【目的】 获取鲤鱼线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein，MAVS)基因CDS区，对其进行生物信息学分析，并探讨MAVS基因在免疫反应中的功能。【方法】 参考NCBI中公布的鲤鱼MAVS基因预测序列(GenBank登录号：XM_019072216.2)设计引物对MAVS基因进行克隆和测序，使用生物信息学软件分析鲤鱼MAVS蛋白的性质和功能。对鲤鱼进行嗜水气单胞菌攻毒试验，使用实时荧光定量PCR技术检测MAVS基因在攻毒前后鲤鱼各组织中的表达水平。通过免疫荧光检测试验进行MAVS和线粒体的亚细胞定位；使用双荧光素酶报告基因系统检测MAVS基因调控下游基因的表达情况。【结果】 克隆得到鲤鱼MAVS基因CDS区序列全长1 749 bp，共编码582个氨基酸。鲤鱼MAVS基因核苷酸序列与鲫鱼、多磷白甲鱼、虎皮鱼、野鲮、草鱼、团头鲂、拉氏鱥、金线鲃、胖头鱥的相似性分别为92.3%、89.5%、85.1%、79.1%、73.6%、73.1%、72.0%、70.1%和69.8%。系统进化树结果显示，鲤鱼与鲫鱼、野鲮、多磷白甲鱼等聚为一支。鲤鱼MAVS蛋白为酸性、不稳定蛋白质，具有较强的亲水性，含有133个磷酸化位点及1个跨膜螺旋，属于跨膜蛋白；不含有信号肽，不属于分泌蛋白。蛋白保守性分析显示，MAVS蛋白的N-端CARD结构域、中间富含脯氨酸结构域(PRR)和C-端跨膜结构域(TM)在不同物种之间高度保守。鲤鱼MAVS蛋白的二级结构和三级结构显示，该蛋白主要由无规则卷曲(58.93%)和α-螺旋(23.37%)构成，延伸链(13.92%)和β-转角(3.78%)含量较低，表明其为一种混合性蛋白。蛋白互作结果显示，MAVS蛋白与NLRP3、TRAF6、ATG5、DDX58、TBK1等免疫蛋白之间存在相互作用。实时荧光定量PCR结果表明，与对照组相比，攻毒后鲤鱼MAVS基因在心脏、脑、脾脏、肝脏、肠道、肌肉、鳃组织中表达量显著或极显著升高(P＜0.05；P＜0.01)，在肾脏中表达量极显著降低(P＜0.01)，在眼组织中表达量无显著差异(P＞0.05)。细胞免疫荧光结果显示，MAVS蛋白表达位置与线粒体一致。双荧光素酶基因检测报告结果显示，MAVS基因能够极显著激活IFN和ISRE启动子(P＜0.01)。【结论】 MAVS基因在不同物种及在遗传进化过程中高度保守，在鲤鱼不同组织中广泛表达。本试验结果为进一步研究MAVS 基因在鲤鱼先天免疫反应中的功能及分子机制提供了理论依据。

【目的】 利用转录组测序(transcriptome sequencing，RNA-Seq)和全长翻译组测序(ribosome-nascent-chain-complex sequencing，RNC-Seq)分析比对转录和翻译两个不同水平上牛骨骼肌的生长发育过程，解析其发育特征和规律，并筛选出可能在转录组和翻译组共同参与牛肌肉生长发育过程的关键基因，为后续功能基因的筛选和利用提供目标靶点。【方法】 采集4月龄牛胚胎的骨骼肌卫星细胞的增殖期(proliferative period，GM)和分化期第2天(the second day of differentiation，DM2)的样品进行RNA-Seq和RNC-Seq分析，对其差异表达基因进行生物信息学分析，从翻译调控的角度分析与骨骼肌发育相关的差异基因。【结果】 BSMSCs的DM2期相较于GM期差异基因筛选表明，转录组共筛选获得2 808个差异基因(上调基因1 749个，下调基因1 059个)，翻译组共筛选获得3 740个差异基因(上调基因1 769个，下调基因1 971个)，转录组和翻译组共有的差异表达基因725个，其中表达趋势相同的基因618个，表达趋势相反的基因107个。功能富集分析获得103个与骨骼肌发育相关的基因。进一步深入分析发现，转录水平的调控和翻译水平的调控具有相对独立性，且翻译调控对转录调控具有一定的回调作用，筛选获得了22个与牛肌肉的生长发育密切相关的标靶基因(CDK1、SERPINE1、THBS1、IGFBP3、CNB1、GADD45A、CYCS、CDK2、CCND1、CCNE2、ZMAT3、ACTB、ACTA1、TNNT1、MYH7、ACTG1、TUBA1C、TNNC1、KIF20A、TUBB4B、MYL3、TUBB3)及13个存在翻译回调现象的关键基因(GREM1、EGR1、SFRP4、NKD2、DKK3、IGFBP3、CTSK、ITGAV、CTSV、CDKN1A、SESN3、GADD45A、ZMAT3)。【结论】 本研究筛选获得了22个可能与牛肌肉的生长发育密切相关的关键基因和13个存在翻译回调的关键基因，为进一步利用分子手段调节牛肌肉生长发育过程及进行新品种培育提供了重要的靶点。

