【目的】 分析不同日龄宁乡猪背最长肌组织mRNA表达谱，筛选发育过程中与脂肪沉积相关的差异表达基因及其所参与的信号通路，并确定部分关键基因在肌内脂肪发育过程中的表达特征。【方法】 选取30(D30)和250(D250)日龄宁乡猪各3头，采集背最长肌组织样品提取总RNA进行转录组测序，对测序数据进行比对和处理，筛选参与脂质代谢的差异表达基因进行GO功能、KEGG通路及蛋白互作分析，并随机选取6个差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证。【结果】 共筛选出30个与脂质代谢相关的差异表达基因，其中9个上调，21个下调。差异表达基因主要富集在脂肪酸氧化、长链脂肪酸代谢等生物过程，线粒体、细胞器膜等细胞组分，酰甘油O-酰基转移酶活性、氧化还原酶活性等分子功能；参与了脂肪酸降解、甘油酯代谢、PPAR等信号通路。蛋白互作分析筛选出ACSL1、ACAA2、HADHB、LIPG、GPCPD1、ALDH2等关键蛋白基因处于核心位置，通过其mRNA表达量不同参与脂肪沉积调控。ACSL1、CPT1A等6个基因的实时荧光定量PCR验证结果与转录组测序结果一致。【结论】 ACSL1、ACAA2、HADHB、LIPG、GPCPD1、ALDH2等作为核心基因参与宁乡猪肌内脂肪调控，并通过脂肪酸降解、甘油酯代谢等信号通路发挥调控作用。本研究结果为进一步研究猪肌内脂肪沉积相关基因的分子调控机制提供了理论参考。

【目的】 试验旨在获取水牛Krüppel样因子15(Krüppel-like factor 15,KLF15)基因，分析其分子特征和组织差异表达，初步揭示该基因的结构和功能。【方法】 克隆水牛KLF15基因编码区，对该基因的结构、氨基酸序列一致性、理化特性、基序、保守结构域、生物学功能等进行比较分析，并采用实时荧光定量PCR法检测KLF15基因在水牛各组织中的表达水平。【结果】 克隆得到水牛KLF15基因编码区长为1 212 bp，编码403个氨基酸。生物信息学分析显示，水牛KLF15与其他牛科物种氨基酸序列的一致性较高，是核内的亲水性蛋白，无信号肽序列及跨膜结构，包含KLF15_N、COG5048和zf-C2H2锌指结构等保守结构域。水牛KLF15的主要功能是调控DNA转录、结合DNA、结合锌指结构等。KLF15基因在泌乳期水牛的脂肪中表达量最高，在非泌乳期水牛的肌肉中表达量最高，但在2个时期的水牛中均为在乳腺、心脏、肝脏、脾脏等组织中中度表达，在肺脏、肾脏、瘤胃和小肠等组织中低表达或几乎不表达。【结论】 水牛KLF15是细胞核内的蛋白，可结合锌指结构调控DNA的转录，在脂合成旺盛的组织中发挥功能。

【目的】 比较不同日龄滩羊皮肤组织毛囊形态变化，挖掘影响毛囊发育的关键信号通路和候选基因，对揭示滩羊毛囊发育的分子调控机制具有重要意义。【方法】 选取出生后0、35和55日龄的滩羊各3只，采集皮肤组织样品，利用HE染色法进行组织学分析；利用Illumina NovaSeq 6000平台进行转录组测序，采用DESeq2软件进行差异表达基因(DEGs)分析，并对DEGs进行KEGG通路富集分析，筛选出与毛囊发育相关的基因。随机选择10个DEGs用实时荧光定量PCR验证转录组测序结果。【结果】 HE染色结果显示，随着滩羊日龄的增加，初级毛囊数量显著或极显著减少(P＜0.05；P＜0.01)，次级毛囊数量极显著增加(P＜0.01)，且次级毛囊逐渐密集分布在初级毛囊周围，形成了毛囊群结构。转录组测序结果显示，在35和0日龄比较组中共筛选到681个DEGs，其中368个上调，313个下调；在55和0日龄比较组中共筛选到852个DEGs，其中469个上调，383个下调；在55和35日龄比较组中共筛选到194个DEGs，其中99个上调，95个下调。3个比较组DEGs取并集得到1 274个DEGs，可分成4个簇(K1～K4 cluster)。对各簇进行KEGG富集分析发现，这些基因显著富集在PI3K-Akt和MAPK等与毛囊形态发生相关的信号通路中，其中PDGFRA、PDGFRB、PDGFB、FGFR4和NR4A1基因在毛囊发育和分子调控机制中发挥重要作用。实时荧光定量PCR结果显示，所选10个DEGs的表达水平与转录组测序结果一致，说明测序结果可靠。【结论】 本研究通过转录组测序分析挖掘到PDGFRA、PDGFRB、PDGFB、FGFR4和NR4A1是毛囊发育过程中的重要候选基因，为进一步揭示滩羊裘皮性状形成的分子机制提供了理论依据。

【目的】 从线粒体损伤角度探究双酚A(BPA)暴露引起小鼠睾丸间质细胞(TM3)凋亡的作用机制。【方法】 利用不同浓度BPA(0、10、30、60、90、120、150 μmol/L)处理TM3细胞24 h后，采用CCK-8法筛选出引起细胞凋亡的最低BPA浓度。将TM3细胞随机分为对照组(0 μmol/L BPA)和BPA组(60 μmol/L BPA)，每组3个重复，各处理24 h。通过倒置光学显微镜观察细胞状态，TUNEL染色观察细胞凋亡。再将TM3细胞随机分为对照组(0 μmol/L BPA)、BPA组(60 μmol/L BPA)、BPA和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)共处理组(60 μmol/L BPA+5 mmol/L NAC)，每组3个重复，各处理24 h。ELISA法检测细胞培养上清中丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性，试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平，JC-1染色观察细胞线粒体膜电位，实时定量PCR检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶1(Gpx1)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰剂亚基(Gclm)、过氧化氢酶(Cat)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(Gclc)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、NAD依赖性蛋白脱乙酰酶Sirtuin3(Sirt3)、半胱天冬酶3(Casp3)、细胞色素C(Cycs)、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达水平，Western blotting检测BAX和细胞凋亡调节因子BCL-2蛋白的相对表达量，流式细胞仪检测细胞凋亡率。【结果】 TM3细胞在60 μmol/L BPA处理24 h后，细胞相对存活率开始出现极显著下降(P＜0.01)，细胞凋亡率极显著增高(P＜0.01)，细胞数量明显减少。与对照组相比，60 μmol/L BPA处理24 h后，TM3细胞中MDA含量极显著增加(P＜0.01)，T-SOD活性极显著下降(P＜0.01)，抗氧化相关基因(Gpx1、Cat、Gclm、Gclc基因) mRNA表达水平显著或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01)，ROS生成极显著增加(P＜0.01)；细胞中红/绿荧光强度比值极显著下降(P＜0.01)，线粒体功能相关基因(Mfn2、Sirt3基因) mRNA表达水平极显著降低(P＜0.01)，线粒体凋亡通路相关基因(Casp3、Cycs、Bax基因) mRNA表达水平极显著升高(P＜0.01)，BAX蛋白表达量极显著升高(P＜0.01)，BCL-2蛋白的相对表达量极显著降低(P＜0.01)，细胞凋亡率极显著升高(P＜0.01)。与BPA处理组相比，BPA+NAC处理组TM3细胞中MDA含量显著降低(P＜0.05)，T-SOD活性显著升高(P＜0.05)，抗氧化相关基因(Gpx1、Cat、Gclm、Gclc基因) mRNA表达水平显著升高(P＜0.05)，ROS生成极显著减少(P＜0.01)，细胞中绿色荧光极显著减弱，红色荧光极显著增强，红/绿荧光强度比值显著升高(P＜0.05)，线粒体功能相关基因(Mfn2、Sirt3基因) mRNA表达水平显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，线粒体凋亡通路相关基因(Casp3、Cycs、Bax基因) mRNA表达水平极显著降低(P＜0.01)，BAX蛋白表达量极显著降低(P＜0.01)，BCL-2蛋白相对表达量极显著升高(P＜0.01)，细胞凋亡率极显著下降(P＜0.01)。【结论】 BPA暴露可导致TM3细胞发生氧化应激，引起线粒体功能受损，从而诱导细胞凋亡。

【目的】 建立不同年龄、不同组织来源的亚洲象成纤维细胞系，并进行冷冻保存和细胞生物学特性研究，为实现濒危动物遗传资源保存和开发利用提供理论依据。【方法】 分别采集6岁龄亚洲象耳缘组织(AE00)、新生亚洲象脐带组织(AE01)及死亡16 h后的4岁龄亚洲象耳缘组织(AE02)样品，分别建立成纤维细胞系并进行传代培养和冷冻保存，通过细胞形态学、增殖能力、衰老及凋亡水平分析不同年龄、不同组织来源成纤维细胞的生物学特性，并进行绿色荧光蛋白(GFP)转染筛选和核型检测，分析亚洲象成纤维细胞的遗传稳定性。【结果】 成功建立了3头亚洲象成纤维细胞系并进行冷冻保存，复苏后细胞均能保持一定水平的活力，经连续传代培养后，细胞形态均呈梭形；AE02成纤维细胞冻存活力、细胞增殖能力均最佳，细胞凋亡率依次为AE01(16.7%)＞AE00(6.4%)＞AE02(3.8%)，细胞衰老率依次为AE00(35.9%)＞AE01(17.2%)＞AE02(7.8%)；AE02细胞经长达19次传代后，细胞染色体数目稳定，AE00进行GFP转染筛选可获得稳定表达GFP的亚洲象成纤维细胞系。【结论】 本研究成功建立了不同年龄、不同组织来源的亚洲象成纤维细胞系，细胞形态均为梭形，不同年龄、不同组织来源的成纤维细胞系增殖能力、细胞衰老及凋亡水平均不同，经连续传代后细胞染色体数目稳定，能实现外源基因的稳定转染和长期筛选，可作为濒危动物遗传资源长期保存和复活个体的重要方法之一。

