化脓隐秘杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.05.009

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (5): 1093-1097.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.05.009

化脓隐秘杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

刘二龙¹, 卢丽¹, 唐婕², 吕英姿¹, 郑高彬¹, 蒋湘¹

1. 广东出入境检验检疫局, 广州 510730;
2. 陕西省动物研究所, 西安 710032

收稿日期:2014-11-10 出版日期:2015-05-20 发布日期:2015-06-02
通讯作者: 唐婕 E-mail:22223520@qq.com
作者简介:刘二龙(1978-),男,湖南永兴人,硕士,研究方向:微生物检测,E-mail:erlongliu@126.com
基金资助:
陕西省科学院应用基础专项(2013K-12)

Establishment of TaqMan Real-time PCR Assay for Detection of Arcanobacterium pyogenes

LIU Er-long¹, LU Li¹, TANG Jie², LV Ying-zi¹, ZHENG Gao-bin¹, JIANG Xiang¹

1. Guangdong Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Guangzhou 510730, China;
2. Shaanxi Institute of Zoology, Xi'an, Shaanxi 710032, China

Received:2014-11-10 Online:2015-05-20 Published:2015-06-02

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在建立检测化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes,A.pyogenes)特异、灵敏的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank公布的化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin,PLO)基因高保守序列,设计特异性引物和探针建立检测体系,用于化脓隐秘杆菌的快速检测,并对该方法的特异性和灵敏度进行检测。结果显示,本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法仅对化脓隐秘杆菌的检测结果为阳性;该方法最低检测DNA浓度为77.6 fg,最低检测细菌浓度为63 CFU/mL。采用本研究建立的方法检测23份林麝临床病例样品,共鉴定出16株化脓隐秘杆菌,与API Coryne生化鉴定方法的结果相同。本研究为化脓隐秘杆菌的检测提供了一种灵敏、特异、快速的检测方法,其可用于化脓隐秘杆菌的诊断和流行病学调查。

关键词: 化脓隐秘杆菌; TaqMan实时荧光定量PCR; 溶血素(PLO)

Abstract: The study was aimed to establish a specific and sensitive TaqMan Real-time PCR assay for detection of Arcanobacterium pyogenes (A.pyogenes).Based on the conservative sequence of pyolysin (PLO) gene of A.pyogenes published in GenBank, specific primers and TaqMan probes were designed. The TaqMan Real-time PCR assay was established, and the specificity and sensitivity were tested.The specificity test results showed that only A.pyogenes exhibited typical curves.The detection sensitivity of this assay was 77.6 fg genomic DNA per 20 μL reaction, and 63 CFU/mL for pure cultures.16 out of 23 clinical samples were positive detected by the TaqMan Real-time PCR assay, which were consistent with API Coryne identification.The TaqMan Real-time PCR assay developed in this study was specific and sensitive for detection of A.pyogenes, and it could be used for identification and epidemiological investigation of A.pyogenes.

Key words: Arcanobacterium pyogenes(A.pyogenes); TaqMan Real-time PCR; pyolysin (PLO)

中图分类号:

S852.61

刘二龙, 卢丽, 唐婕, 吕英姿, 郑高彬, 蒋湘. 化脓隐秘杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. , 2015, 42(5): 1093-1097.

LIU Er-long, LU Li, TANG Jie, LV Ying-zi, ZHENG Gao-bin, JIANG Xiang. Establishment of TaqMan Real-time PCR Assay for Detection of Arcanobacterium pyogenes[J]. , 2015, 42(5): 1093-1097.

