为构建牛生长分化因子9(GDF-9)基因真核表达载体,观察GDF-9基因真核表达载体转染牛卵丘细胞后对卵丘扩展相关基因表达的影响,试验在质粒pcDNA4 myc-his的多克隆位点插入GDF-9基因构建真核表达载体pcDNA4 myc-his-GDF-9,用脂质体转染牛卵丘细胞,利用Western blotting检测了GDF-9蛋白的表达量,同时利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测牛卵丘细胞中卵丘扩展相关基因的表达量.结果发现,转染了pcDNA4 myc-his-GDF-9的牛卵丘细胞中检测到GDF-9蛋白的表达,且牛卵丘细胞扩展相关基因PTGS2、PTX3和HAS2的表达量显著提高(P< 0.05),表明牛pcDNA4 myc-his-GDF-9可有效地转染到牛卵丘细胞中,该试验结果为进一步研究GDF-9基因的功能奠定了基础.

本试验旨在观察前列腺素E₂受体激动剂(布他前列腺素(butaprost))与雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中转化生长因子β₃(TGFβ₃)表达的影响,阐明butaprost和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞TGFβ₃有无协同调控作用.采用胰酶消化法及机械法分离培养奶牛输卵管上皮细胞,分别将butaprost和雌激素作用于体外培养的奶牛输卵管上皮细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测butaprost和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中TGFβ₃ mRNA表达的影响.结果显示,与0 h作用组相比,雌激素作用16、24和48 h时对奶牛输卵管上皮细胞TGFβ₃的表达量均极显著升高(P< 0.01),4 h的表达量极显著降低(P< 0.01);且受体激动剂butaprost和雌激素有协同调控TGFβ₃的效应;加入吲哚美辛后能有效抑制内源性前列腺素对TGFβ₃表达的作用.结果表明,butaprost和雌激素可调控奶牛输卵管上皮细胞TGFβ₃ mRNA 的表达.

为了克隆也木勒白羊抑制素α(inhibin α,INHα)亚基基因和表达其重组蛋白质,本试验采集发情期也木勒白羊卵巢组织,并从中快速抽提总RNA,以此作为模板并根据白羊INHα亚基基因编码区序列(GenBank登录号:XM_004004955.1)设计合成1对引物,经反转录扩增获得了也木勒白羊INHα亚基基因编码区全长序列.并将扩增产物克隆到表达载体(pEGFP-N1)的Scal Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点之间,构建重组质粒pEGFP-INHα并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,后进行鉴定、测序,证明成功构建了INHα亚基基因的真核表达载体.将也木勒白羊INHα亚基基因与人、大猩猩、牛等动物的INHα亚基基因序列进行同源性比对分析,相似度都在50%以上,说明了抑制素基因具有高度保守性.用RT-PCR和Western blotting方法验证了INHα亚基基因的真核表达载体在BHK细胞中的成功表达及蛋白表达.

试验旨在构建一个能够定点整合且无筛选标记基因的半乳糖苷酶基因LacS表达载体.本研究以pEGFP-N1质粒为原始框架,通过PCR及限制性酶切位点在pEGFP-N1质粒的标记基因两端添加两个同向LoxP序列,在多克隆位点上游添加能够定点整合的attB序列,最后再将目的基因BC promoter-LacS-PolyA通过限制性酶切位点插入多克隆位点.每一步都进行PCR、酶切及测序鉴定.PCR产物及酶切片段大小符合预期结果,测序结果也与相应寡核苷酸序列一致,证明各个基因片段正确地连接到载体相应位置.本试验成功构建了可定点整合的无筛选标记半乳糖苷酶基因表达载体pEGFP-N1-LacS.

为了解狂犬病口服疫苗SRV₉毒株的基因序列与生物学特性的关系,并就其主要抗原位点与国内外现用狂犬病疫苗生产毒株进行比较,明确其作为口服疫苗株的分子基础,本试验通过RT-PCR方法对狂犬病口服疫苗SRV₉毒株的N、P、M、G、L基因分别进行克隆,并分别连接于pMD19-T载体,经酶切、测序鉴定后,用DNAStar软件对全基因序列进行分析,并与11株目前生产用狂犬病疫苗株进行基因序列比对分析和主要抗原位点的比较.狂犬病口服疫苗SRV₉毒株N、P、M、G、L基因序列与其他毒株的序列同源性为81.8%~100.0%,由全基因组进化树可知,SRV₉毒株与所有疫苗株在同一个大的分支内,均属于基因Ⅰ型,其中狂犬病口服疫苗SRV₉毒株与ERA、SAD B19、SAG-2等口服疫苗株的进化距离最近,而与疫苗生产毒株aG、RC-HL 之间的进化距离则较远.狂犬病口服疫苗SRV₉毒株与各疫苗株的糖蛋白不同结构区的氨基酸同源性分析表明,狂犬病口服疫苗SRV₉毒株与SAD B19、SAG-2、ERA口服疫苗株的膜外区、跨膜区和膜内区的同源性最高.狂犬病口服疫苗SRV₉毒株的基因组结构和抗原基因位点特征均与目前生产用口服疫苗株相似,这为今后狂犬病口服疫苗的研制和通过分子生物学技术构建基因重组弱毒疫苗株的研究提供了试验依据.

