【目的】 挖掘与绵羊布鲁氏菌病抗性或易感性相关的基因，以期为绵羊布鲁氏菌病抗病育种提供分子标记。【方法】 以自然感染布鲁氏菌病并且未注射疫苗的绵羊为研究对象，采集50只绵羊的血液样本进行竞争酶联免疫吸附试验(competitive enzyme-linked immunosorbent assay，cELISA)。对绵羊血液DNA进行全基因组重测序，以cELISA结果为数量性状表型，利用GEMMA软件进行全基因组关联分析。使用clusterProfiler软件包对显著基因进行功能富集分析。【结果】 全基因组关联分析筛选到Top 1 000的位点共注释到56个基因，GO功能富集结果显示，注释基因主要富集在β选择和αβ T细胞增殖和分化等条目；KEGG通路富集分析结果显示，注释基因主要富集在Th1/Th2/Th17细胞分化和自然杀伤细胞介导的细胞毒性等通路，主要涉及γ-干扰素受体1(interferon gamma receptor 1，IFNGR1)、活化T细胞核因子2(nuclear factor of activated T cells 2，NFATC2)、NF-κB抑制因子β(NF-κB inhibitor beta，NFKBIB)、脾酪氨酸激酶(spleen associated tyrosine kinase，SYK)、转化生长因子β受体2(transforming growth factor beta receptor 2，TGFBR2)和T细胞受体相关蛋白激酶70的Zeta链(Zeta chain of T cell receptor associated protein kinase 70，ZAP70)共6个基因，筛选到的条目、通路和基因与布鲁氏菌的感染或宿主的抗感染密切相关。【结论】 本研究筛选到6个与绵羊布鲁氏菌病相关的基因，为进一步细胞或个体水平的功能验证奠定了基础，为绵羊布鲁氏菌病抗病育种分子标记提供了参考。

【目的】 构建鸡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(chCaspase 3)基因表达载体，鉴定表达蛋白酶活性，并进行生物信息学分析，为后续研究chCaspase 3功能奠定基础。【方法】 以鸡法氏囊组织cDNA为模板，通过PCR扩增chCaspase 3基因，构建chCaspase 3基因的原核和真核表达载体。将原核表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导表达重组蛋白后利用Western blotting分析chCaspase 3原核表达产物。将真核表达载体以不同剂量(0、0.5、1.0、1.5、2.0 μg)转染DF-1细胞进行表达，利用Western blotting和间接免疫荧光技术(IFA)分析chCaspase 3真核表达产物。用Caspase 3活性检测试剂盒分别检测原核和真核表达蛋白的酶活性；利用生物信息学软件分析chCaspase 3的相似性，并预测chCaspase 3蛋白的结构域和三级结构。【结果】 chCaspase 3基因CDS区长852 bp,编码283个氨基酸。本研究成功构建了原核pET28a(+)-chCaspase 3和真核p3×Flag-CMV7.1-chCaspase 3重组质粒，原核表达产物分子质量为36 ku，与预期相符；真核表达产物表达量随转染的真核表达载体量的增加而增加。原核和真核表达产物均具有Caspase 3酶活性。生物信息学分析发现，chCaspase 3与其他物种相似性较低，且亲缘关系较远，chCaspase 3蛋白含有Caspase家族的保守五肽QACRG和经典的CASc结构域，其三维结构与人Caspase 3(hCaspase 3)十分吻合。【结论】 试验成功克隆并表达了chCaspase 3基因，重组蛋白具有Caspase 3酶活性，生物信息学预测chCaspase 3蛋白与hCaspase 3蛋白有相似的三维结构，为揭示chCaspase 3蛋白的功能及探索其抗病毒天然免疫机制奠定了基础。

【目的】 探究miR-141在动物机体糖脂代谢和骨代谢中的调控机制，为糖尿病合并骨质疏松症动物模型构建及相关基因表达调控机制研究提供依据。【方法】 利用miRbase数据库获取不同物种miR-141成熟序列，通过BioEdit及WebLogo软件进行序列比对及保守性分析；利用PROMO及JASPAR在线软件对山羊miR-141启动子区转录因子结合位点进行预测；利用TargetScan和miRwalk数据平台对miR-141靶基因进行预测；利用DAVID和KOBAS在线软件对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析；利用Networkanalyst数据库建立miRNA靶基因蛋白互作网络并绘制网络调控图；通过YM500V2在线数据库分析miR-141在山羊不同组织中的表达情况。【结果】 miR-141成熟序列在不同物种间高度保守；山羊miR-141启动子区分布有转录因子C/EBPα、MyoD、YY1和Sp1等结合位点；选用不同数据库预测到Nfatc2、Egr2和Fasl等89个靶基因。GO功能富集分析发现，靶基因主要富集在RNA聚合酶Ⅱ启动子转录调控与转录DNA模板等生物过程、细胞核与细胞质等细胞组分、蛋白结合与DNA结合等分子功能。KEGG通路富集显示，靶基因主要富集在肌动蛋白细胞骨架的调节、细胞紧密连接、轴突引导、Hedgehog信号通路、cGMP-PKG信号通路与癌症中的microRNA等。miR-141靶基因蛋白互作分析显示，Nfatc2和Egr2基因由Fasl基因连接，构成与其他蛋白相对复杂的靶向关系，这些关键基因参与了与机体糖脂代谢及骨代谢相关的TGF-β、Hedgehog及Wnt/β-catenin等多条信号通路。miR-141在山羊多种组织中均有表达，其表达水平具有组织差异性。【结论】 miR-141可通过靶向Nfatc2、Egr2和Fasl基因参与调节Hedgehog及Wnt/β-catenin等多条信号通路，并进一步调控山羊糖脂代谢、肌肉骨骼系统生理生化反应。

【目的】 研究氧化应激反应激酶1(oxidative stress-responsive 1，OXSR1)在犬肾细胞(Madin-Darby canine kidney cell，MDCK)凋亡中的作用，为深入理解MDCK凋亡通路及研究以OXSR1基因为靶向的MDCK凋亡的干预疗法提供参考。【方法】 利用CRISPR/Cas9技术在MDCK-Cas9细胞上构建OXSR1基因敲除细胞系，在OXSR1基因敲除细胞中转入OXSR1基因回补与失活质粒以构建OXSR1基因回补与失活细胞系。以刺激剂MMC、JNJ-26854165、Rotenone分别刺激野生型细胞与OXSR1基因敲除、回补、失活细胞，通过流式细胞术检测激活的p53依赖和非依赖途径、ROS信号通路介导的细胞凋亡，并通过实时荧光定量PCR检测相关凋亡基因的表达情况。【结果】 靶序列出现明显的Indel特征，证实OXSR1基因敲除细胞系构建成功。Western blotting检测显示，OXSR1基因回补与失活细胞系构建成功。流式细胞术发现，刺激剂MMC、JNJ-26854165、Rotenone均能诱导细胞发生不同程度的凋亡，其中在MMC和Rotenone刺激下，OXSR1基因敲除细胞凋亡率极显著或显著低于野生型细胞和OXSR1基因回补细胞(P＜0.01；P＜0.05)，与OXSR1基因失活细胞无显著差别(P＞0.05)；在JNJ-26854165刺激下，OXSR1基因敲除细胞凋亡率极显著或显著低于野生型细胞、OXSR1基因回补和失活细胞(P＜0.01；P＜0.05)。实时荧光定量PCR检测发现，当MMC和Rotenone刺激细胞时，OXSR1基因敲除细胞的BCL-XL基因表达量极显著或显著高于野生型细胞和OXSR1基因回补细胞(P＜0.01；P＜0.05)，与OXSR1基因失活细胞无明显差别(P＞0.05)；当JNJ-26854165刺激细胞时，OXSR1基因敲除细胞的BCL-XL基因表达量极显著高于野生型细胞、OXSR1基因回补与失活细胞(P＜0.01)，NOXA基因表达量极显著低于野生型细胞、OXSR1基因回补与失活细胞(P＜0.01)。【结论】 OXSR1基因及其激酶活性可调节MMC、JNJ-26854165、Rotenone刺激MDCK时BCL-XL基因转录，影响p53依赖和非依赖途径以及ROS途径介导的细胞凋亡。

【目的】 研究草质素对RAS-选择性致死小分子3(RSL-3)诱导的RAW264.7巨噬细胞铁死亡效应的抑制作用，探究草质素对巨噬细胞铁死亡的影响。【方法】 利用0、5、10、20、40、80 μmol/L草质素处理RAW264.7巨噬细胞48 h后，用CCK-8法检测细胞活力。将RAW264.7巨噬细胞分为对照组(Control)、RSL-3(15 μmol/L)组、草质素(20、40、80 μmol/L)组、铁死亡抑制剂铁抑素-1(10 μmol/L Fer-1)组，草质素组和Fer-1组分别与RSL-3共孵育48 h，通过乳酸脱氢酶(LDH)试验检测各组细胞损伤效应，利用比色法检测各组细胞裂解液中铁离子、谷胱甘肽及丙二醛(MDA)含量。利用荧光探针法检测各组细胞胞浆内Fe²⁺荧光强度、线粒体膜电位(MMP)和脂质活性氧(ROS)水平。采用Western blotting检测各组细胞裂解液核因子红细胞系2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-4)的表达量。【结果】 与0 μmol/L草质素组相比，40 μmol/L草质素可显著增强巨噬细胞活力(P＜0.05)；与40 μmol/L草质素组相比，80 μmol/L草质素组细胞活力显著降低(P＜0.05)，故5～40 μmol/L为药物安全浓度。与对照组相比，RSL-3组细胞内LDH活性、总铁离子浓度、Fe²⁺浓度、Fe³⁺浓度、Fe²⁺平均荧光强度、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量、GSSG占总谷胱甘肽的百分比及MDA水平均显著升高(P＜0.05)；细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量、总谷胱甘肽含量、GSH占总谷胱甘肽的百分比、MMP相对百分比及脂质ROS荧光比值均显著降低(P＜0.05)，提示出现铁死亡效应。与RSL-3组相比，40 μmol/L草质素组细胞内LDH活性、总铁离子浓度、Fe²⁺浓度、Fe³⁺浓度、Fe²⁺平均荧光强度、GSSG含量、GSSG占总谷胱甘肽的百分比及MDA水平均显著降低(P＜0.05)；GSH含量、总谷胱甘肽含量、GSH占总谷胱甘肽的百分比、MMP相对百分比及脂质ROS荧光比值均显著升高(P＜0.05)。与Fer-1组相比，40 μmol/L草质素组的上述所有指标均无显著差异(P＞0.05)。Western blotting结果表明，与RSL-3组相比，40 μmol/L草质素显著升高了Nrf-2、HO-1和GPX-4的表达量(P＜0.05)；与Fer-1组相比，40 μmol/L草质素组的上述指标均无显著差异(P＞0.05)。【结论】 草质素通过调控RSL-3诱导的RAW264.7巨噬细胞铁死亡相关分子指标，升高了GPX-4的表达水平，并激活其Nrf-2/HO-1通路发挥抑制RAW264.7巨噬细胞的铁死亡效应。本研究通过离体试验初步揭示了40 μmol/L草质素可显著改善巨噬细胞铁死亡损伤效应及其机制。

