绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立及应用

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.09.004

《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站 ›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (9): 2240-2245.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.09.004

绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立及应用

郑佳琪, 黄海碧, 王晓晖, 李真亚, 邢蒙恩, 郝永清

内蒙古农业大学兽医学院, 微生物学与免疫学实验室, 呼和浩特 010018

收稿日期:2015-03-22 出版日期:2015-09-20 发布日期:2015-09-25
通讯作者: 郝永清 E-mail:haoyq1960@163.com
作者简介:郑佳琪(1990-),女,河北秦皇岛人,硕士生,研究方向:预防兽医学,E-mail:yijia55555@163.com
基金资助:
国家科技支撑计划(2012BAD13B00)"重点牧区"生产生态生活"保障技术集成与示范";国家科技支撑计划(2011BAD18B01)"草原肉牛肉羊绿色养殖关键技术集成研究与产业化"

Development and Application of a Duplex PCR Assay for Detecting Mycoplasma ovipneumiae and Mycoplasma arginini

ZHENG Jia-qi, HUANG Hai-bi, WANG Xiao-hui, LI Zhen-ya, XING Meng-en, HAO Yong-qing

Laboratory of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China

Received:2015-03-22 Online:2015-09-20 Published:2015-09-25

摘要/Abstract

摘要： 为建立绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法,本试验分别设计了绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的特异性引物,优化反应条件后对其特异性和敏感性进行评价,并对40份鼻拭子进行了检测。结果显示,该方法能同时扩增出绵羊肺炎支原体545 bp和精氨酸支原体806 bp的特异性片段,而对其他病原的DNA扩增均为阴性。该双重PCR方法对绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的最低检测限分别为100和10 pg/μL。40份鼻拭子检测结果显示,双重PCR检测方法与分离培养法符合率高达92.5%,均能鉴定出绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体。结果表明,本研究建立的双重PCR方法可用于绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的临床快速诊断。

关键词: 绵羊肺炎支原体; 精氨酸支原体; 双重PCR

Abstract: In order to establish a duplex PCR method for simultaneous detection of Mycoplasma ovipneumiae and Mycoplasma arginini, specific primers of Mycoplasma ovipneumiae and Mycoplasma arginini were designed, and evaluated its sensitivity and specificity after optimizing the reaction conditions of PCR.Then, a total of 40 nasal swabs were tested by duplex PCR.The assay could specifically amplify PCR fragments of 545 and 806 bp from Mycoplasma ovipneumiae and Mycoplasma arginini, respectively.While no PCR products were detected for other pathogens.The detection limits of the assay were determined to be 100 pg/μL for Mycoplasma ovipneumiae and 10 pg/μL for Mycoplasma arginini.The duplex PCR could detect Mycoplasma ovipneumiae and Mycoplasma arginini, and the coincidence rate could reach as high as 92.5% with enrichment culture about the 40 nasal swabs.The results suggested that the duplex PCR could be useful for clinical detection of Mycoplasma ovipneumiae and Mycoplasma arginini.

Key words: Mycoplasma ovipneumiae; Mycoplasma arginini; duplex PCR

中图分类号:

S858.26

郑佳琪, 黄海碧, 王晓晖, 李真亚, 邢蒙恩, 郝永清. 绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立及应用[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2015, 42(9): 2240-2245.

ZHENG Jia-qi, HUANG Hai-bi, WANG Xiao-hui, LI Zhen-ya, XING Meng-en, HAO Yong-qing. Development and Application of a Duplex PCR Assay for Detecting Mycoplasma ovipneumiae and Mycoplasma arginini[J]. , 2015, 42(9): 2240-2245.

参考文献

[1] Concalves R,Mariano I,Nunez A,et al.Atypical non-progressive in goats[J].Vet J,2010,83(2):219-221.

[2] Dassanayake R P,Shanthalingam S,Herndon C N,et al.Mycoplasma ovipneumoniae can predispose bighorn sheep to fatal Mannheimia haemolytica pneumonia[J].Vet Microbiol,2010,145(3-4):354-359.

[3] 储岳峰.我国山羊(接触)传染性胸膜肺炎病原学、流行病学研究及灭活疫苗的研制[D].北京:中国农业科学院,2011.

[4] Mcauliffe L,Hatchell F M,Ayling R D,et al.Detection of Mycoplasma ovipneumoniae in Pasteurella-vaccinated sheep flocks with respiratory disease in England[J].Vet Rec,2003,153(22):687-688.

[5] Kilic A,Kalender H,Eroksuz H,et al.Identification by culture,PCR,and immunohistorchemistry of Mycoplasma and their molecular typing in sheep and lamb lungs with pneumonia in Easter Turkey[J].Trop Anim Health Prod,2013,45(7):1525-1531.

[6] 张玲,郝永清,黄海碧,等.内蒙古地区绵羊肺炎支原体的分离鉴定及序列分析[J].中国畜牧兽医,2013,40(7):158-161.

