为探讨鸭甲肝病毒(DHAV)GX株基因分型特点及主要衣壳蛋白(VP1)的生物学特性,本试验对其进行全基因组序列测定,并应用分子生物学软件将DHAV GX株与DHAV 3个血清型参考毒株进行序列比对分析。结果显示,其基因组全长7 800 bp,由5'和3'非编码区(UTR)和一个大开放阅读框(ORF)组成。其中,5'UTR和3'UTR的长度分别为652和369 bp;ORF长度为6 756 bp,编码2 251个氨基酸长的多聚蛋白,其编码产物至少有12个(VP0/VP3/VP1/2A1/2A2/2A3/2B/2C/3A/3B/3C/3D);在分类地位上DHAV GX株属于DHAV-3,其与DHAV-3参考株核苷酸、氨基酸同源性最高;与DHAV-3 FS株亲缘关系最近,在同一较小分支上。DHAV GX株结构蛋白VP1以第195—201、211—221位氨基酸区段为B细胞优势表位的可能性较大。提示,VP1基因可作为研制DHAV基因工程疫苗的优势候选基因。

为了使猪圆环病毒2b型(PCV2b)Cap蛋白在猪圆环病毒病等疾病的诊断和防制方面取得更有效的应用,本试验将编码PCV2b Cap蛋白的ORF2基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,并构建pET-32a-ORF2重组质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21受体菌后,通过IPTG诱导表达重组蛋白,将重组蛋白用镍柱进行纯化并免疫大白兔,制备兔抗PCV2b Cap蛋白的多克隆抗体。利用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光及病毒交叉反应等试验对制备的多克隆抗体进行生物学特性检测。ELISA检测结果显示,该抗体效价可达到1:2¹⁶;Western blotting检测结果显示,该多克隆抗体可与PCV2b产生特异性的反应条带,说明其具有较好的反应活性;间接免疫荧光试验结果显示,该多克隆抗体能识别感染PK-15细胞中的PCV2b,说明该多克隆抗体具有鉴别诊断PCV2b的能力;病毒交叉试验结果显示,该多克隆抗体能与PCV2b反应,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪轮状病毒(PRoV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)等猪源病毒发生交叉反应,表明该多克隆抗体具有高度特异性。本试验制备的抗PCV2b Cap蛋白多克隆抗体为PCV2b病原特性研究及该病的临床检测奠定基础。

为了对蒙古绵羊Brachyury基因DNA序列进行研究,试验主要利用PCR技术对蒙古绵羊Brachyury基因序列进行扩增并克隆,首次获得了完整的Brachyury 基因序列。利用NCBI网站上的BLAST功能将测序结果同已发表绵羊Brachyury基因序列进行比对,结果显示同源性高达99%,大部分序列完全一致。将该序列与GenBank数据库中登录的牛、人、大鼠、小鼠、山羊、猴和蝾螈等10个不同物种的Brachyury分子序列进行了比对分析。结果显示,蒙古绵羊Brachyury氨基酸序列与牛Brachyury氨基酸序列同源性最高,为96.30%;最低的则是来源于蝾螈的Brachyury氨基酸序列,仅为58.45%。遗传进化分析进一步证实蒙古绵羊与牛的Brachyury亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。此外,序列分析发现蒙古绵羊Brachyury基因高度保守,仅个别碱基发生突变。研究结果表明,蒙古绵羊Brachyury基因序列与其他脊椎动物的Brachyury基因序列也具有高度的保守性。

为研究反季节生产技术对鹅FSHβ和FSHR基因表达的影响,选取经反季节生产技术控制的处于产蛋期和正常处于休产期扬州鹅,测定血清中FSH含量,并应用实时荧光定量PCR技术研究FSHβ和FSHR基因mRNA在下丘脑-垂体-性腺轴中的表达水平变化。结果表明,试验组(反季节生产技术控制处于产蛋期)鹅的血清中FSH水平极显著高于对照组(未调控处于休产期)鹅的血清中FSH水平(P<0.01);FSHβ和FSHR基因在垂体、下丘脑和卵巢组织中均有表达,且FSHβ在垂体中表达最高(P<0.01),FSHR基因在卵巢组织中表达最高(P<0.01);FSHβ基因在试验组鹅垂体中的表达量极显著高于其在对照组鹅垂体中的表达量(P<0.01);FSHR基因在产蛋期鹅卵巢组织中的表达极显著高于休产期鹅卵巢组织中的表达量(P<0.01)。反季节生产技术控制下鹅生殖轴组织中FSHβ和FSHR基因表达显著增加,血清中FSH测定结果与之一致,表明FSH与生殖周期密切相关。

为探索骨桥蛋白(OPN)调控骨代谢及与肿瘤的关系,本试验利用DNAMAN与Mega 5.02软件分析OPN蛋白系统进化关系;采用RT-PCR与分子克隆方法制备OPN蛋白表达载体;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素浓度梯度复性获得OPN蛋白,免疫小鼠制备OPN蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blotting检测抗血清特异性。OPN序列的同源性比对分析发现,在不同进化层次动物中均存在Arg-Gly-Asp(RGD)短肽重复序列;OPN序列系统进化分析显示,OPN在动物间具有明显的进化趋势;提取小鼠肝脏RNA,OPN重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果及蛋白表达、纯化条带大小均与预测一致;ELISA法确认OPN抗血清滴度达1:1 600;Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。结果表明本试验对OPN序列进行了遗传进化分析,成功克隆、表达、纯化及复性OPN蛋白,并制备、鉴定了小鼠多克隆抗体。