【目的】 探究聚苯乙烯微塑料(PS-MPs)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞(MCEC)自噬的作用机制。【方法】 依据CCK-8法测定的PS-MPs和DEHP对MCEC的半数抑制浓度(IC₅₀)，将MCEC分为5组：对照组、PS-MPs组、DEHP组、联合组和抑制组，各组MCEC分别用培养基及含有200 μg/L PS-MPs、100 μmol/L DEHP、200 μg/L PS-MPs+100 μmol/L DEHP、200 μg/L PS-MPs+100 μmol/L DEHP+5 nmol/L硼替佐米(PS-341)的培养基处理24 h后，采用生化试剂盒检测NO含量及iNOS活性，通过MDC法检测自噬小体，利用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blotting检测自噬，以及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。【结果】 PS-MPs和DEHP均可抑制MCEC的活力，且IC₅₀分别为2 315 μg/L和1 477 μmol/L。与对照组相比，PS-MPs、DEHP、联合组细胞中NO含量、iNOS活性及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05)，MDC法与免疫荧光染色的荧光强度均显著增强(P＜0.05)，MCEC的自噬相关基因(Beclin1、ATG5、LC3-B)的mRNA和蛋白表达水平显著上调(P＜0.05)；PS-341可显著缓解PS-MPs和DEHP对MCEC暴露引起的上述检测指标的变化。【结论】 联合暴露于PS-MPs和DEHP可激活iNOS，使NO含量激增，上调NO/iNOS/NF-κB通路，从而诱导小鼠结肠上皮细胞自噬。

自噬是细胞通过溶酶体的功能实现降解自身内容物的过程，自噬相关过程中的突变会导致严重的人类疾病，如癌症、心血管疾病、神经退行性疾病、代谢疾病、肺部疾病和肾脏疾病等。自噬能够联合机体的一些生化反应组建成动态循环系统，起到消除有害物质的作用，且可以为细胞更新和维持体内平衡提供新的能量。因此，自噬在机体的生理和病理过程中发挥着重要作用。近年来，有医学和动物生理病理学研究指出乙酰化修饰在调控细胞自噬过程中发挥着关键作用。乙酰化修饰作为蛋白质翻译后修饰中的一类修饰方法，是由乙酰转移酶和去乙酰化酶介导的可逆的翻译后修饰。其中，乙酰转移酶将乙酰辅酶A的乙酰基团转移至底物蛋白的氨基酸残基上，而乙酰基团的去除由去乙酰化酶完成。乙酰化修饰常发生于组蛋白赖氨酸ε-氨基和非组蛋白的N-端α-氨基上。作者从组蛋白及非组蛋白乙酰化修饰水平方面阐述乙酰化修饰对细胞自噬的影响，以期为深入研究乙酰化修饰在细胞自噬中扮演的角色及其在各类疾病上的治疗作用提供参考和方向。

脂肪组织过度沉积会导致人体肥胖，并引发相关的代谢性疾病，同时也会直接影响畜禽生产效率和产品品质。因此，如何调控脂肪组织沉积对于保障人类身体健康、提高动物生产性能及改善动物产品品质都具有重要意义。而脂肪组织的产热功能成为了一个备受关注的领域，其可通过消耗葡萄糖、脂肪酸等能量物质对机体进行产热调节，从而达到维持机体能量平衡的目的。N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m⁶A)修饰作为RNA分子上的主要表观遗传标记，在棕色脂肪组织激活、脂肪组织棕色化及产热中发挥重要功能。作者概述了脂肪组织的产热机制及mRNA m⁶A相关修饰蛋白，重点论述了mRNA m⁶A甲基化修饰对产热脂肪组织能量代谢的调控机制，深入解析了其在能量平衡、产热脂肪激活及代谢性疾病等方面的关键作用，以期为研究产热脂肪的具体产热机制奠定基础，并为精准靶向调控动物脂肪产热机制进而调控动物生产性能和产品品质提供新的思路。