[7] 冯旭飞,张贤宇,王成龙,等.基于p113基因的绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医科学,2013,43(11):1157-1161.

[8] Thirkell D,Spooner P K,Jones G E,et al.Cross-reacting antigens between Mycoplasma ovipneumoniae and other species of Mycoplasma of animal origin,shown by ELISA and immunoblotting with reference antisera[J].Veterinary Microbiology,1991,26(3):249-261.

[9] Sikdar A,Uppalp K.Antibiogram of respiratory Mycoplasma of caprine and ovine origin[J].Indian Joural of Animal Heal,1996,35(2):185-187.

[10] 冷青文,李志远,屈勇刚,等.盘羊肺炎支原体感染 PCR 检测方法的建立与初步应用[J].兽类学报,2011,31(3):312-316.

[11] 冯旭飞,王远微,李定霏,等.绵羊肺炎支原体和溶血性曼氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用[J].中国预防兽医学报,2014,36(10):789-791.

[12] 冯旭飞,刘霜,张贤宇,等.绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医科学,2013,343(12):1257-1261.

[13] Weiser G C,Drew M L,Cassirer E F,et al.Detection of Mycoplasma ovipneumoniae and M.arginini in bighorn sheep using enrichment culture coupled with genus- and species-specific polymerase chain reaction[J].Journal of Wildlife Diseases,2012,48(2):449-453.

[14] 吴移谋,叶元康.支原体学[M].第2版.北京:人民卫生出版社,2008.

[15] 胡政香,乔军,孟庆玲,等.绵羊肺炎支原体新疆分离株黏附素与溶血素A基因的克隆及序列分析[J].石河子大学学报:自然科学版,2015,33(2):69-73.

绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立及应用

Development and Application of a Duplex PCR Assay for Detecting Mycoplasma ovipneumiae and Mycoplasma arginini

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	田广原, 王宇琛, 周雅坪, 郭婷, 赵红梅, 赵逢淼, 孙雅婕, 卞宇晨, 于佳梁, 周雨霞. 绵羊肺炎支原体P60_58aa-928aa蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1960-1969.
[2]	袁婷, 郝华芳, 马丽娜, 陈胜利, 颜新敏, 吴娅琴, 蔡亚婷, 孙延鸣, 储岳峰. 绵羊肺炎支原体人工感染SPF鸡胚的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(9): 2988-2996.
[3]	张云丹, 马光强, 岳筠, 周碧君, 文明, 程振涛. 贵州省畜禽源葡萄球菌和链球菌快速鉴定双重PCR方法的建立及应用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(3): 873-880.
[4]	周怡, 王柏林, 杨美, 何玲, 覃岚, 岳筠, 张双翔, 周碧君, 王开功, 程振涛. 绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒的构建及对小鼠细胞免疫应答的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2019, 46(11): 3387-3395.
[5]	麻昌姣, 郑佳琪, 黄海碧, 王晓晖, 白帆, 郝永清. 绵羊肺炎支原体p60蛋白N端与C端的表达及其免疫学特性研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(2): 371-376.
[6]	练斯南, 梁淋, 白挨泉, 崔尚金. 鉴别猪伪狂犬病病毒的双重PCR方法的建立及初步应用[J]. , 2016, 43(5): 1169-1175.
[7]	闭炳芬, 陶立, 李军, 黄明学, 蓝显利, 蓝金红, 胡萍, 农启文, 韦志锋, 秦若甫, 兰美益, 杨威. 马山黑山羊支原体肺炎病原的鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(9): 249-253.
[8]	张双翔，程振涛，唐宇，冉隆仲，李涛，周碧君，文明，王开功，王慧. 绵羊肺炎支原体热休克蛋白Hsp70的生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 74-80.
[9]	彭武丽，罗展荣，史茜，员丽娟，于学辉，季新成. 布鲁氏菌和鹦鹉热衣原体双重PCR检测方法的建立与应用[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(4): 7-11.
[10]	王成龙，吴禹熹，冯旭飞，杨发龙. 丝状支原体簇和多杀性巴氏杆菌双重PCR方法的建立及应用[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(4): 22-26.
[11]	孙园园，赵鹏，刘骏，王云，钱科. 犬瘟热—犬冠状病毒双重PCR诊断方法的建立及初步应用[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(3): 99-103.
[12]	李书光, 李天芝, 李峰, 胡琳琳, 沈志强. 快速鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种双重PCR方法的建立[J]. , 2013, (7): 43-46.
[13]	曲泽慧, 陈佩佩, 张爱芹, 郭东春, 林欢, 姜骞, 刘家森, 师东方, 曲连东. 产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立[J]. , 2013, (7): 65-68.
[14]	张玲, 郝永清, 黄海碧, 徐春光, 程晨. 内蒙古地区绵羊肺炎支原体的分离鉴定及序列分析[J]. , 2013, 40(7): 158-161.
[15]	何曼莉, 费磊, 岳华, 汤承. 3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较[J]. , 2013, 40(3): 177-180.