线粒体融合蛋白2(mitofusin-2,MFN2)是位于线粒体外膜上的跨膜蛋白,也是外膜的信号分子和药物作用靶蛋白,它在细胞增殖、分化、凋亡和多种疾病中起着重要作用。为深入研究山羊MFN2基因在炎症疾病过程中的分子作用机制,本试验采用RT-PCR的方法克隆了波尔山羊MFN2基因,并对其进行了序列测定及其编码蛋白的结构分析。结果显示,克隆得到的波尔山羊MFN2基因大小为2 441 bp,其编码的蛋白由705个氨基酸组成。波尔山羊MFN2基因种间同源性低,存在Fzo-mitofusin结构域、DLP-2结构域,是结构保守蛋白;存在1个潜在跨膜区,位于576—595位氨基酸(loop1);不存在信号肽。试验首次克隆了波尔山羊MFN2基因,为探索山羊MFN2基因与炎症发生之间关系的分子机制提供了基础数据。

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)可引起人及动物急性腹泻,其关键毒力因子为耐热肠毒素(ST)。由于ST是一种具有强烈毒性但缺乏免疫原性的小分子肽,如何在保持其免疫原性的同时减弱其毒性已成为制备ST类毒素疫苗的研究热点。本试验以利凡诺法提纯兔血清白蛋白(RSA),经0.2%戊二醛活化,再与人工合成的甲醇可溶性STa偶联,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示获得分子质量约108.5 ku的完全抗原。用该偶联物免疫新西兰白兔4次,采集抗血清并用Protein A/G 琼脂糖小珠进行纯化,斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)和免疫印迹(Western blotting)结果显示抗血清效价均为1:400。试验结果表明抗STa多克隆抗体成功制备,这为筛选ST结构类似物做有益的铺垫。

基于海口市动物基因工程重点实验室获得的牛乳状瘤病毒13型(BPV-13)基因组序列信息(GenBank登录号:KM258443.2),以基因组为模板,扩增E5基因片段,将其连入pEGFP-N1质粒,构建重组质粒pEGFP-E5-N1,测序正确后瞬时转染HEK293细胞,应用荧光显微镜、流式细胞仪、Western blotting 鉴定融合蛋白的表达。结果显示,E5片段大小为135 bp;重组质粒pEGFP-E5-N1构建正确;荧光显微镜下观察转染重组质粒pEGFP-E5-N1的HEK293细胞,可见明亮的绿色荧光;流式细胞术分析结果显示,转染重组质粒pEGFP-E5-N1 48 h后,约55.59% 的细胞表达绿色荧光蛋白;Western blotting结果表明,表达的融合蛋白大小约为32 ku。本试验结果为下一步研究E5基因的作用机理奠定了基础。

本试验旨在建立检测化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes,A.pyogenes)特异、灵敏的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank公布的化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin,PLO)基因高保守序列,设计特异性引物和探针建立检测体系,用于化脓隐秘杆菌的快速检测,并对该方法的特异性和灵敏度进行检测。结果显示,本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法仅对化脓隐秘杆菌的检测结果为阳性;该方法最低检测DNA浓度为77.6 fg,最低检测细菌浓度为63 CFU/mL。采用本研究建立的方法检测23份林麝临床病例样品,共鉴定出16株化脓隐秘杆菌,与API Coryne生化鉴定方法的结果相同。本研究为化脓隐秘杆菌的检测提供了一种灵敏、特异、快速的检测方法,其可用于化脓隐秘杆菌的诊断和流行病学调查。

为了能快速、特异的检测猪细环病毒2型(TTSuV2),本研究针对TTSuV2全基因序列的非编码区域和第1个开放性阅读框前端设计了2对引物,建立了TTSuV2的环介导等温扩增(LAMP)检测方法并对反应成分和条件进行了梯度摸索。试验结果显示,该LAMP检测方法最佳反应条件为64 ℃恒温90 min,可特异性检测TTSuV2,与猪细环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪博卡病毒无交叉反应,病毒最低检出限为100拷贝/μL。结果表明,建立的LAMP方法具有快速、特异且灵敏的特点,可在TTSuV2快速检测方面提供一定的技术支持。

轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55 ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列设计并合成1对特异性引物,本试验利用RT-PCR方法扩增牛轮状病毒UK株NSP1基因,克隆入pET-28a(+)表达载体,经双酶切和测序鉴定,并利用分子生物学软件进行同源性比对分析。本试验结果显示获得的NSP1基因全长编码区序列为1 473 bp,编码491个氨基酸,与美国WC3株同源性最高。将阳性重组质粒转入E.coli Rosetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析,结果表明重组蛋白分子质量约为55 ku,以包涵体形式表达,可与鼠抗His-tag抗体反应。本试验成功获得牛轮状病毒UK株NSP1基因,且实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,本试验结果为研究NSP1蛋白在细胞内定位与其活性之间的相互关系奠定了基础。

本试验应用细胞杂交瘤技术,取健康BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞进行细胞融合,经双抗体夹心ELISA筛选,4次有限稀释法克隆,得到2株能稳定分泌抗伪狂犬病病毒(PRV)的单克隆抗体杂交瘤细胞株:2C6E6、3D5F1。2株杂交瘤细胞培养上清的效价分别为1:512、1:1 024。鉴定结果显示这2株单克隆抗体分别为IgG1亚类和IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为84条。用纯化的PRV免疫经产健康的BALB/c小鼠,采用ELISA方法检测获得的腹水的效价分别为1:1 638 400和1:819 200。经检测这2株单克隆抗体与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒均不发生交叉反应,特异性良好。杂交瘤细胞连续培养30代,仍能稳定分泌抗PRV的单克隆抗体,说明这2株单克隆抗体的稳定性良好。本试验研究结果为PRV的快速诊断方法的建立奠定了理论基础。

肌细胞增强因子2B(MEF2B)基因属于肌细胞增强因子2(MEF2)基因家族成员,广泛表达于人和动物的肌肉和神经组织中,在肌肉生成、神经系统发育和分化、肝脏纤维化等方面具有重要的作用,作者从MEF2B基因的结构、组织分布、生物学功能及研究进展等方面对该基因进行了综述。