参考文献

[1] Ramos C P, Foster G, Collins M D.Phylogenetic analysis of the genus Actinomyces based on 16S rRNA gene sequences:Description of Arcanobacterium phocae sp.nov., Arcanobacterium bernardiae comb.nov., and Arcanobacterium pyogenes comb.nov.[J].Int J Syst Bacteriol, 1997, 47(1):46-53.
[2] Confer A W.Update on bacterial pathogenesis in BRD[J].Anim Health Res Rev, 2009, 10(2):145-148.
[3] 王居海, 张海波, 周玉龙, 等.犊牛化脓隐秘杆菌性肺炎的病原鉴定[J].畜牧与兽医, 2010, 42(9):85-87.
[4] 唐婕, 胡罕, 王永奇, 等.林麝化脓棒状杆菌的分离和鉴定[J].中国草食动物, 2011, 31(2):71-73.
[5] 唐婕, 刘文华, 王永奇.大肠杆菌引起林麝死亡的初步研究[J].特产研究, 2009, 31(1):23-24.
[6] 郭文洁, 赵敬翠, 刘耀川, 等.化脓隐秘杆菌毒力因子的研究进展[J].中国兽医杂志, 2010, 1:52-53.
[7] Billington S J, Jost B H, Cuevas W A, et al.The Arcanobacterium (Actinomyces) pyogenes hemolysin, pyolysin, is a novel member of the thiolactivated cytolysin family[J].Bacterol, 1997, 179(19):6100-6106.
[8] 周玉龙, 高小兵, 范春玲, 等.牛源化脓隐秘杆菌PLO蛋白的原核截短表达及其溶血活性检测[J].中国预防兽医学报, 2012, 3:197-200.
[9] 刘明春, 杨蕴力, 吴聪明, 等.奶牛子宫内膜炎化脓隐秘杆菌的分离与PCR鉴定[J].畜牧与兽医, 2008, 40(11):76-77.
[10] 王密, 周玉龙, 朴范泽.牛化脓性隐秘杆菌病PCR诊断方法的建立[J].微生物学通报, 2010, 37(9):1320-1324.
[11] 刘明春, 刘耀川, 赵敬翠, 等.奶牛子宫内膜炎化脓隐秘杆菌16S rRNA基因的鉴定与分析[J].中国兽医学报, 2009, 29(3):343-345.
[12] 鲁杏华, 何世成, 谈志祥, 等.猪化脓隐秘杆菌的分离与鉴定[J].中国畜牧兽医, 2009, 36(5):149-152.
[13] 杜昕波, 赵耘, 李伟杰, 等.3株斑羚、岩羊化脓隐秘杆菌的鉴定及系统发育分析[J].中国畜牧兽医, 2010, 37(4):60-62.

化脓隐秘杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

Establishment of TaqMan Real-time PCR Assay for Detection of Arcanobacterium pyogenes

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 8

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	麻宝艺, 盛陈艳, 刘宏莹, 马青霞, 汪婷婷, 李健明, 时坤, 杜锐, 冷雪. BVDV 1型和2型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2326-2335.
[2]	张斯旂, 刀筱芳, 李垚, 马媛, 杨发龙. 山羊皮下脓肿的病原分离与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(3): 949-956.
[3]	兰德松, 顾贵波, 侯振中. 伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(7): 1804-1812.
[4]	郭翠丽, 张春红, 郭鹏举, 张建峰, 沈海燕, 潘家强. 鸡传染性贫血病病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. , 2014, 41(12): 45-49.
[5]	李伟杰, 魏财文, 刘燕, 岂晓鑫, 田野, 蒋桃珍. 奶牛源化脓隐秘杆菌的分离鉴定及其毒力基因的检测[J]. , 2014, 41(11): 68-72.
[6]	范晴;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;谢丽基;彭宜. 牛轮状病毒TaqMan实时荧光RT-PCR 快速检测方法的建立[J]. , 2011, 38(4): 105-108.
[7]	杜昕波;赵耘;李伟杰;康凯;陈敏;陈永林. 3株斑羚、岩羊化脓隐秘杆菌的鉴定及系统发育分析[J]. , 2010, 37(4): 60-62.
[8]	鲁杏华;何世成;谈志祥;刘道新;邱立新;范仲鑫;唐小明;黄建龙;王洪冰. 猪化脓隐秘杆菌的分离与鉴定[J]. , 2009, 36(5): 149-151.