本研究克隆了水牛骨形态发生蛋白1(bone morphogenetic protein-1,BMP1)基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,此外还运用实时荧光定量PCR技术对BMP1基因在水牛不同组织中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆得到水牛BMP1基因的cDNA序列长度为3 195 bp,其中包含完整的2 967 bp的开放读码框(ORF),编码988个氨基酸。经序列相似性分析显示,水牛BMP1基因与牛、猪、马、人和小鼠相应氨基酸序列相似性分别为99%、96%、96%、96%和95%,具有很强的保守性。结合系统进化树分析结果推测,BMP1基因在不同物种及进化的过程中具有高度的保守性。对水牛BMP1蛋白的结构域预测结果发现,其存在1个信号肽区、1个前肽区、1个金属蛋白酶区、5个CUB区和2个EGF-like功能区。定量表达分析结果显示,BMP1基因在水牛心脏组织中相对表达量最高,睾丸、卵巢和生殖嵴等性腺器官表达量次之,骨头等其他组织表达量较低,肝脏表达量最低。

本研究以从江香猪为研究对象,二元杂交猪(从江香猪×野猪)、外三元杂交猪(杜×长×大)为对照,采用DNA池和直接测序技术对3个群体的SIM1基因7个外显子、部分内含子以及3'非翻译区序列进行多态性检测;利用生物信息学软件预测多态位点对SIM1基因mRNA二级结构和蛋白质一级、二级结构的影响。结果表明,在3个群体的SIM1基因中筛查到12个SNPs,C77T位于第5外显子,T29186C、A29195C位于第9内含子,C63T、C225T位于第10外显子,C107T、A426G、T583C、A586C、A605C、A615C位于第11外显子,G267T位于3'非翻译区。其中C77T、T29186C、A29195C、C63T、C225T、C107T、G267T为同义突变,A426G、T583C、A586C、A605C、A615C为错义突变;5个错义突变分别导致异亮氨酸(Ile)变为缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)变为脯氨酸(Pro)、谷氨酸(Glu)变为丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)变为天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)变为组氨酸(His);根据在线软件预测,突变前后的SIM1基因mRNA二级结构和蛋白质一级、二级结构均会发生改变。

通过生物信息学软件对噬菌体vB_EcoM-Bp7裂解酶基因的密码子用法及偏性分析。利用Mobyle中的CodonW 1.4.4及cusp程序计算密码子偏性的各种指标,并对7个噬菌体裂解酶基因序列中的总GC含量、密码子第1、2位GC含量平均值和第3位的GC含量进行分析,利用MegAlign软件对7株噬菌体裂解酶进行氨基酸序列分析,构建系统发育树。结果表明,除噬菌体phi68外,Bp7裂解酶基因与其他5株噬菌体的裂解酶基因密码子使用模式基本一致。偏爱使用以A或U为结尾的密码子;除了AUG(Met)和UGG(Trp)外,还确定了Bp7裂解酶使用的12种高频密码子;偏性比较发现,Bp7裂解酶基因密码子偏性与IME08最相近,与JS98次之;进化分析及聚类分析均表明Bp7裂解酶基因与IME08亲缘关系最近。分析结果将为进一步研究噬菌体Bp7的进化奠定基础。

为建立绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法,本试验分别设计了绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的特异性引物,优化反应条件后对其特异性和敏感性进行评价,并对40份鼻拭子进行了检测。结果显示,该方法能同时扩增出绵羊肺炎支原体545 bp和精氨酸支原体806 bp的特异性片段,而对其他病原的DNA扩增均为阴性。该双重PCR方法对绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的最低检测限分别为100和10 pg/μL。40份鼻拭子检测结果显示,双重PCR检测方法与分离培养法符合率高达92.5%,均能鉴定出绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体。结果表明,本研究建立的双重PCR方法可用于绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的临床快速诊断。

为探索可用来开发牛流行热病毒(bovine ephemeral fever virus,BEFV)疫苗和诊断试剂的候选基因,本研究针对BEFV糖蛋白(G)基因设计了2对特异性引物,用PCR方法扩增基因片段,PCR产物经Xho Ⅰ和Nde Ⅰ双酶切后亚克隆到表达载体pET-30上,将鉴定正确的重组质粒(480-pET-30、1107-pET-30)转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,培养阳性菌株D_{600 nm}值为0.6~1.0,37 ℃下用1.0 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,将其纯化之后进行SDS-PAGE和Western blotting免疫原性分析。同时,应用间接ELISA、动物免疫试验及交叉反应试验对目的蛋白进行分析。结果表明,首次发现的1 107 bp基因片段是分段表达的,具有很好的生物活性和特异性,更适合作为开发疫苗和诊断试剂的候选基因,为今后建立BEFV的血清学诊断方法及疫苗研发提供了理论基础。

为研究江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因的变异情况及NSP2基因的结构特征,采用RT-PCR方法扩增了12份江西地区猪场疑似患PRRS的猪肺脏样品中的ORF5全序列和NSP2部分序列,应用DNAStar和Mega 6.0等软件对所得序列进行同源性比对及遗传变异分析。12株PRRSV ORF5核苷酸同源性为83.7%~99.8%,氨基酸同源性为82.1%~99.5%;与参考毒株JXA1、VR-2332和LV的核苷酸同源性分别为84.9%~99.7%、85.2%~91.0%和62.4%~64.8%。对阳性病料进行了NSP2基因部分序列的扩增,测序结果显示12株PRRSV均属于美洲型毒株,12株PRRSV的NSP2部分序列均存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV有相同的缺失特征。12株PRRSV的ORF5遗传进化树分析显示,10株与高致病性PRRSV处在同一进化分支,进一步说明高致病性PRRSV已成为江西地区的优势流行毒株。

根据GenBank中已发表的猪伪狂犬病病毒(PRV) gE、gI基因的序列设计了2对引物,对PRV NP株的gE、gI基因进行了PCR扩增、回收、克隆、测序,测序结果与预期的PRV gE、gI基因片段相符。同源性比对分析结果显示,PRV NP株gE、gI基因推导的氨基酸序列与国内分离的PRV毒株的同源性分别为95.7%~99.8%、89.9%~99.5%。遗传进化树分析和氨基酸序列比对结果发现PRV NP株的gE氨基酸序列发生变化的位点与2012年国内分离到的PRV流行株相同,从而推测NP株为PRV变异毒株,本研究为PRV的流行病学调查分析奠定了基础,也为开发科学、有效的新型猪伪狂犬病(PR)疫苗提供科学依据。