骨髓间充质干细胞(BMSC)具有多向分化的特性,但其生命周期有限,为进一步探讨端粒逆转录酶(TERT)对端粒酶活性的影响,本试验利用将外源性TERT导入间充质干细胞技术,构建重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TERT,将其转染BMSC,通过筛选及鉴定,结果显示成功构建了重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TERT.将TERT-BMSCs在体外进行传代培养及生长曲线的测定,利用PCR技术对其原有干细胞因子的表达情况进行了鉴定.结果显示,TERT-BMSC具有快速扩增的能力,细胞形态良好,且仍具有干细胞特性.本试验结果揭示了外源性TERT基因的表达能激活绵羊BMSC的端粒酶活性.

为探究绵羊骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)的生物学特性,本试验综合运用NCBI、DNAMAN、DNAStar、TMHMM Server v.2.0、PsortⅡ、SignalP等多种生物信息学软件推测绵羊BMP4基因序列性质及编码蛋白的理化性质、疏水性、磷酸化位点、保守性结构域和二级结构,并用SWISS-MODEL Workspace预测三维结构.结果显示,绵羊BMP4基因与各物种的BMP4基因存在很高的同源性,编码蛋白是一个不稳定的亲水蛋白,不存在跨膜区,很可能位于细胞核中,且存在信号肽.BMP4具有18个磷酸化位点,通过功能域的预测发现,含有2个功能域,即TGF-β超家族和TGF-β前肽超家族.这与BMP4基因家族的功能相一致,证明了绵羊BMP4是一种生长因子,具有信号传导功能.蛋白三维结构预测结果与模板3bmp.1.A同源性达到了88.29%.绵羊BMP4基因的生物信息学分析可为以后实践中深入研究其功能提供参考.

通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437 bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法.该方法能同时检测到TGEV和PEDV,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)等均无扩增,其检测TGEV、PEDV的极限为10⁴ 拷贝/μL;用该方法对临床收集的68份疑似病毒性腹泻仔猪粪便和肠道组织样本进行检测,结果表明本试验建立的二重PCR方法具有特异性强、灵敏度高等特点,能用于临床诊断及流行病学调查.

为建立快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的血清学方法,本试验以IBV为检测抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.研究结果显示,抗原的最佳包被浓度为19.2 μg/mL,最佳包被条件为37 ℃ 1 h后4 ℃过夜;血清的最佳稀释度为1:800,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1:7 000,37 ℃孵育60 min;底物显色为37 ℃避光作用10 min.经特异性、重复性、敏感性试验证明,该方法与鸡常见病原的阳性血清均无交叉反应,重复性较好及血清稀释至1:12 800时仍可检测到IBV抗体.结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.

本研究旨在建立一种能同时检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)、肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae,K.pneumoniae)的三重PCR检测方法.根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌toxR基因、肺炎克雷伯杆菌PhoE基因设计并合成引物,在单一PCR条件基础上优化建立三重PCR反应条件,并进行特异性、敏感性和重复性分析及与细菌分离培养的比对试验.结果显示,3对引物均能特异性扩增出目的条带,大小分别为484、278和368 bp.最佳退火温度在56~59 ℃之间,引物浓度均为0.2 μmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,Mg²⁺浓度为2.5 mmol/L.3种细菌间无交叉反应.对支气管鲍特杆菌等其他8种实验动物常见致病菌均无交叉反应.最低能同时检测到10^-5 ng/μL的细菌基因组DNA.3次重复结果一致,表明建立的三重PCR方法重复性好.同时采用细菌分离培养法和三重PCR方法对30份实验小鼠样本进行检测,对比结果显示三重PCR方法检出率略高于细菌分离培养法,细菌分离培养法呈阳性的样品,三重PCR方法均能检出.结果表明,本试验建立的三重PCR检测方法具有特异、敏感、高效等优点,为实验动物细菌快速检测和流行病学调查提供了技术支持.

本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况.利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重组质粒pET-32a-F1L,转化至大肠杆菌BL21菌株后,对阳性菌株进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定.结果表明,所获得的毒株为ORFV,其F1L基因在大肠杆菌中的表达产物大小约为57.4 ku,主要以包涵体形式存在,5 h为最佳诱导表达时间,并具有良好的反应原性.

为了研究老年大熊猫肠道菌群的构成,本试验对3只圈养老年大熊猫粪便细菌构建16S rDNA克隆文库,采用限制性内切酶Hinf Ⅰ、Msp Ⅰ对其进行限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)及测序分析.结果显示,老年大熊猫肠道细菌主要由变形菌门和厚壁菌门组成;变形菌门中又以大肠埃希氏菌属为主,其次为假单胞菌属、志贺氏菌属、气单胞菌属;而厚壁菌门中以链球菌属为主,其次为魏斯氏菌属、梭菌属;此外还发现一定比例的未培养细菌.本试验第一次建立了较丰富的老年大熊猫肠道菌群的克隆文库,为分析比较各年龄层大熊猫的肠道菌群结构的异同提供了参照,也为合理饲喂老年大熊猫,保障老年大熊猫的健康提供重要信息.

本研究旨在发掘牛更多的microRNA(miRNA)信息及新的miRNA序列,为进一步研究miRNA的生物学功能奠定理论基础.运用高通量测序技术对来自一头西门塔尔公牛和一头荷斯坦母牛的多个组织的小RNA进行混池测序,对测序结果进行了生物信息学分析.随机选取了一条成熟miRNA:bta-miR-2346-5p和两条新预测的miRNAs:novel_miR-48和novel_miR-86,采用茎环RT-PCR进行验证.共鉴定了604条miRNAs,其中429条为牛的已知miRNAs,175条为新预测的miRNAs.通过茎环RT-PCR发现选取的这3条miRNAs在背最长肌、心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠中均有表达,证明了高通量测序结果的准确性.本试验得到的数据在一定程度上丰富了牛miRNA的数量和种类,为后续牛或其他物种的miRNA相关生物学研究提供了更加详实的信息.

