重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.06.011

《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站 ›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (6): 1396-1401.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.06.011

重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达

杨钰¹, 冯杰¹, 刘嫒¹, 张素辉², 许国洋², 冯将¹, 刘宗胜³, 鲜思美^1,4

1. 贵州大学, 贵阳 550025;
2. 重庆市畜牧科学院, 重庆 402460;
3. 毕节市七星关区农牧局草地中心, 毕节 551700;
4. 贵州省动物疫病研究所, 贵阳 550025

修回日期:2014-12-04 出版日期:2015-06-20 发布日期:2015-07-23
通讯作者: 鲜思美 E-mail:xiansimei2005@163.com
作者简介:杨钰(1989-),女,山西长治人,硕士生,研究方向:兽医公共卫生学,E-mail:yuxitutu@sina.com
基金资助:
贵州省科学技术基金项目[黔科合J字(2010)2260];贵州省科学技术基金项目[黔科合LH字(2014)7667];重庆市农发资金项目(14423);毕节市科技局项目:贵州黑山羊羔羊口疮病防治技术攻关[毕科合字(2012)24号]

Isolation and Identification of Orf Virus in Chongqing Area, and Prokaryotic Expression of F1L Gene

YANG Yu¹, FENG Jie¹, LIU Ai¹, ZHANG Su-hui², XU Guo-yang², FENG Jiang¹, LIU Zong-sheng³, XIAN Si-mei^1,4

1. Guizhou University, Guiyang 550025, China;
2. Chongqing Academy of Animal Sciences, Chongqing 402460, China;
3. Grassland Center of Agriculture and Animal Husbandry, Qixingguan Bureau, Bijie 551700, China;
4. Institute of Animal Disease, Guizhou Province, Guiyang 550025, China

Revised:2014-12-04 Online:2015-06-20 Published:2015-07-23

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况.利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重组质粒pET-32a-F1L,转化至大肠杆菌BL21菌株后,对阳性菌株进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定.结果表明,所获得的毒株为ORFV,其F1L基因在大肠杆菌中的表达产物大小约为57.4 ku,主要以包涵体形式存在,5 h为最佳诱导表达时间,并具有良好的反应原性.

关键词: 羊口疮病毒; 分离鉴定; F1L基因; 原核表达

Abstract: The assay was aimed to isolate,culture and identify Orf virus (ORFV) in Chongqing area,and investigate the expression of the F1L gene sequence in E.coli,the virus in the scab samples collected from suspected ORFV infected lamb was isolated in MDBK cell.Moreover,the F1L gene was amplified by PCR and ligated into pET-32a for expression in E.coli.The recombinant plasmid pET-32a-F1L was constructed with the introduction of restriction enzymes NotⅠand EcoRⅠ.The isolated virus was ORFV.SDS-PAGE analysis and Western blotting showed that the target protein was highly expressed with 57.4 ku in lenght at 5 h in E.coli as inclusion bodies and had good reactivity.

Key words: Orf virus (ORFV); isolation and identification; F1L gene; prokaryotic expression

中图分类号:

杨钰, 冯杰, 刘嫒, 张素辉, 许国洋, 冯将, 刘宗胜, 鲜思美. 重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2015, 42(6): 1396-1401.

YANG Yu, FENG Jie, LIU Ai, ZHANG Su-hui, XU Guo-yang, FENG Jiang, LIU Zong-sheng, XIAN Si-mei. Isolation and Identification of Orf Virus in Chongqing Area, and Prokaryotic Expression of F1L Gene[J]. , 2015, 42(6): 1396-1401.

参考文献

[1] 殷震,刘景华.动物病毒学[J].北京:科学出版社,1997.

[2] 鲜思美,胡廷帅,熊朝丽,等.贵州省羊口疮的调查研究[J].动物医学进展,2012,33(11):73-76.

[3] Weber O,Siegiing A,Friebe A.Inactivated parapoxvirus ovis (Orf virus) has antiviral activity against hepatitis B virus and herpes simplex virus[J].J Gen Virol,2003,84(7):1843-1852.