本试验通过深入了解广西陆川猪猪肺炎支原体(Mhp)地方流行毒株的黏附因子P97基因R1区的序列特征、基本结构及遗传变异等特点,为广西地方品种陆川猪猪支原体肺炎(MPS)有效的综合防控措施提供理论依据,并为进一步研究广西陆川猪Mhp地方流行毒株特性打下坚实的基础。参考Mhp基因组序列设计扩增P97基因R1区的1对引物,以 2011年—2014年广西陆川猪MPS阳性病料为研究对象,提取基因组DNA,PCR扩增P97基因R1区,对PCR产物进行测序,将广西陆川猪Mhp不同地方流行毒株的P97基因R1区序列的碱基组成和推导的氨基酸序列进行比对。DNAStar软件分析结果表明,所获得的15株广西陆川猪Mhp毒株(GXLC-1、GXLC-2、GXLC-3、GXLC-4、GXLC-5、GXLC-6、GXLC-7、GXLC-8、GXLC-9、GXLC-10、GXLC-11、GXLC-12、GXLC-13、GXLC-14、GXLC-15)和3株广西其他品种猪Mhp毒株(GX227、GX595、GX674)的P97基因R1区的多处碱基发生变异。通过推导氨基酸序列统计P97 R1区五氨基酸(AAKPV/E)重复数为9~18,平均值为12,TN重复数为1~4,结果发现广西陆川猪Mhp流行毒株变异使其毒力和黏附能力增强,再加上陆川猪呼吸道短小狭窄的特殊结构,更易导致广西陆川猪MPS的发生。

本试验建立了一种超高效液相色谱—电喷雾串联质谱测定鸡肉中金刚烷胺的分析方法。以甲醇-1%三氯乙酸作提取剂,采用超声波辅助溶剂萃取法萃取鸡肉中金刚烷胺,萃取液用MCX固相萃取柱进行净化浓缩。以BEH C18色谱柱为分离柱,在正离子模式下以电喷雾电离串联质谱仪进行测定。对质谱和色谱条件、提取剂的种类、超声提取时间、固相萃取柱及洗脱液的种类进行了优化,在0.1~20.0 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.9998)。样品在5.0、10.0 和20.0 μg/kg添加水平的回收率为89.7%~101.4%,相对标准偏差(RSD)小于7.0%;方法的检测限为0.07 μg/kg,定量限为0.23 μg/kg。本方法灵敏度高、准确度高,能满足公司及相应鸡肉行业的客户进行鸡肉中金刚烷胺残留量的快速、高灵敏检测分析。本试验还根据金刚烷胺在动物体内的代谢动力学成功制备了浓度为11.16和7.18 mg/kg的金刚烷胺阳性鸡肉样品,为研发金刚烷胺ELISA试剂盒提供了相应的阳性样品。

本研究旨在克隆并表达牛乳头状瘤病毒13型(BPV13)L1基因。以BPV13基因组为模板,通过PCR技术扩增得到大小1 494 bp的目的片段,同时用BamHⅠ和Hind Ⅲ分别对目的片段和pET28a(+)载体进行双酶切,将双酶切后的L1基因片段克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-L1重组质粒,双酶切和测序鉴定正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌中,筛选出最佳IPTG浓度和最佳诱导时间后进行诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,L1基因正确插入到原核表达载体pET28a(+)中;IPTG诱导后含重组质粒pET28a-L1的表达菌成功表达了带His标签的融合蛋白;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白分子质量为60 ku,与预期大小一致,超声破菌后,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白存在于沉淀中;Western blotting验证为带His标签的融合蛋白。本试验为进一步研究BPV13 L1基因的功能及为BPV13有效DNA疫苗的研制奠定基础。

本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法,建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。试验利用RT-PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段,在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针——生物素和地高辛,使扩增产物结合探针。利用胶体金的放大原理将链霉亲和素与金颗粒形成胶体金混合物,从而与RT-PCR产物中的生物素探针结合。硝酸纤维素膜上端标记生物素化山羊抗兔IgG作为指控条带,下端标记抗地高辛抗体以捕获RT-PCR产物中的地高辛探针。组装金标试纸条,检测RT-PCR产物,结果表明该核酸试纸条可以检测到 0.3×10^-3~3×10^-3 μg/μL,敏感性高于琼脂糖凝胶电泳,两种方法的符合率高,核酸试纸条检测方法是一种敏感性高、成本低且费时短的新型检测方法。该方法为口蹄疫病毒检测提供了一种新的思路。

本研究旨在探讨不同浓度的神经肽P物质(SP)刺激对内蒙古白绒山羊皮肤干细胞BMP2、BMP4基因表达的影响。本研究分别采用0(对照组)、1×10^-6、1×10^-7、1×10^-8、1×10^-9 mol/L 5个浓度梯度的SP对内蒙古白绒山羊皮肤干细胞进行刺激处理,并分别于第0、7、14及21天采用实时荧光定量PCR方法鉴定BMP2和BMP4基因的表达量。结果显示,1×10^-6和1×10^-8 mol/L的SP促进BMP2、BMP4的表达;在7和14 d时,SP 1×10^-8 mol/L组BMP2的表达量显著高于SP 1×10^-6 mol/L组(P<0.05),SP 1×10^-6 mol/L组BMP4的表达量与SP 1×10^-8 mol/L组差异不显著(P>0.05);在21 d时,SP 1×10^-8 mol/L、SP 1×10^-6 mol/L组BMP2、BMP4的表达量都明显降低,其中SP 1×10^-8 mol/L组BMP2的表达量显著高于1×10^-6 mol/L组(P<0.05),SP 1×10^-6 mol/L组BMP4的表达量与SP 1×10^-8 mol/L组差异不显著(P>0.05)。结果表明,SP 1×10^-6和1×10^-8 mol/L不仅对内蒙古白绒山羊皮肤干细胞BMP2、BMP4基因的表达量有影响,而且为皮肤干细胞的定向分化提供理论基础。