【目的】 研究单宁酸(TA)对氟化钠(NaF)诱导小鼠卵母细胞氧化应激损伤的保护作用，从而为开发氟中毒解毒剂提供理论依据。【方法】 在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中添加0(对照)、0.25、0.50、0.75 mmol/L NaF，通过检测卵母细胞第一极体排出率，确定NaF最适作用浓度。以最佳作用浓度NaF处理小鼠卵母细胞后，通过添加不同浓度TA(0、1、10、100 μg/L)，确定最佳TA作用浓度。在上述试验基础上设置对照组、毒性组(NaF)和解毒剂组(NaF＋TA)，利用免疫荧光染色检测小鼠卵母细胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)以及线粒体膜电位(MMP)水平；统计各组小鼠卵母细胞受精率、卵裂率和囊胚率，测定丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。【结果】 与对照组相比，0.25～0.75 mmol/L NaF组卵母细胞第一极体排出率均极显著降低(P＜0.01)，后续以0.25 mmol/L NaF作为有效毒性剂量进行试验。小鼠卵母细胞经NaF处理后，与0 μg/L TA组相比，10 μg/L TA组卵母细胞第一极体排出率极显著升高(P＜0.01)。免疫荧光检测结果显示，与对照组相比，NaF组小鼠卵母细胞ROS水平显著上升(P＜0.05)，GSH、MMP水平和SOD、GSH-Px活性显著或极显著下降(P＜0.05；P＜0.01)。与NaF组相比，NaF＋TA组小鼠卵母细胞GSH、MMP水平以及SOD和GSH-Px活性显著或极显著升高(P＜0.05；P＜0.01)，ROS水平和MDA含量显著或极显著降低(P＜0.05；P＜0.01)。早期胚胎发育统计结果显示，NaF组小鼠卵母细胞的受精率、卵裂率和囊胚率均极显著低于对照组(P＜0.01)；NaF+TA组小鼠卵母细胞受精率、卵裂率以及囊胚率均极显著高于NaF组(P＜0.01)，且与对照组相比无显著差异(P＞0.05)。【结论】 NaF通过提高卵母细胞内ROS和MDA水平诱导小鼠卵母细胞产生氧化应激，并降低细胞MMP水平，影响早期胚胎发育。添加10 μg/L TA可以缓解NaF诱导小鼠引起的氧化应激，提高小鼠卵母细胞成熟质量，从而促进体外受精和胚胎发育潜力。

【目的】 探究复合型营养添加剂(immunomodulatory and nutritional combined additive，INC)对围产期奶牛瘤胃微生物区系及其代谢的影响，以期改善奶牛围产期瘤胃健康并提高产奶量，为新型添加剂的使用与推广提供技术支撑。【方法】 以14头围产期奶牛作为试验对象，依据上一胎次产奶量和体况随机分为对照组(CON)和试验组(TR)，每组7头，试验期42 d。CON组奶牛饲喂基础饲粮，TR组每头奶牛在对照组基础上添加60 g/d INC。分别于产后7、14、21 d采集奶样测定乳成分，并记录日产奶量；产后21 d晨饲后使用瘤胃导管采集所有奶牛的瘤胃液，进行16S rRNA测序和代谢组学分析。【结果】 ①产后奶牛乳蛋白率、乳脂率、乳糖率两组间均无显著差异(P＞0.05)，但TR组奶牛产后第1周产奶量极显著高于CON组(P＜0.01)。②在门水平上，两组奶牛瘤胃中的优势菌门均为厚壁菌门和拟杆菌门；在属水平上，优势菌属均为普雷沃菌属和琥珀酸菌属。③两组中共检测到19个差异菌属(线性判别分析(LDA)值≥2，P＜0.05)，其中理研菌科RC9肠道菌属(Rikenellaceae-RC9-gut-group)等4个菌属在CON组中显著富集(P＜0.05)，瘤胃球菌属(Ruminococcus)等15个菌属在TR组中显著富集(P＜0.05)。④代谢组学结果表示，TR组中L-犬尿氨酸(L-formylkynurenine)、吲哚-3-乙酸乙酯(1H-indole-3-acetic acid)及3-甲基吲哚(3-methylindole)的相对浓度均明显提高。⑤相关性分析结果显示，在TR组中毛螺旋菌科UCG_010属(Lachnospiraceae_UCG_010)与L-犬尿氨酸、吲哚-3-乙酸乙酯及3-甲基吲哚等代谢物呈显著正相关(P＜0.05)，且毛螺旋菌科UCG_010属与色氨酸代谢途径、亚麻酸代谢途径呈显著正相关(P＜0.05)，同时与产后第1周产奶量呈显著正相关(P＜0.05)。【结论】 饲粮中添加INC可以提高围产期奶牛瘤胃内相关营养物质分解菌的丰度，通过调控瘤胃微生物的菌群结构及其代谢来改善奶牛健康和瘤胃发酵，并最终提高奶牛产奶量。

【目的】 探究葡萄籽原花青素(GSPs)对高精料绵羊结肠上皮屏障的影响及通过Nrf2/ARE通路保护结肠上皮损伤的作用机制。【方法】 选取48只120日龄、体重(22.75 kg±1.20 kg)相近的杜寒F1代杂交公羔羊，随机分为4组，每组12只羊。各组试验羔羊基础饲粮中GSPs的添加量分别为0(对照组，CON)、10(10GSPs组)、20(20GSPs组)、40(40GSPs组)mg/kg BW。试验期60 d，其中预试期15 d，正试期45 d。正试期结束次日早晨每组屠宰6只羊，采集结肠组织进行形态学和炎性细胞浸润分析，检测结肠组织白细胞介素2(IL-2)、IL-4、前列腺素E₂(PGE₂)等炎症因子水平及核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)等相关基因和蛋白表达量。【结果】 ①对照组羔羊结肠黏膜上皮细胞严重缺失，固有层裸露，肠腺排列疏松，间隙增宽，紧密连接蛋白缺失、受损，而20GSPs和40GSPs组羔羊结肠形态结构和紧密连接蛋白分布表达正常；②随着GSPs添加量的升高，羔羊结肠组织髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)酶活性及一氧化氮(NO)、PGE2、IL-2水平线性降低(P＜0.05)；③与对照组相比，20GSPs和40GSPs组羔羊结肠组织中Nrf2、OH-1基因和蛋白表达量均显著升高(P＜0.05)，40GSPs组结肠组织中GPx4基因表达量升高(P＜0.05)；④与对照组相比，20GSPs和40GSPs组羔羊结肠组织中Toll-样受体4(TLR4)基因和蛋白表达量均显著降低(P＜0.05)，40GSPs组结肠组织中核因子κB(NF-κB)P65基因和蛋白表达量均显著降低(P＜0.05)；20GSPs和40GSPs组羔羊结肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因和蛋白及IL-1β蛋白表达量均显著降低(P＜0.05)。【结论】 GSPs可以通过激活Nrf2通路，抑制NF-κB炎症信号通路活化，降低结肠组织局部炎症，缓解饲喂高精料绵羊结肠上皮组织损伤。

【目的】 探讨饲粮中添加不同水平辣椒素(capsaicin，CAP)对产蛋后期长顺绿壳蛋鸡产蛋性能、蛋品质、卵泡发育及生殖激素水平的影响，并估算CAP在产蛋后期蛋鸡饲粮中适宜的添加剂量。【方法】 选取56周龄开产日龄相近且健康状况良好的长顺绿壳蛋鸡500只，随机分为5个处理组，每个处理10个重复，每个重复10只鸡。其中，试验Ⅰ组鸡饲喂基础饲粮(0 mg/kg CAP)，试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ组鸡分别饲喂在基础饲粮基础上添加100、150、200及400 mg/kg CAP的饲粮。试验期8周。试验结束后，统计蛋鸡产蛋性能和蛋品质；采集血液及卵巢组织，测定生殖器官发育指标及血清中生殖激素含量。【结果】 与试验Ⅰ组相比，①试验Ⅱ～Ⅴ组蛋鸡试验期1~4、5~8及1~8周产蛋率及日产蛋重均显著升高，试验期1~4及1~8周蛋鸡的平均日采食量均显著升高(P＜0.05)。②试验期第4周试验Ⅱ～Ⅴ组鸡蛋的蛋黄颜色显著提升，但试验期第8周仅试验Ⅱ、Ⅲ组鸡蛋的蛋黄颜色显著提升(P＜0.05)；试验期第4、8周试验Ⅱ组鸡蛋的哈氏单位显著升高，而试验期第4周试验Ⅲ组鸡蛋的哈氏单位显著升高(P＜0.05)。③试验Ⅱ～Ⅴ组蛋鸡的卵巢、大黄卵泡及小黄卵泡的相对重均显著升高(P＜0.05)；试验Ⅱ～Ⅳ组蛋鸡的小黄卵泡数量及血清中促卵泡生成素、黄体生成素、孕酮及雌二醇含量均显著升高(P＜0.05)。【结论】 饲粮中添加CAP有利于提高产蛋后期长顺绿壳蛋鸡产蛋性能，改善蛋品质，促进蛋鸡卵泡发育，并增加生殖激素水平，且以242～281 mg/kg添加量较佳。

【目的】 本试验旨在研究红三叶草异黄酮在瘤胃内的稳定性及其代谢规律。【方法】 体内试验：选择3头安装有瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛，于晨饲前在瘤胃内投入2 g红三叶草提取物(异黄酮含量为22.91%)，分别在0、0.5、1、2、4、8、12、14 h采集瘤胃液，利用HPLC法分析异黄酮含量。体外瘤胃发酵试验：设置3个处理组，分别为添加0.1 g/120 mL(高剂量组)、0.01 g/120 mL(低剂量组)和不添加红三叶草提取物组(对照组)，每组均为5个重复，在39 ℃条件下发酵，分别在0、0.5、1、2、4、8、12、14 h采集瘤胃液，利用HPLC法分析异黄酮含量。【结果】 在体内试验中，刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A分别于14和8 h完成代谢。2 h后，瘤胃内出现代谢产物S-雌马酚。鹰嘴豆芽素A和刺芒柄花素的半衰期分别为1.02和2.25 h，大豆苷元和染料木素的半衰期分别为3.38和0.77 h。在体外试验中，高剂量组和低剂量组发酵液中4种异黄酮的半衰期均不同：高剂量组中，鹰嘴豆芽素A、刺芒柄花素、大豆苷元和染料木素的半衰期分别为2.45、0.70、12.62和5.74 h。低剂量组中，这4种异黄酮的半衰期分别为2.82、0.87、13.11和3.45 h。【结论】 红三叶草异黄酮在奶牛瘤胃中不稳定，会被微生物分解代谢，主要异黄酮刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A半衰期不超过4 h，推测这两种异黄酮代谢终产物分别为S-雌马酚和对乙基苯酚。

