牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.05.008

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (5): 1088-1092.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.05.008

牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

庞峰, 史巧芸, 朱华培, 徐开莲, 赵天靖, 李亚颖, 彭冬梅, 李国华, 周海龙, 王凤阳

海南大学农学院, 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室, 海口市动物基因工程重点实验室, 海口 570228

收稿日期:2014-11-03 出版日期:2015-05-20 发布日期:2015-06-02
通讯作者: 王凤阳 E-mail:fywang68@163.com
作者简介:庞峰(1987-),男,山东泰安人,硕士生,研究方向:动物功能基因组,E-mail:19871122asdf@163.com
基金资助:
海南大学"中西部"重点学科项目(ZXBJH-XK002)

Construction of Eukaryotic Expression Vector pEGFP-E5-N1 of Bovine Papillomavirus Type 13 and its Expression in HEK293 Cells

PANG Feng, SHI Qiao-yun, ZHU Hua-pei, XU Kai-lian, ZHAO Tian-jing, LI Ya-ying, PENG Dong-mei, LI Guo-hua, ZHOU Hai-long, WANG Feng-yang

Animal Genetic Engineering Key Laboratory of Haikou City, Hainan Key Laboratory of Tropical Animal Reproduction & Breeding and Epidemic Disease Research, College of Agriculture, Hainan University, Haikou 570228, China

Received:2014-11-03 Online:2015-05-20 Published:2015-06-02

摘要/Abstract

摘要： 基于海口市动物基因工程重点实验室获得的牛乳状瘤病毒13型(BPV-13)基因组序列信息(GenBank登录号:KM258443.2),以基因组为模板,扩增E5基因片段,将其连入pEGFP-N1质粒,构建重组质粒pEGFP-E5-N1,测序正确后瞬时转染HEK293细胞,应用荧光显微镜、流式细胞仪、Western blotting 鉴定融合蛋白的表达。结果显示,E5片段大小为135 bp;重组质粒pEGFP-E5-N1构建正确;荧光显微镜下观察转染重组质粒pEGFP-E5-N1的HEK293细胞,可见明亮的绿色荧光;流式细胞术分析结果显示,转染重组质粒pEGFP-E5-N1 48 h后,约55.59% 的细胞表达绿色荧光蛋白;Western blotting结果表明,表达的融合蛋白大小约为32 ku。本试验结果为下一步研究E5基因的作用机理奠定了基础。

关键词: 牛乳状瘤病毒13型(BPV-13); E5; EGFP; 融合蛋白; 真核表达

Abstract: The PCR technology was used to amplify the E5 gene according to the genome sequence of bovine papillomavirus type 13 (BPV-13) Hainan strain with the GenBank accession number KM258443.2.Then it was ligated into pEGFP-N1 vector.The recombinant plasmid pEGFP-E5-N1 was transfected into HEK293 cells with liposomes by transient transfection.The expression of fusion protein was identified by fluorescence microscope, flow cytometry and Western blotting.The results showed that the E5 gene was 135 bp with the 100% homology with the sequence deposited in GenBank.Bright green fluorescence could be seen in HEK293 cells transfected by pEGFP-E5-N1.The expressed fusion protein was about 32 ku.This experiment laid the foundation for further study of the functions of E5 gene in eukaryotic cells.

Key words: bovine papillomavirus type 13 (BPV-13); E5; EGFP; fusion protein; eukaryotic expression

中图分类号:

Q786

庞峰, 史巧芸, 朱华培, 徐开莲, 赵天靖, 李亚颖, 彭冬梅, 李国华, 周海龙, 王凤阳. 牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达[J]. , 2015, 42(5): 1088-1092.

PANG Feng, SHI Qiao-yun, ZHU Hua-pei, XU Kai-lian, ZHAO Tian-jing, LI Ya-ying, PENG Dong-mei, LI Guo-hua, ZHOU Hai-long, WANG Feng-yang. Construction of Eukaryotic Expression Vector pEGFP-E5-N1 of Bovine Papillomavirus Type 13 and its Expression in HEK293 Cells[J]. , 2015, 42(5): 1088-1092.

[1]	潘鹏丞, 雷宗全, 李显, 胡湘云, 秦谦涛, 覃兆鲜, 关志惠, 陈宝剑, 谢炳坤. 陆川猪MYL2基因生物信息学分析、真核表达载体构建及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1796-1806.
[2]	白少成, 周娟, 靳荣帅, 王璠, 卢婷婷, 汤先伟, 赵博昊, 吴信生, 陈阳. 新西兰白兔CYP11A1基因的克隆、生物信息学分析及其对繁殖相关基因的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(7): 2484-2496.
[3]	邹剑伟, 邹菊红, 申玉建, 韦一, 张叁保, 连子童, 徐建建, 宋颖, 黄艳娜, 韦英明, 蒋钦杨, 郑自华. 努比亚山羊LMCD1基因生物信息学分析、真核表达载体的构建及表达[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2033-2042.
[4]	董媛, 于鸿绪, 陈国良, 鲍东博, 崔嘉芮, 刘磊, 王会岩. 牛妊娠相关蛋白19真核表达载体的构建及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1233-1243.
[5]	张艳敏, 周亚南, 曹磊, 田园, 刘旭平, 谭文松, 赵亮. 猪瘟病毒E2-GM-CSF融合蛋白在HEK293T细胞中的表达和免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 669-676.
[6]	庞峰, 龙琴琴, 梁绍波, 成虹松, 程振涛. 羊口疮病毒ORFV114蛋白生物信息学分析、真核表达及亚细胞定位[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4150-4158.
[7]	曹颖颖, 李慧君, 李宝莹, 梁亮, 冷静, 唐海波. 瑶山亚种树鼩ISG15蛋白表达及其多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 273-282.
[8]	谢珊珊, 杨琴, 邓肖玉, 易继海, 王震, 陈创夫. 线粒体融合蛋白2基因干扰与过表达对布鲁氏菌诱导巨噬细胞凋亡的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 283-293.
[9]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.
[10]	乔连江, 陈晨, 张如, 崔立恒, 徐丽, 杨艳玲. RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因真核表达载体构建及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(7): 2313-2323.
[11]	邹菊红, 申玉建, 高小童, 黄艳娜, 蒋钦杨. 努比亚山羊脂肪和肥胖相关蛋白基因克隆分析及真核表达载体构建[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(7): 2342-2348.
[12]	焦文强, 刘运超, 邢广旭, 陈鹏举, 徐引弟, 王治方, 张青娴, 许峰. 猴源葡萄糖调节蛋白78生物信息学分析及其真核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1170-1178.
[13]	赵泓淙, 高登科, 江海圳, 李雅婷, 李丹, 马白荣, 靳亚平, 陈华涛. 山羊生物钟基因CLOCK真核表达载体的构建和生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(12): 4327-4338.
[14]	潘鹏丞, 温斌华, 谢婉, 姜长津, 焦迪, 陈宝剑, 关志惠, 谢炳坤. 陆川猪PDK4基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(8): 2337-2347.
[15]	王召阳, 蒋亚君, 刘雪婷, 林伟东, 鑫婷, 侯绍华, 郭晓宇, 朱鸿飞, 贾红. 抗犬瘟热病毒VHH抗体噬菌体库的构建与筛选[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(6): 1685-1693.

牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

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