本研究根据猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)VP0基因序列特征设计特异性扩增引物,采用RT-PCR方法扩增猪嵴病毒VP0基因全长编码区。将特异性扩增目的片段克隆后进行序列测定,将结果进行拼接后获得猪嵴病毒VP0基因全长并进行相关生物信息学分析。所扩增的目的片段编码有完整的VP0基因开放阅读框,全长为1 098 bp,编码有366个氨基酸,理论等电点为6.71,理论分子质量为38.489 ku,不稳定系数为34.65,最大疏水指数为2.622,最小疏水指数为—2.122。将获得的VP0基因和GenBank中的猪嵴病毒代表株VP0基因序列进行核苷酸同源性比对和遗传进化分析,其与HNXX-4核苷酸同源性最高,为89.1%,与S-1-HUN核苷酸同源性最低,为81.1%。从遗传进化上看,猪嵴病毒VP0基因在遗传进化上呈两个独立的基因亚群,猪嵴病毒中国分离株在两个遗传基因亚群上均有分布。

为分离纯化奶牛腐蹄病坏死杆菌,分析其与其他菌株的亲缘关系,本研究利用坏死杆菌白细胞毒素特异性引物,对奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品进行了PCR检测,利用厌氧培养基对PCR检测阳性样品进行了坏死杆菌的分离培养,以分离的坏死杆菌基因组DNA为模板,对白细胞毒素基因进行了克隆和序列分析。结果显示,9份奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品PCR检测结果均为阳性,对其中一份样品中的坏死杆菌进行分离培养,获得了纯培养物,命名为bFR13-1。坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素基因测序结果显示,与GenBank已发表的H05、A25和B35菌株的白细胞毒素基因在核苷酸水平的同源性分别为98.40%、98.35%和90.79%,推导氨基酸的同源性分别为97.7%、97.6%和89.0%。进化树分析结果显示,坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素与H05菌株的同源性最高,bFR13-1菌株与H05菌株和A25菌株呈较近亲缘关系。结果表明,不同坏死杆菌分离株的白细胞毒素呈现一定的变异性,这种变化是否与坏死杆菌致病性相关,值得深入研究。

本试验应用不同消化分离途径获取犬子宫内膜基质细胞,调节培养液中雌激素(E₂)和孕酮(P₄)的浓度,采用MTT法测定E₂和P₄浓度水平对犬子宫内膜基质细胞体外增殖的影响,利用细胞免疫组织化学法鉴定细胞并测定细胞孕酮受体(PR)表达与激素浓度水平的相关性。结果表明,E₂浓度变化(15、30、100 pg/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖和PR的表达均没有显著的调节作用(P>0.05);P₄(15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖有显著促进作用(P<0.05),P₄(3、15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞PR的表达具有显著的抑制作用(P<0.05),其影响程度与浓度和作用时间关系密切。

猪鼻支原体(Mycoplasma hyrhinis,Mhr)是猪鼻腔的常在菌。将猪鼻支原体与弗氏佐剂共乳化,免疫新西兰大白兔,获得猪鼻支原体兔抗血清。Western blotting检测其特异性;建立间接ELISA方法检测其抗体效价;将获得的猪鼻支原体兔抗血清分别加入猪鼻支原体和猪肺炎支原体培养物中,进行生长抑制试验。结果显示,制备的猪鼻支原体兔抗血清与猪鼻支原体具有反应原性;抗体效价达1:160 000以上;猪鼻支原体兔抗血清可以显著抑制猪鼻支原体的生长,而对猪肺炎支原体的生长影响较小。本试验结果为鉴定和检测猪鼻支原体提供了方法,也为猪肺炎支原体的分离提供了参考。

试验旨在研究不同日粮能量水平对五指山猪生长性能、初情期启动及血清激素含量的影响。选择20头日龄(30±2)d、体重(2.5±0.6)kg、健康的断奶五指山母猪,随机分为2个处理,分别为NRC组(标准组:饲喂基础日粮,按正常的后备母猪饲喂标准量投放饲料)和0.7 NRC组(限饲组:按NRC组70%的投饲量投喂),每个处理10个重复,每个重复1头猪,试验期10周。结果表明,断奶后6~10周时NRC组体重显著高于0.7 NRC组(P<0.05);NRC组平均日增重显著高于0.7 NRC组(P<0.05);日粮能量水平对五指山猪初情期日龄有显著影响(P<0.05),限饲(0.7 NRC)可延缓五指山母猪发情期启动;0.7 NRC组母猪初情期时背膘厚度显著低于NRC组(P<0.05),初情期时0.7 NRC组母猪背膘厚度降低39.7%左右;初情期时,NRC组血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二酮(E₂)和瘦素(Leptin)含量均显著高于0.7 NRC组(P<0.05)。由此可知,提高日粮能量水平有利于母猪初情期的启动和发情表现。

本试验通过研究伊犁夏牧场不同年龄、不同性别绵羊羊毛与血液中铁、铜、锰、锌、硒5种微量元素的含量及变化规律,为夏季放牧绵羊科学补饲微量元素提供依据。选择在新疆伊犁夏牧场卡拉卓恩(南坡)和唐布拉草地(北坡)1 400~2 999 m垂直带放牧的中国美利奴羊(新疆型)羊毛和血液样品,测定其铁、铜、锰、锌和硒含量,并评估其微量元素的营养生态环境。结果表明,放牧绵羊羊毛铁、铜、锰、锌和硒含量分别为520.70、3.89、30.16、102.64 mg/kg和41.18 μg/kg,其中铜和硒分别低于正常值48.3%和79.7%,而铁高于正常值603.4%;血液中铁、铜、锰、锌和硒含量分别为357.05、4.18、0.25、3.08 mg/L和45.23 μg/L,其中铜、硒分别低于正常值29.9%和73.9%,而铁高于正常值95.5%。羊毛与血液中铁、铜、锰、锌、硒含量均随年龄而增加。不同性别绵羊间血液中锌、硒含量差异明显。