作为一种非常规蛋白质饲料，桑叶具有较高的营养和经济价值。桑叶适口性好，富含蛋白质、氨基酸、黄酮、生物碱、多酚、多糖等生物活性物质。近年来，随着桑资源的开发利用，桑叶及其提取物在畜牧领域应用的研究越来越深入。作为畜禽生产中的优质饲料来源，桑叶以干燥、青贮、发酵、活性物质提取等加工方式为主。不同的加工方式对桑叶中营养成分的组成和含量产生不同的影响。在畜禽饲粮中添加桑叶或其提取物，可以提高畜禽的免疫力、成活率、生产性能和抗氧化能力，改善肠道微生态，调节代谢等，从而提高畜禽产品品质，但其在不同动物、同一物种不同发育阶段的应用不尽相同。作者综述了桑叶的饲用价值、加工方式及其在畜禽生产中的应用，旨在为桑叶的合理开发利用提供依据，推动畜牧业高质量发展。

【目的】 探究不同胎次奶牛对25-羟基维生素D₃的机体反应，分析胎次对奶牛生产性能、产后疾病发生率及后代犊牛生长性能的影响，进而揭示围产期奶牛胎次对25-羟基维生素D₃营养效应的具体作用。【方法】 选择体况评分一致(3.25)、预产期前21 d的健康荷斯坦奶牛26头，按照胎次分配头胎组(胎次=1，n=11)和经产组(胎次≥2，n=15)。试验奶牛饲喂统一饲粮，每日补充3 mg/头25-羟基维生素D₃。试验期82 d(第22天为预计产犊日)。记录产犊后奶牛日乳产量，同时采集产犊后0、7、21 d的乳样，用于检测乳成分。于产犊前21、7 d(―21、―7 d)，分娩当天(0 d)，产犊后7、21 d采集饲料及母牛、后代犊牛血液样品，分别用于检测饲料常规营养成分、血液免疫及抗氧化指标，以及血液骨、胶原代谢相关指标，并检测0、60日龄犊牛的体重和体尺指标。【结果】 ①与头胎奶牛相比，经产奶牛产后7、21 d乳产量极显著或显著升高(P＜0.01；P＜0.05)，产后7 d非脂乳固体率显著降低(P＜0.05)。②经产奶牛较头胎奶牛血液中免疫球蛋白G(IgG)含量显著升高(P＜0.05)。与头胎奶牛相比，在产犊前21和7 d时经产奶牛血液中降钙素(CT)含量显著升高(P＜0.05)；在产犊7 d时，经产奶牛血液中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)含量极显著升高(P＜0.01)，经产奶牛血液中CT和IgM含量极显著降低(P＜0.01)，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量极显著升高(P＜0.01)；在产犊21 d时，经产奶牛血液IgM和TNF-α含量显著或极显著升高(P＜0.05；P＜0.01)。③经产奶牛后代犊牛60日龄时体高极显著高于头胎奶牛后代犊牛(P＜0.01)。【结论】 头胎和经产围产期奶牛对25-羟基维生素D₃的营养效应具有显著差异，围产期添加25-羟基维生素D₃可使头胎奶牛血液免疫能力提高；经产奶牛骨、胶原代谢能力增强，同时其后代犊牛60日龄时体高增加。

【目的】 研究饲粮添加不同水平沙葱粉对安格斯肉牛胴体特征及肉品质的影响，以期为沙葱粉在肉牛生产中的应用提供参考。【方法】 选取24头健康状况良好、月龄(14±2)、体重(271.17 kg±17.60 kg)相近的安格斯肉牛，随机分为4组，每组3个重复，每个重复2头牛。对照组饲喂基础饲粮(CON组)，试验组在基础饲粮基础上每头牛每天分别添加沙葱粉10(低水平组，LAMR)、15(中水平组，MAMR)和20 g(高水平组，HAMR)。试验持续135 d，其中预试期为15 d，正试期为120 d。试验结束后测定各试验牛的宰前活重，屠宰后测定胴体特征、高档肉和优质肉产量，采集胴体左侧胸段背最长肌用于测定肉品质相关指标。【结果】 与对照组相比，①LAMR组肉牛的宰前活重显著提高(P＜0.05)，HAMR组肉牛的肾脏指数显著降低(P＜0.05)；②LAMR和MAMR组肉牛背最长肌中粗灰分含量极显著提高(P＜0.01)，HAMR组背最长肌中的粗脂肪含量和LAMR组背最长肌中的粗蛋白质含量分别显著和极显著提高(P＜0.05和P＜0.01)；③随着沙葱粉添加水平的提高，优质肉中针扒的重量呈现线性下降(P＜0.05)，优质肉中大条的重量和优质肉占净肉重的比值呈现先降低再升高的趋势(0.05＜P＜0.10)；④LAMR、MAMR和HAMR组肉牛背最长肌肌纤维面积和肌纤维直径分别极显著和显著降低(P＜0.01和P＜0.05)；⑤LAMR、MAMR和HAMR组肉牛背最长肌剪切力极显著降低(P＜0.01)，LAMR组背最长肌蒸煮损失显著降低(P＜0.05)，LAMR和HAMR组背最长肌熟肉率显著提高(P＜0.05)。【结论】 饲粮添加10 g/d沙葱粉有利于安格斯肉牛肌肉蛋白质沉积，促进肌肉生长，增加终末体重；饲粮添加20 g/d沙葱粉有利于安格斯肉牛肌内脂肪的沉积，改善牛肉嫩度。

【目的】 探究饲粮维生素D₃(VD₃)添加水平对10～12月龄梅花鹿生长性能、营养物质表观消化率及血清生化指标的影响。【方法】 选取24头10月龄、平均体重为(45.32±5.23)kg的健康雄性梅花鹿，随机分成4组，每组6头，每个重复1头，分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照组)、2 000、4 000 和8 000 IU/kg VD₃的试验饲粮。试验期共90 d。试验结束后统计梅花鹿体重、采食量，计算生长性能；采集血液样本，测定血清谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、碱性磷酸酶水平及丙二醛、免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、甲状腺旁素、降钙素、1,25羟基维生素D₃、钙和磷含量。试验第75天起连续采集3 d粪便样本，测定干物质、粗蛋白质、粗脂肪、酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维、钙及磷含量。【结果】 ①与对照组相比，饲粮添加4 000 IU/kg VD₃显著提高了梅花鹿平均日增重(P＜0.05)，其他各组间平均日增重差异不显著(P＞0.05)。②4 000 IU/kg组梅花鹿Ca表观消化率显著高于对照组(P＜0.05)，其他各组间差异不显著(P＞0.05)。③3个试验组梅花鹿血清T-SOD水平均显著高于对照组(P＜0.05)，但其在3组间差异不显著(P＞0.05)；饲粮添加8 000 IU/kg VD₃显著提高了梅花鹿血清1,25羟基维生素D₃水平(P＜0.05)，其他各组间该指标差异不显著(P＞0.05)。【结论】 饲粮添加适量VD₃有利于提高梅花鹿生长性能和机体抗氧化能力，增加血清1,25羟基维生素D₃含量。综合试验结果，4 000 IU/kg VD₃在10～12月龄梅花鹿应用效果较好。

【目的】 试验旨在研究饲粮营养水平对多浪羊生长性能、体尺性状、屠宰性能、肉品质、血清生化指标及瘤胃发酵参数的影响，为多浪羊的科学饲养提供参考。【方法】 选择体重相近的3～4月龄多浪羊公羊18只，随机分为3组，每组6个重复，每个重复1只羊。饲粮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组羊分别饲喂精粗比为35∶65、50∶50和65∶35的全混合饲粮。试验期74 d，其中预试期14 d，正试期60 d。于第60天晨饲前对羊进行称重、测量体尺并颈静脉采血，屠宰后采集瘤胃内容物并测定屠宰性能和肉品质。【结果】 ①与饲粮Ⅰ相比，饲粮Ⅲ能够显著提高羊平均日增重和胸围(P＜0.05)。②与饲粮Ⅰ相比，饲粮Ⅱ能够显著提高羊屠宰率(P＜0.05)，饲粮Ⅲ能够极显著提高羊胴体重、屠宰率和肝脏重(P＜0.01)。③与饲粮Ⅱ相比，饲粮Ⅰ能够极显著或显著提高羊背最长肌a^*_{24 h}、pH_{24 h}及滴水损失率，以及羊股二头肌pH_{45 min}和pH_{24 h}(P＜0.01；P＜0.05)；饲粮Ⅲ能够极显著或显著提高羊背最长肌a^*_{24 h}和b^*_{24 h}(P＜0.01；P＜0.05)。与饲粮Ⅲ相比，饲粮Ⅰ能够极显著或显著提高羊股二头肌L^*_{24 h}和b^*_{45 min}(P＜0.01；P＜0.05)。④与饲粮Ⅱ相比，饲粮Ⅲ能够显著提高羊瘤胃中血清中尿素氮含量(P＜0.05)。⑤与饲粮Ⅰ相比，饲粮Ⅲ能够极显著或显著提高羊瘤胃中戊酸、乳酸、异丁酸和异戊酸含量(P＜0.01；P＜0.05)，显著降低乙丙比(P＜0.05)，饲粮Ⅱ和Ⅲ均能够显著提高羊瘤胃中氨态氮含量(P＜0.05)。【结论】 饲喂精粗比为65∶35饲粮可以提高多浪羊生长性能和屠宰性能，改善肉品质，促进肝脏发育，改变瘤胃发酵类型，增加总挥发性脂肪酸含量。