【目的】 探讨孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞容受性标志基因表达的影响，为研究孕酮与子宫内膜容受性的关系及其调控机制提供理论依据。【方法】 用0、10、100 μg/L孕酮处理奶牛子宫内膜上皮细胞，通过显微镜观察细胞形态，利用CCK8试验检测细胞增殖水平，使用实时荧光定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)和同源盒结构基因10(HOXa10)的mRNA表达水平，筛选孕酮最佳作用浓度。用孕酮、转录激活因子3(STAT3)抑制剂(1.5 μmol/L)、孕酮＋STAT3抑制剂分别处理奶牛子宫内膜上皮细胞，通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平。使用Lipofectamine 3000将VEGF的靶向miRNA(miR-497 mimic、miR-497 inhibitor)、HOXa10的靶向miRNA(miR-27a-3p mimic、miR-27a-3p inhibitor)以及阴性对照(mimic-NC、inhibitor-NC)分别转染奶牛子宫内膜上皮细胞，采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-497、miR-27a-3p以及VEGF和HOXa10的表达情况。【结果】 与0 μg/L组相比，10和100 μg/L孕酮处理组细胞增殖水平、PI3K和Akt基因的mRNA表达水平没有显著差异(P＞0.05)，VEGF和HOXa10基因mRNA表达水平显著升高(P＜0.05)，后续选用10 μg/L孕酮进行试验。与10 μg/L孕酮处理组相比，STAT3抑制剂处理组和孕酮＋STAT3抑制剂联合处理组细胞中VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05)，但与对照组无显著差异(P＞0.05)。与mimic-NC组相比，转染miR-497 mimic、miR-27a-3p mimic后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05)；与inhibitor-NC组相比，转染miR-497 inhibitor、miR-27a-3p inhibitor后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05)。【结论】 孕酮通过激活STAT3信号通路调节奶牛子宫内膜上皮细胞中VEGF和HOXa10基因的表达，miR-497负调控VEGF基因的表达，miR-27a-3p负调控HOXa10基因的表达。

内质网是具有多种功能的细胞器，参与物质运输，在蛋白质修饰加工、脂质与甾体类激素的合成、细胞应激以及维持钙稳态等生物活动中发挥重要作用。当内质网上错误折叠或未折叠蛋白过度堆积会引起内质网应激反应，无法调节时则会启动细胞凋亡程序。睾丸间质细胞是睾酮合成的主要场所，通过一系列合成酶将胆固醇转化为睾酮，对于维持动物繁殖性能至关重要。近年来有研究显示，在雄性动物睾丸间质细胞合成睾酮过程中，常包含内质网应激和未折叠蛋白反应，通过调控不同的信号通路导致细胞凋亡，影响睾酮合成。而目前对于内质网应激对睾酮合成影响的具体机制尚不明确。作者综述了在雄性动物睾丸间质细胞中，内质网应激介导不同细胞凋亡途径、氧化损伤以及钙离子途径对睾酮合成的影响及可能的分子机制，以期为通过调节内质网应激从而提高睾酮合成提供新思路。