试验旨在研究灭活乳酸菌培养物对肉鸡生长性能及免疫功能的影响。选择300只体重相近的健康1日龄AA肉仔鸡,随机分为5组,每组6个重复,每个重复10只鸡,雌、雄各半。其中对照组饲喂基础日粮,抗生素组在基础日粮中添加0.01%金霉素,乳酸菌培养物组分别在基础日粮中添加0.16%乳酸菌培养物L1、L2、L3。试验期42 d,分1~21日龄(前期)和22~42日龄(后期)2个阶段。结果显示,1~21日龄时,乳酸菌培养物L1组肉鸡平均日采食量极显著高于对照组和抗生素组(P<0.01),血清中白介素-2(IL-2)含量显著低于对照组(P<0.05),脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数均显著高于对照组(P<0.05);乳酸菌培养物L2组肉鸡脾脏指数、胸腺指数显著高于对照组(P<0.05);乳酸菌培养物L3组肉鸡平均日增重极显著高于对照组和抗生素组(P<0.01);抗生素组肉鸡血清中γ-干扰素(IFN-γ)含量显著高于乳酸菌培养物组(P<0.05)。22~42日龄时,乳酸菌培养物L1、L2组肉鸡平均日增重极显著高于对照组和抗生素组(P<0.01);乳酸菌培养物L2组肉鸡血清中免疫球蛋白G(IgG)含量显著高于抗生素组(P<0.05),血清新城疫抗体效价及脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数均显著高于对照组(P<0.05);乳酸菌培养物L3组肉鸡血清中免疫球蛋白A(IgA)含量及胸腺指数显著高于对照组(P<0.05)。由此可知,在肉鸡日粮中添加一定量的灭活乳酸菌培养物可在一定程度上提高肉鸡的生长性能、增强其免疫功能,其中,对于提高肉鸡的生长性能,试验前期添加L3效果较好,试验后期添加L1和L2效果较好;对于增强肉鸡的免疫功能,试验前期添加L1效果较好,试验后期添加L2效果较好。

试验旨在研究苜蓿黄酮对绵羊生长性能和血清指标的影响。选择体重为(27.02±3.03)kg的萨福克羊×小尾寒羊杂交F1代公羊28只,采用单因素随机区组试验设计,分成4组,每组7个重复,每个重复1只。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮中添加0(对照组)、0.1%、0.2%、0.4%苜蓿黄酮。预试期7 d,正试期41 d。结果表明:①日粮中添加苜蓿黄酮对绵羊生长性能无显著影响(P>0.05)。②日粮中添加苜蓿黄酮对绵羊血清中球蛋白(GLB)、天冬氨酸(ASP)、尿素氮(BUN)、高密度脂蛋白(HDL)、磷(P)含量有显著影响(P<0.05),其中Ⅲ组GLB含量在第1天时显著低于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05);Ⅳ组ASP含量在第1和21天时显著低于Ⅰ组(P<0.05),BUN含量在第1天时显著低于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱ组HDL含量在第21天时显著低于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05);Ⅳ组P含量在第21天时显著低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)。综上所述,日粮中添加苜蓿黄酮可调节绵羊脂类代谢,提高氮的利用率;维持体内能量代谢及平衡Ca、P含量;具有潜在的促生长功能;对肝脏功能无不良影响。建议绵羊日粮中苜蓿黄酮的适宜添加量为0.2%。

为了评价蒙古牛肉的肉质特性与营养价值,本研究选择6头4岁的常年放牧在库布齐沙漠的蒙古阉牛,进行了牛肉常规营养成分及氨基酸含量的测定分析。结果显示,牛肉中水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙和磷含量分别为68.21%、22.60%、6.49%、2.69%、0.58%和0.55%;牛肉中总氨基酸含量为24.297 g/100 g,必需氨基酸含量为10.265 g/100 g,必需氨基酸的构成比例符合并超过FAO/WHO公布的标准。必需氨基酸占总氨基酸含量的42.25%,必需氨基酸与非必需氨基酸比值为73.15%。功能性氨基酸中,鲜味氨基酸和甜鲜味氨基酸含量为总氨基酸的46.891%。另外,必需氨基酸中除缬氨酸之外其他氨基酸全部优于FAO/WHO规定的理想蛋白质模式,缬氨酸含量达到理想蛋白质的83.972%。因此,从牛肉的常规养分含量和氨基酸的营养价值方面来评定,蒙古牛肉属于营养全面的优质蛋白质食物。

试验采用3个菌种(乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌)分别固态发酵相同水分的3种原料(玉米、豆粕、棉籽粕),以感官评价、原料pH变化和发酵后益生菌存留量作为评价指标,探讨不同饲料原料品质随发酵时间变化的规律,优化发酵饲料生产工艺。结果显示,不同饲料原料达到稳定pH所需的时间不同,相同发酵菌种达到pH稳定所需的时间为:玉米< 豆粕< 棉籽粕;玉米、豆粕和棉籽粕的种类对初始pH无影响;在pH达到稳定时,3种原料发酵后颜色和气味各呈现相应的特性,而黏度强度表现为:棉籽粕 >豆粕 >玉米;益生菌存留数量为:玉米 >豆粕 >棉籽粕。由此可知,玉米作为微生物发酵底物,发酵率高,益生菌存留量多,优于豆粕和棉籽粕。

试验旨在研究枯草芽孢杆菌和鼠李糖乳杆菌原生质体融合子(RH-3融合子)对三黄鸡免疫功能及肠道菌群的影响。选用96只1日龄三黄鸡,随机分为4组,每组3个重复,每个重复8只雏鸡;对照组饮水为不添加RH-3融合子培养物的清水;试验组分别在三黄鸡的饮水中添加0.5%、1.0%和1.5% RH-3融合子培养物。试验期42 d,分1~21和22~42日龄两个阶段。结果表明,与对照组相比,RH-3融合子可提高21和42日龄三黄鸡血清新城疫HI抗体效价、SOD活性和淋巴细胞转化率,增加免疫器官指数,其中0.5%添加水平差异显著(P<0.05);与对照组相比,RH-3融合子可降低21和42日龄三黄鸡空肠、回肠和盲肠内容物中的沙门氏菌和大肠埃希菌的菌群数量,增加双歧杆菌和乳酸菌的菌群数量,其中0.5%添加水平差异显著(P<0.05)。综上所述,RH-3融合子可改善三黄鸡免疫功能,调节肠道微生物区系,促进有益菌的生长,抑制有害菌的生长,且随着RH-3融合子添加水平的增加,效果均呈现下降的趋势。因此,在本试验条件下,建议三黄鸡饮水中RH-3融合子添加水平为0.5%。