【目的】 试验旨在研究饲料中添加禽源性凝结芽孢杆菌BC-362对鸡白痢沙门菌(SP)感染蛋雏鸡生长性能、抗氧化能力和免疫功能的影响。【方法】 选取150只1日龄健康、体重相近的京红1号SPF蛋雏鸡，随机分为对照组(A组)、益生菌组(B组)、SP+益生菌组(C组)、SP+抗生素组(D组)、SP模型组(E组)，每组6个重复，每个重复5只雏鸡。A、D和E组蛋雏鸡饲喂基础饲粮，B和C组蛋雏鸡在基础饲粮中添加1.0×10⁸ CFU/g凝结芽孢杆菌，7日龄时，C、D和E组蛋雏鸡灌胃1.0×10⁹ CFU SP(0.5 mL)，A和B组蛋雏鸡灌胃同等剂量无菌水，D组蛋雏鸡灌胃后第2天开始，在基础饲粮中添加0.375 g/kg 硫酸新霉素。试验期共14 d。14日龄时测定蛋雏鸡生长性能；采集血液、免疫器官和空肠组织，测定血清抗氧化和免疫指标、免疫器官指数、空肠组织形态、CD3免疫组化表达、炎性和抗氧化相关基因转录水平。【结果】 ①与A组相比，B组蛋雏鸡平均日增重(ADG)显著增加、料重比(F/G)显著下降(P＜0.05)，E组蛋雏鸡平均日采食量(ADFI)和ADG均显著降低(P＜0.05)；与E组相比，C和D组蛋雏鸡ADFI和ADG均显著增加(P＜0.05)；C与D组蛋雏鸡ADFI、ADG和F/R均无显著差异(P＞0.05)。②与A组相比，B组蛋雏鸡血清超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著提高(P＜0.05)，E组蛋雏鸡血清SOD、CAT、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均显著下降(P＜0.05)，而丙二醛(MDA)含量显著上升(P＜0.05)；与E组相比，C和D组蛋雏鸡血清SOD活性和T-AOC均显著上升(P＜0.05)，MDA含量显著下降(P＜0.05)；C组蛋雏鸡血清中CAT和GSH-Px活性显著高于D组(P＜0.05)。③与A组相比，B组蛋雏鸡血清IgA和IgM含量均显著提高(P＜0.05)，E组蛋雏鸡血清IgA、IgM和IgG含量均显著降低(P＜0.05)；与E组相比，C和D组蛋雏鸡血清IgA、IgM和IgG含量均显著增加(P＜0.05)；C组蛋雏鸡血清IgM含量显著高于D组(P＜0.05)。④与A组相比，B组蛋雏鸡胸腺指数显著提高(P＜0.05)，E组蛋雏鸡免疫器官指数均显著降低(P＜0.05)；与E组相比，C和D组蛋雏鸡胸腺和法氏囊指数显著提高(P＜0.05)；C组蛋雏鸡脾脏指数显著高于D组(P＜0.05)。⑤与A组相比，B组蛋雏鸡空肠组织杯状细胞数量和CD3表达量无显著差异(P＞0.05)，E组蛋雏鸡空肠组织杯状细胞数量和CD3表达量均显著减少(P＜0.05)；与E组相比，C和D组蛋雏鸡空肠组织CD3表达量显著增加(P＜0.05)；C组蛋雏鸡空肠组织杯状细胞数量显著高于D组(P＜0.05)。⑥与A组相比，B组蛋雏鸡空肠组织炎性相关基因Toll样受体4(TLR4)、髓分化因子88(MYD88)、核因子κB(NF-κB)和白细胞介素-6(IL-6)相对表达量显著下调(P＜0.05)，抗氧化相关基因Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、谷胱甘肽过氧化酶1(GPX1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)相对表达量显著上调(P＜0.05)，E组蛋雏鸡空肠组织炎性相关基因TLR4、MYD88、IL-1β、NF-κB及IL-6相对表达量均显著上调(P＜0.05)，抗氧化相关基因NADH醌脱氢酶1(NQO1)、血红素氧合酶1(HO-1)、GCLC和核因子E2相关因子(Nrf2)相对表达量均显著下调(P＜0.05)；C和D组蛋雏鸡炎性相关基因TLR4、MYD88、IL-1β、NF-κB和IL-6相对表达量均显著低于E组(P＜0.05)，抗氧化相关基因NQO1和GCLC相对表达量显著高于E组(P＜0.05)；C组蛋雏鸡炎性相关基因TLR4、MYD88和IL-1β相对表达量显著低于D组(P＜0.05)，抗氧化相关基因Keap1和GCLC相对表达量显著高于D组(P＜0.05)。【结论】 饲粮中添加禽源性凝结芽孢杆菌BC-362可提高感染SP蛋雏鸡生长性能，增强机体抗氧化及免疫能力，从而减轻SP感染导致的蛋雏鸡肠道炎症反应。

【目的】 旨在比较分析不同生长期苦豆子全株、茎、叶和花的营养物质含量，确定苦豆子的最适宜收割时期，同时采用不同菌种对刈割苦豆子进行发酵处理，筛选适宜的发酵菌种。【方法】 采集不同生长期苦豆子全株、茎、叶和花样品，测定其中粗蛋白质(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和粗灰分(Ash)的含量；采用单因素完全随机试验设计，设对照组(CK组，不添加菌剂)、EM菌液组(E组，添加2 mg/kg EM菌液)、地衣芽孢杆菌组(D组，添加31.25 mg/kg地衣芽孢杆菌菌粉)、枯草芽孢杆菌组(K组，添加31.25 mg/kg枯草芽孢杆菌菌粉)和粪肠球菌组(F组，添加25 mg/kg粪肠球菌菌粉)进行发酵试验，每组4个重复。将调制好的发酵料置于37 ℃发酵96 h，评定发酵料感官品质，测定发酵料的营养成分含量。【结果】 未开花期和初花期苦豆子全株和茎中CP含量显著高于盛花期，全株ADF含量和叶中NDF含量显著低于盛花期(P＜0.05)，而未开花期与初花期间无显著差异(P＞0.05)。未开花期苦豆子全株中NDF含量显著低于初花期和盛花期(P＜0.05)，而初花期与盛花期间无显著差异(P＞0.05)。未开花期苦豆子茎中NDF含量显著低于盛花期(P＜0.05)，而初花期与未开花期、盛花期相比无显著差异(P＞0.05)。苦豆子茎中ADF含量的变化规律是盛花期＞未开花期＞初花期(P＜0.05)。初花期苦豆子花中CP含量显著高于盛花期，NDF和ADF含量显著低于盛花期(P＜0.05)。经地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌发酵后，苦豆子无丁酸臭味且具有芳香果味或面包香味，叶片结构良好，呈淡褐色，评分均为优良等级。苦豆子发酵料中CP含量呈现显著的变化规律：F＜CK＜E、D和K组(P＜0.05)，而E、D和K组间无显著差异(P＞0.05)。苦豆子发酵料中EE含量呈现显著的变化规律：F＜D＜CK组(P＜0.05)。苦豆子发酵料中NDF含量呈现显著的变化规律：D＜CK、E和K＜F组(P＜0.05)，而CK、E和K组间无显著差异(P＞0.05)。苦豆子发酵料中ADF含量呈现显著的变化规律：D、K和F＜CK和E组(P＜0.05)，而E和CK组相比无显著差异，D、F和K组之间无显著差异(P＞0.05)。各组间粗灰分含量差异均不显著(P＞0.05)。【结论】 不同生长期苦豆子的营养物质含量存在一定差异，未开花期和初花期苦豆子的营养价值更高，可选择在此时期进行刈割。不同菌种对初花期苦豆子的发酵效果存在较大差异，其中枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的发酵效果最好。

随着全球范围内对抗生素在畜牧业中使用的严格限制，寻求安全有效的替代物成为动物生产领域的重要课题。植物源性抗菌物质因其天然、安全、环保的特点而备受关注。其中，肉桂醛作为一种来自肉桂精油的活性成分，因其显著的生物学活性而在猪生产中显示出巨大的应用潜力。文章分析了肉桂醛的抗菌、抗炎、抗氧化和免疫调节活性，回顾了肉桂醛在猪生产中的应用研究进展，探讨其在促进生长性能、改善肠道健康、优化生长环境和防治疾病等方面的实践效果与作用机制。在生长性能方面，添加肉桂醛的饲料能够提高猪的平均日增重和饲料转化率，从而为生产者带来经济效益。在改善肠道健康方面，肉桂醛能够通过维持肠道微生态平衡和增强肠道屏障功能，降低腹泻等肠道疾病的发生。在优化生长环境方面，肉桂醛的使用减少了有害气体的排放，改善了养殖环境的质量。在防治疾病方面，肉桂醛的应用也展现出积极的作用。未来需要进一步研究肉桂醛的作用机制，以更好地理解和利用其在猪生产中的生物学功能，并且要积极开展更多的临床试验验证其在不同养殖环境和猪品种中的有效性及安全性。文章旨在为相关领域的研究人员和生产者提供有益的参考，并为肉桂醛在猪生产中的进一步研究和应用奠定坚实的基础。

【目的】 研究鞣花酸(ellagic acid，EA)对公猪精液常温保存过程中精子质量及抗氧化性能的影响，以期为鞣花酸在精液保存中的推广应用提供理论依据。【方法】 试验采集4头2～3岁健康的成年杜洛克公猪精液，将合格精液分为5份，用添加不同浓度EA(0(对照)、5、10、15、20 μg/mL)的BTS(Beltsville thawing solution)常温保存稀释液分别稀释，在保存的第1、3、5、7天检测精子活率、平均路径速度、侧摆幅度、鞭打频率、质膜完整率、顶体完整率及抗氧化能力等指标。【结果】 精液保存第1天，15 μg/mL EA组精子质膜完整率显著高于对照组(P＜0.05)，其他指标各试验组与对照组均无显著性差异(P＞0.05)。精液保存第3天，10、15 μg/mL EA组精子平均路径速度、过氧化氢酶(CAT)活性、总抗氧化能力(T-AOC)显著高于对照组(P＜0.05)。精液保存第5天，15、20 μg/mL EA组精子侧摆幅度显著低于对照组及5、10 μg/mL EA组(P＜0.05)，5、10、15 μg/mL EA组精子活率显著高于对照组(P＜0.05)，10、15、20 μg/mL EA组精液中CAT、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及T-AOC显著高于对照组(P＜0.05)。精液保存第7天，各试验组精子活率、平均路径速度、质膜完整率、顶体完整率、CAT活性、T-AOC均显著高于对照组(P＜0.05)。【结论】 添加EA于BTS稀释液中，对常温保存的精液具有良好的保护作用，其中10 μg/mL EA效果最好。

【目的】 筛选影响阳原驴产驹数的关键基因与相关通路，提高阳原驴繁殖性能。【方法】 以健康产双驹和产单驹阳原驴静脉全血为样本进行转录组高通量测序，与参考基因组非洲野驴(Equus asinus (ass))比对后筛选差异表达基因，并对差异表达基因进行GO功能及KEGG通路富集分析，筛选与阳原驴产驹数相关的基因。随机挑选5个差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证。【结果】 与产单驹组相比，产双驹组共筛选出1 336个差异表达基因，其中723个上调，613个下调。GO功能富集分析显示，差异表达基因主要在受体活性、信号转导等条目中富集；KEGG通路富集分析显示，卵巢胆固醇生成和雌激素信号通路在富集通路前20位，并筛选出IGF1、IGF1R、INSR和ADCY3共4个与阳原驴产驹数相关的候选基因。实时荧光定量PCR结果与转录组测序结果一致，证实转录组测序结果可靠。【结论】 不同产驹数阳原驴差异表达基因富集在卵巢类固醇生成和雌激素信号通路，IGF1、IGF1R、INSR和ADCY3基因参与卵巢激素分泌且均在产双驹组中表达上调。研究结果可为进一步阐明阳原驴不同产驹数的分子机制提供参考。

