牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.05.011

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (5): 1104-1109.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.05.011

牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达

冉旭华, 曹思, 张峣, 魏晓曼, 闻晓波, 倪宏波, 朱战波

黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室, 大庆 163319

收稿日期:2014-10-31 出版日期:2015-05-20 发布日期:2015-06-02
通讯作者: 闻晓波 E-mail:wenxiaobo1977@163.com
作者简介:冉旭华(1978-),女,黑龙江哈尔滨人,博士,研究方向:分子免疫学,E-mail:ranxuhua@163.com
基金资助:
国家自然科学青年基金(31201909);黑龙江博士后科研启动资助项目 (LBH-Q13134);黑龙江省自然科学青年基金(QC2013C028)

Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of NSP1 Gene of Bovine Rotavirus UK Strain

RAN Xu-hua, CAO Si, ZHANG Yao, WEI Xiao-man, WEN Xiao-bo, NI Hong-bo, ZHU Zhan-bo

Provincial Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China

Received:2014-10-31 Online:2015-05-20 Published:2015-06-02

摘要/Abstract

摘要： 轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55 ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列设计并合成1对特异性引物,本试验利用RT-PCR方法扩增牛轮状病毒UK株NSP1基因,克隆入pET-28a(+)表达载体,经双酶切和测序鉴定,并利用分子生物学软件进行同源性比对分析。本试验结果显示获得的NSP1基因全长编码区序列为1 473 bp,编码491个氨基酸,与美国WC3株同源性最高。将阳性重组质粒转入E.coli Rosetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析,结果表明重组蛋白分子质量约为55 ku,以包涵体形式表达,可与鼠抗His-tag抗体反应。本试验成功获得牛轮状病毒UK株NSP1基因,且实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,本试验结果为研究NSP1蛋白在细胞内定位与其活性之间的相互关系奠定了基础。

关键词: 牛轮状病毒UK株; NSP1; 序列分析; 原核表达

Abstract: Rotavirus is a major cause of acute diarrhea in both many kinds of young animals and children under 5 years old.Rotavirus NSP1, a 55 ku RNA binding protein, is the product of gene 5, which can subvert innate immune responses and be one of virulent determinant factors.According to the sequence in GenBank, specific primers targeting to NSP1 gene were designed and the gene was amplified by RT-PCR, following by being cloned into the pET-28a(+) vector.It showed that the full length of NSP1 gene was 1 473 bp, encoding 491 amino acids.The NSP1 shared the highest identity with WC3 strain.The recombinant protein was induced in E.coli Rosetta(DE3) by IPTG and was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting.The results revealed that NSP1 recombinant protein existed in the form of inclusion body with the molecular weight of 55 ku.The purified recombinant protein could be recognized by His-tag antibody.This study laid the foundation for further research on the relationship between the intracytoplasmic location of NSP1 protein and its activity.

Key words: bovine rotavirus UK strain; NSP1; sequence analysis; prokaryotic expression

中图分类号:

Q786

冉旭华, 曹思, 张峣, 魏晓曼, 闻晓波, 倪宏波, 朱战波. 牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达[J]. , 2015, 42(5): 1104-1109.

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牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达

Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of NSP1 Gene of Bovine Rotavirus UK Strain

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