本研究旨在获得抗猪伪狂犬病病毒(PRV)闽A株的多克隆抗体,为PRV的治疗与检测提供理论基础.本研究在PK-15细胞上进行PRV的增殖,测定其TCID₅₀为10^-7.372,粗提蛋白后,测定PRV蛋白浓度为3.6 mg/mL.试验选用25只健康、雄性、体重为2.5 kg±0.2 kg的新西兰大白兔为试验动物,用获得的PRV为抗原免疫后,获得抗PRV多克隆抗体.测定其抗血清效价为1:32 000,抗原包被稀释度为1:40,最佳包被条件为4 ℃ 12 h,最佳封闭时间为1 h,酶标二抗最佳工作稀释度为1:8 000.细胞病变中和试验结果表明,本研究制备的PRV抗血清在1:16的稀释情况下能保护50%的PK-15细胞免受PRV的攻击,而阴性血清不能保护PK-15细胞免受PRV的感染.结果表明本研究成功制备了PRV多克隆抗体.

长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是一类长度大于200 nt的非编码RNA,能够存在于细胞核和细胞质中.LncRNA能够以顺式和反式作用方式调节基因表达,是一类重要的基因表达调节分子.LncRNA参与细胞分化发育、X染色体失活、肿瘤、免疫、神经系统和心血管系统疾病等多种生物过程和疾病的调控,具有重要的研究价值.作者主要对LncRNA的分类和来源、作用机制、研究现状及其在畜牧兽医中的研究情况进行了综述,为LncRNA在兽医和畜牧业科学中的研究和应用提供参考.

本试验旨在研究不同水平的复方中药对断奶獭兔生长性能、营养物质表观消化率、免疫功能及屠宰性能的影响.将70只60日龄断奶仔獭兔随机分为7组,每组5个重复,每个重复2只.Ⅰ组为空白对照组,饲喂基础日粮;Ⅱ组为抗生素对照组,饲喂在基础日粮中添加抗生素(含50 mg/kg杆菌肽锌、10 mg/kg硫酸黏杆菌素)的日粮;Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组为中药试验组,分别饲喂在基础日粮中添加1%、2%、3%、4%、5%复方中药的日粮.预试期7 d,正试期45 d.结果表明:①Ⅳ组平均日增重显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P< 0.05),料重比显著低于其他各试验组(P< 0.05).②在干物质表观消化率上,Ⅳ组显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P< 0.05),Ⅶ组显著高于Ⅰ组 (P< 0.05);在粗纤维表观消化率上,Ⅳ组极显著高于Ⅰ组(P< 0.01),Ⅶ组显著高于Ⅰ组(P< 0.05);在中性洗涤纤维表观消化率上,Ⅳ组极显著高于Ⅰ组(P< 0.01),显著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ组(P< 0.05);在酸性洗涤纤维表观消化率上,Ⅳ组显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ组(P< 0.05);在粗蛋白质表观消化率上,Ⅳ组显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P< 0.05).③各试验组间免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)含量差异均不显著(P> 0.05);Ⅳ组脾脏指数显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ组(P< 0.05).④各试验组间屠宰率、半净膛屠宰率、全净膛屠宰率差异均不显著(P> 0.05).综上所述,日粮中添加复方中药和抗生素都可提高断奶獭兔生长性能、营养物质表观消化率、免疫功能及屠宰性能,且添加2%复方中药效果最好.

通过消化代谢试验研究绵羊对棉籽壳(含仁棉籽壳、无仁棉籽壳)和粉碎玉米秸秆的自由采食量和表观消化率,旨在对棉籽壳的营养价值和消化特点进行评价.试验选择12只成年新疆美利奴公羊,随机分为2组(n=6),在饲喂300 g/(只·d)混合精料的基础上分别喂给400(试验1组)、800(试验2组)g/(只·d)无仁棉籽壳,用差数法测定绵羊对棉籽壳的表观消化率.另外,选择18只成年新疆美利奴公羊,随机分为3组(n=6),在饲喂300 g/(只·d)混合精料的基础上,分别自由采食含仁棉籽壳(试验3组)、无仁棉籽壳(试验4组)和粉碎玉米秸秆(试验5组),研究绵羊对其的消化代谢情况.结果表明,绵羊对无仁棉籽壳干物质、有机物、粗蛋白质、纤维素、半纤维素和能量的表观消化率分别为46.71%、47.37%、-53.40%、66.60%、62.48%和42.59%.饲喂含仁棉籽壳、无仁棉籽壳和粉碎玉米秸秆时,饲喂含仁和无仁棉籽壳组的干物质、有机物、纤维素、半纤维素、能量和钙等的采食量均无明显差异(P> 0.05),但采食含仁棉籽壳组粗蛋白质和磷的采食量极显著高于无仁棉籽壳组(P< 0.01),木质素采食量极显著低于无仁棉籽壳组(P< 0.01).饲喂含仁棉籽壳日粮和无仁棉籽壳日粮绵羊间干物质、有机物和能量的表观消化率均无明显差异(P> 0.05),但无仁棉籽壳组绵羊的纤维素和半纤维素的表观消化率却分别显著和极显著高于含仁棉籽壳组(P< 0.05;P< 0.05),含仁棉籽壳组粗蛋白质的表观消化率极显著高于无仁棉籽壳组(P< 0.01);饲喂玉米秸秆时绵羊的干物质、有机物、粗蛋白质、纤维素和能量的表观消化率均极显著高于饲喂含仁或无仁棉籽壳的绵羊(P< 0.01),但钙和磷的表观消化率却低于饲喂棉籽壳的绵羊(P> 0.05).饲喂含仁棉籽壳日粮绵羊的氮摄入量和氮保留率极显著高于无仁棉籽壳日粮绵羊(P< 0.01);饲喂玉米秸秆日粮绵羊和饲喂无仁棉籽壳绵羊在氮保留上无明显差异(P> 0.05).因此,棉籽壳是一种特殊的粗饲料,绵羊对其采食量大,纤维素类物质和能量的消化率较高,但存在着严重的蛋白质消化障碍;无仁棉籽壳日粮与玉米秸秆日粮的营养价值基本相当,但绵羊对无仁棉籽壳日粮的氮消化率较低.