【目的】 探究蒲公英甾醇对黄曲霉毒素B₁(AFB₁)诱导鸡原代肝细胞凋亡、自噬的影响及其作用机制。【方法】 采用MTT法测定蒲公英甾醇对鸡原代肝细胞的毒性，确定蒲公英甾醇安全作用浓度。将鸡原代肝细胞分为空白组(Normal)、模型组(AFB₁，0.05 μg/mL)、水飞蓟宾阳性组(Sil，2 μg/mL)以及蒲公英甾醇低(L-dose,5 μg/mL)、中(M-dose,10 μg/mL)、高(H-dose,20 μg/mL)剂量组。各试验组经相应浓度药物处理后收集细胞，利用流式细胞术和CYTO-ID法检测鸡原代肝细胞凋亡和自噬情况。采用实时荧光定量PCR检测鸡原代肝细胞中细胞色素酶、凋亡和自噬相关基因mRNA表达量。【结果】 蒲公英甾醇浓度为5～25 μg/mL时对鸡原代肝细胞无明显毒性，因此后续选用蒲公英甾醇低、中、高剂量组给药浓度分别为5、10、20 μg/mL。流式细胞术和CYTO-ID检测结果显示，与空白组相比，模型组鸡原代肝细胞中绿色荧光标记的自噬滤泡数量明显增多。与模型组相比，水飞蓟宾组、蒲公英甾醇各剂量组鸡原代肝细胞中绿色荧光标记的自噬滤泡数量明显减少。实时荧光定量PCR结果显示，与空白组相比，模型组鸡原代肝细胞中细胞色素酶P450 1A5(CYP1A5)、CYP3A37A、半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Caspase-9、苄氯素1(Beclin-1)、自噬蛋白5(ATG-5)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3-Ⅰ)和LC3-Ⅱ基因mRNA表达量均极显著升高(P＜0.01)。与模型组相比，水飞蓟宾和蒲公英甾醇各剂量组鸡原代肝细胞中CYP1A5、CYP3A37、Caspase-3、Caspase-9、Beclin-1、ATG-5、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ基因mRNA表达量均极显著减低(P＜0.01)。【结论】 蒲公英甾醇通过影响细胞色素酶、凋亡和自噬相关基因的表达，进而对AFB₁所致鸡原代肝细胞损伤起到保护作用。

【目的】 旨在阐明谷氨酸脱氢酶gdhA基因对单增李斯特菌抗氧化应激能力的影响，并探明glnR基因对gdhA基因的调控作用。【方法】 采用同源重组技术构建单增李斯特菌gdhA基因缺失株；通过生长曲线测定亲本株10403S、缺失株10403S-ΔgdhA和回补株10403S-CΔgdhA菌株的生长能力；利用抗氧化应激存活试验检测gdhA基因缺失对单增李斯特菌抗氧化应激能力的影响。诱导GdhA蛋白表达并纯化，制备兔多克隆抗体，并通过Western blotting检测抗体特异性。通过构建携带gdhA基因启动子区域的GFP报告质粒，测定氧化应激条件下glnR基因缺失对gdhA基因转录水平的影响。使用Western blotting检测氧化应激条件下glnR基因缺失对GdhA蛋白表达水平的影响，并检测glnR基因缺失对菌株存活能力的影响。【结果】 生长曲线结果显示，gdhA基因缺失不影响单增李斯特菌在正常条件下的生长能力。在20 mmol/L H₂O₂条件下，缺失株10403S-ΔgdhA存活能力极显著高于亲本株10403S(P＜0.01)。Western blotting结果显示，GdhA兔多克隆抗体制备成功。GFP荧光分析结果显示，glnR基因缺失后，gdhA基因转录水平极显著上调(P＜0.01)；在氧化应激条件下glnR基因缺失后GdhA蛋白表达水平极显著升高(P＜0.01)；glnR基因缺失菌株存活能力显著下降(P＜0.05)。【结论】 谷氨酸脱氢酶编码基因gdhA缺失不影响单增李斯特菌10403S正常生长，但显著提高其氧化应激条件下的存活能力，gdhA基因转录水平及GdhA蛋白表达水平受glnR基因负调控。

【目的】 探究饲粮中添加不同水平沙葱粉对安格斯牛营养物质表观消化率及血浆代谢组特征的影响，为将沙葱作为植物添加剂应用于安格斯牛生产提供一定的理论依据。【方法】 选取24头安格斯肉牛，随机分为4组，每组6头，其中对照组(CON)肉牛饲喂TMR基础饲粮，各试验组肉牛在基础饲粮基础上分别添加10(LAMR)、15(MAMR)、20(HAMR) g/d沙葱粉。预试期15 d，正试期120 d，其中正试期分2个阶段饲喂，每个阶段各60 d。在正试期第114―120天持续7 d采集饲料样和粪样，用于测定营养物质表观消化率。正试期第113天晨饲前进行血样采集，用于血浆非靶向代谢组学测定。【结果】 与对照组相比，LAMR、MAMR组安格斯肉牛粗蛋白质、钙、酸性洗涤纤维及中性洗涤纤维的表观消化率均显著升高(P＜0.05)，其中LAMR组的效果最佳。血浆代谢组学结果显示，共筛选出62种差异代谢物，其中在正离子模式下11种上调、30种下调；在负离子模式下1种上调、20种下调。这些差异代谢物主要为脂类和类脂类分子、有机酸和衍生物及有机杂环化合物，主要通过上调PC 19∶0_20∶3、PC 18∶0_18∶1、25-羟基胆钙化醇等代谢物调控α-亚麻酸代谢通路，促进安格斯牛对营养物质的利用。【结论】 本试验条件下，饲粮中添加10 g/d沙葱粉对安格斯牛的营养物质表观消化率效果最佳，沙葱粉中的活性成分可能通过上调甘油磷脂类化合物(PC 19∶0_20∶3、PC 18∶0_18∶1)、25-羟基胆钙化醇等代谢产物调控α-亚麻酸代谢通路，进而影响肉牛对营养物质的利用。

【目的】 试验旨在对青海高寒地区人工栽培禾本科多年生牧草进行营养价值评价，以期为高原畜牧业的发展和家畜饲草需求提供参考。【方法】 以高寒地区常见的冰草、黑麦草、小黑麦、麦宾草、冷地早熟禾和草地早熟禾为研究对象，选用3头成年公牦牛作为瘤胃液供体动物，通过体外产气法结合牧草产草量评定牧草的营养价值。【结果】 ①小黑麦的鲜草产量和干草产量均显著高于其他牧草(P＜0.05)。小黑麦和麦宾草的干鲜比较低，显著低于其他牧草(P＜0.05)。②小黑麦的干物质(DM)和粗蛋白质(CP)含量均显著高于冷地早熟禾和草地早熟禾(P＜0.05)。草地早熟禾的粗灰分(Ash)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量均最高。冰草的粗脂肪(EE)含量显著高于其他牧草(P＜0.05)。小黑麦的钙(Ca)含量显著高于其他牧草(P＜0.05)，而磷(P)含量与冰草相同。③小黑麦在24、48和72 h的体外产气量(GP)均显著高于其他牧草(P＜0.05)，且随时间的推移，各牧草间的产气量呈现上升趋势。④6种栽培牧草体外发酵液的pH范围为6.76～6.98。小黑麦和麦宾草的总挥发性脂肪酸(VFA)、乙酸和丙酸含量与其他牧草间差异显著(P＜0.05)，小黑麦的丁酸和戊酸含量最高，草地早熟禾的乙丙比显著高于其他牧草(P＜0.05)。6种栽培牧草氨态氮(NH₃-N)浓度范围为84.70～112.60 mg/L。冷地早熟禾的体外干物质消化率(IVDMD)显著高于其他牧草(P＜0.05)。⑤小黑麦各单位面积营养成分产量最高，均显著高于其他牧草(P＜0.05)。【结论】 小黑麦的综合生产性能最优，营养价值较高，可以作为青海高寒地区适宜栽培牧草。

【目的】 通过研究饲料中添加不同水平的发酵黑水虻对杂交鳢(Channa maculate ♀×Channa argus ♂)生长性能、体成分、血清生化指标、抗氧化及免疫能力的影响，探讨发酵黑水虻在水产饲料中的应用价值。【方法】 1 920尾初始体重为(5.88±0.01)g的杂交鳢被随机分成6组，每组4个重复，每重复80尾鱼，分别投喂添加0(对照)、2%、4%、6%、8%和10%发酵黑水虻湿物质的6种试验饲料，分别记作G0、G2、G4、G6、G8、G10，试验期56 d。试验结束后统计每个网箱杂交鳢重量、数量、摄食量，计算生长性能；每网箱随机挑选6尾杂交鳢分析体成分；尾静脉取血并分离血清，测定血清生化、抗氧化与免疫指标；取肝脏,测定肝脏抗氧化与免疫指标。【结果】 与G0组相比，G2～G8组杂交鳢终末体重、增重率和特定生长率均有显著提高(P＜0.05),G4组摄食量显著升高(P＜0.05)；G6和G8组饲料系数显著降低(P＜0.05)，存活率显著提高(P＜0.05)。各组间杂交鳢肥满度、脏体比和肠体比均无显著差异(P＞0.05)，G2、G4、G6和G10组肝体比与G0组相比均显著降低(P＜0.05)。各组全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙和总磷含量均无显著差异(P＞0.05)。各组杂交鳢血清总蛋白、葡萄糖、总胆固醇、尿素氮含量及谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性均无显著差异(P＞0.05)，G2～G10组血清甘油三酯含量与G0组相比显著降低(P＜0.05)；与G0组相比，G2组血清总抗氧化能力显著提高(P＜0.05)，G2～G8组肝脏过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性显著升高(P＜0.05)，G2～G10组血清溶菌酶活性显著升高(P＜0.05)。【结论】 发酵黑水虻对杂交鳢生长性能有显著促进作用，可显著降低杂交鳢肝体比和血清甘油三酯含量，同时可提高杂交鳢抗氧化和免疫能力；发酵黑水虻在杂交鳢饲料中适宜添加水平为2%～8%。