试验旨在探讨日粮中添加油脂对焉耆马赛后运动性能及抗氧化能力的影响。选取运动成绩、体重、体尺、年龄相近的焉耆马9匹,随机分为3组,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ组分别在基础日粮中添加不同水平的豆油。试验开始第20天对各组马匹进行20 km模拟比赛,赛后30 min内测定各组试验马匹的体温、脉搏、呼吸,同时采集各组马匹血液。结果表明,试验Ⅰ、Ⅱ组焉耆马赛后0 min心率极显著低于对照组(P<0.01),试验Ⅱ组焉耆马赛后5 min呼吸频率极显著低于对照组(P<0.01);试验Ⅰ、Ⅱ组焉耆马赛后血浆中GSH-Px、T-SOD活力浓度分别比对照组高87.60%(P<0.05)、15.87%(P>0.05)和98.38%(P<0.05)、38.25%(P<0.05);试验Ⅰ、Ⅱ组焉耆马血浆中MDA、LA浓度分别比对照组低53.44%(P<0.05)、24.08%(P<0.05)和51.42%(P<0.05)、25.08%(P<0.05)。饲料中添加油脂可提高焉耆马运动性能,有利于焉耆马运动后生理机能的快速恢复,提高运动后焉耆马的抗氧化能力,相比较而言,添加5%油脂组效果较佳。

本试验旨在探讨N-氨甲酰谷氨酸(N-carbamylglutamate,NCG)和精氨酸(Arg)对京海黄鸡肉仔鸡生长性能、血清生化参数及游离氨基酸含量的影响。选用1日龄体重相近的京海黄鸡肉仔鸡600只,随机分为5组,每组6个重复,每个重复20只。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组饲喂在基础日粮中分别添加0.05%、0.10%、0.15% NCG及0.10% Arg的试验日粮。试验期28 d。结果表明,与对照组相比,添加0.05%、0.10%、0.15% NCG及0.10% Arg组平均日增重(ADG)升高,添加0.10% NCG组料重比(F/G)显著降低(P<0.05);添加0.10% NCG组血清中血氨(AMM)、尿酸(UA)和低密度脂蛋白(LDL)含量相对于其他各组显著降低(P<0.05),添加0.15% NCG组血清中一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)和碱性磷酸酶(ALP)含量显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,添加0.10%、0.15% NCG组和添加0.10% Arg组血清中Arg含量显著升高(P<0.05)。综上所述,日粮中添加NCG有助于提高京海黄鸡肉仔鸡血清中Arg和脯氨酸(Pro)的含量,改善血液指标,提高肉仔鸡的生长性能,其中NCG添加水平为0.10%时效果较好。

本试验选取年龄11~12周岁、体重(410±30)kg、胎次4~5胎,处于第3泌乳月的伊犁马30匹,随机分为6组,每组5匹马。采用两因子二次回归正交旋转组合设计,以日粮粗蛋白质和消化能为变量,研究泌乳后期伊犁母马饲喂不同粗蛋白质、消化能水平日粮对马驹生长发育和血液生化指标的影响。试验1~6组消化能和粗蛋白质日饲喂量分别为92 MJ/d、1.20 kg/d,125 MJ/d、1.20 kg/d,92 MJ/d、1.55 kg/d,107 MJ/d、1.35 kg/d,125 MJ/d、1.44 kg/d和115 MJ/d、1.55 kg/d。结果表明,母马饲喂不同营养水平日粮对4、5月龄马驹体重、体高、胸围和管围均无显著影响(P>0.05)。与试验2组(消化能125 MJ/d、粗蛋白质1.20 kg/d)相比,试验4组(消化能107 MJ/d、粗蛋白质1.35 kg/d)马驹4、5月龄时体长发育显著增加(P<0.05)。从血液生化指标来看,各组间马驹总蛋白、白蛋白、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、尿素氮、肌酐及谷丙转氨酶水平均无显著差异(P>0.05),母马饲喂试验4组日粮后可明显提高马驹尿酸和谷草转氨酶水平。由此可知,伊犁母马泌乳后期粗蛋白质摄入1.35 kg/d、消化能摄入107 MJ/d时可明显提高马驹体长发育速度,日粮营养通过提高谷草转氨酶活性影响氮代谢。

本试验旨在研究发酵花生壳对育肥猪生产性能、胴体性状、肉品质及经济效益的影响。选用100头50 kg左右、健康的杜×长×大三元杂交育肥猪,随机分成5组,每组4个重复,每个重复5头猪。对照组饲喂玉米—浓缩料型基础日粮,试验1~4组分别饲喂在基础日粮中添加10%发酵花生壳、20%发酵花生壳、30%发酵花生壳、15%发酵玉米秸秆的试验日粮,试验期66 d。结果表明,对照组及试验2、3组平均日采食量显著高于试验1、4组(P<0.05),对照组和试验3组平均日增重显著高于试验1、4组(P<0.05),各组间料重比差异均不显著(P>0.05),试验1、2、3、4组腹泻频率均极显著低于对照组(P<0.01);各组间胴体质量、屠宰率、背膘厚度、眼肌面积差异均不显著(P>0.05),试验2组瘦肉率显著低于对照组和试验1组(P<0.05);各组间大理石纹、肉色、嫩度、肌内脂肪、失水率及熟肉率差异均不显著(P>0.05),但试验1、2、3、4组失水率低于对照组,差异不显著(P>0.05);根据经济效益分析表明,在育肥猪从50~90 kg阶段,对照组每头猪平均盈利47.60元,试验1、2、3、4组每头猪平均盈利分别为56.40、60.40、78.80、58.80元,其中试验3组最优。综合上述的分析结果可知,发酵花生壳对育肥猪生长性能、胴体性状、肉品质无不良影响,且能有效地降低育肥猪的腹泻频率,提高猪肉的系水力,适当的添加可有效地降低饲养成本,提高经济效益。