精子发生是在哺乳动物睾丸内通过一系列细胞分化和发育，最终形成精子的过程，在时间和空间上具有高度异质性。随着生物信息学的不断更新与发展，以往研究大多依赖于对各种细胞类型的RNA进行分析。然而，从睾丸中分离每一种细胞类型是非常大的挑战，因此在转录组水平上对于不同类型的睾丸生殖细胞的研究相对较少。近年来，由于科技的进步和发展，单细胞转录组测序 (scRNA-Seq)技术已推出多种测序平台，其使用范围和场景不断扩大，在神经、肿瘤、免疫、生长发育和疾病等领域广泛应用，研究对象主要涉及人、模式生物及家畜。该技术可高效捕获睾丸内单个细胞，进行高通量测序分析，获取其转录组水平信息，精细描述其细胞类型，揭示细胞异质性，并推测其发育轨迹。目前，scRNA-Seq已经开始从家畜生殖细胞的角度对家畜精子发生相关机制进行更深入的探究，以此进一步研究家畜精子发生的相关过程。因此，作者在阐述scRNA-Seq技术方法的基础上，总结论述了其在牛、羊和猪等家畜精子发生领域中的应用进展，为家畜精子发生的研究提供理论基础。

低温保存是生产中普遍使用的保存动物精液的有效方法，动物精液在低温保存过程中会因氧化应激导致精子组成结构、代谢途径、生理功能和活力改变，进而影响其精子质量和受精率。褪黑素在生产中广泛应用于动物精液的低温保存中，表现出极强的抗氧化特性，能够清除氧化应激产生的自由基，提高冷冻保存后精子的活力和受精率。褪黑素保护精子的作用机制可能是通过提高精液中抗氧化酶系谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性，减少精液脂质氧化及氧化产物产生；改善线粒体的氧化磷酸化、电子传递链及三羧酸循环和ATP产生；改善精子质膜、顶体膜、线粒体膜、DNA结构的完整性，增强抗凋亡作用和抑制凋亡蛋白、凋亡基因表达等途径发挥作用。作者综述了褪黑素的抗氧化性能、抗氧化酶活性、抗氧化酶基因表达、信号通路及对精子质膜、DNA、线粒体等结构和功能的影响及其相关分子机制，以期为褪黑素在精液保存中的应用提供理论参考。

【目的】 建立鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale，ORT)血清抗体的ELISA检测方法。【方法】 利用原核表达方法克隆表达鼻气管鸟杆菌外膜蛋白OR02，经Western blotting鉴定其免疫原性。以纯化产物作为抗原包被于固相载体，采用棋盘滴定法确定抗原包被浓度和血清稀释度。同时，优化ELISA反应条件，利用鼻气管鸟杆菌阴性血清确定该检测方法的阴阳临界值判定标准。通过检测其他病原阳性血清评估该方法的特异性，检测不同比例稀释的鼻气管鸟杆菌阳性血清以评估其灵敏性，并与商品化试剂盒进行比较，评估该ELISA方法的符合率。【结果】 重组蛋白OR02以包涵体形式表达，分子质量约为58 ku，与预期相符。Western blotting显示，OR02重组蛋白能与鼻气管鸟杆菌阳性血清发生特异性结合，具有良好的免疫反应性。以纯化的OR02蛋白作为包被抗原，确定最佳抗原包被浓度为2 ng/μL，血清样本的稀释度为1∶50，孵育时间为30 min，酶标二抗的稀释度为1∶5 000，孵育时间为30 min，最佳底物显色条件为在避光条件下孵育15 min。阴阳临界值的判定标准为：当待检血清D_{450 nm}值≥0.266时判定为阳性，当待检血清D_{450 nm}值＜0.266时判定为阴性。用该方法检测副鸡禽杆菌(Apg)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)等单因子阳性鸡血清均无交叉反应。将抗体滴度为1∶64的鼻气管鸟杆菌阳性鸡血清以1∶800稀释仍能检测到阳性结果。与商业试剂盒对相同临床样本的检测结果的符合率为91.25%。【结论】 本研究利用重组OR02蛋白建立了一种检测鼻气管鸟杆菌血清抗体的间接ELISA方法，该方法具有良好的特异性和灵敏性，且与商业试剂盒的符合率较高，可作为鸡血清鼻气管鸟杆菌抗体的检测工具。

【目的】 建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus，BEFV)的免疫胶体金检测方法，为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。【方法】 构建原核表达载体pET32a-BEFV-G，将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达，对诱导成功后的表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western blotting鉴定。以纯化后的蛋白作为特异性抗原包被检测线，以链球菌G蛋白作为金标抗原，与金纳米颗粒结合后标记在金标垫上，用羊抗鼠IgG作为质控线，通过优化不同的反应条件，建立检测BEFV的免疫胶体金检测方法，并对试纸条进行敏感性、特异性和重复性检测。【结果】 SDS-PAGE结果显示，在IPTG终浓度为0.75 mmol/L时，37 ℃诱导8 h的条件下重组BEFV G蛋白表达量最大，且以包涵体形式表达，分子质量约为46 ku。Western blotting结果显示，浓缩纯化后的重组BEFV G蛋白具有较好的反应原性，可作为包被抗原用于免疫胶体金试纸条的建立。在质控线包被的抗体羊抗鼠IgG浓度为2 mg/mL，BEFV G蛋白包被浓度为0.6 mg/mL，喷金量为2.5 μL/cm的条件下，3～5 min就可完成检测。制备的试纸条有较高的敏感性和特异性，血清稀释倍数为40倍的时候显色接近消线，且试纸条仅与BEFV阳性血清发生显色反应，与牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等其他病毒阳性血清均无交叉反应，阳性血清样本重复性试验证明试纸条的重复性较高，成功建立了免疫胶体金检测方法。【结论】 本研究以原核表达的G蛋白为抗原成功制备了检测BEFV的新型免疫胶体金试纸条，该检测试纸条特异性强、稳定性好，适合用于临床快速检测BEF。

【目的】 建立一种具有良好特异性和敏感性的非洲猪瘟病毒(African swine fever，ASFV)抗体间接ELISA检测方法。【方法】 根据ASFV P54蛋白基因序列进行大肠杆菌密码子优化，将优化后的P54序列克隆到pET-28a(＋)质粒中，构建重组质粒pET28a-P54，利用大肠杆菌表达系统表达目的蛋白并用His镍柱进行纯化，经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后，以纯化的P54蛋白作为检测抗原进行包被，建立一种间接ELISA方法，对包被条件、封闭液、封闭时间和血清孵育等反应条件进行优化后，对其临界值、特异性、灵敏性和重复性进行验证。【结果】 SDS-PAGE结果显示，P54蛋白分子质量为42 ku，纯度在95%以上；Western blotting结果显示，P54蛋白与ASFV阳性血清能产生特异性反应。优化后的ELISA反应条件为：0.3125 μg/mL抗原 37 ℃包被1 h，5%脱脂奶粉37 ℃封闭1 h，1∶800稀释的血清37 ℃孵育2 h，1∶15 000稀释的酶标二抗37 ℃孵育1 h。该ELISA检测方法仅与ASFV阳性血清产生特异性反应，与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和乙型脑炎病毒的阳性血清均无明显交叉反应；该方法灵敏性较高，ASFV阳性血清稀释度为1∶3 200时仍有明显反应。批间重复和批内重复变异系数均＜10%；与商品化试剂盒相比，其阳性符合率为95.45%，阴性符合率为96.05%，总符合率为95.83%。【结论】 本研究建立了一种以ASFV P54蛋白为检测抗原的ASFV间接ELISA方法，该方法具有良好的特异性和敏感性，能运用于ASFV的血清学检测，为非洲猪瘟的快速诊断提供更多选择。

【目的】 分析传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus，TGEV)感染对猪肾上皮细胞(PK-15)中环状RNA(circRNA)表达的影响以及差异表达circRNA的潜在调控功能。【方法】 利用Illumina HiSeq 4000测序平台对PK-15细胞(对照)和TGEV感染的PK-15细胞进行circRNA转录组测序，筛选差异表达circRNA。对差异表达circRNA来源基因进行GO功能和KEGG通路富集分析，预测TGEV感染相关circRNA-miRNA-mRNA调控网络。随机挑选12种差异表达circRNAs通过实时荧光定量PCR验证其表达水平。【结果】 转录组测序中共发现1 029种circRNAs。相较于对照PK-15细胞，TGEV感染的PK-15细胞中共发现128种显著差异表达circRNAs，其中70种上调，58种下调。GO功能分析显示，TGEV感染的PK-15细胞中差异表达circRNAs来源基因主要富集在细胞大分子代谢过程和细胞代谢等生物过程；细胞内部分和胞内膜结合细胞器等细胞成分；有机环化合物结合和核酸结合等分子功能中。KEGG通路富集结果显示，TGEV感染的PK-15细胞中差异表达circRNAs来源基因主要富集在肌动蛋白细胞骨架调控、甲型流感、丙型肝炎、cAMP信号通路和mTOR信号通路等方面。circRNA-miRNA-mRNA调控网络显示，TGEV感染的PK-15细胞中存在庞大复杂的circRNA调控网络，多种circRNAs可通过miRNA靶向基因IFNAR1、IFNAR2和NHE3来调节先天免疫和跨膜离子转运，从而影响TGEV感染和症状。实时荧光定量PCR鉴定结果显示，12种差异表达circRNAs表达水平与测序结果基本趋势一致。【结论】 TGEV改变了PK-15细胞中circRNA的表达。差异表达circRNA来源基因广泛参与细胞大分子代谢、病毒感染及cAMP信号通路等过程，与先天性免疫和TGEV发病机制相关的多个靶基因IFNAR1、IFNAR2和NHE3可能被circRNA调控。本研究结果揭示了circRNA在TGEV与宿主相互作用中的潜在功能。