【目的】 研究不同饲养方式、去势对短角牛生长育肥、屠宰性能、肉品质的影响。【方法】 选取17月龄左右体重相近的18头短角牛，其中公牛12头(分为2组：放牧公牛组和育肥公牛组，每组6头)、阉割牛6头(育肥阉牛组)。放牧公牛组采用放牧饲养；育肥公牛组和育肥阉牛组围栏式育肥，均自由采食全混合饲粮(TMR)。3组均饲养育肥至24月龄进行屠宰，测定短角牛的育肥性能、屠宰性能和肉品质。【结果】 在不同饲养方式下，育肥公牛组短角牛终末体重、平均日增重(ADG)、体斜长，胸围和腹围，胴体重、屠宰率、净肉率、肉骨比、胴体产肉率、背膘厚、眼肌面积、大理石花纹，总肉重，心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏重量，背最长肌和股二头肌的粗脂肪和粗蛋白质含量均极显著或显著高于放牧公牛组(P＜0.01或P＜0.05)，背最长肌和股二头肌的剪切力和水分含量显著或极显著低于放牧公牛组(P＜0.05或P＜0.01)。在相同饲养方式下，育肥公牛组短角牛ADG、眼肌面积、特级肉块和高档肉块重量、心脏和肝脏重量，背最长肌剪切力、股二头肌和背最长肌的水分含量均显著或极显著高于阉牛(P＜0.05或P＜0.01)，大理石花纹、股二头肌和背最长肌粗脂肪含量、股二头肌的粗蛋白质含量显著或极显著低于育肥阉牛组(P＜0.05或P＜0.01)。【结论】 通过舍饲育肥可提高短角牛的生长性能、屠宰性能，改善牛肉嫩度、提高牛肉营养水平；去势降低了短角牛的育肥和屠宰性能，提高了短角牛牛肉大理石花纹等级、嫩度，并改善了牛肉品质。可根据市场需求决定是否去势。

【目的】 旨在探究硒代蛋氨酸(selenomethionine，SeMet)对黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁，AFB₁)致家兔脾脏损伤的保护作用。【方法】 选取50只35日龄家兔，随机分为5组，每组10只，分别为对照组(基础饲粮)、模型组(0.3 mg/kg BW AFB₁＋基础饲粮)、Se-1组(0.2 mg/kg SeMet＋0.3 mg/kg BW AFB₁＋基础饲粮)、Se-2组(0.4 mg/kg SeMet＋0.3 mg/kg BW AFB₁＋基础饲粮)、Se-3组(0.6 mg/kg SeMet＋0.3 mg/kg BW AFB₁＋基础饲粮),试验期共21 d。试验结束后取脾脏，通过HE染色观察脾脏组织形态学变化、免疫组化染色观察PCNA蛋白表达量和TUNEL染色观察细胞凋亡率，并检测脾脏组织中氧化应激水平和炎性因子的含量。【结果】 与对照组相比，模型组家兔脾脏可见红髓与白髓排列紊乱，淋巴细胞数量明显减少，PCNA蛋白的表达降低并出现大量凋亡细胞。与模型组相比，饲料中添加SeMet可明显改善家兔AFB₁中毒引起的脾脏病理损伤；同时提高了脾脏组织中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性(P＜0.01)，降低了丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β含量(P＜0.01)，有效缓解了AFB₁中毒引起的氧化应激和炎症反应。【结论】 饲料中添加SeMet可以通过提高抗氧化酶的活性，降低炎性因子的表达，有效改善AFB₁引起的家兔脾脏损伤。其中以0.2 mg/kg SeMet的缓解效果最佳。

【目的】 研究添加植物乳杆菌、地衣芽孢杆菌和纤维素酶对花棒微贮发酵品质和微生物群落结构的影响。【方法】 试验以花棒为原料，设置4个组，分别为对照组(不添加任何微贮添加剂)、J组(地衣芽孢杆菌＋植物乳杆菌)、M组(纤维素酶)和JM组(地衣芽孢杆菌＋植物乳杆菌＋纤维素酶)，混匀后装入透明聚乙烯袋中，密封后于室温避光发酵。在发酵第7、14、30、60天取样，测定花棒微贮饲料的营养价值、微贮发酵品质及酚类物质含量。【结果】 植物乳杆菌、地衣芽孢杆菌和纤维素酶协同发酵能够减少花棒的干物质损失，并保存营养成分，在花棒微贮发酵第60天时，3个处理组的中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维均显著低于对照组(P＜0.05)，M组中性洗涤纤维含量显著低于J和JM组(P＜0.05)。在花棒微贮发酵第30、60天时，J和JM组乳酸、乙酸含量均显著高于对照组(P＜0.05)；各处理组微贮pH均在4.2以下，发酵品质优良。随着发酵时间的增长，各处理组中单宁含量呈递减趋势，在花棒微贮发酵第60天时，JM组单宁、植物原花青素、植物总酚含量均显著低于对照组(P＜0.05)。【结论】 综上所述，各微贮添加剂都在一定程度上改善了花棒微贮的营养成分和发酵品质，添加植物乳杆菌、地衣芽孢杆菌和纤维素酶协同发酵60天对花棒微贮效果最佳。

【目的】 本试验通过研究饲粮中添加巴戟天多糖(Morinda officinalis polysaccharide，MOP)对文昌鸡生长性能、血清免疫和抗氧化指标及免疫器官发育的影响，旨在为MOP在肉鸡生产中得到深入应用提供参考依据。【方法】 选取6日龄体重相近、健康的雌性文昌鸡600只，随机分为5组，每组8个重复，每个重复15只鸡，对照组鸡饲喂基础饲粮，试验组鸡分别在基础饲粮中添加250、500、1 000和2 000 mg/kg的MOP，试验期40 d。在试验第1、40天分别称重，试验期间以重复为单位记录采食量和剩料量，计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)；在试验第40天每重复选取1只试验鸡采血，屠宰后采集胸腺、脾脏、法氏囊并称重，测定血清生化指标、抗氧化指标和免疫指标，并测定免疫器官指数。【结果】 与对照组相比，①饲粮中添加不同水平的MOP对文昌鸡的终末体重、ADG和ADFI无显著影响(P＞0.05),但250 mg/kg MOP组的F/G显著提高(P＜0.05)，其余试验组F/G无显著变化(P＞0.05)。②250 mg/kg MOP组文昌鸡血清免疫球蛋白G(IgG)含量、500 mg/kg MOP组血清IgM含量均显著提高(P＜0.05)；500和1 000 mg/kg MOP组血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P＜0.05)；2 000 mg/kg MOP组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著提高(P＜0.05)。③500、1 000和2 000 mg/kg MOP组文昌鸡法氏囊指数均显著提高(P＜0.05)。【结论】 饲粮中添加250及500 mg/kg MOP可提高文昌鸡血清免疫球蛋白含量，添加500、1 000和2 000 mg/kg MOP可改善文昌鸡血清抗氧化指标，促进免疫器官法氏囊的生长发育。本试验中，MOP添加量以500 mg/kg为宜。

【目的】 探究黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁,AFB₁)诱导细胞内活性氧(ROS)的产生对猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡的影响，为AFB₁致病机制提供理论依据。【方法】 用0、20、40、60、80和100 μg/mL AFB₁刺激细胞12 h，使用CCK-8试剂盒检测细胞存活率，以确定AFB₁对IPEC-J2细胞的毒性作用；使用0、10、20、30 μg/mL AFB₁刺激细胞后采用ROS免疫荧光分析法检测细胞内ROS产生情况；使用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测细胞内凋亡通路相关的关键因子mRNA和蛋白表达情况，并采用ROS抑制剂N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)处理细胞后检测AFB₁对细胞内凋亡因子表达的影响情况。【结果】 0～20 μg/mL AFB₁对细胞活性无显著影响(P＞0.05)，但随着AFB₁浓度升高，与空白对照组相比，IPEC-J2细胞活性显著或极显著下降(P＜0.05；P＜0.01)。ROS免疫荧光分析结果显示，ROS含量与AFB₁浓度呈高度依赖性，且随着AFB₁浓度的升高，与空白对照组相比，细胞内ROS含量显著或极显著增加(P＜0.05；P＜0.01)。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示，当AFB₁浓度为20 μg/mL时Caspase-3 mRNA和蛋白表达量均显著高于空白对照组(P＜0.05)；当AFB₁浓度为30 μg/mL时Caspase-3和Bax/Bcl-2 mRNA和蛋白表达量显著高于空白对照组(P＜0.05)，而Bax和Bcl-2蛋白表达量显著低于空白对照组(P＜0.05)；与AFB₁单独处理组相比，使用ROS抑制剂NAC预处理细胞后加入AFB₁，凋亡因子呈现出不同程度的显著下降趋势(P＜0.05)。【结论】 AFB₁可促进IPEC-J2细胞凋亡因子Bax、Bcl-2和Caspase-3的上调，并且这一过程与细胞内ROS的积累有关。

由于畜禽水产养殖业的快速发展，优质饲料蛋白面临需求量快速增加、原料价格上涨和品质参差不齐等问题，寻找优质的替代蛋白成为解决问题的关键。棉籽蛋白作为一种优质蛋白在动物饲料中广泛使用，蛋白质含量可以达到40%以上，资源丰富且价格低廉，但其存在的抗营养因子限制了其在生产中的应用。随着棉籽蛋白生产工艺的不断发展，通过合理有效的科学技术手段去除棉籽蛋白的抗营养因子并进一步优化其营养组成，其营养价值和适口性不断提高。合理利用棉籽蛋白能在保证动物生长性能的同时可以大幅降低动物饲料成本，但关于棉籽蛋白在不同养殖动物和生长阶段的适宜添加量和添加形式，对动物吸收、代谢、生理功能的影响及作用机制研究尚未明确。作者阐述了棉籽蛋白的营养价值、生产工艺、替代饲料蛋白源的研究现状以及影响棉籽蛋白利用价值的因素，为棉籽蛋白的合理使用和进一步提高棉籽蛋白利用价值提供参考。

【目的】 研究3个世代肉用褐牛生长性能和屠宰性能的差异，并进行外脊、小黄瓜条和辣椒条部位的肉品质差异分析，为肉用褐牛品质育种提供数据参考。【方法】 对育肥200 d后达到24(24m)、30(30m)月龄的第一(G1)、二(G2)、三(G3)世代共计313头肉用褐牛公牛进行体尺测定。随机从G1-24m(n=101)、G2-24m(n=75)、G3-24m(n=20)、G1-30m(n=53)、G2-30m(n=44)、G3-30m(n=20)组各选取8头牛进行屠宰性能测定，并对肉用褐牛外脊、小黄瓜条、辣椒条3个部位肉进行理化性质、营养成分及质构参数分析。【结果】 G3-30m组公牛胸宽、髋宽、坐骨端宽、胴体重、净肉重、骨重均显著高于G1-30m和G2-30m组(P＜0.05)。与《新疆褐牛肉用新类型评定标准》(DB65/T 3791―2015)相比，除G1-24m组公牛体高、腰角宽相对增长率为―0.53%和―0.64%，以及G2-24m组公牛腰角宽相对增长率为―1.18%之外，其余指标均超出《新疆褐牛肉用新类型评定标准》中指标要求。在肉品质方面，外脊嫩度优于小黄瓜条和辣椒条，但保水性较差；3个部位肉适口性无显著差异(P＞0.05)。【结论】 经过改良和选育，肉用褐牛的体格增大、胸围增长、体躯紧凑、肉用性能提高。