本试验旨在研究日粮中青贮甘蔗尾叶替代不同比例王草对海南黑山羊生长性能、养分表观消化率及血清生化指标的影响.选用20只平均体重(6.96±0.49)kg的3月龄海南黑山羊羔羊(公、母各半),随机分为5组,每组4个重复,每个重复1只羔羊.对照组饲喂基础日粮,基础日粮包括精饲料和粗饲料,粗饲料为王草;试验1~4组分别在粗饲料中以青贮甘蔗尾叶替代25%、50%、75%、100%王草.预试期5 d,正试期30 d.结果表明,与对照组相比,试验3组粗饲料干物质采食量和平均干物质日采食量显著升高(P< 0.05),各组间平均日增重、精饲料干物质采食量和料重比均无显著差异(P> 0.05);与对照组相比,试验3组粗灰分、磷表观消化率显著升高(P< 0.05),试验4组粗灰分、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、钙表观消化率显著升高(P< 0.05),试验3、4组间差异不显著(P> 0.05);各组间黑山羊血清生化指标均无显著差异(P> 0.05).综上所述,粗饲料中青贮甘蔗尾叶替代一定比例王草可在一定程度上改善黑山羊生长性能,提高养分表观消化率,且对其血清生化指标无不利影响,其中粗饲料中用青贮甘蔗尾叶替代75%王草时饲喂效果最佳.

为确定昆明鼠对饲料中霉菌毒素吸附剂蒙脱石的耐受剂量,试验选择60只初始体重为(17±0.12)g的健康雄性昆明系小白鼠,随机分成5个处理组,每组2个重复,每个重复6只.在基础日粮含黄曲霉毒素B₁(AFB₁)< 10.0 μg/kg的条件下,5个处理组分别添加0(对照组)、0.5%、1%、2%和5%蒙脱石.试验30 d后测定小白鼠生长性能、养分表观消化率、血清生化指标及内脏组织变化.结果表明,添加0.5%蒙脱石显著提高了小白鼠平均日采食量(P< 0.05),添加1%蒙脱石组小白鼠平均日采食量和平均日增重与对照组间均无显著差异(P> 0.05),随着蒙脱石添加水平的升高,小白鼠平均日采食量显著下降(P< 0.05).蒙脱石添加水平为2%时,小白鼠平均日增重与对照组相比无显著差异(P> 0.05),但显著低于0.5%和1%组(P< 0.05).本试验中添加不同水平蒙脱石对小白鼠干物质(DM)、粗蛋白质(CP)和粗脂肪(EE)的表观消化率均未造成显著影响(P> 0.05).随着蒙脱石添加水平的提高,血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及丙二醛(MDA)含量不断升高,除0.5%组与对照组相比差异不显著外(P> 0.05),其他3组均显著高于对照组(P< 0.05).小白鼠组织切片显示,蒙脱石添加水平为5%时,肝脏有不同程度的损伤.综上所述,在本试验条件下,当基础日粮含霉菌毒素在安全范围内时,综合考虑各项指标,昆明系小白鼠对本受试蒙脱石的耐受剂量介于0.5%~2%之间.

试验旨在研究补饲复合微生态制剂对泌乳期伊犁母马血液生化指标及抗氧化能力的影响.根据年龄、胎次、泌乳月龄相近的原则选择泌乳期伊犁母马24匹,随机分为4组,分别为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组.对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在饲喂基础日粮的基础上分别补饲0.05 g枯草芽孢杆菌(活菌数为2.0×10¹¹ CFU/g)和0.133 g植物乳杆菌(活菌数为3.0×10¹⁰ CFU/g)、0.10 g枯草芽孢杆菌和0.266 g植物乳杆菌、0.15 g枯草芽孢杆菌和0.399 g植物乳杆菌.结果表明,与对照组相比,补饲复合微生态制剂对泌乳期伊犁母马血液中总蛋白、白蛋白、血尿素氮含量和谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性的影响均差异不显著(P> 0.05);但补饲复合微生态制剂泌乳期伊犁母马血液中总蛋白、白蛋白含量和超氧化物歧化酶活性呈升高的趋势;试验Ⅱ组泌乳期伊犁母马血液中球蛋白含量显著高于对照组和试验Ⅰ组(P <0.05),其他各组之间差异不显著(P> 0.05).过氧化氢酶的活性试验Ⅱ组显著高于对照组和试验Ⅲ组(P <0.05),试验Ⅰ组与其他各组之间差异不显著(P> 0.05);总抗氧化能力试验Ⅱ组显著高于试验Ⅰ和Ⅲ组(P <0.05),其他各组之间差异不显著(P> 0.05).因此,补饲植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌复合物对泌乳期母马增强免疫机能,改善氮沉积,提高机体抗氧化能力起到了一定作用,且补饲0.10 g枯草芽孢杆菌和0.266 g植物乳杆菌复合物时效果较为明显.