为探讨乳酸菌在填饲过程中对朗德鹅产肝性能、脂肪沉积、屠体性能、养分表观消化率及血清生化指标的影响,试验选用108只健康、体重相近的12周龄朗德鹅,随机分为试验A组、试验B组和对照组,每组6个重复,每个重复6只。对照组填饲日粮为无乳酸菌菌液的基础日粮,试验A、B组于正式填饲前期(1~5 d)分别在基础日粮中添加2 000、3 000 g/t乳酸菌菌液;正式填饲中期(6~15 d)分别在基础日粮中添加3 000、5 000 g/t乳酸菌菌液;正式填饲后期(16~25 d)不添加乳酸菌菌液。结果表明,与对照组相比,日粮中添加乳酸菌使填饲朗德鹅肥肝成熟期延长(P<0.05),淘汰率降低;与对照组相比,日粮中添加乳酸菌使填饲朗德鹅肝脏脂肪沉积比例下降,试验B组肥肝重、肝脏重/(肠脂重+腹脂重)、肝脏重/填饲期增重显著降低(P<0.05);各组间屠体性能指标均无显著性变化(P>0.05);与对照组相比,试验B组粗脂肪表观消化率显著升高(P<0.05),试验A、B组钙、磷的表观消化率显著升高(P<0.05);与对照组相比,试验A、B组血清中甘油三酯、胆固醇和极低密度脂蛋白含量显著降低(P<0.05)。综上所述,饲喂添加乳酸菌的日粮虽可促进鹅体健康,但会延缓鹅肝脏脂肪的沉积,不利于鹅肥肝生产。因此,生产中不宜在朗德鹅填饲日粮中添加乳酸菌。

本试验旨在探讨饲料营养对柴蛋鸡产蛋率、蛋品质、血液生化指标和蛋中某些矿物质元素含量的影响。从北京市昌平区(韩台、黑山寨、泰陵鸡场)及顺义区(都市农庄(简称都市)、梨园鸡场)5个柴蛋鸡散养场各选择100只日龄和体重基本一致的产蛋鸡,随机分为对照组和试验组,每组设5个重复,每个重复10只鸡。对照组以玉米为主要日粮,试验组在以玉米为主要日粮中添加适量的微量元素、维生素等营养元素。试验期52 d。结果表明,不同散养鸡场中试验组柴蛋鸡的产蛋率均显著高于对照组(P<0.05);韩台、都市、泰陵和梨园鸡场试验组鸡蛋的蛋重显著高于对照组(P<0.05),梨园鸡场对照组鸡蛋的蛋白高度显著高于试验组(P<0.05),都市和梨园鸡场试验组鸡蛋的蛋黄颜色显著高于对照组(P<0.05),而蛋形指数、蛋壳厚度、平均蛋壳强度各组间均无显著差异(P>0.05);黑山寨鸡场试验组柴蛋鸡血浆中总蛋白、甘油三酯含量显著高于对照组(P<0.05);韩台和都市鸡场试验组鸡蛋中钙含量显著高于对照组(P<0.05),都市鸡场试验组鸡蛋中铜、镁及韩台鸡场试验组鸡蛋中锰、铁含量均显著高于对照组(P<0.05),黑山寨鸡场试验组鸡蛋中镁含量显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,日粮中添加适量的营养元素可明显提高柴蛋鸡的产蛋率及鸡蛋中钙、锌和镁等矿物质元素的含量,提高柴蛋鸡血液总蛋白、胆固醇和甘油三酯含量,显著改善柴蛋鸡的营养状况。

本试验通过研究不同妊娠期母羊在舍饲条件下养分摄入量与血清生化指标的动态变化,为舍饲山羊日粮的合理配制和健康状态分析提供依据。随机选择空怀期、妊娠前期和妊娠后期健康母山羊各10只,测定其采食量;随机选择空怀期,妊娠1、2、3、4月及临产健康母羊各8只,以及临产病母羊6只,测定其7项血清生化指标。结果表明:①与NRC(2007)山羊营养需要量相比,空怀期和妊娠前期母羊对干物质、代谢能和粗蛋白质的摄入量高于需要量,但妊娠后期母羊相应的摄入量低于需要量;各阶段母羊对钙和磷的摄入量均远高于需要量;②从空怀、妊娠到临产,母羊的血清葡萄糖含量逐渐下降(3.44至2.57 mmol/L),血清酮体含量逐渐升高(14.93~23.55 μg/mL),而临产病母羊的血清葡萄糖含量显著降至0.85 mmol/L(P<0.05),血清酮体含量显著升至42.98 μg/mL (P<0.05);血清总蛋白含量呈下降趋势(70.55至59.94 g/L),但血清白蛋白含量(33.55至32.61 g/L)变化不大,临产病母羊血清总蛋白(56.79 g/L)和白蛋白(29.72 g/L)含量进一步降低;血清钙(2.21至2.19 mmol/L)和磷(2.62至2.25 mmol/L)含量变化不大,而临产病母羊的血清钙(1.80 mmol/L)含量显著降低(P<0.05),血清磷含量下降至2.17 mmol/L;血清碱性磷酸酶活性呈下降趋势(258.57至104.35 U/L),但临产病母羊的血清碱性磷酸酶活性突然升高至180.53 U/L。综上所述,妊娠后期母羊能量摄入不足,是导致妊娠母羊血清葡萄糖等逐渐降低、酮体逐渐升高的根本原因,临产病母羊诊断为妊娠毒血症,建议调整母羊日粮结构,分阶段饲喂,增加妊娠后期母羊能量摄入量。