【目的】 通过分析梅花鹿早期妊娠不同时期的血液转录组数据，筛选参与梅花鹿早期妊娠的关键基因。【方法】 分别采集人工授精后0、7、15和20 d的雌性梅花鹿血液样品，利用Illumina HiSeq^TM3000C测序平台进行转录组分析。对不同时期的血液样本进行主成分分析和组间表达相关性分析，鉴定梅花鹿早期妊娠的关键阶段，利用DESeq筛选各时期的差异表达基因(DEGs)，并进行GO和KEGG功能分析以及蛋白互作网络构建。【结果】 转录组测序结果显示，妊娠第15天时梅花鹿血液出现了转录高峰，比较组D7 vs D0、D15 vs D7、D20 vs D15分别筛选到181、996、265个DEGs。其中比较组D7 vs D0共筛选到ERAS、MET、KDR等7个关键基因。综合GO和KEGG功能富集结果显示，基因主要富集在细胞对刺激的响应、信号转导等生物过程，以及PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等通路中；比较组D15 vs D7共筛选到HRAS、HIF1A、MAPK1、JAK1等10个关键基因，主要富集在免疫系统进程、免疫反应、趋化因子信号通路、C型凝集素受体信号通路等信号通路中；比较组D20 vs D15共筛选到MAPK1、MMP2等4个关键基因，主要富集在雌激素信号通路和松弛素信号通路中。【结论】 本研究分析了梅花鹿早期妊娠关键时间点血液转录组的动态表达，筛选到KDR、HRAS、MAPK1、JAK1等关键基因，为梅花鹿早期妊娠诊断标志物的挖掘提供参考。

随着社会经济发展的需要，养猪业逐渐趋向规模化、集约化及高效化养殖。人工授精(AI)作为现代化猪养殖过程中最有效的一种生物技术被广泛应用，其中保存优质种猪精液是人工授精的关键步骤。经保存后的猪精液品质直接影响到母猪的受胎率及仔猪的成活率，在精液保存过程中其质量会受到温度、pH、微生物及精液稀释剂等因素影响。目前生产实践中对猪精液保存主要采用常温保存、低温保存、冷冻保存3种方法。常温保存为利用猪精液在15～25 ℃下产生酸性代谢产物形成酸抑制达到短期保存目的。低温保存为在抗冷剂的保护下将精液缓慢降温至0～5 ℃，使精子处于半休眠状态从而进行保存。冷冻保存为利用液氮等冷源使猪精液进行快速降温至―196～―79 ℃，从而抑制精子的生理代谢活动，以达到长期保存猪精液的目的。作者旨在对3种猪精液保存方法进行综述，对影响猪精液保存效果的主要因素进行简要介绍，并提出了针对不同猪精液保存方法的改进策略，从而为中国生猪产业的人工授精技术相关研究及其应用和猪种质资源保存提供有益的参考与借鉴，助推中国猪产业持续健康发展。

【目的】 通过对鸽F3卵泡颗粒细胞进行高通量测序筛选出与卵泡闭锁相关的关键基因。【方法】 选择产蛋间隔第5(LI5)和7(LI7)天的白羽王鸽各3只，构建F3卵泡颗粒细胞转录文库，利用转录组测序筛选差异表达基因(differentially expressed genes，DEGs)，并对DEGs进行功能注释，利用实时荧光定量PCR对随机选择的5个DEGs进行表达量验证。【结果】 LI5和LI7期鸽F3卵泡颗粒细胞的6个cDNA文库中获得41.96～43.62 Mb clean reads，Q30＞92%，比对率为82.21%～85.94%。筛选出LI5和LI7期F3卵泡颗粒细胞DEGs共6 587个，其中2 318个基因上调，4 269个基因下调。GO功能富集分析显示，DEGs主要富集在细胞过程、代谢过程、连接和催化活性功能等条目。KEGG通路富集分析显示，DEGs主要显著富集到聚焦黏附、内质网加工蛋白、卵巢类固醇合成和类固醇激素生物合成等信号通路。结合蛋白-蛋白互作网络和关键通路的DGEs发现，StAR、HSD3B1、MARCH6、BCL2、BOK、CDCA7等基因在鸽卵泡闭锁中发挥了重要作用。实时荧光定量PCR结果显示，5个基因在LI5和LI7期鸽F3卵泡颗粒细胞中表达变化趋势与转录组测序结果一致。【结论】 试验获得的6个差异表达基因(StAR、HSD3B1、MARCH6、BCL2、BOK、CDCA7)在鸽卵泡闭锁中发挥重要作用，为进一步了解鸽卵泡闭锁的分子机制提供依据，并为抑制鸽卵泡闭锁、提高鸽产蛋量提供理论基础。

【目的】 本研究旨在筛查雷州山羊T盒子转录因子15(TBX15)基因潜在的单核苷酸多态性(SNP)位点，并分析其与体尺性状的关联性，为雷州山羊分子选育提供理论支撑。【方法】 采集78只雷州山羊血样提取基因组DNA，利用PCR扩增和直接测序法检测TBX15基因SNP位点，并分析其遗传多样性；采用SPSS 23.0软件分析TBX15基因多态性与雷州山羊体高、体长和胸围等体尺性状的关联性；利用HaploView软件进行TBX15基因SNP位点的连锁不平衡和单倍型分析。【结果】 在雷州山羊TBX15基因内含子上发现3个SNPs位点：g.96346139 A＞G、g.96345894 T＞C和g.96330058 G＞A，均存在3种基因型，优势基因型分别为GG、CC和AA；卡方检验结果表明，其均处于Hardy-Weinberg平衡状态；多态信息含量(PIC)分别为0.309、0.285及0.294，均为中度多态(0.25＜PIC＜0.50)。关联分析结果发现，雷州山羊TBX15基因g.96346139 A＞G位点GG基因型个体的体高、十字部高和体斜长均显著高于AA基因型(P＜0.05)；g.96345894 T＞C位点CC基因型个体的体高、十字部高、体斜长和胸深均显著高于TT基因型(P＜0.05)；g.96330058 G＞A位点GG基因型个体的胸深显著低于其他2种基因型(P＜0.05)。在单倍型和连锁不平衡分析中发现，3个SNPs位点间存在强连锁关系(R²＞0.33)，有5种主要单倍型，其中优势单倍型是ACG，其概率为0.716。【结论】 雷州山羊TBX15基因3个SNPs位点对体高、体斜长等体尺指标具有显著影响，且该3个位点间具有强连锁关系，单倍型ACG可作为雷州山羊选育的候选标记。

【目的】 探究42日龄北京鸭和连城白鸭腿肌肉品质和感官指纹图谱等差异，为进一步解析北京鸭与连城白鸭腿肌风味特征提供基础数据。【方法】 分别选取8只42日龄北京鸭和连城白鸭，采集腿肌检测其肉品质，包括pH、肉色、剪切力及失水率，同时运用电子舌、电子鼻进行仿生感官评价，并对其进行人的感官评价。【结果】 在肉品质指标上，42日龄连城白鸭腿肌肉色亮度(L^*)和红度(a^*)值均显著高于北京鸭(P＜0.01),连城白鸭腿肌失水率和剪切力显著低于北京鸭(P＜0.01)。电子舌结果显示，北京鸭腿肌在苦味、苦味回味、鲜味、咸味、甜味上的响应值极显著或显著高于连城白鸭(P＜0.01；P＜0.05)，但两者在丰富性上无显著差异(P＞0.05)。电子鼻结果显示，连城白鸭腿肌中含更多的甲烷，两个品种之间在无机硫化物和乙醇上存在明差异，北京鸭腿肌含有更多芳香成分、氨水、氢气、烷烃、甲烷、有机硫化物等。在人的感官评价中，连城白鸭腿肌在咸味、甜味、腥味上的得分极显著高于北京鸭(P＜0.01)，北京鸭腿肌香味得分极显著高于连城白鸭(P＜0.01)。【结论】 42日龄北京鸭腿肌整体风味比连城白鸭更丰富，连城白鸭腿肌在口感上更加多汁。本研究结果为进一步解析两品种鸭腿肌的风味特征提供基础数据。

【目的】 探究青海省果洛藏族自治州牦牛的父系起源、群体遗传结构、遗传多样性水平以及分化状况。【方法】 通过基因组DNA提取、PCR扩增和测序分型，利用5个Y染色体单核苷酸多态性(Y-SNPs)标记(SRY4、USP9Y、UTY19、AMELY3和OFD1Y10)和1个Y染色体微卫星(Y-STR)标记(INRA189)对玛多、久治、甘德、班玛4个牦牛群体共144头牦牛个体进行父系遗传分析。通过软件计算单倍型多样度(Hd)和群体间固定分化指数(Fst)，评估各牦牛群体的父系遗传多样性水平、群体间遗传分化程度。利用Mega 5.05和Network 10.1软件分别构建UPGMA树状图和网络中介图，探究各牦牛群体间的父系遗传关系和群体结构组成。【结果】 青海省果洛藏族自治州4个牦牛群体中共鉴定出7种Y染色体单倍型。玛多、久治、甘德、班玛牦牛群体分别鉴定出6、4、4、4种单倍型。玛多、班玛牦牛群体中分别检测到2种(H2Y1和H3Y1)和1种(H7Y1)特有单倍型。遗传多样性分析表明，4个牦牛群体的父系遗传多样性较为丰富(Hd＝0.506)，其中玛多牦牛的单倍型多样度最高(Hd＝0.632)，甘德牦牛的单倍型多样度最低(Hd＝0.324)。遗传分化分析结果显示，除班玛牦牛与甘德、玛多牦牛群体间均呈中等遗传分化外(0.05＜Fst＜0.15)，其他牦牛群体间分化程度均较弱(0＜Fst＜0.05)。聚类分析结果显示，4个牦牛群体明显地聚为2类，其中久治、玛多牦牛群体最先聚在一起，再与甘德牦牛群体聚为一类，而班玛牦牛群体单独为一类。系统发育分析表明，除班玛牦牛群体由1个父系支系(Y1)组成外，其他3个牦牛群体均由2个父系支系(Y1和Y2)组成。【结论】 本研究基于Y染色体分子标记初步揭示了青海省果洛藏族自治州4个牦牛群体的父系遗传多样性、分化程度和群体遗传结构，4个牦牛群体拥有较为丰富的父系遗传多样性，存在2个父系起源；群体间父系遗传分化程度较弱，但父系遗传结构存在一定差异。研究结果为当地牦牛遗传资源的保种选育和开发利用提供了理论依据。