【目的】 评估不同形态和剂量的锌对高温应激环境中雪山草鸡生长性能、表观消化率和血清生化指标的影响，以期为高温环境下雪山草鸡的锌营养提供参考。【方法】 试验采用2(锌源)×2(锌添加水平)两因子完全随机设计，2种锌源分别为无机硫酸锌和中等螯合强度蛋白锌，2种锌添加水平分别为30和60 mg/kg，共4个试验组；另设1个满足肉鸡锌需要量的对照组。选取320只61日龄雪山草鸡，随机分配到5个组中，每个处理8个重复，每个重复8只鸡。预试期7 d，正试期28 d，均在高温应激条件下进行。分别在试验第14(75日龄)和28(89日龄)天时采集饲料样、粪样和血样，用于测定肉鸡的生长性能、养分表观消化率和血清生化指标。【结果】 ①锌源、锌添加水平及两因子互作对高温应激肉鸡的生长性能均无显著影响(P＞0.05)。②与对照组相比，饲粮中添加锌显著提高了肉鸡粗蛋白质和粗脂肪的表观消化率(P＜0.05)。锌源对干物质的消化率有显著影响，在锌源主效应上，与饲粮中添加无机硫酸锌相比，添加中等螯合强度蛋白锌显著降低了高温应激肉鸡的干物质表观消化率(P＜0.05)。③与对照组相比，饲粮中添加锌显著提高了试验第14天时肉鸡血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白含量(P＜0.05)，以及显著提高了试验第28天时肉鸡血清中总蛋白和白蛋白含量(P＜0.05)。锌源对试验第14天时肉鸡血清中总蛋白和白蛋白含量有显著影响(P＜0.05)；锌水平对试验第14天时肉鸡血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白含量，以及试验第28天时肉鸡血清中总蛋白和白蛋白含量有显著影响(P＜0.05)；锌源×锌水平交互对试验第14天时肉鸡血清中总蛋白含量和试验第28天时肉鸡血清中白蛋白含量均有显著影响(P＜0.05)，其中饲粮中添加60 mg/kg中等螯合强度蛋白锌作用效果最佳。④在锌源、锌水平和锌源×锌水平互作效应上，饲粮中添加锌对高温应激肉鸡血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性均无显著影响(P＞0.05)。⑤与对照组相比，饲粮中添加锌显著提高了试验第14天时肉鸡血清中总胆固醇和高密度胆固醇含量，显著降低了试验第28天时肉鸡血清中总胆固醇和低密度胆固醇含量(P＜0.05)。锌水平对肉鸡血清中总胆固醇、高密度胆固醇和低密度胆固醇含量均有显著影响(P＜0.05)。【结论】 在高温应激条件下，饲粮中添加锌虽然没有显著改善肉鸡的生长性能，但对肉鸡粗蛋白质和粗脂肪的表观消化率产生了显著影响，并对高温应激肉鸡血清蛋白质和脂代谢指标产生有益影响，有助于维持肉鸡生理功能的稳定性。

【目的】 探讨黄芪、甘草、苦豆子3种中草药水提物复合制剂对幼龄滩羊瘤胃发酵参数及细菌组成的影响。【方法】 试验采用单因素设计，选择40只3月龄、体重相近且健康的幼龄滩羊，随机分为4组：对照组(k0)、试验1组(s1)、试验2组(s2)和试验3组(s3)，分别饲喂含有0、0.50%、1.00%和1.50%的中草药水提物复合制剂的基础饲粮，每组10只，试验预试期10 d，正试期60 d。经口腔采集瘤胃液，测定pH、氨态氮(NH₃-N)、挥发性脂肪酸等相关瘤胃发酵参数，利用高通量测序技术测定瘤胃细菌的多样性，并借助测序平台分析瘤胃主要差异细菌属与瘤胃发酵参数的相关性。【结果】 各组间瘤胃液总挥发性脂肪酸(TVFA)、异丁酸、异戊酸、戊酸、NH₃-N及pH均无显著变化(P＞0.05)。与对照组相比，试验1、2组的乙酸、丁酸比例无明显变化(P＞0.05)，试验3组瘤胃液乙酸比例明显提高(P＜0.05)、丁酸比例明显降低(P＜0.05)，试验1、2、3组瘤胃液中丙酸比例明显降低(P＜0.05)，乙丙比明显提高(P＜0.05)。从瘤胃细菌多样性分析可以看出，在门水平，与对照组相比，试验2、3组的厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度明显降低(P＜0.05)，试验2组的螺旋体(Spirochaetota)相对丰度明显降低(P＜0.05)，试验1、2、3组的髌骨菌门(Patescibacteria)相对丰度明显降低(P＜0.05)；在属水平，与对照组相比，试验1组的新月形单胞菌属(Selenomonas)相对丰度明显提高(P＜0.05)，试验1和2组的密螺旋体属相对丰度明显降低(P＜0.05)。相关性分析发现，瘤胃液纤维杆菌属(Fibrobacter)与乙酸比例、乙丙比呈显著正相关，与丙酸比例呈显著负相关，理研菌属(Rikenellaceae_RC9_gut_group)与戊酸比例呈显著正相关，密螺旋体属与pH呈显著负相关(P＜0.05)。【结论】 在饲粮中添加浓度为0.50%中草药水提物复合制剂，可调整幼龄滩羊瘤胃挥发性脂肪酸的比例，改善瘤胃细菌菌群多样性，一定程度提高瘤胃纤维降解菌(如纤维杆菌属)的相对丰度，明显提高乳酸抑制菌(如新月形单胞菌属)的相对丰度，明显降低半纤维降解菌(如密螺旋体属)的相对丰度，更适于幼龄滩羊机体生长需要。