试验旨在研究益生菌—中草药复方制剂对蛋鸡输卵管组织、生产性能及蛋品质的影响。选取体质优良的45周龄的海兰褐蛋鸡720只,随机分成4组,每组3个重复,每个重复60只。对照组饲喂不含抗生素的基础日粮,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组为试验组,分别在基础日粮中添加1.0‰中草药组方一(败酱草、蒲公英、板蓝根、连翘等)、1.0‰中草药组方二(金银花、黄芪、淫羊藿、益母草等)和1.0‰中草药组方三(大青叶、黄柏、黄芩、栀子等),且各试验组均添加1.5‰复合益生菌。预试期7 d,正试期28 d。结果表明:①益生菌—中草药复方制剂能修复蛋鸡受损的输卵管组织,减少输卵管与周围组织的黏连,使输卵管保持通畅性,降低蛋鸡输卵管组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和表皮生长因子受体(EGFR)含量,尤以Ⅱ组效果最好,分别较对照组降低40.85%和17.79%,差异显著(P<0.05);②与对照组相比,Ⅱ组可显著提高蛋鸡产蛋率(P<0.05),显著降低料蛋比和软破蛋率(P<0.05);③与对照组相比,Ⅱ组可显著提高48和50周龄蛋鸡的蛋形指数和蛋黄比率(P<0.05)。由此可知,日粮中添加益生菌—中草药复方制剂能在一定程度上减轻蛋鸡输卵管炎症反应,提高产蛋率,改善蛋品质,其中以Ⅱ组益生菌和金银花、黄芪、淫羊藿、益母草等中草药联合使用效果最好。

本研究旨在建立南阳牛骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)体外分离培养方法,在此基础上研究其生物学特性和多向分化的能力。采用骨髓穿刺法取3月龄小牛的肋骨骨髓,分离培养BMSCs,传代培养并测定其生长曲线,RT-PCR检测Oct4、Nanog、Sox2基因的表达,然后取P3 BMSCs分别向神经和脂肪细胞进行诱导分化,并利用组织学染色技术和RT-PCR技术进行鉴定。结果表明,分离得到的BMSCs大小均匀,多呈梭形的成纤维细胞样生长;RT-PCR可检测到干细胞因子Oct4、Nanog、Sox2的表达;不同代次细胞生长曲线呈S型,一般在第3天时进入指数生长期,第7天后进入平台期;成神经诱导后,甲苯胺蓝染色可见明显的尼氏体结构,RT-PCR检测ENO2和GFAP基因表达呈阳性;成脂肪诱导后,油红O染色后可见大量的脂滴存在,RT-PCR检测Leptin和PPAR基因表达呈阳性。试验证明,成功分离得到了南阳牛BMSCs,且其具有多向诱导分化潜能。

试验旨在研究镰刀菌毒素污染日粮对断奶仔猪血清酶、肝脏抗氧化功能及组织病理学的影响。选择35日龄体重为(8.45±0.94) kg的健康三元杂交(杜×长×大)断奶雌性仔猪40头,随机分为2组,每组20个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂用霉变玉米和霉变玉米蛋白粉替代基础日粮中50%的玉米和玉米蛋白粉配制而成的镰刀菌毒素污染日粮(玉米赤霉烯酮(ZEN) 0.90 mg/kg,呕吐毒素(DON) 1.43 mg/kg,烟曲霉毒素(FUM) 5.85 mg/kg)。仔猪单栏饲喂,预试期7 d,正试期35 d。结果表明:①与对照组相比,试验组断奶仔猪血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性均显著升高(P<0.05),肝脏相对重显著降低(P<0.05);②与对照组相比,试验组断奶仔猪血清和肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性均显著降低(P<0.05),而丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05);③病理组织学观察发现,试验组断奶仔猪肝脏出现一定程度的组织损伤,部分肝小叶边缘发生明显的炎性细胞浸润,肝细胞发生局部空泡变性。由此可知,镰刀菌毒素污染日粮(0.90 mg/kg ZEN,1.43 mg/kg DON,5.85 mg/kg FUM)饲喂断奶仔猪可引起仔猪血清酶活性改变,肝脏抗氧化功能降低,肝脏组织出现一定程度的病理损伤,从而影响肝脏功能的发挥。

为分离鉴定新疆地区牛病毒性腹泻—黏膜病病毒(BVDV)流行毒株,掌握该毒株的生物学特性,本试验在新疆北疆部分地区采集牛病毒性腹泻—黏膜病(BVD/MD)疑似病例的粪便,通过RT-PCR检测、细胞分离培养、间接免疫荧光抗体检测、免疫电镜观察及血清中和试验5种方法对毒株进行分离和鉴定。对毒株的TCID₅₀测定后,再对毒株分别进行乙醚敏感性试验、氯仿敏感性试验、胰蛋白酶敏感性试验、酸碱度敏感性试验、温度敏感性试验及核酸分型试验等理化特性检测。经RT-PCR诊断,病料在286 bp处出现了目的片段。将RT-PCR诊断为阳性的粪便,接种于密度约为80%的单层MDBK细胞出现了细胞病变,盲传5代至出现典型的细胞病变。将F5代细胞培养物采用间接免疫荧光抗体检测,结果产生了与C₂₄V标准毒株相同的特异性黄绿色荧光。免疫电镜观察到了大量呈球形的BVDV粒子,大小20~40 nm。血清中和试验中抗体阳性血清处理组细胞均未出现细胞病变,病毒完全被抗体阳性血清中和。综合以上方法确定分离株为BVDV毒株。对分离株进行毒价和理化特性测定,该毒株TCID₅₀为10^-4.5/0.1 mL,对乙醚和氯仿敏感,对胰蛋白酶敏感,耐碱不耐酸,对温度敏感,经54 ℃ 1 h完全被灭活,属于RNA病毒。本试验成功分离到一株新疆BVDV流行毒株,掌握了该毒株的生物学特性,为今后该病的诊断和防控奠定了基础。