水稻是世界主要的粮食作物之一,同时也是重要的饲料原料.近年来国内外研究机构培育出数种转苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因水稻,可有效杀灭二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟等虫害,减少水稻种植过程中农药的使用,提高水稻产量.由于水稻是人类主要的粮食作物,转Bt基因水稻的安全性受到广泛的关注.截至目前尚未有确切证据证实转基因水稻存在饲用安全性问题,但仍需对其长期饲用结果进行持续监控.作者现就转Bt基因水稻的发展、潜在风险和安全评价方法,营养价值、毒理性,对动物生长、免疫、肠道微生物的影响,以及外源基因和外源蛋白的残留等方面进行简要综述.

肉碱是1905年在肌肉中发现的一种必需代谢产物,它的主要生理功能是将细胞液中的长链脂肪酸转运到线粒体中参与脂肪酸β-氧化为机体提供能量.近年来,肉碱作为一种改善畜禽生产和繁殖性能的必需营养物质,在畜牧生产中的应用越来越广泛.作者综述了肉碱的生物合成、转运及其在畜牧业中的应用,以期为肉碱相关研究提供理论依据和思路.

本试验通过Carony's液固定,阿尔新蓝-藏红O复染(AB/SO)法,对1~7日龄雏鸡免疫器官和消化器官中肥大细胞(mast cells,MC)的形态、分布及数量变化进行观察分析.结果表明,免疫器官中MC集中分布在胸腺髓质内、脾脏红白髓交界处、法氏囊的淋巴小结周围组织内;消化器官中MC密集分布于腺胃固有层和胃腺周围、肠的固有层及黏膜下层、肝脏窦状隙和中央静脉周围.雏鸡主要免疫器官与消化器官MC数量随日龄增长均呈上升趋势.

本试验运用干化学法和湿化学法两种方法检测钙离子通道a1亚单位528位精氨酸突变为组氨酸(Cchl1a3-R528H)基因敲入小鼠的电解质水平,对两种不同检测方法进行比较,并分析其相关性.试验首先对该电解质分析仪的精密度进行检测,再选择同一小鼠,先取尾血使用干化学法检测电解质水平,再从眼球取全血,使用湿化学法检测电解质水平,两者进行比较.精密度试验结果显示干式电解质分析仪检测电解质Na⁺、Cl^-、K⁺的变异系数分别为(2.06±0.18)%、(3.61±0.22)%、(4.40±0.19)%,均< 4.5%.将两种方法所测得的电解质结果进行比较,结果显示差异无统计学意义(P> 0.05);各项检测项目之间进行比较,结果显示呈线性相关(其中Na⁺、Cl^-的r值均> 0.975).结果表明该电解质分析仪精密度高,稳定性好,且两种方法所检测电解质结果具有高度相关性及良好的可比性,后续试验可以使用干化学法替代湿化学法进行电解质检测.

本试验旨在比较高原蕨麻小型猪与平原巴马小型猪的血液生理生化指标差异,为高原蕨麻小型猪的实验动物化提供理论基础.试验分别在高原地区和西安市采集高原蕨麻小型猪与巴马小型猪血样,检测10项血液生理指标和14项血液生化指标,并对结果进行统计分析.结果显示,血液生理指标中高原蕨麻小型猪的红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCMH)均极显著高于巴马小型猪(P< 0.01),血小板(PLT)、红细胞分布列宽变异系数(RDW-CV)和红细胞分布宽度标准差(RDW-SD)与巴马小型猪相比差异显著(P< 0.05);血液生化指标中高原蕨麻小型猪γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、葡萄糖(GLU)、肌酐(CRE)均极显著高于巴马小型猪(P< 0.01),其余指标均无显著差异(P> 0.05).结果表明,高原蕨麻小型猪具有低氧适应的生理特征,与巴马小型猪相比有独特的高原适应性,具有开发成为高原疾病动物模型的潜力.

本试验采用PCR-SSCP方法对148只布鲁氏菌阴性和60只布鲁氏菌阳性中国美利奴羊白细胞表面抗原DQB1(OLA-DQB1)基因exon 2单核苷酸多态性(SNPs)进行了检测,之后挑选不同等位基因进行PCR产物测序,旨在确定该基因的多态性位点,并对每个SNP位点的等位基因频率、基因型频率进行统计分析,从而分析其多态性与布鲁氏菌病易感性的相关性.测序结果表明,在270 bp的序列内共检测到43个SNPs,其中G196A位点的等位基因频率在病例组和对照组中的分布存在极显著差异(P< 0.01),其基因型频率存在显著差异(P< 0.05);C211T位点的等位基因频率在病例组和对照组中存在显著差异(P< 0.05).由此表明,OLA-DQB1基因exon 2多态性与中国美利奴羊布鲁氏菌病易感性呈显著相关.