本试验旨在研究去势对西门塔尔牛日增重及体尺的影响。选取50头健康的、16月龄的西门塔尔公牛,经药物驱虫后,依据体重进行单因素配对试验设计。结果表明,17~21月龄的体重和全期平均日增重去势组均比未去势组低,差异不显著(P>0.05);17~21月龄,去势组与未去势组间的体高、体斜长、胸围和腰角宽的长度及其全期月增加数差异均不显著(P>0.05);去势后第1个月(17月龄),去势组的体高、腰角宽和坐骨端宽的月增加数均极显著低于未去势组(P<0.01);17~19月龄去势组的坐骨端宽比未去势组少(P<0.05);全期平均腹围月增加数,去势组极显著高于未去势组(P<0.01)。结果说明,去势西门塔尔牛的全期平均日增重低于未去势西门塔尔牛;去势西门塔尔牛的生长曲线为指数曲线,未去势西门塔尔牛的生长曲线为S型;去势会短期抑制体高、腰角宽、坐骨端宽的月增长;去势能提高去势西门塔尔牛腹围的增长;西门塔尔牛在1.5岁时的体尺接近成年体尺。

为研究犊牛部分组织中小肽转运体(proton-dependent oligopeptide transporters,POTs) (PepT1、PepT2、PHT1、PHT2) mRNA的表达,试验选用4头3月龄的中国荷斯坦犊牛进行屠宰,采用实时荧光定量PCR方法来定量组织中小肽转运蛋白表达水平。结果表明,犊牛PepT1 mRNA在瘤胃中表达丰度极显著高于心脏和肌肉(P<0.01);犊牛PepT2 mRNA在肝脏和肾脏中表达丰度极显著高于心脏、脾脏、胸腺、肌肉、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃(P<0.01);犊牛PHT1 mRNA在肺脏和脾脏中表达丰度极显著高于心脏和肌肉(P<0.01);犊牛PHT2 mRNA在肺脏和胸腺中表达丰度显著高于心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肌肉、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃(P<0.05)。综上所述,PepT1、PepT2、PHT1、PHT2 mRNA分别在犊牛瘤胃、肾脏和肝脏、脾脏和肺脏、肺脏和胸腺中表达量最高。

试验将36只18~22 g雄性昆明小鼠随机分为空白对照组、太子参多糖对照组(400 mg/kg体重)、环磷酰胺(CY)模型组、太子参多糖低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg体重),上述各组分别灌喂蒸馏水和多糖,连续灌胃19 d,第20天,除空白对照组和太子参多糖对照组小鼠腹腔注射生理盐水外,其余4组均腹腔注射CY(100 mg/kg体重),24 h处死小鼠,取十二指肠和回肠,放免法测定分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)的含量,研究太子参多糖对CY所致肠道黏膜损伤小鼠中SIgA、IL-2、IL-6分泌的影响。结果显示,与CY模型组相比,太子参多糖高、中剂量组十二指肠SIgA含量显著升高(P<0.05),太子参多糖高剂量组回肠SIgA含量极显著升高(P<0.01);太子参多糖高剂量组中十二指肠和回肠IL-2含量显著升高(P<0.05),十二指肠IL-6含量极显著升高(P<0.01),回肠IL-6含量显著升高(P<0.05)。上述结果表明太子参多糖在一定程度上能颉颃CY所致的肠道黏膜免疫损伤。

为探索试验用Hartley豚鼠的饲养及建立滴鼻剂变应性鼻炎(AR)模型的有效方法,本试验采用单因素试验,考察了试验动物种类、饲养方式、卵清蛋白(OVA)致敏剂量、时间对滴鼻剂AR建模的影响,观察空白组与模型组Hartley豚鼠过敏反应症状和鼻黏膜病理切片。结果显示,就滴鼻剂的AR试验而言,Hartley豚鼠是较好的试验动物;饲料为普通小鼠饲料+莴苣叶或油麦菜;OVA为致敏剂,基础致敏浓度为0.1~0.3 mg/mL OVA,隔天腹腔注射1次,共7次;激发致敏浓度为2%,两侧鼻腔各10~30 μL,每天1次,6~9 d后与空白组相比,模型组Hartley豚鼠有明显的过敏反应症状和鼻黏膜病变。该建模方法简单经济,重现性好,可作为滴鼻剂AR建模的最佳方法。

试验旨在研究不同剂型阿维拉霉素的稳定性,为其生产、运输及贮存等提供科学依据。试验以高效液相色谱法(HPLC)测定阿维拉霉素相对含量及单组分相对含量,分别通过温度试验和光照试验探讨贮存过程中阿维拉霉素相对含量及单组分相对含量的变化规律,以评价其预混剂及原料药两种剂型的稳定性。温度试验和光照试验结果均显示阿维拉霉素预混剂及阿维拉霉素原料药对温度和光照敏感,光照的影响大于温度的影响;但相同条件下阿维拉霉素原料药较阿维拉霉素预混剂稳定,阿维拉霉素A组分较B组分稳定。结果表明阿维拉霉素在运输及贮存时需确保避光,其贮存温度应低于20 ℃,以保证产品质量,提高稳定性。

本研究旨在评价乌锦颗粒剂的毒性,为临床安全用药提供理论依据。试验分别以昆明小鼠和Wistar大鼠为研究对象,进行急性毒性试验和亚慢性毒性试验研究。急性毒性试验结果显示,乌锦颗粒剂的半数致死量(LD₅₀)>40 g/kg体重,最大给药量为160 g/kg体重,相当于临床用药量的80倍;在亚慢性毒性试验中,动物一般情况正常,试验组Wistar大鼠增重和饲料消耗量与对照组相比无显著差异(P>0.05);与对照组相比,高剂量组中雌鼠血清胆红素(T-BIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)及雄鼠CREA和肝脏指数均有显著差异(P<0.05),而其他指标与对照组相比差异均不显著(P>0.05);低剂量组和中剂量组Wistar大鼠血常规、血液生化指标和脏器指数与对照组相比差异均不显著(P>0.05);病理学检查发现高剂量组Wistar大鼠肝脏出现轻微颗粒变性,其他组Wistar大鼠组织结构清晰正常。结果表明,高剂量的乌锦颗粒剂能抑制肝脏对游离胆红素的摄入及蛋白质的合成;低剂量和中剂量乌锦颗粒剂此作用不明显。综合分析,乌锦颗粒剂临床用药是安全的。