[4] 徐毅,陈无暇,王光伟.山羊暴发传染性脓疱皮炎[J].中国兽医杂志,2002,3:47-48.

[5] Lloyd J B,Gill H S,Haig D M,et al.In vivo T-cell subset depletion suggests that CD⁴⁺ T-cells and a humoral immune response are important for the elimination of Orf virus from the skin of sheep[J].Vet Immunol Immunopathol,2000,74(3-4):249-262.

[6] Torfason E G,Gunadottir S.Polymerase chain reaction for laboratory diagnosis of Orf virus infections[J].J Clin Virol,2002,24(1-2):79-84.

[7] 向智龙,卓建华,程振涛,等.贵州地区羊口疮病毒 B2L基因克隆及原核表达载体构建[J].中国畜牧兽医,2011,38(7):76-79.

[8] Scagliarini A,Ciulli S,Battilani M,et al.Characterisation of immunodominant protein encoded by the F1L gene of Orf virus strains isolated in Italy[J].Archives of Virology,2002,147(10):1989-1995.

[9] Gallina L,Scagliarini A,Ciulli S,et al.Cloning and expression of the Orf virus F1L gene:Possible use as a subunit vaccine[J].Veterinary Research Communications, 2004,28(Suppl):291-293.

[10] 邱进杰,张素辉,沈克飞,等.重庆地区山羊羊口疮病毒的PCR鉴定分析[J].黑龙江畜牧兽医,2014,5:104-105.

[11] 赵立志,薛双虎,吕武夫,等.羊传染性脓疱性皮炎病毒的细胞培养[J].中国兽医杂志,1991,17(8):12-13.

[12] 王明珠,于春林,白斯琴,等.羊传染性脓疱的流行与防治[J].中国兽医杂志,2002,38(10):49-50.

[13] 田婷婷,李杰,姚运亮,等.羊口疮病毒灭活疫苗的制备及免疫效果观察[J].动物医学进展,2013,6:17-20.

[14] 张克山,刘永杰,孔汉金,等.羊口疮病毒B2L基因DNA疫苗载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达[J].中国人兽共患病学报,2013,10:951-954.

[15] 许国洋,包小玉,范磊,等.鸡β-防御素-13成熟肽的原核表达与抑菌活性分析[J].中国预防兽医学报,2014,36(6):479-482.

重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达

Isolation and Identification of Orf Virus in Chongqing Area, and Prokaryotic Expression of F1L Gene

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[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[3]	宋越, 苏胜杰, 张帆, 白帆, 戴伶俐, 王娜, 王大伟, 杨茜雯, 赵世华, 张月梅. 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2479-2486.
[4]	卢玉葵, 刘佳琪, 钟嘉诚, 陈济铛, 朱婉君, 张溢珊, 张济培. 鹅源副鸡禽杆菌的分离鉴定及致病性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2562-2572.
[5]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[6]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[7]	李志杰, 赵莹, 马鑫, 王萌, 余四九, 王立斌, 潘阳阳. 动物卵泡液外泌体分离方法及主要生殖功能研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1480-1488.
[8]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[9]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[10]	田常青, 张坤中, 齐玉梅, 史文静, 董志杰, 张浩浩, 何曾文, 芝吉, 赵学慧, 崇倩, 薛慧文, 苟惠天. 1株环境源单增李斯特菌的分离鉴定及生物特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1543-1555.
[11]	刘家兴, 韩雪英, 张鑫茹, 邓嘉昕, 姚伦广, 刘阳坤. 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1567-1574.
[12]	曹颖颖, 梁亮, 曾怡蓉, 钟清华, 袁小芳, 唐海波, 冷静. 滇西树鼩源沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1718-1728.
[13]	贾新月, 马静, 张艳艳, 马勋, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 847-858.
[14]	章志涛, 李祥龙, 孔令丽, 罗雨昕, 王冬英. 大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1107-1117.
[15]	甘露, 郑会珍, 诺明达来, 刘燕, 金敏, 何文文, 温丽翠, 李永畅, 巴音查汗·盖力克. 伊氏锥虫伊犁株扩繁及其PFR基因克隆表达和生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 469-478.