【目的】 研究断奶仔猪肠道古菌菌群结构功能，分析古菌与断奶仔猪腹泻的相关性，为防治断奶仔猪腹泻提供理论依据。【方法】 选取同批次24日龄健康断奶仔猪(H组)和腹泻断奶仔猪(D组)各32头，采集粪便后通过16S rRNA基因测序分析两组粪便样本古菌菌群结构，使用PICRUSt2软件预测肠道古菌功能，分析差异古菌与断奶仔猪腹泻的相关性。【结果】 健康和腹泻断奶仔猪腹泻评分差异显著(P＜0.05)。广古菌门(Euryarchaeota)、泉古菌门(Crenarchaeota)和奇古菌门(Thaumarchaeota)为健康和腹泻仔猪优势古菌菌门；健康仔猪优势菌属为甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)、Euryarchaeota_norank和甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)。腹泻仔猪优势菌属为Euryarchaeota_norank、甲烷八叠球菌属和甲烷短杆菌属。腹泻仔猪菌群多样性和丰富度高于健康仔猪，且健康和腹泻断奶仔猪的古菌菌群结构和功能差异显著(P＜0.05)，古菌菌群结构差异主要体现在甲烷八叠球菌属、Euryarchaeota_norank、恐硫球菌属(Sulfophobococcus)、Nitrosarchaeum、热网菌属(Pyrodictium)等菌属上；古菌菌群功能差异主要体现在脂多糖的生物合成、氨基酸生物合成、抗原处理和表达等通路上。相关性分析发现，甲烷八叠球菌属、恐硫球菌属、Euryarchaeota_norank、甲烷暖球菌属(Methanocaldococcus)、火球菌属、甲烷卵圆形菌属(Methanocalculus)和Nitrosarchaeum的相对丰度与断奶仔猪腹泻均显著相关(P＜0.05)。【结论】 健康和腹泻断奶仔猪肠道古菌菌群结构和功能存在显著差异，腹泻断奶仔猪Euryarchaeota_norank相对丰度较高，而甲烷八叠球菌属相对丰度较低，Euryarchaeota_norank、甲烷八叠球菌属和恐硫球菌属与断奶仔猪腹泻存在相关性。

【目的】 试验旨在以青贮的方式提高柠条的消化利用率，探究柠条青贮对奶牛瘤胃干物质降解率和发酵性能的影响，为反刍动物提供一种潜在的饲料资源。【方法】 将新鲜刈割的柠条分为2组：鲜样组和青贮组，每组9个重复，每个重复1 000 g，青贮30 d后测定柠条的营养成分及青贮品质。将烘干后的样品，按照10 g/份分别称取18份，测定柠条在奶牛瘤胃发酵2、4、8、24、48和72 h的尼龙袋干物质降解率；再按照0.5 g/份分别称取18份样品，测定柠条在体外发酵2、4、8、24、48和72 h的发酵参数。【结果】 青贮组柠条的干物质、粗蛋白质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量均显著低于鲜样组(P＜0.05)。柠条青贮30 d后pH为4.51，氨态氮含量为5.12 g/kg，乳酸含量为14.53 mmol/g，乙酸含量为8.45 g/kg。鲜样组柠条的尼龙袋干物质降解率在奶牛瘤胃发酵2、4、8、24和48 h时显著低于青贮组(P＜0.05)。奶牛瘤胃体外发酵参数结果显示，青贮组柠条的体外干物质降解率、产气量、乙酸、丙酸和总挥发性脂肪酸含量均显著高于鲜样组(P＜0.05)；在体外发酵24、48和72 h时青贮组柠条的氨态氮和甲烷含量均显著高于鲜样组(P＜0.05)。【结论】 青贮可有效降低柠条的粗纤维含量，有效提高柠条的奶牛瘤胃干物质降解率、体外产气量、挥发性脂肪酸及氨态氮含量。