本试验采用了氢化物发生—原子荧光光谱法测定牛肉中的硒,通过消解液、预还原剂、介质酸的选择等优化了试验条件并测定其检出限、精密度、加标回收率等。结果显示本试验选用2:1的混合酸作为消解液,6 mol/L HCl作为预还原剂,体积比为10%的HCl作为介质酸。硒在0~8 μg/L的范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9999,检出限为0.01 ng/mL。在20、30和40 μg/L 3个添加水平下牛肉的回收率为94%~104%,相对标准偏差(RSD)为3.80%。该方法具有简便、有效等特点,对肉制品中硒的测定具有一定的参考意义。

将毛发皮质醇激素作为反映慢性应激程度的黄金标准具有前瞻性和创新性。毛发皮质醇激素不仅可用于检测及估计动物慢性应激程度,且有助于了解动物体生理病理过程,并及时制定行之有效的健康管理策略。血液、唾液、尿液及乳汁中皮质醇激素含量作为反映急性应激程度的模型,被用于检测和建立持续的皮质醇激素昼夜循环规律研究。而毛发作为一个很好的补充模型却可以回顾性地反映慢性应激程度。毛发皮质醇激素作为反映慢性应激的生化指标不仅具有采样应激小、检测灵敏、方便的优点,而且是可遗传性状(h²=0.31),可以作为下丘脑—垂体—肾上腺轴(HPA轴)活性标记,进而利用其解释遗传变异对慢性应激中HPA轴活性变化的影响程度。作者综述了皮质醇激素与动物体健康的关系,慢性应激下机体调节机理及遗传适应改变,慢性应激评定指标研究进展,毛发作为皮质醇激素研究模型的研究进展,以及毛发皮质醇激素作为反映慢性应激的生化指标的限制与未来面对的挑战。

乳腺属于外分泌腺的一种,在雌性动物生殖周期中呈动态性变化。乳腺的发育可根据动物性别发育和繁殖时期的不同分为胚胎期、青春期前期、青春期、妊娠期、泌乳期和退化期。作者总结了上皮-基质(间质)之间相互作用对胚胎时期及出生后动物个体乳腺发育的影响,详细阐述了乳腺不同发育阶段不同种类激素所发挥的调控作用,并针对小鼠、人乳腺干细胞的发现及标记物进行简要描述。本综述旨在清晰、深入地揭示乳腺发育的基本过程及潜在的调控机理,为进一步了解乳腺相关方面的研究工作提供参考资料。

为了研究7种家养动物全基因组微卫星的分布是否存在差异,本试验利用软件MSDB搜索了猪、马、牛、山羊、绵羊、鸡和犬7种家养动物全基因组微卫星序列,并对其进行了分析研究。初步结果显示,7种家养动物全基因组微卫星在数量、丰度和密度上都存在差异,其中数量、丰度和密度最高的是犬,共1 436 242个位点,数量最少的是鸡,共276 564个位点,但丰度和密度最低的是马,共430 760个位点。对这些微卫星的分析表明,所有物种全基因组中单碱基重复微卫星最丰富,六碱基重复微卫星数量最少,且6种重复类型的优势微卫星都富含碱基A和T。除这些共同点之外,微卫星的分布规律也存在差异。总的来说,牛、山羊、绵羊微卫星的分布规律最为相似,鸡与其他物种微卫星的分布规律相差最远。分析还发现,7种动物微卫星长度大多集中在12~20 bp之间,这可能是受到趋同选择压力的结果。据以上可以推测,物种间微卫星的分布存在差异,但也存在一定的保守性,且物种间亲缘关系越近,微卫星的分布也越相似。以上结果为以后微卫星的功能研究提供依据。

酪氨酸相关蛋白酶1(tyrosinase-related protein 1,TYRP1)是酪氨酸酶家族成员之一,也是第一个成功克隆的色素基因。为了探究选择压力对TYRP1基因在生物进化过程中的影响。本研究利用NCBI下载不同物种TYRP1基因编码区核苷酸及其蛋白序列,通过Clustal X对TYRP1基因编码蛋白序列进行比对,利用Pal2nal在线工具生成密码子多序列比对,DAMBE软件判断该碱基替代饱和度适合构建系统树后,利用最大似然法和PAML软件分别分析不同物种TYRP1基因的亲缘关系和选择压力。结果表明,TYRP1基因进化与哺乳动物的进化分类最为接近,位点模型检测表明TYRP1基因在适应性进化中主要受负选择的约束,而且在进化过程中曾承受正选择作用,共检测到13个正选择位点。本研究从分子进化的角度分析了TYRP1基因的生物进化模式,为该基因结构和功能的研究提供了新的思路。

为科学评价、保护和利用天山马鹿资源,以昌吉市新疆盛华马鹿驯养繁育基地(CJ)与哈密军马场(HM)两地鹿场圈养的53头天山马鹿为研究对象(CJ,n=31;HM,n =22),8个微卫星位点为分子标记,对其遗传多样性进行分析,并探讨了保持圈养天山马鹿遗传多样性的方法。微卫星数据表明,8个基因座的等位基因数为3~7个,共检测到37个等位基因;盛华马鹿驯养繁育基地圈养种群的遗传多样性水平为:A=4.625,He=0.6398,Ho=0.5887,PIC=0.5851,Ne=2.8357,Fis=0.0338;哈密军马场马鹿种群为A=4.375,He=0.6888,Ho=0.6818,PIC=0.6238,Ne=3.2078,Fis=-0.0175。两地区马鹿种群没有显著偏离 Hardy-Weinberg平衡。由此可见,圈养天山马鹿种群的遗传多样丰富,但F统计量结果表明,盛华马鹿驯养繁育基地圈养种群个体之间存在一定程度的近交,因此,现阶段圈养马鹿种群的管理重点是避免近交和遗传多样性丧失上。