【目的】 了解禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的遗传变异情况。【方法】 采集山东地区部分养殖场中疑似IBV感染鸡病料组织，接种SPF鸡胚进行病毒分离鉴定，利用二代测序技术进行全基因组测序鉴定，并基于全基因组序列进行遗传进化和关键氨基酸位点分析。【结果】 感染鸡剖检可见气管环出血，管腔内有黄色或黑黄色栓塞物等。从病料中共分离获得2株IBV，分别命名为SDJN和SDLY。相似性分析结果显示，分离株SDJN和SDLY与GⅠ-19基因型参考毒株相似性较高，核苷酸序列相似性为96.0%～97.3%，氨基酸序列相似性为94.9%～100%。氨基酸序列分析结果显示，2株IBV分离株与其他毒株相比存在多个氨基酸变异位点。系统进化树结果显示，分离株SDJN和SDLY与IBV GⅠ-19基因型参考毒株位于同一分支。重组分析结果显示，分离株SDJN和SDLY为多种基因型毒株的重组毒株，均以ck/CH/LDL/091022株为主要亲本毒株。【结论】 本研究从山东地区分离得到2株IBV，2株分离株与GⅠ-19基因型毒株密切相关，是一种新型重组IBV毒株。研究结果为进一步研究IBV流行与进化及禽传染性支气管炎的防控奠定基础。

【目的】 通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型，探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】 将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142，按照100 μL/只(10⁸ EID₅₀/100 μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡，并在感染后观察鸡的临床特征，采集感染后0、1、3、5、7、9 d的咽拭子和血清样品；感染后5和9 d剖检观察鸡的呼吸道和肺脏病理变化，收集气管灌洗液、气管和肺脏组织；通过实时荧光定量PCR检测咽拭子、气管灌洗液、气管和肺脏组织中的病毒载量；应用ELISA方法检测感染后血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG的变化规律，通过血清中和试验分析血清中和抗体的活性；通过ELISA方法检测血清和气管灌洗液中炎症相关细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB(NF-κB)的水平。【结果】 H9N2亚型AIV感染后鸡没有出现典型的临床特征，但感染后1～5 d在咽拭子中可检测到病毒核酸，且感染3 d后病毒载量最高，感染5 d后检测不到病毒核酸；感染5 d时，在气管灌洗液、气管和肺脏检测到病毒核酸，其中前两者载量高于肺脏；血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG在感染后3 d增多，感染后5～9 d维持较高水平，且具有较强的病毒中和活性；血清IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB也在感染后3 d开始呈上升趋势；但气管灌洗液中IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB含量很低，且感染前后无明显变化。【结论】 本研究成功建立了H9N2亚型AIV感染鸡呼吸道模型，确定上呼吸道是H9N2亚型AIV主要感染和增殖部位，H9N2亚型AIV感染诱导机体产生促炎和抑炎细胞因子，可能是感染动物维持免疫稳态的重要因素。本研究为深入探索H9N2亚型AIV的致病机制和宿主防御机制奠定了基础。

【目的】 非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)是对生猪养殖业危害极大的一种病原体，B602L蛋白作为其重要的非结构蛋白，是衣壳蛋白p72折叠为正确的三级结构的伴侣分子之一，在病毒组装成二十面体结构的过程中发挥着关键作用。特异性抗体对于抗非洲猪瘟免疫应答机制及血清学检测方法研究具有重要意义，本研究旨在获取ASFV B602L蛋白，并制备抗ASFV B602L蛋白的多克隆抗体，为ASFV B602L蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】 以ASFV China/2018/AnhuiXCGQ株的B602L基因为研究对象，应用生物信息学软件对B602L蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、抗原性和蛋白结构进行分析后，利用同源重组的方法将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经诱导表达获得B602L重组蛋白，利用镍柱亲和层析进行蛋白纯化，通过SDS-PAGE和Western blotting对B602L蛋白纯化效果进行验证。将纯化后的B602L蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价，通过Western blotting和Dot blotting检测多克隆抗体特异性。【结果】 生物信息学分析表明，B602L蛋白属于稳定性亲水蛋白，无跨膜区和信号肽。二级结构主要含有α-螺旋(54.91%)、延伸链(9.81%)和无规则卷曲(32.08%)。成功构建了ASFV B602L重组质粒，SDS-PAGE和Western blotting结果显示，重组菌pET-28a-B602L-BL21在16 ℃、0.5 mmol/L IPTG诱导下高效表达，获得的重组蛋白主要表达在BL21菌株上清中，大小约为70 ku，且能与ASFV 阳性血清特异性结合。间接ELISA检测结果显示，制备的抗B602L鼠源多克隆抗体效价达1∶40 9600，Western blotting和Dot blotting试验结果表明，抗B602L鼠源多克隆抗体能够特异性识别B602L蛋白。【结论】 原核表达的B602L重组蛋白具有良好的免疫原性，能够与ASFV阳性血清特异性结合，制备的鼠抗ASFV B602L蛋白多克隆抗体具备较好的生物学活性。本试验结果可为进一步研究ASFV B602L蛋白的生物学功能和非洲猪瘟诊断方法的建立提供生物材料和理论支撑。

【目的】 探究从污水样品中分离到的1株肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性及全基因组特征，为临床肺炎克雷伯菌感染的防控和开发噬菌体相关新型替抗产品提供基础。【方法】 以肺炎克雷伯菌TJAU-K11为宿主菌，采用双层平板法从污水样品中分离纯化获得肺炎克雷伯菌噬菌体。通过透射电镜观察噬菌体形态，测定噬菌体宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线，评估噬菌体稳定性，探究其对肺炎克雷伯菌TJAU-K11的生物被膜形成的影响以及裂解效果，同时进行全基因组测序，了解噬菌体的生物学特性及全基因组特征。【结果】 从污水样品中成功分离获得3株肺炎克雷伯菌噬菌体，分别命名为kp4、kp5和kp6，透射电镜观察结果显示，噬菌体kp6是具有正二十面体形态的短尾噬菌体。一步生长曲线结果显示，噬菌体kp6的潜伏期为20 min，爆发期为30 min。该噬菌体在―20～50 ℃、pH 4.0～10.0和紫外照射12 min内噬菌体效价保持稳定。单一噬菌体的体外抑菌试验结果显示，不同MOI噬菌体kp6组的D_{600 nm}值在7 h内始终＜0.4；噬菌体鸡尾酒制剂的体外抑菌试验结果显示，MOI为1、100时，噬菌体kp6在12 h内的D_{600 nm}值＜0.1。不同MOI噬菌体kp6组宿主菌生物被膜形成量均极显著低于阳性对照组(P＜0.01)，单一噬菌体kp6与噬菌体鸡尾酒制剂均能裂解宿主菌生物被膜。全基因组测序表明噬菌体kp6基因组为双链环状DNA，全长40 971 bp，GC含量为53.13%，49个编码序列中有23个编码已知功能的蛋白，其中包括短尾噬菌体吸附和注入作用的尾纤蛋白gp12、裂解功能蛋白内溶酶等。【结论】 本研究分离获得的肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体kp6，其基因组中存在1个内溶酶，以其制备的噬菌体鸡尾酒制剂在12 h内能完全抑制宿主菌生长，试验结果为后续裂解酶和噬菌体制剂的开发奠定基础。

猪链球菌(Streptococcus suis)是一种能引起猪和人感染，危害较大的人兽共患病病原体。猪链球菌在自然状态下具有形成生物被膜的能力，是其产生耐药性的重要原因之一。目前已知猪链球菌是在感染的黏附、集结和分散3个阶段形成生物被膜，其中毒力因子(荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白和溶血素)起到主要作用，整个形成过程由细菌细胞的信号转导系统进行调控。细菌群体感应(quorum-sensing,QS)系统是细菌胞内重要的信号转导系统，它对细菌生物被膜的形成具有显著的调控作用，并通过调控水平基因转移、复制、生物被膜形成等方式增强细菌耐药性，同时在增加细菌密度等方面发挥重要作用。生物被膜的形成能够增强猪链球菌的耐药性，其耐药机制主要涉及QS系统调控、胞外聚合物的形成、细胞外DNA作用、外排泵作用、生物被膜结构和水平基因转移。明确猪链球菌生物被膜的形成与调控及生物被膜引起耐药的机制，对猪链球菌的预防和治疗具有重要意义。化学消毒剂、高温、紫外线和臭氧均能破坏猪链球菌的生物被膜并杀灭细菌；使用抗生素或抗菌剂等化学合成药物能抑制生物被膜的形成或破坏生物被膜，从而达到杀灭细菌的作用，实现治疗猪链球菌感染的目的。此外，部分中药对猪链球菌的生物被膜有抑制和破坏作用，其活性成分具有抗耐药的特性，具有良好的开发前景。笔者对猪链球菌生物被膜的形成和调控机制及其引起的耐药机制的研究进展进行综述，并对目前的防治策略进行归纳总结，以期为猪链球菌的防控提供新的思路。