本试验旨在探究Pax7(paired box 7)基因在猪不同组织中的表达特征及其在背最长肌中的发育性表达规律.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和Western blotting技术检测了Pax7基因在1日龄马身猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、下丘脑、小脑、背最长肌、腰大肌、股二头肌12种组织中的mRNA和蛋白质表达谱,以及马身猪和大白猪从出生1日龄到180日龄7个发育阶段(1、30、60、90、120、150、180日龄)背最长肌中的发育性表达规律.结果表明,Pax7基因mRNA在背最长肌、腰大肌、股二头肌、下丘脑和小脑组织中表达,而Pax7蛋白仅在背最长肌、腰大肌和股二头肌中表达.背最长肌中Pax7基因mRNA和蛋白质的发育性表达趋势在马身猪和大白猪中基本一致.在mRNA水平上,30日龄的表达量最高,极显著高于其他日龄(P <0.01);1日龄的表达量次之;其他日龄维持低表达的稳定状态.Pax7蛋白表达量在1日龄时最高,极显著高于其他日龄(P <0.01);30日龄次之;其他日龄维持低表达的稳定状态.从出生1日龄到180日龄,马身猪背最长肌中Pax7蛋白的表达量均显著或极显著地高于大白猪(P <0.05;P <0.01).Pax7 基因的表达与组织、日龄及品种的遗传背景有关.

文章通过分析母羊胎次与配种日期对内蒙古白绒山羊产羔数的影响,确定内蒙古白绒山羊的最佳配种时间,以提高其繁殖效率.试验数据来自于内蒙古白绒山羊种羊场1998-2013年的繁殖记录.利用SAS 9.0软件的GLM程序确定母羊胎次、配种日期对产羔数的显著性影响.结果表明,母羊胎次和配种日期对产羔数影响极显著(P< 0.01).母羊第1胎产羔数最低(1.37),随着母羊胎次的增加,产羔数显著增加,第6胎之后产羔数开始下降;配种周期为9月29日-10月16日的产羔数最高(1.76),且母羊发情月份和发情高峰主要集中在10月份,所以在生产中此阶段可以作为内蒙古白绒山羊的配种期.

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)基因在机体固有免疫和炎症反应中发挥重要作用,本研究旨在分析大白猪TNF-α基因启动子区C-791T多态性及其与基因表达之间的关系,为分析TNF-α基因启动子区C-791T突变的遗传学效应提供科学依据.本试验利用PCR-SSCP方法对201头大白猪TNF-α基因启动子区C-791T位点多态性进行检测,同时利用Real-time PCR方法分析TNF-α基因C-791T位点不同基因型在大白猪11个组织中的mRNA差异表达情况.结果表明,大白猪TNF-α基因启动子区-791 bp处存在碱基突变(C> T),并检测到3种基因型,分别为:CC、CT和TT.TNF-α基因在断奶仔猪脾脏、肺脏、胸腺和淋巴结等免疫器官中表达量均较高;TT和CT基因型个体在11个组织中TNF-α基因表达量普遍高于CC基因型个体,且在十二指肠及空肠组织中达到差异显著性水平(P <0.05).因此,TNF-α基因启动子区C-791T突变对该基因的mRNA表达水平产生显著影响,有必要将TNF-α基因启动子区C-791T位点多态性作为提升机体肠道病原菌抗性的遗传标记进行深入研究.

为研究海南五指山猪Myf5和MyoD基因的多态性分布情况,本试验通过PCR-RFLP方法对80头海南五指山猪进行了Myf5和MyoD基因型检测,并运用生物信息学方法对这两个基因的序列进行分析.结果发现,在Myf5基因第1外显子的HhaⅠ-RFLP位点上,五指山猪以CC和CG基因型为主;在Myf5基因第1外显子的Hsp92Ⅱ-RFLP位点上,五指山猪以AA基因型为主;在MyoD基因第1内含子的DdeⅠ-RFLP位点上,等位基因A在五指山猪中是优势等位基因.此外,Myf5和MyoD基因启动子区域和第1外显子处存在CpG岛.本研究得到海南五指山猪Myf5和MyoD基因的序列信息,为下一步五指山猪Myf5和MyoD基因的功能研究奠定基础.

本研究对7 945窝大白母猪妊娠周期、总产仔数、产活仔数、健仔数、弱仔数、畸形数、死仔数、木乃伊及死胎数9个繁殖性状进行了最小二乘分析,分析了胎次、配种季节及妊娠周期分类对母猪繁殖性能的影响;并利用动物模型REML(约束最大似然)方法估计动物繁殖性状的遗传力及性状之间的遗传相关.结果表明,胎次对畸形数(P=0.2619)和木乃伊(P=0.4639)影响不显著(P >0.05),对其他7个繁殖性状影响极显著(P <0.01);配种季节对妊娠周期、产活仔数、弱仔数、木乃伊、死仔数及健仔数影响极显著(P <0.01),对畸形数(P=0.3993)影响不显著(P> 0.05),对总产仔数和死胎数影响显著(P <0.05).妊娠周期对木乃伊影响显著(P <0.05),对其他7个性状影响极显著(P <0.01).妊娠周期遗传力最高,为0.34,其他繁殖性状遗传力都低于0.2,为低遗传力性状.总产仔数与妊娠周期之间存在负遗传相关(r_g=-0.10),与产活仔数及健仔数之间存在较强的正遗传相关,遗传相关都超过0.80.妊娠周期与其他繁殖性状之间的遗传相关较小,最高的为妊娠周期与畸形数之间的遗传相关为-0.17.由此得出结论,妊娠周期属于中等遗传力性状,妊娠周期不仅受到胎次、季节等环境因素的影响,而且也受总产仔数等繁殖性状的影响,妊娠周期可作为养猪生产的间接指标.