试验旨在研究新发现的两种牛蛙活性肽对人肺癌细胞NCI-H446、人乳腺癌细胞MCF-7及小鼠白血病细胞K562 3种肿瘤细胞体外增殖的影响,为新的多肽抗肿瘤药筛选提供依据。本试验利用圆二色谱(CD)法检测两种新牛蛙活性肽的二级结构,通过MTS细胞毒试验测定不同浓度的两种新牛蛙活性肽对人肺癌细胞NCI-H446、人乳腺癌细胞MCF-7及小鼠白血病细胞K562 3种瘤细胞体外增殖的影响。圆二色谱法结果显示,Temporin-Lb的二级空间结构为聚脯氨酸Ⅱ型螺旋(PPⅡ)结构,Catesbeianin-1a的二级空间结构为无规则卷曲。MTS细胞毒试验结果显示,给予Catesbeianin-1a的3种瘤细胞培养24 h后,瘤细胞形态无明显变化,正常增殖,而给予Temporin-Lb的3种瘤细胞培养24 h后,瘤细胞发生皱缩、细胞变圆、脱落甚至死亡,增殖受到抑制,其中对Temporin-Lb在4~40 μmol/L浓度范围内对小鼠白血病细胞K562的抑制效果最为明显。结果表明,新牛蛙活性肽Temporin-Lb具有一定的抑瘤作用,Catesbeianin-1a对瘤细胞的体外增殖没有明显影响。

本试验旨在通过对雄性SD大鼠长期饲喂高脂饲料建立大鼠代谢综合征模型。将30只4周龄SD雄性大鼠随机分为两组,其中试验组24只,对照组6只。试验组饲喂正常饲料并添加鸡蛋黄、花生,两周后将体重排在后1/3的肥胖抵抗大鼠剔除,对照组饲喂正常饲料,饲喂32周后称量大鼠体重并计算Lee's指数,采用小动物无创血压计测量大鼠收缩压。禁食12 h,做口服糖耐量试验后腹主动脉采血测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量。结果显示,饲喂32周后,试验组大鼠体重达到(794.0±63.5)g,对照组大鼠体重(571.8±61.9)g,试验组大鼠体重超过对照大鼠体重的38.9%;试验组大鼠的Lee's指数为343.0±8.7,对照组大鼠的Lee's指数为319.2±7.1,试验组与对照组相比差异极显著(P<0.01);试验组大鼠TC、TG含量均极显著高于对照组(P<0.01);试验组大鼠收缩压为140.0±15.4,对照组大鼠收缩压为117.9±11.4,试验组大鼠血压显著高于对照组(P<0.05);口服糖耐量试验结果显示试验组大鼠有显著的胰岛素抵抗作用(P<0.05)。结果表明通过高脂饲料饲养32周诱导SD雄性大鼠能成功的建立大鼠代谢综合征模型。

为了研究五指山猪遗传多样性和系统地位,本研究采用PCR产物直接测序法得到55条五指山猪线粒体控制区(mtDNA D-Loop)全序列,并结合GenBank中发表的1条五指山猪mtDNA D-Loop全序列进行结构分析、遗传多样性研究及系统发育分析。结果发现,56条序列中出现21次保守区变异,即"TTATAAAACAC"序列重复,共定义13个单倍型,发现14个变异位点,单倍型多样度(Hd)和核苷酸多样度(Pi)分别为0.838和0.00334,表明五指山猪遗传多样性较丰富。五指山猪线粒体控制区序列构建的系统发育树和Network网络分析呈现两大分支,推测有两个母系起源,且与GenBank中其他23个猪种的聚类结果表明,五指山猪与长江流域以南地区的猪种有着较近的亲缘关系。

为了解三穗鸭肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor 2A,MEF2A)SNPs与屠宰性状的相关性,本研究以60只三穗鸭为研究对象,采用PCR-SSCP方法结合PCR产物直接测序技术对三穗鸭MEF2A基因多态性进行检测,并进行SNPs与屠宰性状各指标的相关分析。结果表明,在MEF2A基因中共发现了2个SNPs:第11外显子的g.47915G>A位点和g.47918G>A位点,g.47915G>A位点发生的G/A突变使密码子由GAA变为AAA,翻译出的氨基酸由谷氨酸变成赖氨酸,g.47918G>A位点的G/A突变引起的密码子由GAT变成AAT,翻译出的氨基酸由天冬氨酸变成天冬酰胺。SNPs与屠宰性状的关联性分析表明,g.47915G>A和g.47918G>A位点影响全净膛率。这一结果揭示了MEF2A基因的多态性对三穗鸭屠体性状具有重要的影响。

为探讨脾源性酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)的表达与奶牛乳腺发育和泌乳功能之间的关系,试验采用Western blotting和激光共聚焦显微技术对泌乳期高乳品质、低乳品质及干乳期的中国荷斯坦奶牛乳腺组织中SYK的表达含量和表达部位的变化进行研究。结果表明,干乳期奶牛乳腺组织中SYK的表达显著高于泌乳期奶牛乳腺组织(P<0.05),泌乳期高乳品质、低乳品质奶牛乳腺组织中SYK的表达差异不显著(P>0.05);在干乳期SYK主要在乳腺导管上皮细胞的胞质中表达,而在泌乳期SYK在腺泡上皮细胞中表达。结果提示SYK是乳腺上皮细胞增殖与分化的调节因子,主要参与干乳期乳腺组织的重建过程。