【目的】 牛早幼粒细胞白血病蛋白(promyelocytic leukemia protein，PML)是细胞核亚结构PML核体(nuclear bodies，NBs)的骨架蛋白，在抗病毒内源性免疫中发挥重要作用。本研究旨在制备牛PML单克隆抗体，为研究PML NBs结构和功能准备物质材料。【方法】 构建表达bPML基因截短体的重组质粒pET-32a-bPML，将重组质粒转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达，利用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析。将经镍柱亲和层析纯化后的重组蛋白免疫小鼠，制备单克隆抗体，应用ELISA方法鉴定单克隆抗体类/亚类和型，进一步鉴定该单克隆抗体识别的抗原表位；通过检测不同种属来源的细胞检测单克隆抗体的特异性；利用该单克隆抗体对外源转染牛PML的细胞进行Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测；利用该单克隆抗体建立的IFA检测不同的牛源细胞内源PML定位情况。【结果】 牛PML在大肠杆菌中可溶性表达，分子质量大小为50 ku；以此纯化蛋白为免疫原制备出1株抗牛PML单克隆抗体bPML-2G5，其为IgG1亚类，轻链为Kappa型，识别表位位于牛PML结构域⁷⁸EQPRPSTSRA⁸⁸；Western blotting和IFA分析结果显示，bPML-2G5不仅可特异性识别外源转染的牛PML，而且还能特异性识别牛肾细胞、牛鼻甲骨细胞、牛胚气管细胞的胞核内核体结构中的PML。【结论】 本研究成功制备了1株分泌牛PML单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体可用于检测外源性及内源性表达的牛PML。

【目的】 对云南昆明尖音库蚊复合组蚊虫的种类进行调查和鉴定，为蚊媒传染病的防控提供依据。【方法】 选取于2022年6月和2023年5月采集于昆明金殿青龙山和黄土坡的尖音库蚊复合组雄虫进行形态学和分子生物学鉴定。通过体视显微镜观察蚊虫的形态特征，并切下雄蚊尾器进行观察，根据形态特征鉴定蚊虫种类；扩增蚊虫的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因和乙酰胆碱酯酶基因2(AChE2)，对基因序列进行分析。【结果】 金殿青龙山采集的蚊虫阳茎中叶末端尖削，内叶外伸部分呈宽叶状；黄土坡采集的蚊虫阳茎中叶末端平齐，阳茎内叶呈刀叶状。基因序列相似性分析结果显示，采集蚊虫的COⅠ基因无显著差异；AChE2基因将蚊虫区分为两种，金殿青龙山采集蚊虫与致倦库蚊相似性较高，相似性最高为98.1%～100%，黄土坡采集蚊虫与尖音库蚊指名亚种相似性较高，相似性最高为99.7%。COⅠ基因系统发育分析结果显示，6只蚊虫与致倦库蚊、尖音库蚊、骚扰库蚊和淡色库蚊处于同一进化分支，没有明显的遗传进化差异；AChE2基因系统发育分析结果显示，金殿青龙山采集的蚊虫与致倦库蚊聚为一簇，黄土坡采集的蚊虫与尖音库蚊聚为一簇，分别处于不同进化分支。【结论】 本研究采集到2种尖音库蚊复合组蚊虫。金殿青龙山采集蚊虫为致倦库蚊，黄土坡采集蚊虫为尖音库蚊指名亚种。研究表明中国昆明等南方地区存在尖音库蚊指名亚种，应加强西尼罗病毒等有关病毒的监测。

【目的】 利用原核表达系统表达嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum，AP) MSP4蛋白，并制备抗MSP4蛋白的多克隆抗体，为嗜吞噬细胞无浆体检测方法的建立提供试验材料和理论依据。【方法】 根据GenBank公布的MSP4基因优化并合成MSP4基因，将其插入pET-30a载体，构建pET-30a-MSP4重组质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，对影响表达效果的因素(温度和IPTG)进行优化，选择最佳诱导表达条件，经SDS-PAGE分析蛋白表达情况，重组蛋白经Ni-IDA亲和层析纯化，并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。用纯化后的重组蛋白MSP4免疫新西兰大白兔制备兔源多克隆抗体，利用间接 ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及特异性。【结果】 本研究成功构建pET-30a-MSP4重组质粒，在37 ℃、0.8 mmol/L IPTG诱导条件下蛋白表达量较高，表达的重组蛋白分子质量约为28 ku，以包涵体形式存在。Western blotting鉴定结果显示，其免疫原性较好。获得的多克隆抗体效价分别为1∶64 000(家兔1)和1∶128 000(家兔2)，且能与表达的重组蛋白MSP4发生特异性反应，具有较好的免疫原性。【结论】 本研究成功表达纯化了嗜吞噬细胞无浆体MSP4蛋白,并制备了其多克隆抗体，可为嗜吞噬细胞无浆体抗原抗体检测方法的建立及疫苗效果评估提供参考，也为MSP4蛋白功能研究奠定基础。

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的一种重要的人兽共患病，在全球广泛流行，造成了严重的经济损失并威胁公共卫生安全。中国是布病严重流行的国家之一，在高流行地区实施疫苗免疫接种是预防布病传播的有效策略之一。中国流行菌株主要为羊种布鲁氏菌，患病羊是造成布鲁氏菌传播的主要传染源。目前中国可用于预防羊布病的疫苗有羊种布鲁氏菌Rev.1株、羊种布鲁氏菌M5/M5-90株、猪种布鲁氏菌S2株等常规弱毒疫苗，以及新批准的羊种布鲁氏菌M5-90Δ26株、BA0711株等基因缺失活疫苗。虽然可用于预防羊布病的疫苗种类众多，但现有疫苗仍存在两点不足，一是安全性不够，注射免疫怀孕动物会引起流产；二是疫苗株与野毒株同为光滑型，免疫后干扰临床诊断。因此，研制安全性高且不干扰临床诊断的布病疫苗仍十分迫切。笔者对羊用布病疫苗的应用及新型疫苗的研究现状作一综述。

【目的】 对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离鉴定和遗传进化分析。【方法】 通过 RT-PCR方法检测到实验室购买的某进口胎牛血清中存在BVDV核酸污染，将污染血清接种MDBK细胞，传代培养至第7代，对每一代细胞的培养物进行BVDV 5'-UTR扩增，PCR扩增产物连接pMD19-T载体并测序,对测序结果进行遗传进化分析；利用间接免疫荧光试验(IFA)进行分离株抗原检测和病毒滴度测定；将分离株接种BALB/c小鼠，采集眼眶血进行血常规检测和RT-PCR检测。【结果】 该病毒分离株在培养MDBK细胞时未能引起细胞病变效应，细胞培养物 RT-PCR扩增为阳性；基于5'-UTR序列的相似性分析表明，该分离株与BVDV UDEC-COY7-17(OL860952.1)毒株5'-UTR序列相似性为99.6%，同属BVDV-1e亚型；IFA检测到感染分离株的MDBK细胞细胞质中出现特异性绿色荧光信号，而对照组无信号；半数培养感染剂量(50% tissue culture infectivedose,TCID₅₀)为10^-4.7/0.1 mL；接种BALB/c小鼠后第7天血常规检测其血液中白细胞(WBC)和淋巴细胞(LYM)数量极显著低于对照组(P＜0.01)。提取血液总 RNA 进行5'-UTR RT-PCR检测，检测结果为阳性，扩增产物大小为298 bp，与预期相符。【结论】 本研究在进口胎牛血清中分离得到1株非致细胞病变型BVDV-1e亚型毒株，证明进口胎牛血清中存在BVDV抗原污染，为进一步研究BVDV的相关分子机制提供试验材料。

【目的】 基于CRISPR序列信息应用机器学习模型预测致泻性大肠埃希菌感染人的潜在风险，并以此识别具有人兽共患风险的高危菌株。【方法】 从Enterobase 数据库批量获取806株中国分离的致泻性大肠埃希菌基因组序列信息，提取CRISPR位点的间隔序列构造特征，建立机器学习模型并使用交叉验证评价机器学习模型的预测效果。使用最佳模型输出致泻性大肠埃希菌的感染风险，并比较不同动物来源分离株对人的潜在感染风险。【结果】 从806株菌株中共获取1 093个间隔序列簇，人源分离株独有间隔序列簇为196个，动物源分离株独有间隔序列簇为291个，其中606个二者共享，线性判别分析发现人源和动物源菌株的间隔序列簇分布存在明显差异。以间隔序列簇作为特征，成功构建随机森林模型、逻辑斯谛回归模型、支持向量机模型和梯度提升树模型4种机器学习模型，其宿主预测准确率均超过0.82，受试者工作特征曲线下面积(area under receiver operating characteristic curve，AUC)值均接近0.9。最终确定随机森林模型的分类效果最佳，优化后模型预测准确率为 0.844，AUC值为0.915。根据最佳模型输出的致泻性大肠埃希菌的感染风险，猪源分离株感染人的风险最高，羊源分离株感染人的风险较低，极少数禽源分离株可能具备感染人的潜力。【结论】 基于间隔序列构建的机器学习模型对具有人兽共患风险的致泻性大肠埃希菌具备一定的识别能力，该模型为传染性疾病防控提供了新思路。

【目的】 探索钙离子对牛乳腺上皮细胞炎症反应的调控作用，比较分析脂多糖与钙离子共处理的牛乳腺上皮细胞的miRNA表达谱。【方法】 使用脂多糖处理牛乳腺上皮细胞构建炎症反应模型，检测不同浓度(0.5～6.6 mmol/L)钙离子和脂多糖(50 μg/mL)共处理的牛乳腺上皮细胞的炎症因子转录水平。提取正常、脂多糖处理、脂多糖与钙离子共处理牛乳腺上皮细胞样本中总RNA，每组各3个样本。对9个RNA样本进行质量评估，并对其开展miRNA测序和生物信息学分析，最后对3组共有差异表达miRNA进行实时荧光定量PCR验证。【结果】 在牛乳腺上皮细胞炎症模型中，高浓度钙离子可抑制炎症因子的转录。9个样本的clean reads在raw reads中占比为93.86%～98.18%，序列分布长度均集中在21～24 nt之间。3组样本的组内相似性高，而组间差异度高。3组样本共鉴定出47个差异表达miRNA，共有差异表达miRNA分别为bta-miR-11980、bta-miR-1246和bta-miR-677。GO功能和KEGG通路富集分析显示，差异表达miRNA的靶基因显著富集于细胞通讯调节、信号调节、内膜系统、系统发育、细胞发育过程、细胞分化等GO条目，显著富集于HIF-1信号通路、ErbB信号通路、TNF信号通路、突触囊泡周期、肌醇磷酸代谢途径等通路。实时荧光定量PCR验证结果显示，3组样本共有差异表达miRNA(bta-miR-677和bta-miR-1246)表达趋势与转录组测序结果一致。【结论】 钙离子通过调控牛乳腺上皮细胞内bta-miR-11980、bta-miR-1246和bta-miR-677等差异表达miRNA的表达模式，间接影响牛乳腺上皮细胞炎症反应进程。