【目的】 本试验旨在探究高精料饲粮中添加苦豆子生物碱对杜蒙羔羊生长性能和血液指标的影响。【方法】 试验选用32只体重(25.76±2.35) kg的杜蒙羔羊，随机分成4组，每组8只。各试验组基础饲粮相同，均为精粗比7∶3的高精料饲粮，其中对照组饲喂基础饲粮；Ⅰ组添加0.2%苦豆子；Ⅱ组添加0.121 g/kg苦豆子生物碱(低剂量碱组)；Ⅲ组添加0.169 g/kg苦豆子生物碱(高剂量碱组)。预饲期为15 d，正式试验期60 d，试验羔羊单笼饲养，自由采食。试验期间统计每只羊每天的采食量，在正式试验第0、30、60天对试验羔羊空腹称重，计算生长性能指标；试验第60天羔羊称重后颈静脉采血，测定血清生化指标。【结果】 试验0～30 d，Ⅰ和Ⅱ组羔羊平均日增重显著高于对照组和Ⅲ组(P＜0.05)；试验30～60 d，Ⅱ组羔羊平均日增重和日采食量显著高于Ⅲ组(P＜0.05)；试验0～60 d，Ⅱ组羔羊平均日增重显著高于Ⅲ组(P＜0.05)。试验第60天，与Ⅲ组相比，Ⅰ、Ⅱ组羔羊血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性显著降低(P＜0.05)；Ⅱ组羔羊血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量显著升高(P＜0.05)；与对照组相比，Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组羔羊血清葡萄糖(GLU)含量均显著降低(P＜0.05)，Ⅱ组羔羊血清免疫球蛋白M(IgM)含量极显著升高(P＜0.01)，且Ⅱ组血清IgA含量显著高于Ⅲ组(P＜0.05)。【结论】 本试验条件下，高精料饲粮中添加0.121 g/kg苦豆子生物碱可提高杜蒙羔羊的生长性能、缓解肝脏损伤、降低血糖以及调节体液免疫功能。

【目的】 探讨不同产蛋阶段山麻鸭的卵泡发育、促性腺激素水平、抗氧化能力及卵泡自噬相关基因的变化规律，为开发延长蛋禽产蛋期新技术奠定研究基础。【方法】 采用单因素完全随机试验设计，选取产蛋正常的产蛋高峰期(25周)和产蛋后期(70周)的龙岩山麻鸭各84只，随机各分为6个重复，每个重复14只。饲喂同一玉米-豆粕型基础饲粮，试验期8周。于第8周末，随机从每个重复选取3只体况良好、产蛋正常的蛋鸭采血、屠宰取样，检测各项血液生化指标及卵巢发育相关指标。【结果】 与产蛋高峰期山麻鸭相比，①产蛋后期山麻鸭的小黄卵泡数量、小黄卵泡指数及平均小黄卵泡重均显著降低，闭锁卵泡重量显著增加(P＜0.05)。②产蛋后期山麻鸭血浆中卵泡刺激素(FSH)水平显著降低(P＜0.05)；小黄卵泡的谷胱甘肽过氧化物酶和总超氧化物歧化酶活性显著降低、丙二醛水平显著升高，此外，闭锁卵泡的谷胱甘肽过氧化物酶和总超氧化物歧化酶活性显著降低(P＜0.05)。③产蛋后期山麻鸭卵泡中促卵泡素受体(FSHR) mRNA表达水平降低，叉头转录因子1(FOXO1)被激活并调控自噬相关基因(选择性自噬受体(SQSTM1)和beclin 1(BECN1)下调)(P＜0.05)。【结论】 山麻鸭进入产蛋后期，由于氧化应激增加，卵泡中FSH含量及敏感性降低，激活FOXO1调控卵泡颗粒细胞自噬，抑制卵泡发育。