为研究内蒙古二郎山绒山羊体尺、绒毛性状与经济性状间的相关关系,选取1 000只3岁成年母羊进行生产性能测定,并利用SAS 9.0和Excel 2003软件进行统计分析。结果表明,二郎山绒山羊体尺、绒毛性状中体高(X₁)、体斜长(X₂)、胸围(X₃)与体重(Y)之间呈极显著正相关(P<0.01),最优回归方程为Y=-12.0856+0.0821X₁+0.4053X₂+0.1624X₃,回归方程的截距和3个偏回归系数都达到了极显著的程度(P<0.01),说明该方程是最优回归方程。胸围对体重的影响最大,而体高、体斜长和绒细度主要通过胸围对体重产生影响;体高对产绒量的影响最大,其次为绒厚度,但是就体高、体斜长、胸围、绒细度、绒厚度、毛长与产绒量之间并未找到最优回归方程。表明二郎山绒山羊体尺、绒毛性状与经济性状之间存在着复杂的内在联系。

本试验旨在优化小鼠超排后的合笼时间,高效获取小鼠孵化囊胚。试验选用150只ICR系8周龄雌性小鼠,随机分为5组,同一时间超排处理后雌、雄按1:1于18:00、19:00、20:00、21:00合笼过夜,次日上午08:00查栓,发现阴道栓这为妊娠第1天(D1)。取妊娠第5天(D5)小鼠处死,剪取双侧子宫角,冲取胚胎。统计每组冲取胚胎的总数及孵化囊胚/未孵化囊胚的比值,作为胚胎获取效率的评价指标;统计内细胞团数/滋养外胚层细胞团数,作为评价胚胎质量的参考指标。结果发现,在数量上组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ囊胚数差异不显著(P>0.05),但有增高趋势,组Ⅳ囊胚数显著高于其他3组(P<0.05)。组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ内细胞团数/滋养外胚层细胞团数分别为23.18%、23.55%、21.72%和23.28%,各组间差异不显著(P>0.05)。结果表明,组Ⅳ所对应的合笼时间获取小鼠孵化囊胚获取效率最高,胚胎囊胚质量无明显差异。

生殖发育关系到一个物种的繁衍生息。哺乳动物的雌性生殖细胞,也就是卵母细胞,其生殖能力的获得需要同时经历两个过程:卵子发生和卵泡发育,而这两个相互依存的过程将为雌雄配子相互结合及新一代个体发育的起始奠定基础。随着分子生物学技术的发展,许多与卵泡发育相关的基因表达调控机制逐渐被揭示出来,新观点纷纷涌现。作者将对哺乳动物卵泡生长发育各阶段的主要分子通路研究进展进行综述,旨在为卵子干细胞的研究、治疗性克隆的发展、卵子减少不孕症等人类疾病的治疗和研究提供理论依据;此外,本综述还将对畜牧业中加快卵泡的发育进程、充分利用早期卵母细胞资源、缩短世代间隔、提高繁殖率等产生重要的指导意义。

在细胞中存在着各种信号转导通路,不同的信号转导通路相互交叉,形成复杂的信号转导网络系统,参与生物体内的各种生理生化功能,其中部分信号转导通路对动物的生殖生理有着重要作用。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)是细胞内重要的信号通路之一,其参与了多种生理过程的调节,对动物的繁殖有重要作用。文章将主要对MAPK信号通路在动物繁殖中的作用进行综述。

试验从青海民和县某羊场致病性感染半月龄羔羊中分离出革兰氏阳性菌,感染羔羊临床症状有精神萎靡,采食减少,发病1~2 h后死亡。两只濒死羔羊剖检结果发现,其中一只出现肝脏肿大及肝包膜脱落,其余脏器无明显病理变化;另一只各脏器均未发现病理变化。分离病料,革兰氏染色发现,从病料中分离到的细菌均为革兰氏阳性球菌。对分离菌株进行Tuf基因PCR扩增,BLASTn比对结果显示与屎肠球菌AUS0085核苷酸序列相似性为99.8%,据此初步确定这些菌株为屎肠球菌。药敏试验结果表明,这些菌株可分为两类,第1类对β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、喹诺酮类、利福霉素类抗生素及林可霉素和克林霉素耐药,对氯霉素和万古霉素敏感;第2类对β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、喹诺酮类、利福霉素类抗生素耐药,对红霉素和罗红霉素中度耐药,但对克拉霉素、阿奇霉素、克林霉素、林可霉素、氯霉素和万古霉素敏感。对第1类耐药性代表菌株lby1和第2类耐药性代表菌株lbg3进行多位点序列分析(MLST),结果发现这些菌株为一个屎肠球菌的新序列型,为ST989。系统进化树结果显示屎肠球菌lbg3与屎肠球菌ST468亲缘关系最近,致病力试验结果表明屎肠球菌lby1和lbg3均具有致病性。

本研究旨在查明甘肃与宁夏地区奶牛衣原体的感染情况并分析影响其感染的风险因素。本试验采用间接血凝试验(IHA)方法检测了甘肃榆中(751份)、宁夏青铜峡(450份)和宁夏吴忠(456份)3个地方总计1 657份奶牛血清样品,并应用流行病学调查及统计学方法对影响奶牛衣原体感染的因素进行了分析。流行病学调查结果显示,奶牛衣原体抗体总阳性率为29.33%;应用logistic回归分析评估奶牛衣原体感染的风险因素,结果显示年龄和胎次不是显著风险因素(P>0.05),而地区因素是影响奶牛衣原体感染的风险因素(P<0.05)。奶牛衣原体抗体滴度最高达1:1 024。结果表明,甘肃和宁夏地区奶牛衣原体普遍流行。因此,应当提高对调查地区奶牛衣原体感染的重视,采取适当的综合控制方法和有效的管理措施以防控奶牛衣原体病,以保证奶牛养殖业的经济效益。