为了从分子水平上揭示朝鲜鹌鹑、中国黄羽鹌鹑、中国黑羽鹌鹑3个鹌鹑群体的遗传结构和亲缘关系,为鹌鹑的遗传资源研究提供科学依据,本研究采用PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳、聚类分析等方法对3个鹌鹑群体进行了微卫星标记的多态性分析。结果表明,12个微卫星标记在3个鹌鹑群体中检测到的观测等位基因数在4~7个之间,中国黄羽鹌鹑、中国黑羽鹌鹑、朝鲜鹌鹑的平均多态信息含量分别为0.6853、0.6401和0.6565;平均期望杂合度分别为0.7333、0.6957和0.7111,以中国黄羽鹌鹑群体遗传多态样性最为丰富。聚类分析结果表明,中国黑羽鹌鹑和朝鲜鹌鹑的遗传距离最小为0.0628,因此中国黑羽鹌鹑和朝鲜鹌鹑先聚为一类,而后与中国黄羽鹌鹑聚合在一起。这也更进一步证明了中国黑羽鹌鹑和朝鲜鹌鹑有更近的亲缘关系,而中国黑羽鹌鹑,朝鲜鹌鹑与中国黄羽鹌鹑的亲缘关系要远一些。

试验旨在研究伊犁马催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因多态性及其与产奶量之间的关联性。以60匹伊犁马为研究对象,选取PRLR基因侧翼区的部分片段,采用PCR-SSCP技术检测其遗传多态性,并与伊犁马的日产奶量进行关联分析,研究PRLR基因的多态性与伊犁马产奶性能的关系。结果显示,PRLR基因侧翼区的2个片段均具有多态性,都存在3种基因型:AA、AB和BB,测序结果显示PRLR-P1的碱基突变位置为g.29764513 G>A,该突变为错义突变,导致其编码的氨基酸由组氨酸变成精氨酸,经关联分析发现,该突变对伊犁马日产奶量有显著影响(P<0.05);PRLR-P2的碱基突变位置为g.30106804 C>A,该突变为同义突变,未导致其编码的氨基酸发生改变,经关联分析发现,该突变对伊犁马日产奶量有显著影响(P<0.05)。伊犁马PRLR基因侧翼区的碱基突变与日产奶量之间存在关联性,且可能是影响伊犁马产奶性能的重要位点。

本研究旨在比较神曲、麦芽、山楂3种助消化中草药对断奶仔猪小肠不同部位组织形态学的影响。本试验以杜长大三元猪为研究对象,选取40头28日龄、体重为(8.13±1.32)kg断奶仔猪,添加1%的中草药饲喂,分空白组、神曲组、麦芽组、山楂组,每组两个重复,每重复5头,分别在试验第7和14天早晨空腹屠宰取样,经HE染色,200×显微镜下照相,用Image-Pro Plus软件测定小肠各段绒毛高度(VH)、隐窝深度(CD)、肠壁厚度(IWT)、绒毛高度与隐窝深度的比值(V/C)。结果显示,神曲组在回肠段的IWT显著或极显著高于空白组(P<0.05;P<0.01);第7天时山楂组的十二指肠和空肠的VH和IWT均极显著低于空白组(P<0.01),回肠段的IWT和第14天回肠段VH均极显著高于空白组(P<0.01);第7天的麦芽组十二指肠和空肠VH及空肠IWT均极显著低于空白组(P<0.01),第7天的回肠段CD及十二指肠和回肠段IWT均极显著高于空白组(P<0.01)。不同单味中草药对仔猪小肠不同部位组织形态学的影响不同,源于肠道消化物质的功能不同,对十二指肠、空肠、回肠影响最大的分别是麦芽、山楂、神曲。

本试验旨在针对性的研发一种安全性好、能有效增强免疫效果、使用方便的猪瘟活疫苗新型佐剂稀释剂(AD),并对AD的免疫增强效果进行评价。采用高压均质技术制备了AD,采用响应面试验设计优化了AD的处方和制备工艺,并对其稳定性、粒径、多分散指数(PDI)及Zeta电位进行表征。将AD与猪瘟活疫苗混合后,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,进行佐剂增强免疫效果评价。优化处方和工艺制备的AD平均粒径为100.4 nm,PDI为0.147,Zeta电位为—28.7 mV,试验结果表明其稳定性良好。免疫效果评价试验结果显示,佐剂组小鼠血清中抗猪瘟病毒(CSFV)抗体水平与对照组相比有显著差异(P<0.05),抗体水平能持续较长时间,表明AD能有效诱导机体产生体液免疫应答;佐剂组小鼠血清中IL-4、IL-6和IFN-γ的水平均有明显提高,表明该疫苗佐剂能诱导机体产生细胞免疫应答。本试验制备的佐剂稀释剂与疫苗混合使用,能显著提高体液免疫和细胞免疫水平,从而增强疫苗的免疫刺激能力。

为研究大黄对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染所引起的细胞病变的抑制作用及其机理,本试验采用形态学观察法测定大黄溶液在Vero细胞上的最大安全浓度,建立体外病毒感染Vero细胞模型并利用该模型进行了大黄对病毒抑制作用的研究。结果显示,本试验成功建立了体外病毒感染模型和大黄的抗病毒试验方法;大黄在Vero细胞上的最大安全浓度为3.28 mg/mL;形态学观察法和MTT法均显示大黄不仅能阻断病毒吸附Vero细胞,抑制病毒的合成复制,还可直接灭活病毒。本研究结果表明,大黄具有抗PEDV的作用,为临床上预防和治疗猪流行性腹泻(PED)提供理论基础。

本试验旨在查清广西某牛场1起牛呼吸道疾病综合征(BRDC)病例的病原,指导牛场进行疾病防控。采取现场调查、临床症状与病理变化、病原分离鉴定等方法对病例病原进行分析,根据病原药敏试验结果进行治疗。从病例的肺脏组织中分离到1株支原体和1株革兰氏阴性致病杆菌。支原体分离株在PPLO固体培养基上可见典型的"煎蛋样"菌落,PCR扩增出牛支原体oppF基因特异性的448 bp目的片段,其oppF基因序列与美国分离的牛支原体国际标准株PG45的核苷酸序列同源性为98.4%。革兰氏阴性细菌分离株生化特性符合黏质沙雷氏菌特性,其16S rRNA基因PCR扩增出1 400 bp的目的片段,测序结果与GenBank上登录的黏质沙雷氏菌的核苷酸序列同源性达到99.0%,对小鼠具有致病性。牛支原体和黏质沙雷氏菌分离株均对壮观霉素、阿奇霉素、阿米卡星、庆大霉素和新霉素高度敏感,用高敏药物壮观霉素联合地塞米松等相关措施进行治疗,收到良好效果。结果表明,引起这次牛呼吸道疾病综合征的病原为牛支原体和黏质沙雷氏菌。