【目的】 探索大蒜素缓解伏马毒素B₁(FB₁)造成产蛋期鹌鹑肝脏损伤的机制，为预防FB₁诱导鹌鹑肝损伤提供试验依据，减少FB₁中毒给养殖业造成的经济损失。【方法】 以黄羽雌性鹌鹑为试验对象，将120只鹌鹑随机分为4组，分别为对照组、大蒜素组(500 mg/kg大蒜素)、伏马毒素组(30 mg/kg FB₁)及缓解组(500 mg/kg大蒜素+30 mg/kg FB₁)，每组30只。观察鹌鹑肝脏组织病理学及组织超微结构变化，并检测肝功能、抗氧化功能指标及相关炎症因子的表达。【结果】 肝脏病理学与超微结构结果显示，大蒜素能够有效缓解FB₁造成的鹌鹑肝脏线粒体嵴消失、胶原纤维增加等病理损伤。与对照组相比，伏马毒素组鹌鹑血清中谷草转氨酶(AST)浓度显著升高(P＜0.05)；过氧化氢酶(CAT)活力、总抗氧化物能力(T-AOC)均显著降低(P＜0.05)，丙二醛(MDA)含量显著升高(P＜0.05)；白细胞介素8(IL-8)、IL-6、IL-18、IL-12β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、环氧化酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、相关凋亡因子配体(FASL)及Toll样受体4(TLR4)基因表达量均显著升高(P＜0.05)。与伏马毒素组相比，缓解组鹌鹑血清中AST含量显著降低(P＜0.05)；CAT活力、T-AOC显著升高(P＜0.05)，MDA含量显著降低(P＜0.05)；IL-8、IL-6、IL-18、IL-12β、TNF-α、COX-2、iNOS、FASL、TLR4基因表达量均显著降低(P＜0.05)。【结论】 大蒜素可有效缓解FB₁导致的鹌鹑肝损伤，其机制与大蒜素的抗炎作用和抗氧化作用密切相关。

【目的】 揭示腹泻犊牛粪便菌群和粪便代谢物的变化特征。【方法】 根据粪便评分和临床症状，本研究将30日龄内哺乳犊牛分为健康组(CK)和腹泻组(D)，应用16S rRNA扩增子测序技术对CK和D组犊牛粪便菌群进行比较分析。应用液相色谱-质谱联用法，对犊牛粪便进行非靶向代谢组分析，筛选差异代谢物并对其进行KEGG通路富集分析，对粪便菌群和粪便差异代谢物进行Spearman相关性分析。【结果】 与CK组相比，D组犊牛粪便菌群OTU数量和Chao1指数极显著升高(P＜0.01)，Shannon和Simpson指数极显著降低(P＜0.01)。D组粪便中梭杆菌门、变形菌门、酸杆菌门和绿弯菌门，以及埃希-志贺属、梭杆菌属、梭菌属等9个菌属相对丰度极显著或显著升高(P＜0.01或P＜0.05)，而放线菌门、厚壁菌门和广古菌门，以及粪杆菌属、罕见小球菌属、厄氏菌属、双歧杆菌属等11个菌属极显著或显著降低(P＜0.01；P＜0.05)。梭杆菌门、变形菌门、梭杆菌属、埃希-志贺菌属、死亡梭杆菌、大肠埃希菌是腹泻犊牛粪便生物标志物。从CK和D组犊牛粪便中共筛选到54个差异代谢物，其中PC(16∶1(9Z)/16∶1(9Z))富集到甘油磷脂代谢途径，与梭杆菌属极显著正相关(P＜0.01)，与柯林斯菌属、巨型球菌属、厄氏菌属显著或极显著负相关(P＜0.05；P＜0.01)。脱硫生物素富集到生物素代谢途径，与梭杆菌属显著负相关(P＜0.05)，与罕见小球菌属、巨型球菌属、罗尔斯通菌属显著正相关(P＜0.05)。二氢生物蝶呤和二氢新蝶呤三磷酸富集到叶酸生物合成途径，与梭杆菌属、消化链球菌属极显著或显著负相关(P＜0.01；P＜0.05)，与罕见小球菌属、巨型球菌属、厄氏菌属、双歧杆菌属、普雷沃菌属、柯林斯菌属、粪杆菌属、副拟杆菌属极显著或显著正相关(P＜0.01；P＜0.05)。【结论】 腹泻犊牛粪便菌群丰富度、多样性、物种组成及粪便代谢物组成均发生了显著变化，犊牛肠道甘油磷脂代谢、生物素和叶酸生物合成受到影响，肠道菌群的紊乱和粪便代谢物的显著变化紧密相关。

【目的】 通过网络药理学、分子对接和试验验证的方法探讨茵陈蒿汤(YCHD)治疗糖尿病(DM)的作用机制。【方法】 利用TCMSP、ETCM、UniProt、SwissTargetPrediction数据库及文献查阅等查找YCHD的活性成分和相关作用靶点；利用OMIM、PharmGkb、TTD、DrugBank数据库获取DM的疾病靶点。构建YCHD和DM的蛋白互作(PPI)网络图，对关键作用靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。采用AutoDockTool 1.5.7软件进行分子对接，预测活性成分和核心靶点的结合能。将细胞分为对照组(Control)、模型组(Model)及YCHD含药血清低(YCHD-L)、中(YCHD-M)、高(YCHD-H)剂量组，通过体外细胞试验检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶2(COX2)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)p65、白细胞介素-1β(IL1β)、IL6的mRNA表达水平，以及iNOS、COX2、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB p65蛋白表达水平，并对关键通路进行验证。【结果】 共获得YCHD活性成分147个，DM疾病靶点486个，YCHD作用于DM的相关靶点基因57个，其中胰岛素(INS)、IL1β、肿瘤坏死因子(TNF)、B细胞中κ轻型多肽基因增强子的核因子1(NFKB1)、信号传导子和转录活化子1(STAT1)、白蛋白(ALB)、TLR4、IL1A、IL10、IL8等为关键靶基因。根据Counts值筛选出GO前十的条目中包含生物过程1条、细胞组分7条、分子功能2条，主要包括RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、内质网膜、质膜、胞外区、核质、胞质溶胶、细胞质、膜的组成部分、相同蛋白质结合和蛋白质结合。KEGG通路富集分析显示，与NOD样受体、NF-κB、Toll样受体等炎症信号通路密切相关。分子对接结果显示，YCHD的活性有效成分与主要靶点具有良好的结合能力。体外试验结果表明，与对照组相比，模型组细胞TLR4、iNOS、COX2、NF-κB p65、IL1β和IL6 mRNA表达水平及iNOS、COX2、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05)；与模型组相比，YCHD-L、YCHD-M、YCHD-H组细胞iNOS、COX2、IL1β和IL6 mRNA表达水平及iNOS、COX2蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05)，YCHD-M、YCHD-H组细胞TLR4、NF-κB p65 mRNA水平显著降低(P＜0.05)，YCHD-H组细胞MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平显著降低(P＜0.05)。【结论】 YCHD可能通过多成分、多靶点，调控TLR4、NF-κB等多条炎症信号通路，发挥抗DM的作用。以YCHD-H组对炎症信号通路相关指标的抑制最明显。

【目的】 丰富复方苦玄参颗粒剂型，用于防控畜禽细菌性腹泻，研制复方苦玄参口服液并对其进行质量控制，为后期临床试验奠定药理学基础。【方法】 基于前期试验基础，评价联合使用0.25%苯甲酸和0.075%山梨酸作为防腐剂的适用性，筛选0.025%～0.100%亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和抗坏血酸中适宜的抗氧化剂；建立处方中苦玄参、救必应、桃金娘根、南刘寄奴四味药材的薄层色谱(TLC)鉴别分析方法和君药苦玄参指标性成分苦玄参苷IA高效液相色谱(HPLC)含量测定分析方法，并参照《中华人民共和国兽药典》2020版口服液相关规定对口服液进行质量控制。【结果】 添加0.25%苯甲酸和0.075%山梨酸作为防腐剂，复方苦玄参口服液中大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉和白色念珠菌活菌数在第14和28天时均符合抑菌效力标准；与阴性样品相比，添加0.075%焦亚硫酸钠作为抗氧化剂10 d时苦玄参苷IA降解量由7%下降到1.38%，显著增强了复方苦玄参口服液的稳定性；TLC结果显示，复方苦玄参口服液中苦玄参、救必应、桃金娘根、南刘寄奴与对照品或对照药材在相应位置上显示相同颜色的荧光斑点，表明建立的TLC方法专属性良好；HPLC结果显示，苦玄参有效成分苦玄参苷IA在14.063～450 μg/mL(R²=0.9996)范围内线性关系良好，精密度试验、重复性试验、稳定性试验结果相对标准偏差(RSD)分别为1.02%、0.44%和0.60%；苦玄参苷IA平均加样回收率为98.50%，RSD(n=6)为0.56%，表明所建立的复方苦玄参口服液HPLC方法专属性、精密度、重复性、稳定性等均符合方法学要求。测得3批复方苦玄参口服液中苦玄参苷IA的含量平均值依次为214.97、213.85、214.82 μg/mL，RSD为0.38%。其他质控指标,如外观性状呈黄褐色，相对密度为1.039～1.055 g/mL、RSD为0.88%，pH为5.50～5.66、RSD为0.72%，微生物限度等均符合《中华人民共和国兽药典》2020版口服液相关规定。【结论】 本研究制备的复方苦玄参口服液工艺简单，质量控制方法准确、可靠，可用于后续中试生产与质量控制。