为弄清贵州地方山羊脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty acid-binding protein,A-FABP)基因mRNA的表达规律,奠定肉质性状分子标记辅助选择的理论基础,试验以β-actin基因为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊共5个山羊品种心脏、肝脏、肺脏、肾脏、背最长肌、半膜肌及皮下脂肪7个组织器官中A-FABP基因的表达.结果表明,5个山羊品种7个组织中都有A-FABP基因表达,且5个品种中皮下脂肪A-FABP基因的表达水平都较高;在贵州地方山羊A-FABP基因表达的最主要组织——皮下脂肪,以及在与产肉性能直接相关的组织——背最长肌和半膜肌中,黔东南小香羊A-FABP基因mRNA水平都较高.结果提示,贵州地方山羊A-FABP基因mRNA的组织分布模式相似,黔东南小香羊的优良肉质特性或许与其皮下脂肪、背最长肌和半膜肌中A-FABP基因的高表达有关.

本研究以1986年中国自主培育兼用牛新品种——三河牛,在内蒙古海拉尔谢尔塔拉种牛场核心群5 257头1998—2012年20 949条繁殖记录为研究材料,以青年牛首次妊娠日龄、青年牛首次产犊日龄、成母牛妊娠期、成母牛空怀期、产犊间隔为研究对象,用SAS 9.13、DMU软件对数据进行处理,采用AI-REML结合EM算法并配合多性状动物模型对各性状影响因素方差组分进行估计,估算出各性状遗传力,并利用各性状育种值分析其遗传趋势.结果显示,青年牛首次妊娠日龄、青年牛首次产犊日龄、成母牛妊娠期、成母牛空怀期、产犊间隔遗传力分别为0.0552、0.0638、0.0527、0.1096、0.0844,繁殖性状除成母牛空怀期遗传力为0.1096外,其余均小于0.1,属于低遗传力性状.青年牛首次妊娠日龄、青年牛首次产犊日龄、成母牛妊娠期、成母牛空怀期、产犊间隔育种值遗传趋势总体上无明显下降趋势,三河牛繁殖性能保持良好.该试验结果为三河牛优化育种方案、提高选种准确性提供重要理论依据.

本试验旨在探讨CARD15基因StyⅠ酶切位点多态性与云南高原奶牛结核病易感性的关联.选择云南昆明、玉溪、大理等地结核病阳性奶牛103头,结核病阴性奶牛98头,共201头为研究对象,应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP与PCR直接测序法相结合的检测方法,获得CARD15基因StyⅠ酶切位点的基因型及等位基因频率,分析该位点与云南高原奶牛结核病易感性的关系.结果显示,CARD15基因的StyⅠ酶切位点存在AA、AG、GG 3种基因型,在结核病例组中AA、AG、GG基因型频率为0.03、0.42和0.55,A、G等位基因频率为0.24和0.76;在结核对照组中AA、AG、GG基因型频率为0.01、0.05和0.94,A、G等位基因频率为0.04和0.96;对多态性位点的遗传模式进行分析,最佳遗传模式为显性遗传(dominant),在此遗传模式下基因型AG-AA在病例组的频率44.7%,明显高于对照组的频率6.1%,OR(95% CI)=0.08(OR< 1),在病例组与对照组的分布之间有极显著差异(P< 0.0001).结果表明,云南高原奶牛CARD15基因StyⅠ酶切位点多态性与结核病的发生有显著关联性,且基因型AG-AA可能是结核易感型.

卵母细胞和早期胚胎的体外培养(IVC)是哺乳动物胚胎工程的一项关键技术,是生殖生物学和转基因与克隆技术等生物技术研究的基础.影响卵母细胞和早期胚胎体外培养的因素包括培养液组成成分、离子浓度和渗透压,培养环境气相组成和温度等.最近研究表明,培养系统中的氧分压可以显著影响胚胎的发育,而这种影响主要由低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)进行调控.作者综述了氧分压及HIF对卵母细胞和早期胚胎体外发育的影响,并对HIF的结构及调控机制进行讨论,为研究低氧培养技术在卵母细胞和早期胚胎体外培养中的应用提供依据.

为了解副猪嗜血杆菌四川分离株的生物学特性及耐药性情况,本研究采用微生物及分子生物学技术对副猪嗜血杆菌(Hps)四川分离株从生物学特性、16S rRNA基因PCR扩增和耐药性方面进行了研究.结果显示,Hps四川分离株具有一定的微厌氧性,能产生"卫星现象",分离株与其他地区分离株生化特性基本一致;所有分离株均扩增出821 bp的特异性16S rRNA基因片段.药物敏感性试验结果显示,分离株对头孢拉定、氨苄西林、头孢氨苄、阿莫西林、头孢克洛、氧氟沙星、头孢噻肟、呋喃妥因具有较高的敏感性,敏感率为75.61%~87.80%;对林可霉素、羧苄青霉素、恩诺沙星、阿米卡星、磺胺甲唑均表现出较高的耐药性,且多重耐药严重,5~8种耐药占比最多,为21.95%~30.49%,有7株可耐受多达13种药物.结果表明,Hps四川分离株存在严重的耐药性现象.

对四川省成都市某种禽场的156个死胚进行沙门氏菌的分离鉴定及药物敏感性检测.本试验采用沙门氏菌显色培养基、肠杆菌科生化鉴定管、三糖铁试验、沙门氏菌多价血清和16S rRNA PCR鉴定5种方法对疑似菌株进行鉴定,并用6种毒力岛基因将分离的沙门氏菌进行PCR鉴定.结果显示,沙门氏菌的分离率为15.4%(24/156),其中伤寒沙门氏菌占58.3%(14/24);fimY、invA和mgtC毒力基因的检测率均为100%;本试验分离菌对大部分沙门氏菌临床药物表现出明显的耐药性.