为了调查广东地区水禽源大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药的耐药性和耐药基因的流行情况,本试验于2012—2014年从广东地区患病水禽中成功分离鉴定243株大肠杆菌,采用琼脂二倍稀释法测定大肠杆菌分离株对4种β-内酰胺类药物的敏感性,并通过PCR方法检测耐药株的耐药基因bla_CTX-M、bla_TEM和bla_OXA。药敏试验结果显示,广东各地区的分离株对氨苄西林和阿莫西林耐药率较高,耐药率为80.00%~100.00%;而对头孢他啶和头孢噻呋耐药率较低,耐药率为9.09%~50.00%。PCR检测结果显示,在4种药物的耐药菌株中,耐药基因bla_CTX-M、bla_TEM和bla_OXA的检出率分别为88.46%~90.87%、67.21%~88.52%和51.28%~59.02%。结果表明,水禽大肠杆菌对β-内酰胺类药物普遍具有耐药性,其中青霉素类尤为严重。bla_CTX-M、bla_TEM和bla_OXA基因为广东地区水禽源大肠杆菌携带的主要耐药基因,且耐药基因的普遍存在与临床日益严重的耐药现象有着很大的关系。

将鸡传染性法代囊病病毒(IBDV)BX株抗原和IBDV高免血清按一定比例混合,初步制备了无菌的鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1~5(分别含有32、8、4、0.5及0.125单位IBDV中和抗体),用鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1~5及BX株活疫苗分别免疫1日龄低母源抗体水平雏鸡,免疫后9 d观察法氏囊病变,免疫后28 d采血测定IBDV中和抗体,并用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果显示,免疫后9 d,复合物疫苗1~3免疫组鸡法氏囊正常,复合物疫苗4、5免疫组和BX株活疫苗免疫组分别有2/10、4/10和5/10的试验鸡法氏囊出现了病变;免疫后28 d,复合物疫苗1~5免疫组和BX株活疫苗免疫组IBDV中和抗体效价分别为8.34log2、9.60log2、9.21log2、7.88log2、9.50log2和9.12log2,攻毒保护率分别为90%、100%、100%、80%、90%和80%。试验结果表明鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗2、3(分别含8、4单位IBDV中和抗体)免疫1日龄低母源抗体水平的雏鸡效果最好,攻毒保护率能达到100%。

羊口疮病毒的基因组结构、编码基因复制特性及其在宿主和非宿主体内快速启动机体的免疫反应特点,使其具有作为活病毒疫苗载体的特殊优势。此外,该病毒自身及其编码蛋白的双向免疫调节功能使其具有作为临床使用生物制剂的巨大潜力。作者对基于羊口疮病毒的重组疫苗和生物制剂的研制现状进行了详细的综述,以期为该病毒的疫苗研制、生物制剂研发及临床应用提供参考。

猪流行性腹泻病毒是引起猪腹泻的重要病原体之一,广泛流行于世界各地,造成了重大的经济损失。文章阐述了猪流行性腹泻病毒的分子生物学特点,概括了病毒的检测方法,并对近年来流行病学及疫苗的研发情况进行了综述,以期对猪流行性腹泻病毒研究提供帮助。

四头瘤胃瘘管牛被随机分配到根据4×4拉丁方设计的4个处理中,研究尿素和氢氧化钙(Ca(OH)₂)处理稻草的影响以提高其营养价值。4种日粮处理如下:未经处理的稻草、50 g/kg尿素处理稻草、20 g/kg尿素+20 g/kg氢氧化钙处理的稻草和30 g/kg尿素+20 g/kg氢氧化钙处理稻草。所有的试验动物都是单栏饲养,饲喂0.5 g/kg体重(DM)的浓缩料,自由采食稻草。试验进行了4期,每期持续21 d。前14 d,对干物质采食量进行了测定,而后7 d,所有的瘘管牛都移动至代谢箱中进行总粪便的收集。结果显示,20 g/kg尿素+20 g/kg氢氧化钙处理提高了稻草的营养价值、干物质采食量、消化率、瘤胃挥发性脂肪酸、细菌和真菌种群数量、氮贮留和微生物蛋白合成。研究结果表明,使用尿素和氢氧化钙是提高稻草营养价值、瘤胃生态环境和发酵从而降低处理成本的一种替代方法。

日粮蛋白质在反刍动物营养中起着重要作用,对反刍动物补充蛋白质是在热带地区农民的普遍做法。瘤胃细菌是蛋白质和氨基酸降解的主要作用者,但很少有研究关注饲喂热带日粮或补充瘤胃降解蛋白的动物瘤胃内超产氨菌的分离鉴定。本试验研究了添加或不添加酪蛋白补充剂饲喂热带牧草的内洛尔阉牛的瘤胃细菌群落多样性。文章还对高产氨瘤胃细菌进行了分离鉴定。聚合酶链式反应—变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析结果表明对照组和酪蛋白补充组动物的瘤胃细菌群落组成无差异。用胰蛋白胨作为唯一碳源和有机氮源的富集和分离培养基,从饲喂Tifton 85(狗牙根属种)的杂交内洛尔阉牛体内分离出氨基酸发酵菌(n=250)。从补充酪蛋白的阉牛体内分离出的菌株脱氨率较高,NH₃>350 nmol/(mg·min)(P<0.05),而从未补充酪蛋白的阉牛体内分离出的脱氨率为NH₃<200 nmol/(mg·min)。虽然大多数菌株(84%)可发酵碳水化合物,但所有菌株均不能水解蛋白质或用尿素维持增长。所有菌株均对拉沙里菌素、莫能菌素敏感。16S rRNA序列的相似性分析结果表明,优势细菌属于梭菌目(Clostridiales),与已知细菌种类的同源性为73%~99%。本试验结果拓展了关于超产氨菌的生化和遗传多样性的认识,并强调碳水化合物发酵细菌在瘤胃产氨过程中的作用。