【目的】 预测并分析牛源肺炎克雷伯菌携带的前噬菌体以及其携带内溶素基因的情况，探究肺炎克雷伯菌前噬菌体内溶素的体外抗菌活性，为肺炎克雷伯菌感染提供新的治疗手段。【方法】 以134株牛源肺炎克雷伯菌为研究对象，通过PhiSpy软件预测牛源肺炎克雷伯菌前噬菌体，并对前噬菌体进行功能注释鉴定得到内溶素。通过构建内溶素原核表达载体，对重组蛋白进行诱导表达与纯化，并验证其在体外对肺炎克雷伯菌NMG10、GS4和ATCC 13883的裂解活性。【结果】 134株牛源肺炎克雷伯菌基因组的前噬菌体序列携带率为98.5%，共预测到414个前噬菌体序列，其中肺炎克雷伯菌噬菌体共112个，其余均为其他细菌的噬菌体或者噬菌体元件。每株牛源肺炎克雷伯菌所携带的全部前噬菌体占其基因组比例约为1.4%。112个肺炎克雷伯菌噬菌体的前噬菌中共有44个前噬菌体基因组中存在编码内溶素的基因，将其命名为LyKb。内溶素LyKb对肺炎克雷伯菌NMG10、GS4和ATCC 13883均具有裂解和抑菌活性，其中对肺炎克雷伯菌NMG10的裂解及抑菌活性最强，其次是肺炎克雷伯菌GS4、ATCC 13883。【结论】 134株牛源肺炎克雷伯菌普遍携带前噬菌体，且部分前噬菌体基因组中含有编码内溶素的基因。肺炎克雷伯菌前噬菌体内溶素对多种肺炎克雷伯菌具有抗菌活性。

【目的】 评价苍朴乌梅散对脂多糖(LPS)致腹泻小鼠的保护作用，为苍朴乌梅散防护肠炎腹泻提供理论依据。【方法】 将60只ICR小鼠随机分为6组，每组10只，雌雄各半。空白对照组和LPS模型组小鼠按照20 mL/kg灌胃纯化水；盐酸小檗碱组按照20 mL/kg灌胃5 mg/mL盐酸小檗碱溶液；苍朴乌梅低、中、高剂量组按照20 mL/kg分别灌胃0.8、1.6、3.2 g/kg苍朴乌梅散混悬液(终浓度分别为40、80和160 mg/mL)，连续7 d给药后，除空白对照组外，其余各组小鼠末次给药空腹24 h后，按照20 mL/kg剂量腹腔注射0.5 mg/mL LPS溶液，诱导小鼠腹泻，观察并记录2 h内小鼠排便情况，统计腹泻起始时间、腹泻率和腹泻指数；统计小鼠初始体重、造模前体重及终末体重；2 h后采集小鼠血液并进行血常规检测，采集回肠、盲肠和结肠组织进行病理切片观察。【结果】 LPS模型组雄性、雌性小鼠的腹泻起始时间分别为8、6 min，而苍朴乌梅散低、中、高剂量组雄性小鼠的腹泻起始时间分别为23、29和41 min，雌性小鼠的腹泻起始时间分别为22、27和29 min。与LPS模型组相比，苍朴乌梅散中、高剂量组雌雄小鼠腹泻率、腹泻指数均显著降低(P＜0.05)。苍朴乌梅散低、中、高剂量组雌雄小鼠的白细胞数、淋巴细胞数与盐酸小檗碱组相比无显著差异(P＞0.05)。苍朴乌梅散中、高剂量组雌雄小鼠的腹泻指数和体重增长率与空白对照组相比无显著差异(P＞0.05)。组织病理学观察结果显示，LPS模型组雌雄小鼠回肠、盲肠和结肠炎性细胞浸润较为严重，绒毛变短；苍朴乌梅散低剂量组雌雄小鼠出现少量炎性细胞浸润；盐酸小檗碱组及苍朴乌梅散中、高剂量组雌雄小鼠的肠道绒毛、杯状细胞未见明显变化。【结论】 小鼠灌胃苍朴乌梅散可以延长腹泻起始时间，降低稀便率和腹泻指数，缓解LPS诱导的肠炎腹泻，本试验条件下推荐苍朴乌梅散剂量为1.6 g/kg。

【目的】 通过葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium，DSS)或脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激构建小鼠炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)模型，为IBD研究提供高效经济的模型参考，并为IBD抗炎药物筛选与药效评价提供可靠的方法支撑。【方法】 本试验以C57BL/6雄性小鼠为研究对象，分别暴露于不同浓度的DSS(3%、4%和5%)7 d或LPS(5、10和20 mg/kg)4 h。通过测量小鼠结肠长度，HE染色观察肠道形态结构及实时荧光定量PCR检测肠道炎性因子的mRNA表达等对模型进行评价。【结果】 DSS诱导小鼠结肠变短、病理出血、腺体萎缩、结构排列絮乱、炎性细胞浸润以及结肠中炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α，TNF-α)的mRNA表达显著上升(P＜0.05)，4% DSS即可高效建立IBD模型。同时，LPS引起小鼠肠系膜出血、肠道肿胀和充血，肠绒毛高度降低，隐窝深度升高，小肠中IL-10和IL-1β mRNA水平升高、IL-6 mRNA水平下降，十二指肠和回肠TNF-α mRNA水平上升，空肠TNF-α mRNA水平降低，且以5 mg/kg LPS综合影响最为显著。【结论】 4% DSS和5 mg/kg LPS是C57BL/6小鼠IBD模型建立的最适浓度，肠道病理形态改变、肠道炎性细胞浸润及炎性因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的mRNA表达异常是评价IBD模型的重要指标。

【目的】 评估板青颗粒对猪的安全性，为临床合理用药提供参考依据。【方法】 选择32头110日龄左右健康猪，随机分为4组，板青颗粒1倍(100 mg/kg BW)、3倍(300 mg/kg BW)、5倍(500 mg/kg BW)剂量组和空白对照组，每组8头。试验组饮水给药14 d，停药后继续观察10 d；空白对照组正常饲养，不给药。每天上午、下午逐头观察并记录试验猪的临床表现，在给药前(试验第0天，D0)、给药结束(试验第15天，D15)、观察结束(试验第25天，D25)称重，并在空腹称重后采血，检测血液常规指标和生化指标。分别在给药结束和观察结束时对5倍剂量组和空白对照组猪进行组织病理学检查。【结果】 试验期间各剂量组试验猪精神状态、食欲、二便均表现正常，生长性能指标差异均不显著(P＞0.05)；血液常规指标检测结果显示，试验猪红细胞数量、血红蛋白含量两个指标均随着给药剂量的增加而升高，但均在正常范围内波动，其余个别指标虽具有显著差异但不具有剂量相关性，且指标数值均在正常范围内。血液生化指标检测结果显示，试验猪血清总蛋白随着给药浓度的增加而升高，血糖含量随着给药浓度的升高而降低，但均在正常范围内波动，其余个别指标虽具有显著差异但不具有剂量相关性，且指标数值均在历史资料的参考范围内。组织病理学观察结果显示，5倍剂量组试验猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏各组织器官结构清晰，层次分明，发育正常，未发现与中药制剂作用有关的细胞变性、坏死及炎性细胞浸润等病理性变化，各组织与空白对照组相比均未见明显的差异。【结论】 板青颗粒5倍剂量(500 mg/kg BW)对猪用药安全。

【目的】 探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】 试验选取18胚龄SPF种蛋108枚，随机分为3组：Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 10^3.0 EID₅₀/0.1 mL的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV) TS09-C疫苗株)和BLF＋TS组(注射0.1 mL含2% BLF和10^3.0EID₅₀/0.1 mL的NDV TS09-C疫苗株的混合液)，每组36枚种蛋。试验期间，统计种蛋的孵化率和雏鸡的存活率，在雏鸡7、14、21、28日龄时，每组随机选取3只进行屠宰，采集脾脏、法氏囊、胸腺组织，统计免疫器官指数；采集雏鸡翅下静脉血液，测定血清抗体和细胞因子水平；在雏鸡28日龄时使用NDV强毒株F48E9进行攻毒保护试验，攻毒后每天观察试验雏鸡状态，记录体重变化情况，并于攻毒后第3天每组随机选取3只雏鸡进行屠宰，取十二指肠、肺脏和气管组织并检测雏鸡不同组织病毒载量。【结果】 鸡胚接种后，BLF＋TS组雏鸡孵化率为100%，存活率为97.22%。与TS组相比，21～28日龄时BLF＋TS组雏鸡的脾脏、法氏囊和胸腺指数以及血清中白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量均显著升高(P＜0.05)。攻毒试验结果显示，攻毒后BLF＋TS组雏鸡存活率为100%，攻毒后2～4 d BLF＋TS组雏鸡体重增长速度显著低于健康对照组(P＜0.05)；攻毒后3～7 d时BLF＋TS雏鸡体重增长速度显著高于TS组(P＜0.05)。BLF＋TS组雏鸡攻毒后呼吸道和消化道组织的病毒载量显著低于TS组(P＜0.05)。【结论】 BLF作为免疫佐剂可安全进行鸡胚接种，而且能够帮助雏鸡建立早期免疫保护，进一步提高ND疫苗免疫效果，研究结果为开发高效鸡胚免疫疫苗佐剂提供借鉴和参考。

【目的】 探究奶牛场粪污厌氧发酵生产垫料工艺过程中菌群的变化，为奶牛场牛粪垫料标准化生产和合理安全使用提供理论参考。【方法】 采集4个规模化奶牛场中粪污厌氧发酵前牛粪、厌氧发酵固液分离后的牛粪及牛卧床上的牛粪垫料，提取菌体DNA进行16S rRNA高通量测序，对于不同阶段的微生物多样性、菌群组成及显著差异的特征菌群进行分析。【结果】 与发酵前牛粪相比，经过厌氧发酵固液分离后的牛粪中菌群多样性和丰富度均降低，但与牛粪垫料菌群多样性和丰度相似。发酵前牛粪中丰度最高的菌门和菌属分别为厚壁菌门(Firmicutes，55.15%)和瘤胃菌科UCG-005菌属(UCG-005，16.68%)，厌氧发酵固液分离后牛粪中丰度最高的菌门和菌属分别为厚壁菌门(48.12%)和芽孢杆菌属(Bacillus，12.16%)，牛粪垫料中丰度最高的菌门和菌属分别为放线菌门(Actinobacteriota，37.02%)和谷氨酸杆菌(Glutamicibacter，11.65%)。通过LEfSe分析发现，发酵前牛粪、厌氧发酵固液分离后牛粪及垫料3组间存在显著差异的菌属共有14种。【结论】 通过对奶牛场厌氧发酵牛粪生产垫料过程中菌群组成的研究，发现优势菌门和菌属均发生了较大改变，发酵处理后菌群多样性和丰富度均降低，该种生产工艺完全满足奶牛场对牛粪垫料安全性的需要。