【目的】 本试验旨在研究饲粮代谢能水平对1～42日龄盐津乌骨鸡肠道发育及盲肠微生物多样性的影响，为盐津乌骨鸡雏鸡的科学养殖提供参考。【方法】 将200只健康、体重相近的1日龄盐津乌骨鸡随机分为5个处理，每个处理5个重复，每个重复8只鸡，分别饲喂11.40、12.00、12.60、13.20和13.80 MJ/kg 5个代谢能水平的饲粮，42日龄时，每个重复取1只鸡屠宰，分离各肠段并测定其长度和重量，取盲肠内容物利用Illumina NovaSeq高通量测序平台分析盲肠菌群多样性。【结果】 11.40和12.00 MJ/kg组盐津乌骨鸡平均盲肠长度显著高于13.20和13.80 MJ/kg组(P＜0.05)；11.40 MJ/kg组盐津乌骨鸡直肠的绝对质量和相对质量均显著高于12.60和13.80 MJ/kg组(P＜0.05)；饲粮代谢能水平对盐津乌骨鸡盲肠微生物Alpha多样性指数均无显著影响(P＞0.05)，11.40 MJ/kg组微生物群落结构与12.60、13.20和13.80 MJ/kg组有明显差异；门水平上，5组盐津乌骨鸡盲肠微生物共有的优势菌门有厚壁菌门、拟杆菌门和脱硫杆菌门，12.00 MJ/kg组盲肠蓝藻菌门相对丰度显著高于11.40、12.60和13.80 MJ/kg组(P＜0.05)；属水平上，5组盐津乌骨鸡盲肠优势菌属有粪便菌属、拟杆菌属、另枝菌属和未分类颤螺旋菌科，11.40和12.60 MJ/kg组[瘤胃球菌属]_torques_group属相对丰度显著高于13.20和13.80 MJ/kg组(P＜0.05)。【结论】 在本试验条件下，代谢能水平为13.20和13.80 MJ/kg会在一定程度上抑制盐津乌骨鸡雏鸡盲肠和直肠的发育，并抑制部分致病菌的生长；饲粮代谢能水平对盐津乌骨鸡盲肠微生物Alpha多样性影响较小，但会影响盲肠微生物群落结构，并引起微生物优势菌群及其相对丰度的变化。

【目的】 全面评估发酵象草作为猪饲料的营养价值。【方法】 采用气相色谱质谱联用技术(GC-MS)分析发酵象草的代谢产物，并将不同水平发酵象草与木薯、鱼露组合添加到猪基础饲粮中，进行生猪喂养试验。对照组猪饲喂基础饲粮，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组猪分别饲喂发酵象草添加比例为0、2%、3%、4%、6%、9%的饲粮，喂养28 d。试验结束后，统计猪生长性能，检测血清生化指标。【结果】 ①与象草相比，发酵象草共有121个差异代谢物，主要为糖类、氨基酸类和脂肪酸类，其中92个含量上调，松三糖、天冬氨酸、谷氨酸、肌醇、蛋氨酸和N-乙酰-鸟氨酸含量上调1 000倍以上。发酵象草与象草共有11条代谢通路差异极显著(P＜0.01)。②动物试验结果显示，与对照组相比，除Ⅱ组猪血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)含量显著升高外(P＜0.05)，其余各组血清生化指标与对照组均无显著差异(P＞0.05)。Ⅱ组猪血清总蛋白(TP)、TC、LDLC和白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)含量/活性均显著高于其他组(P＜0.05)。饲养试验期间，所有试验组猪腹泻率均为0。【结论】 象草发酵后氨基酸类、糖类和脂类代谢产物含量明显上升，营养价值明显提升；发酵象草可替代猪部分基础饲粮，降低脂肪沉积。饲粮中添加2%发酵象草综合生产效益最佳。

甲烷是温室气体的重要组成，而反刍动物生产是甲烷排放的重要源头。近年，反刍动物甲烷减排研究已成为热点。如何安全高效地降低反刍动物甲烷排放对于推进畜牧业实现可持续发展和环境友好至关重要，并在提高饲料转化率、减少环境污染以及提升反刍动物生产性能方面具有重要作用。为了助推畜牧业绿色发展，作者从反刍动物甲烷产生方式出发，阐述了调整饲粮结构(包括饲粮精粗比例、饲料原料质量、饲料原料搭配等)、优化饲养管理(包括改善饲养环境、改变放牧方式以及对饲料原料进行加工处理等)、优选适宜品种和生理状态动物(选择低甲烷排放品种或生理状态个体)以及利用植物次级代谢产物(如单宁、皂苷和精油等)、微生态制剂(如酵母菌、乳酸菌和枯草芽孢杆菌等微生物)、有机酸(如苹果酸、延胡索酸和单宁酸等)、无机化合物(3-NOP)以及藻类(海藻和微藻)等多种减排措施，总结了各项措施在降低甲烷排放方面所取得的具体效果，并寻求更加适合的减排方案。在对文献进行综述的基础上，提出了甲烷减排的具体措施与建议，希望能够为未来相关领域深入研究提供参考，同时也为生产中降低甲烷排放提供借鉴经验。