为探讨氮磷营养盐对环境大肠杆菌(E.coli)耐药性的影响及其机制,本试验通过建立模型生态系统研究氮磷营养盐引发大肠杆菌对氯霉素(CHL)产生耐药表型的影响,并对分离到的耐药菌株和敏感菌株进行cat基因检测.结果显示,添加不同剂量氮磷营养盐可引发大肠杆菌对氯霉素产生耐药性,46株耐氯霉素大肠杆菌cat基因的阳性率为89.13%;16株对氯霉素敏感的大肠杆菌未检出cat基因.结果表明,模拟生态系统中加入氮磷营养盐可引发大肠杆菌对氯霉素产生耐药;氮磷营养盐引发大肠杆菌对氯霉素耐药与cat基因有关.

传染性支气管炎是一种急性、高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类疫病,对世界养禽业的发展造成了严重威胁.目前,传染性支气管炎的主要预防措施仍然是接种疫苗,但由于传染性支气管炎病毒具有血清型众多、变异速度快且交叉保护性弱等特点,使得传染性支气管炎的防制一直是养禽业面临的重大难题.文章主要对传染性支气管炎病毒的分子生物学特征及其弱毒疫苗的发展历程和免疫策略等方面进行了阐述,以期为新型传染性支气管炎弱毒疫苗的开发及应用提供科学参考.

北京怀柔某养殖场的大鳞大麻哈鱼发生一种慢性,但累计死亡率很高的流行病,为研究大鳞大麻哈鱼感染病原菌的种类,本试验根据病鱼临床症状观察判断疑似感染鲑肾杆菌.试验对病鱼肾脏组织进行印片染色观察细菌形态特征,抽提病鱼的肝脏、肾脏组织DNA,扩增16S rDNA和鲑肾杆菌P57表面蛋白基因片段,测序并运用BLAST进行同源性比对.结果显示,病鱼肾脏组织印片在显微镜下可见大量形态一致的革兰氏阳性短杆菌;采用病鱼肝脏、肾脏组织扩增的16S rDNA基因构建的系统发育树显示与鲑肾杆菌聚为一支;通过PCR扩增出鲑肾杆菌P57表面蛋白基因DNA片段,测序结果与鲑肾杆菌标准株ATCC 33209完全一致,符合率为100%.结果表明病鱼感染鲑肾杆菌并引发细菌性肾病(BKD).这是中国首次在养殖鱼体内检出鲑肾杆菌.

本试验旨在了解毛皮动物源大肠杆菌的耐药性,有效控制毛皮动物细菌病的发生.针对14株分离自毛皮动物的大肠杆菌,采用PCR方法检测氟喹诺酮类耐药基因gyrA的携带情况,并对扩增得到的gyrA基因进行克隆测序和同源性分析;进一步针对gyrA基因制备地高辛标记的核酸探针,使用斑点杂交检测大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药情况;使用牛津杯法检测了大肠杆菌分离株对复方中药的敏感性.结果显示,PCR检出gyrA基因的阳性携带率为57.1%,斑点杂交检出耐氟喹诺酮类大肠杆菌的阳性率为50.0%,对复方中药的耐药率为28.6%.结果表明,毛皮动物对氟喹诺酮类药物的耐药性非常严重,对中药表现较高的敏感性,研究结果将为临床毛皮动物大肠杆菌病的防制提供依据.

为确诊引起秦皇岛某鸡场细菌性疾病的主要病原菌,分析其耐药情况,为临床用药和治疗提供依据,本试验对送检的病死鸡肝脏中分离得到的4株菌进行形态特征观察、生化鉴定、免疫荧光染色观察、细菌16S rRNA基因PCR扩增与测序分析及药敏试验.结果显示,4株分离菌均为革兰氏阴性、带绿色荧光的短杆菌,PCR扩增出的特异性条带与预期大小相吻合,确定为绿脓杆菌.药敏试验结果显示,分离株对庆大霉素、阿米卡星、大观霉素、头孢他啶、头孢曲松、左氧氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、多黏菌素B和磷霉素高度敏感,对四环素和强力霉素中度敏感,而对新霉素、头孢噻肟、头孢噻吩、阿莫西林、氨苄西林、红霉素、复方新诺明和磺胺甲氧异唑耐药.提示,该分离菌对常用抗生素耐药情况严重,养殖场应根据药敏试验结果选择敏感药物进行合理用药.

禽流感是由A型流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病,家禽、野鸟和部分哺乳动物均可感染.禽流感给中国养殖业造成了巨大的损失,同时,随着病毒的种间传播,人类的生命安全也受到了严重威胁.目前,疫苗免疫仍是防控禽流感最主要的手段,传统的疫苗主要有鸡胚灭活苗和禽流感弱毒疫苗.虽然在过往几次禽流感暴发过程中,传统疫苗发挥了重要作用,但其自身却存在诸多弊端,因此研制新型疫苗来弥补传统疫苗的不足是很有必要的.文章主要对禽流感重组活载体疫苗、基因工程亚单位疫苗、DNA疫苗和病毒样颗粒疫苗等新型疫苗的研究进展进行综述,旨在为禽流感的防控提供参考.

牛乳头状瘤(bovine papillomatosis,BP)是由牛乳头瘤病毒(bovine papillomavirus,BPV)引起的一种传染性肿瘤病.该病易复发进而癌变,给养殖业等造成严重经济损失.作者主要对BPV的基因型、基因结构及其功能和致病机制方面的研究进展作一综述,为深入研究BPV致癌潜能及抗病毒疫苗的开发提供参考.