【目的】 鉴定一只来自浙江嘉兴的流浪犬体表寄生的蜱种类及其携带病原体情况，了解血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)的生活史及其携带的病原体对人和动物的危害，为后续防治相关疾病提供措施。【方法】 分别采用光学显微镜观察和PCR方法对蜱进行形态学和分子种类鉴定；同时分别针对梨形虫目和巴贝斯虫属的18S rRNA、斑点热群立克次氏体ompA、埃立希体dsb和伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA基因进行PCR扩增，检测蜱携带病原体情况。【结果】 从该流浪犬体表采集的82只蜱均为血红扇头蜱，其中24只蜱携带泰勒虫属，阳性率为29.27%(24/82)；4只携带Colpodella sp.，阳性率为4.88%(4/82)；2只携带巴贝斯虫属，阳性率为2.44%(2/82)；21只携带斑点热群立克次氏体，阳性率为25.61%(21/82)；15只携带埃立希体，阳性率为18.29%(15/82)；未发现有蜱携带伯氏疏螺旋体。在单只蜱中检出的病原体数量和种类都各不同，其中有24只蜱仅携带1种病原体；12只蜱同时携带2种病原体；6只蜱同时携带3种病原体；有40只蜱未携带所检病原体。【结论】 该流浪犬体表寄生的蜱为血红扇头蜱，其携带了泰勒虫属、巴贝斯虫属、斑点热群立克次氏体、埃立希体多种病原体，可对人和动物造成较大的威胁，应加强对该地区蜱的防控，尤其是加强对流浪犬的管理。

【目的】 研究鸡γ-干扰素(chicken interferon γ,chIFN-γ)与鸡补体受体2(chicken complement receptor 2,chCR2)蛋白的相互作用，为研究chIFN-γ和chCR2新功能奠定基础。【方法】 通过同源重组方法构建chIFN-γ相关表达质粒，利用免疫共沉淀、激光共聚焦和表面等离子共振技术鉴定chIFN-γ与chCR2蛋白的相互作用，并通过分子对接技术模拟chIFN-γ与chCR2蛋白的相互作用模式。【结果】 成功构建了pCMV-Myc-chIFN-γ表达质粒。将pCMV-Myc-chIFN-γ和pCMV-HA-chCR2-ΔTM质粒共转染HEK-293FT细胞，结果表明chIFN-γ蛋白可以与chCR2蛋白进行相互作用；将pCMV-Myc-chIFN-γ和pCMV-HA-chCR2-ΔTM质粒共转染DF-1细胞，结果表明chIFN-γ蛋白与chCR2蛋白可以在DF-1细胞中进行共定位。表面等离子共振试验结果显示chIFN-γ与chCR2蛋白之间的平衡解离常数(KD)值为0.362 μmol/L，二者之间有较高的亲和力。分子对接试验结果显示，chIFN-γ与chCR2蛋白之间的相互作用模式为Asp23-His150间形成1组盐桥作用，Asn37-Ser143、Glu57-Gly179和Ile93-Tyr184间形成3组氢键作用。【结论】 本研究结果证明了chIFN-γ与chCR2蛋白可以进行相互作用，且二者之间的作用模式为1组盐桥和3组氢键作用。

【目的】 了解并掌握山东地区牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)流行毒株的生物学特性和遗传变异情况，为BVDV防控提供理论依据和技术支持。【方法】 采集养牛场疑似BVDV感染样品制备组织上清液，利用RT-PCR方法进行病原鉴定，接种MDBK细胞进行病毒分离培养，采用间接免疫荧光试验(IFA)和电镜观察对分离毒株进行鉴定，对分离毒株全基因组进行分段扩增、克隆和测序，并采用Lasergene等软件分别对全基因组序列、N^pro和E2基因进行比对和遗传演化分析。【结果】 病料样品BVDV特异性引物RT-PCR扩增得到大小约504 bp的目的条带，与预期大小一致。IFA结果显示特异性绿色荧光；电镜下可见直径约50 nm的病毒粒子，表明分离到1株非致细胞病变型BVDV毒株，命名为SDNF9株。分离株基因组全长为12 232 nt，与BVDV参考毒株的全基因组核苷酸相似性为79.1%～93.8%，其中，与中国分离毒株22AH-1和澳大利亚毒株Bega-like的相似性最高，为93.8%；N^pro和E2蛋白氨基酸存在多个位点变异；SDNF9分离毒株与BVDV2型毒株和BVDV3型毒株处于遗传演化的不同分支，而与BVDV 1型毒株处于同一分支，属于BVDV 1c基因型。【结论】 本研究成功分离到1株BVDV 1c流行毒株，并进行基因组和遗传演化分析，与中国分离毒株22AH-1亲缘关系最近，为山东地区牛病毒性腹泻的防控和疫苗研制提供数据和材料支持。

【目的】 探究鸡早幼粒细胞白血病蛋白核小体(PML NBs)在马立克病病毒(Marek’s disease virus，MDV)感染过程中的生物学功能，制备抗鸡早幼粒细胞白血病蛋白(Ch-PML)单克隆抗体，建立可视化检测Ch-PML的方法。【方法】 通过原核表达系统制备Ch-PML重组蛋白，并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠，采用细胞融合技术将骨髓瘤细胞和免疫小鼠的脾细胞进行融合，用ELISA方法筛选出分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株，通过体内诱生法制备腹水并用Protein A/G纯化抗Ch-PML单克隆抗体，利用Western blotting和ELISA方法检测单克隆抗体的特异性、亲和力和亚类，最后利用该单克隆抗体建立用于鸡PML NBs的间接免疫荧光试验(IFA)检测方法。【结果】 Ch-PML蛋白在大肠杆菌中可溶性表达，分子质量大小为19 ku；以此蛋白成功制备了1株抗Ch-PML单克隆抗体，该抗体具有良好的特异性和高亲和力，经亚类和型检测，其为IgG2b亚类，轻链为Kappa型。利用制备的抗Ch-PML单克隆抗体建立的IFA检测方法发现，内源性PML NBs在宿主细胞核中呈点状分布，过表达的Ch-PML在宿主细胞核中形成团块状聚集体，且MDV感染宿主细胞后核内PML NBs数量比未感染细胞显著减少(P＜0.05)，说明MDV感染导致核内的PML NBs组装受到抑制。【结论】 本研究利用制备的抗Ch-PML单克隆抗体建立了鸡PML NBs的IFA检测方法，并发现MDV抑制宿主细胞PML NBs组装这一现象，为MDV致病机制的解析提供了新的研究思路和工具。

【目的】 探究1株多重耐药大肠杆菌裂解性噬菌体的生物学特性及基因组特征，为多重耐药菌株的科学防控提供参考。【方法】 试验以棕熊源大肠杆菌M719-6WT为宿主菌，使用双层平板法从养殖场污水中分离纯化出噬菌体，通过透射电镜观察其形态，利用空斑法测定噬菌体宿主谱，并探究其生物学特性。基于噬菌体全基因组测序数据进行噬菌体生物信息学分析，采用体外、体内抑菌试验评估噬菌体抑菌效果。【结果】 通过双层平板法分离并纯化得到1株大肠杆菌噬菌体，命名为pEC-M719-6WT.2，其噬菌斑边缘清晰且透亮。结合透射电镜观察和全基因组分析结果显示，噬菌体pEC-M719-6WT.2属于Tevenvirinae亚科肌尾状噬菌体。宿主谱测定结果表明，噬菌体pEC-M719-6WT.2可裂解11株大肠杆菌。该噬菌体最佳感染复数(MOI)为0.1，最适温度为25 ℃，最适pH为7.0，潜伏期＜10 min，裂解周期为70 min，裂解量约为190 PFU/cell。基因组分析结果显示，噬菌体pEC-M719-6WT.2基因组大小为170.441 kb，未发现携带已知的耐药、溶原和毒力相关基因。受体结合试验结果显示，噬菌体pEC-M719-6WT.2可以结合宿主菌表面的脂多糖受体。体外抑菌试验结果显示，当MOI为100时，噬菌体pEC-M719-6WT.2与8 μg/mL四环素联合应用，抑菌时间可延长至24 h；体内保护试验结果表明，2.8×10⁵ CFU/mL M719-6WT感染大蜡螟幼虫后，注射2×10⁷ PFU/mL噬菌体pEC-M719-6WT.2可在24和48 h内将大蜡螟幼虫存活率分别提高至100%和70%。【结论】 本研究分离获得1株多重耐药大肠杆菌噬菌体，其具有良好的环境稳定性和抑菌活性，生物信息学特征明确，体内外抑菌效果较好，与抗生素联合使用可产生协同作用，具有治疗临床耐药大肠杆菌感染的潜在应用价值。

【目的】 利用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)核衣壳蛋白(N)，并制备具有高效价和特异性强的多克隆抗体。【方法】 利用生物信息学工具分析PEDV N蛋白氨基酸序列，并预测其抗原性；利用原核表达载体pColdⅠ诱导表达重组N蛋白，并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白；使用兔多抗制备佐剂与纯化后的重组N蛋白混合后免疫新西兰白兔，收集血清制备多克隆抗体。利用间接ELISA法测定重组N蛋白多克隆抗体效价，并对多克隆抗体进行Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)验证。【结果】 生物信息学预测结果显示，N蛋白不含信号肽和跨膜结构，具有良好的抗原性和溶解度。SDS-PAGE电泳结果显示，重组N蛋白大小约为58 ku，主要以可溶性蛋白存在；Western blotting结果显示，该蛋白能与抗His标签的鼠源单克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA结果显示，多克隆抗体效价可达1∶204 800；Western blotting结果表明，抗体稀释度为1∶5 000时能特异性识别重组N蛋白及PEDV感染后的Vero细胞样品中的N蛋白；IFA结果显示，当稀释度为1∶1 000时，该抗体能有效识别PEDV感染细胞样品中的N蛋白。【结论】 本研究成功制备了效价高和特异性好的兔抗N蛋白多克隆抗体，为深入研究PEDV N蛋白的功能、了解PEDV复制机制和病毒-宿主细胞间的互作提供试验材料，为开发PEDV诊断和检测方法奠定基础。

【目的】 调查分析成都地区猪圆环病毒3型(PCV3)的流行与分子遗传进化情况。【方法】 试验于2023年1月至2023年12月从成都地区4家无害化处置场采集病死猪组织样品2 113份，采用实时荧光定量PCR法检测病料组织PCV3感染情况。设计3对引物对阳性样品的PCV3基因组序列进行PCR扩增并测序。通过在线软件拼接PCV3基因组序列、截取ORF2基因序列并推导其氨基酸序列(Cap)，进行相似性比对并构建遗传进化树，分析Cap氨基酸序列突变情况。【结果】 组织病料检测结果显示，2 113份病死猪组织样品的PCV3阳性率为27.21%(575/2 113)。根据PCR扩增测序结果拼接获得了15株PCV3基因组序列。相似性比对分析显示，15株PCV3核苷酸序列相似性为97.2%～100%，ORF2基因核苷酸序列相似性为97.2%～100%，Cap氨基酸序列相似性为96.7%～100%。遗传进化树结果显示，12株PCV3属于PCV3a亚型，3株属于PCV3c亚型。15株Cap氨基酸序列中共13株发生了突变，共存在13个突变位点。【结论】 成都地区PCV3主要为PCV3a和PCV3c亚型，基因组相似性高，序列较保守，Cap氨基酸突变位点主要集中在抗原表位。本试验结果提示该地区需制定科学的防控政策，防止病毒蔓延。