为了探讨松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)的病原学特性,本试验从耗儿鱼(Corydoras)分离出菌株YDE0916,并对其进行生理生化鉴定、16S rDNA基因PCR扩增、序列分析及耐药性分析。结果显示,该菌株为革兰氏阳性球菌,呈串形,无芽孢,无荚膜。该菌不运动,β-半乳糖苷酶、VP反应为阴性,蔗糖、麦芽糖为阳性。扩增的16S rDNA基因序列长度为1 476 bp (GenBank登录号:KP031644),与GenBank中的松鼠葡萄球菌16S rDNA基因序列的相似性达99%。系统进化树显示,菌株YDE0916和松鼠葡萄球菌聚为一簇,由此判定菌株YDE0916为松鼠葡萄球菌。药敏试验结果显示,该菌株对诺氟沙星、杆菌肽耐药,对美满霉素、庆大霉素、氨苄西林等22种药物高度敏感。本研究为松鼠葡萄球菌的分离鉴定及预防积累参考依据。

为探讨不同检测材料对ELISA检测禽白血病病毒(ALV)-p27抗原结果的影响,试验首先对180日龄地方品种母鸡的泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原进行ELISA检测,选取部分阳性鸡和阴性鸡进行分组试验,采用ELISA对试验鸡血清、蛋清和病毒分离的细胞培养液进行ALV-p27抗原检测,采用RT-PCR方法检测血液ALV特异性基因。结果显示,阳性组中以血清、蛋清和细胞培养液作为ELISA ALV-p27抗原检测材料,其检测阳性率均低于泄殖腔棉拭子,血清检测的阳性个体包含全部蛋清和细胞培养液ELISA检测的阳性个体。ELISA检测数据的相关性分析显示,只有血清和细胞培养液检测数据间存在显著性相关,线性关系方程为Y(细胞上清)=1.8439X(血清)-0.1469,R²=0.937;阳性组中ALV-p27基因检测阳性率低于泄殖腔棉拭子,但高于血清、蛋清和细胞培养液,其包含所有血清ELISA检测的阳性样品;外源性ALV-J gp85基因阳性率仅为29.17%,且阳性样品均属于血清ELISA阳性样品。综上所述,成年鸡以泄殖腔棉拭子作为ELISA ALV-p27抗原检测材料存在假阳性结果,蛋清和细胞培养液作为检测材料存在漏检的可能,血清作为ELISA检测材能够更准确地反映成年鸡群ALV感染状态。

本试验旨在为开发防制鸡细菌性呼吸道疾病产品提供依据。本试验将患有呼吸道疾病的鸡病料如喉管、气管、肺脏组织接种到各种选择培养基分离细菌,对分离的17株菌株进行生化鉴定、PCR鉴定和致病力测定。结果显示,在伊红美蓝琼脂(EMB)培养基中分离出黑色金属光泽菌落;革兰氏染色后在光学显微镜下见到革兰氏阴性的短杆状细菌;PCR扩增出1 500 bp大小条带,测序结果与GenBank中细菌16S rDNA序列进行BLAST比对并构建系统进化树,分离菌最终鉴定为一株大肠杆菌。将分离的致病菌滴鼻感染肉鸡能损伤肉鸡呼吸道,使喉管出现血斑,气管红肿、布满血点,心脏、肝脏包裹黄色干酪样物质,气囊浑浊不透明,具有致病性。结果表明,分离的致病菌可作为产品开发的基础。

为了给天津地区各区县养猪场提供副猪嗜血杆菌病的科学防控及合理的治疗用药方案,本试验对天津地区各区县养猪场疑似感染副猪嗜血杆菌的病猪进行了解剖及病理变化观察,无菌采集36份各猪场病猪组织脏器并进行细菌分离,对分离菌进行染色镜检、卫星试验、接触酶反应试验、微量生化反应和PCR鉴定。结果显示,剖检结果以纤维素性胸膜炎及腹膜炎常见,关节腔切面内有大量黄亮黏稠液体;分离出了9株疑似副猪嗜血杆菌菌株,染色镜检均可见革兰氏阴性多形态菌;分离菌有明显的卫星现象;接触酶反应试验均为阳性;微量生化反应D-核糖、山梨醇、果糖、阿拉伯糖和硫化氢均为阴性,麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇和脲酶均为阳性,山梨糖和木糖各有1株为阳性,5株菌β-半乳糖为阳性;PCR鉴定结果显示9株疑似副猪嗜血杆菌菌株在822 bp处均与阳性对照处于同一条带上,均判定为副猪嗜血杆菌,分离率达25%。用16种抗菌药物对9株副猪嗜血杆菌进行敏感药物筛选,药敏结果显示头孢曲松钠和氧氟沙星对分离株有良好的抑菌效果。本试验结果可为天津地区副猪嗜血杆菌病的科学防制提供依据。

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的繁殖障碍在妊娠早期表现为母猪受胎率低、不规律返情及孕早期流产;怀孕后半期流产、早产,产死胎、木乃伊胎及弱仔等。先天感染的仔猪抵抗继发感染的能力低,可持续排毒并感染周围的阴性动物。PRRSV穿过胎盘屏障感染胎儿很可能是经巨噬细胞/单核细胞介导的,并在母胎界面造成病理损伤,病毒在胎儿着床点的复制可能是导致胎儿死亡和母猪流产的原因。预防PRRSV垂直传播必须控制母猪感染PRRSV,缩短已感染母猪的病毒血症持续时间,此外,通过生物安全、限制猪群流动和严格的消毒措施控制水平传播,通过疫苗免疫和药物保健消除易感动物。作者概述了妊娠各阶段母猪感染PRRSV发生垂直传播的情况及其后续的繁殖障碍。

近年来,犬瘟热已严重危害了犬及毛皮动物养殖业的健康发展,快速、准确的诊断技术对于犬瘟热的预防显得尤为重要。现阶段犬瘟热诊断技术的研究主要有病毒分离培养与镜检观察、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化、免疫胶体金、核酸杂交、巢式RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、双重PCR、基因芯片、液相芯片、环介导等温扩增等。获得能产生典型细胞病变的易感细胞株是成功进行犬瘟热病毒分离培养与镜检观察的关键。作者就犬瘟热诊断技术的研究进展作一综述,为有效预防和控制犬瘟热的流行和暴发提供简便、高效的检测技术。