【目的】 了解广西地区牛细小病毒1型(Bovine parvovirus 1,BPV1)的生物学特性及遗传变异情况，为BPV1的防控提供理论依据和支撑。【方法】 试验从广西地区养牛场采集409份犊牛腹泻粪便样本，通过BPV1特异引物进行PCR检测，使用牛鼻甲骨细胞(BT)对阳性样品进行病毒分离。收集产生细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)的BT细胞上清液，通过PCR扩增、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、电镜观察等方法进行病毒鉴定。测定BPV1分离株感染BT细胞后不同时间病毒半数组织培养感染剂量(median tissue culture infectious dose,TCID₅₀)，绘制病毒多步生长曲线。利用高通量测序获得病毒全基因组序列并对其进行遗传进化分析。【结果】 409份粪便样本检测到1例BPV1阳性，阳性率为0.24%。病料接种BT细胞盲传至第3代，可观察到细胞圆缩、弯曲、形成细胞团块、溶解等现象。PCR扩增结果显示，产生CPE细胞上清经PCR扩增可出现特异性条带；电镜可观察到圆形、无囊膜、直径约24 nm的病毒粒子；IFA结果显示，接种分离株的BT细胞内可观察到特异性绿色荧光，成功分离到1株BPV1，命名为GXBS2209。第6代分离株病毒滴度为10^5.75 TCID₅₀/mL，多步生长曲线显示分离株感染BT细胞后病毒滴度在120 h达到峰值，随后逐渐下降。测序结果显示，分离株基因组全长为5 515 bp(GenBank登录号: PP158225)，与美国Bovine parvovirus株全基因组序列相似性最高，为98.7%。遗传进化分析结果显示，分离株与Bovine parvovirus株处于同一分支，亲缘关系最近。分离株与参考毒株NS1、VP2基因核苷酸序列相似性分别为98.8%～99.4%、94.4%～98.1%，氨基酸序列相似性分别为98.8%～99.5%、90.3%～99.4%；NS1和VP2序列中各有2和3个氨基酸位点替换。【结论】 本研究成功分离到1株BPV1,并对其全基因序列进行分析，为后续BPV1的致病机理、疫苗研究以及疾病防控奠定了基础。

【目的】 NOD样受体家族成员C5(NLRC5)在哺乳动物中广泛表达，并参与调节免疫应答和抗原递呈过程。试验通过真核表达系统表达猪NLRC5基因重组表达产物，并制备猪NLRC5多克隆抗体,为后续研究猪NLRC5的分子机制提供基础支撑。【方法】 通过生物信息学在线网站分析NLRC5蛋白的跨膜结构和信号肽。采用PCR方法扩增猪NLRC5基因，构建真核表达载体pCAGGS-HA-NLRC5，并将其转染至HEK-293F细胞。利用Western blotting检测重组蛋白表达，并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。使用间接ELISA法测定多克隆抗体效价，并检测抗体特异性。采用间接免疫荧光法(IFA)和Western blotting检测NLRC5多克隆抗体与不同细胞的反应原性。以NLRC5多克隆抗体为一抗，通过Western blotting检测经siRNA处理后ST细胞中NLRC5蛋白的表达情况。【结果】 生物信息学分析结果显示，NLRC5蛋白不存在跨膜结构域，含有1个信号肽；试验成功构建真核表达质粒pCAGGS-HA-NLRC5。Western blotting结果显示，成功表达NLRC5蛋白，分子质量约203 ku；制备的NLRC5多克隆抗体效价为1∶25 600，且具有良好的特异性。IFA和Western blotting结果表明该抗体能够与多种细胞系发生特异反应；siRNA技术验证其能用于检测细胞中NLRC5的表达。【结论】 本研究利用真核表达系统成功获得猪NLRC5重组蛋白并制备兔源多克隆抗体，为下一步探究NLRC5在先天免疫反应中对外来感染的防御作用提供试验材料。

【目的】 筛选产抗金黄色葡萄球菌细菌素的乳酸菌，分析其所产细菌素的理化特性并对其进行全基因组测序分析。【方法】 本研究以金黄色葡萄球菌为指示菌株，从吉林省延边市的桔子中筛选产抑菌物质的乳酸菌。对筛选得到的菌株进行形态学观察和相似性鉴定，并构建系统发育树。通过排酸、排过氧化氢和蛋白酶敏感试验对抑菌物质进行初步分析，并测定抑菌物质对温度和紫外线的耐受性。对菌株进行全基因组测序及功能分析。【结果】 筛选得到1株产抗金黄色葡萄球菌抑菌物质的乳酸菌，命名为LMM-1，在MRS固体培养基上为乳白色、光滑湿润的圆形菌落；革兰染色后在油镜下为短杆阳性菌。核酸序列经16S rRNA鉴定与融合魏斯氏菌相似性为99.86%，确定LMM-1为融合魏斯氏菌。排除有机酸试验结果显示，发酵上清液抑菌活性显著大于对照组；排除过氧化氢试验结果显示，抑菌活性几乎不变，可排除有机酸和过氧化氢的干扰。经蛋白酶处理分离菌抑菌产物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用降低；在100 ℃高温、pH 2.0～8.0和2 h的紫外线照射下，仍具有良好抑菌活性。基因测序发现,LMM-1基因组长2 194 218 bp，共有2 045个基因被预测，基因组平均GC含量为44.97%。GO功能富集分析结果显示，分子功能中的催化活性和生物过程中的代谢过程得到的基因组功能注释最多，分别为905和801个。KEGG通路富集分析结果显示，在遗传代谢、遗传信息处理和环境信息处理中有49条代谢通路，共有1 050个基因得到功能注释。【结论】 融合魏斯氏菌LMM-1产细菌素对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性，且细菌素具有一定的耐酸碱、高温和紫外线的能力，对环境具有良好的适应性，该菌含有较多与催化活性和新陈代谢相关的基因。本研究结果可为抗金黄色葡萄球菌替抗产品的研发奠定基础。

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是造成急性肝炎最常见的原因之一。HEV基因组由5'非编码区、3个开放阅读框(ORF1、ORF2、ORF3)和3'非编码区组成，仅在HEV-1中发现了ORF4，并与ORF1重叠。各种编码蛋白在HEV的复制和感染中发挥着不同的作用，而HEV的复制是由ORF1编码的RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)所介导的。HEV RdRp是由多个蛋白亚基组成的复合酶，具有7个保守基序，这些保守基序在RNA合成过程中发挥核苷酸识别、合成、延伸、修饰和稳定等作用，保证了RdRp的功能，在HEV的复制和转录中起到关键作用。因此，以RdRp作为抗HEV药物作用靶点的治疗方案具有很好的应用前景，是目前药物开发的一种主流思路。目前，已发现利巴韦林、索非布韦、2'-C-甲基胞苷(2CMC)等核苷类RdRp抑制剂和锌、GPC-N114等非核苷类RdRp抑制剂对HEV有较强的抑制作用，可作为潜在的抗HEV药物进行深入研究。笔者对HEV编码蛋白和HEV RdRp的结构与功能进行阐述，总结目前发现的对HEV有抑制作用的RdRp抑制剂，以期为HEV的药物开发提供一种新的思路。

【目的】 从籽鹅肠道中分离筛选用于改善籽鹅健康状况的潜在益生菌株，并研究其益生特性。【方法】 采集健康籽鹅不同肠段内容物，梯度稀释后涂布于含碳酸钙的MRS(CaCO₃-MRS)固体培养基上，经厌氧培养后，通过形态学、生化试验、16S rRNA基因PCR扩增对分离菌株进行鉴定，采用耐酸试验和抑菌试验对菌株益生特性进行筛选，评价其抑菌能力、抗生素敏感性、耐酸和耐胆盐能力、胃肠液耐受能力，并测定其生长曲线和产酸曲线。【结果】 从健康籽鹅肠道中分离得到4株疑似乳酸菌，命名为RS-1、RS-2、RS-3和RS-4，其中RS-3菌株具有良好的益生特性。RS-3菌株在CaCO₃-MRS培养基上的菌落形态为表面光滑、淡黄色、产生明显溶钙圈的圆形菌落，为革兰阳性杆菌。生化试验结果显示，分离菌株均可发酵麦芽糖、纤维二糖、蔗糖、棉子糖、菊糖和乳糖，也可发酵甘露醇、山梨醇和水杨苷，且七叶苷试验和1%马尿酸钠试验均为阳性，初步判定分离菌株均为乳酸菌。经16S rRNA基因序列分析鉴定，4株分离菌均为非解乳糖链球菌(Streptococcus alactolyticus)，其中RS-3菌株耐受性优于其他3株分离菌。RS-3菌株发酵液对金黄色葡萄球菌有较好的抑制效果，抑菌圈直径达10 mm以上，对卡那霉素、阿米卡星、罗红霉素、磺胺嘧啶、林可霉素、多黏菌素B和诺氟沙星耐药。RS-3菌株具有酸、胆盐及人工胃液和肠液的耐受性，灌胃小鼠后其生长状况良好。【结论】 试验分离得到4株籽鹅肠源型非解乳糖链球菌，其中RS-3菌株具有较好的抑菌、耐酸、耐胆盐益生特性，可作为后续开发鹅用益生菌制剂的一种可靠的菌株来源。

【目的】 自健康猎鹰粪便中分离具有益生作用的乳酸菌，为益生菌制剂的开发研究提供候选菌株。【方法】 自阿合奇县采集6份猎鹰粪便样本，采用选择性培养基进行细菌分离培养，通过革兰染色、生化鉴定和16S rDNA PCR扩增和序列分析对分离菌进行鉴定，并对其进行生长曲线、产酸曲线、抗逆性、药物敏感性、体外抑菌、自聚集能力和表面疏水性等生物学特性测定和动物安全性试验。【结果】 自猎鹰粪便中分离出3株分离菌，经革兰染色镜检为蓝紫色阳性球菌。分离菌生化鉴定结果显示，棉籽糖、葡萄糖和甲基红试验呈阳性，触酶试验、硫化氢试验、吲哚试验和V-P试验结果均为阴性，初步鉴定为肠球菌属。16S rDNA测序结果显示，分离株与NCBI登录的海氏肠球菌相似性均在99%以上，确定3株分离株均为海氏肠球菌，分别命名为EH1、EH2和EH3株。EH1、EH2和EH3株对数生长期分别为8～16、8～19和8～14 h，菌液产酸pH均稳定为4.5，具有较好的产酸性能。3株海氏肠球菌在pH为3.0和0.5%胆盐处理下均能存活，具有较好的抗逆性。3株海氏肠球菌无细胞上清液均对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较好抑菌效果，对链霉素和头孢噻呋呈中介，对环丙沙星、庆大霉素、红霉素、替米考星、青霉素、氨苄西林和氯霉素敏感。以EH1株的自凝集能力较高，为28.00%，以EH2株的疏水性较高，为52.10%；3株海氏肠球菌对昆明小鼠均无致病性。【结论】 本研究分离获得3株猎鹰粪源海氏肠球菌，均具有良好的益生性，可作为益生菌制剂的候选菌株。

【目的】 研究马铃薯淀粉和玉米淀粉对冷冻干燥过程中微胶囊乳酸片球菌活性的保护作用和对乳酸片球菌耐酸耐胆盐性、储藏稳定性的影响，为抗性淀粉的开发利用及益生菌保护技术开拓思路和提供理论依据。【方法】 选用3.0%海藻酸钠、0.8%壳聚糖制备3组微胶囊：对照组、试验1组(T1)和试验2组(T2)。对照组以2%甘油作为冻干保护剂，T1组以2%甘油和10%马铃薯淀粉作为冻干保护剂，T2组以2%甘油和10%玉米淀粉作为冻干保护剂。分别对微胶囊的外貌形态、机械强度、包埋率、载菌量、体外人工胃肠道耐受性及储藏性能进行评价。【结果】 ①T1和T2组微胶囊包埋率均显著高于对照组(P＜0.05)。②T1和T2组微胶囊冻干保护率达到70%以上，均显著高于对照组(P＜0.05)，其中T2组冻干保护率较高，为77.66%。③T1与T2组微胶囊的粒径、机械强度、载菌量均显著高于对照组(P＜0.05)。④体外人工胃肠液耐受性试验结果显示，T1和T2组微胶囊在含胃蛋白酶的模拟胃液中的存活率均高于对照组，2 h时差异显著(P＜0.05)；在模拟肠液中，3组乳酸片球菌微胶囊均在10 min后开始迅速释放，1 h时，基本崩解完全；T1与T2组乳酸片球菌微胶囊在胆盐环境下较稳定，4 h时乳酸片球菌存活率显著高于对照组(P＜0.05)；⑤3组微胶囊25 ℃储藏8周后，T1和T2组微胶囊乳酸片球菌存活率显著高于对照组(P＜0.05)，其中T2组微胶囊乳酸片球菌存活率较高，为52.29%；－20 ℃储存8周后，T1和T2组微胶囊乳酸片球菌存活率均高于对照组，但差异不显著(P＞0.05)。【结论】 通过微囊化技术和添加植物淀粉作为保护剂的措施可提高乳酸片球菌微胶囊冻干保护率及储藏性能，其中玉米淀粉对乳酸片球菌微胶囊冻干保护及储存性能更好。本研究结果可为开发海藻酸钠、壳聚糖为壁材的乳酸片球菌微胶囊研究提供参考。

【目的】 研究黄芪多糖脂质体(Astragalus polysaccharide liposomes，APSL)制备及其在Caco-2细胞模型中的转运。【方法】 采用薄膜分散法制备APSL，通过透射电镜观察APSL结构，鱼精蛋白法检测APSL的包封率及载药量；建立Caco-2单层细胞模型，通过透射电镜观察其结构，测量细胞电阻值及荧光素钠表观渗透系数(apparent permeability coefficient，Papp)来评价Caco-2细胞模型的致密性和完整性；分别进行肠腔侧(apical side，AP)到基底侧(basolateral side，BL)及BL到AP侧两个转运方向的跨膜转运试验，分析药物浓度及P-糖蛋白(P-gp)的抑制剂维拉帕米溶液(Verapamil，Ver)对转运的影响。【结果】 APSL包封率为71.74%±4.87%，载药量为2.92%，透射电镜下可见球状双层结构，粒径为(126.6±0.283)nm (n=3)，聚合物分散性指数(polymer dispersity index，PDI)为0.190±0.009；透射电镜下观察Caco-2细胞紧密结合，形成微绒毛结构，跨膜电阻值达到650 Ω·cm²，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)比值达到3.05，荧光素钠Papp为1.96×10^-7 cm/s，可满足转运试验的要求。在不同浓度下(75、150、300 μg/mL)，黄芪多糖(APS)的外排率(efflux ratio，ER)均＞1.5，APSL的ER均＜1.5。3个浓度上AP-BL吸收方向上APSL组Papp均极显著高于APS组(P＜0.01)，且ER均低于APS组。加入P-gp蛋白抑制剂后，与APS组相比，APS+Ver组AP-BL方向Papp极显著升高(P＜0.01)，ER降低；而APSL+Ver组两侧的Papp均没有明显变化(P＞0.05)。与APS组ER(3.995)相比，APSL组的ER(1.005)降低。【结论】 APS在体外Caco-2细胞单层模型上的转运较差，为低渗透性化合物，可能存在P-gp蛋白外排，而APSL能够增加APS的转运吸收，提高药物渗透性。

塞内卡病毒A(Senecavirus A，SVA)是近年来引起感染猪发生水疱样病变的一种小RNA病毒，属于小RNA病毒科(Picornaviridae)、塞内卡病毒属(Senecavirus)。至今，围绕SVA的遗传进化、基因组结构与功能、致病机制及流行病学等领域的研究已取得一定成果，并建立了多种实验室诊断方法。在中国，SVA感染范围较为广泛，大多以表现为无明显症状的隐性感染形式为主，并且与其他病原体混合感染的情况较为常见。目前,中国在SVA检测领域已实现了显著的技术提升，应用了逆转录恒温热隔绝式PCR(RT-iiPCR)、重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA)、实时荧光逆转录重组酶辅助扩増技术(rRT-RAA)、逆转录微滴式数字PCR(RT-ddPCR)和实时逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)等新型检测手段。然而，SVA是一种易变异和重组的新发RNA病毒，目前尚无针对其的有效商品化疫苗或药物，有效防控SVA仍是一项艰巨的任务。现有SVA疫苗的研究仍以灭活疫苗为主，同时包括亚单位疫苗、减毒活疫苗、核酸疫苗、病毒颗粒疫苗和重组活载体疫苗等。针对SVA引起感染的抗病毒药物治疗方面，目前可采用利巴韦林、甲磺酸瑞波西汀等进行治疗。此外，中草药提取物或其他天然产物也被发现为潜在的抗病毒制剂。笔者旨在对SVA的流行分布、病原学、流行病学、鉴别诊断及防控的最新研究进展进行归纳和总结，以期为SVA的预防和控制策略提供新的视角和思路。

【目的】 研究三氯卡班(triclocarban，TCC)对大鼠免疫功能及脾脏Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路相关因子表达的影响。【方法】 试验选取96只5周龄雄性SD大鼠随机分为4组，分别为玉米油对照组(C组)以及0.1、20、100 mg/kg TCC组(TL、TM和TH组)，每组24只。将不同剂量TCC与玉米油充分混匀，每日灌胃给药1次，C组灌胃等量不含TCC的玉米油，连续60 d。试验结束后，采集大鼠血液和脾脏组织，并检测大鼠血清生化指标、脾淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬指数、血清溶血素水平以及脾脏自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)活性。同时通过ELISA法检测大鼠血清免疫球蛋白含量；利用流式细胞术检测大鼠外周血淋巴细胞亚群水平；采用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测TLR4/MyD88/NF-κB通路标志基因以及下游因子的mRNA和蛋白表达水平。【结果】 与C组相比，TH组大鼠血清中葡萄糖(Glu)水平显著降低(P<0.05),TM组大鼠血清肌酐(CREA)水平显著升高(P＜0.05)；TM组大鼠脾淋巴细胞增殖能力和血清溶血素水平均显著降低(P＜0.05)。ELISA检测结果显示，TH组大鼠血清中免疫球蛋白A(IgA)、IgM、IgG水平及TM组大鼠血清中IgG水平与C组相比均极显著降低(P＜0.01)。流式细胞检测结果显示，不同剂量TCC组大鼠外周血CD3⁺、CD4⁺ T细胞占比和CD4⁺/CD8⁺比值与C组相比均无显著差异(P＞0.05)。实时荧光定量PCR结果显示，与C组相比，不同剂量TCC组大鼠脾脏中TLR4、MyD88、IL-1β的mRNA相对表达量均显著或极显著升高(P＜0.05；P＜0.01)。Western blotting 结果显示，与C组相比，TM组大鼠脾脏中TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达量均极显著升高(P＜0.01)。【结论】 TCC对大鼠的细胞免疫和体液免疫能够产生一定的毒性作用，能显著激活大鼠脾脏TLR4/MyD88/NF-κB信号通路，且可能通过靶向该信号通路来损伤大鼠的免疫系统，诱发大鼠的免疫毒性。

雪貂作为一种新兴宠物，因其性格温顺、外形可爱且较易饲养，近年来越来越受到人们的青睐。随着雪貂饲养数量的不断上升，雪貂的临床诊疗需求也逐渐增加，而肿瘤病是雪貂最常见的疾病类型之一。国内雪貂相关的文献多见于以试验用雪貂为动物模型的病毒学和肿瘤学研究，而罕见以作为家庭宠物的雪貂为主体的诊疗相关研究。笔者综述了雪貂最常见的肿瘤类型，总体上，内分泌肿瘤发病率高达53%，其中以肾上腺皮质肿瘤和胰岛素瘤为主，淋巴瘤次于前两者。笔者对以上3种肿瘤的流行病学、潜在病因、临床症状、诊断方法、常用治疗方法和预后进行详细阐述。同时简要介绍了皮肤、消化系统、骨骼和生殖系统肿瘤的诊治和预后，旨在为国内雪貂相关肿瘤疾病的临床诊疗提供理论参考及指导。

畜禽粪污中具有大量致病菌和病毒等病原微生物，还存在抗生素和抗生素抗性基因(antibiotic resistance gene，ARGs)等有害成分，这些有害成分将对生态环境和人畜的生命健康构成严重威胁。因此，将这些畜禽粪污进行无害化处理是实现这些有机肥原料资源化利用的重要前提。好氧堆肥被广泛证明是实现畜禽粪污无害化和资源化的最有效方法之一。通过查阅国内外有关畜禽粪污堆肥中病原体、抗生素和ARGs去除效果的相关文献资料，笔者简述了病原体、抗生素和ARGs的危害性，简单分析了堆肥过程中这些有害成分去除的基本原理，并详细回顾了堆肥中温度、pH、碳氮比、含水率及添加剂等因素对这些有害成分去除的相关研究报道，探讨了这些因素影响病原体、抗生素及ARGs去除的原因及效果。该文还指出目前有关畜禽粪便堆肥中病毒的研究十分不足，并建议未来可以结合宏基因组学技术和宏病毒组技术对畜禽粪污堆肥过程中的病毒丰度及群落结构进行分析，并进一步分析病毒的功能。另外，抗生素和ARGs去除的研究不全面，一些新型堆肥的生物安全研究依旧缺乏，因此需要加大研究力度。该综述可为畜禽粪污堆肥的安全生产提供依据，并为未来研究提供方向。