【目的】 本研究旨在揭示饲粮添加嗜酸乳杆菌后生元(Lactobacillus acidophilus post-biotic,LAPB)对初产蛋鸡生产性能、血液指标和鸡蛋品质的影响。【方法】 试验采用单因子试验设计，选取216只23周龄健康海兰褐蛋鸡，随机分入3个处理组，每处理6个重复，每重复12只鸡。对照组饲喂基础饲粮，试验组分别饲喂添加0.1%和0.2% LAPB的基础饲粮。预饲1周，正式试验期8周，每天记录产蛋情况，每周结料，计算生产性能。在第4和8周，每重复采集5枚鸡蛋，测定鸡蛋品质。试验结束时，每重复随机选取1只蛋鸡，采集血样，测定血常规和血清生化指标。【结果】 与对照组相比，饲粮添加0.1%或0.2% LAPB增加了初产蛋鸡的平均蛋重、平均日产蛋重(P＜0.05)，降低了料蛋比(P＜0.05)，提高了蛋黄颜色、浓稀蛋白比和蛋白高度(P＜0.05)，对血常规指标无影响(P＞0.05)，增加了血清中总蛋白、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量(P＜0.05)；其中，0.1%添加水平增加了蛋鸡血清肌酐含量(P＜0.05)，降低了谷草转氨酶活力(P＜0.05)。【结论】 饲粮添加0.1%或0.2% LAPB可有效改善初产蛋鸡的生产性能和鸡蛋品质，并且能调节脂肪代谢，增强肝肾健康、机体免疫力和抗氧化性能，推荐使用量为0.1%。

【目的】 试验旨在对糖渣和酱油渣进行营养价值评定，测定其在肉鸭中的营养物质消化率、代谢能和回肠氨基酸消化率。【方法】 代谢能及养分消化率采用排空-强饲法测定，共选取24只肉鸭，随机分为糖渣组和酱油渣组，每组12个重复，每重复1只鸭，强饲量为60 g，排空和集粪时间均为48 h，收集肉鸭粪便样品，测定干物质、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量和总能。使用无氮饲粮法和回肠末端法测定回肠氨基酸消化率，选取60只肉鸭，随机分为糖渣组、糖渣无氮饲粮组、酱油渣组和酱油渣无氮饲粮组，每组5个重复，每重复3只鸭，适应期3 d后分别饲喂试验饲料，4 h后统一屠宰取回肠内容物，测定氨基酸含量。【结果】 糖渣中干物质含量为89.70%、粗蛋白质为21.98%、总能为26.47 MJ/kg；酱油渣中干物质含量为89.53%，粗蛋白质含量为26.65%，总能为24.06 MJ/kg。代谢试验结果表明，糖渣和酱油渣在肉鸭中的表观代谢能分别为18.09和8.59 MJ/kg，干物质消化率分别为57.46%和44.61%，粗脂肪消化率分别为84.88%和84.43%。回肠氨基酸消化率结果显示，糖渣和酱油渣试验中表观回肠消化率最高的是赖氨酸，分别为92.75%和55.60%。【结论】 糖渣和酱油渣粗蛋白质含量高，氨基酸含量和组成丰富，肉鸭对粗脂肪和粗蛋白质利用率较高，可以开发作为肉鸭饲料原料应用在生产中。

葡萄残渣是葡萄酿酒过程中的副产品，含有丰富的蛋白质、粗脂肪、粗纤维等营养成分，及多酚类化合物、葡萄籽油、齐墩果酸和膳食纤维等活性物质，且产量大，易于收集。近些年来，为缓解中国饲料短缺问题，葡萄残渣作为一类天然的非常规饲料原料和添加剂被广泛运用到畜禽饲料生产中，不仅可以促进畜禽生长发育，提高畜禽机体健康和畜产品品质，同时还可以对农副产品资源有效开发利用，解决环境污染和资源浪费问题。但在实际生产过程中，受到葡萄产地、品种和饲料加工技术等因素限制，葡萄残渣作为饲料原料和添加剂大规模生产并投入使用受到限制。羊是中国的主要经济动物之一，近些年中国羊产业规模稳速增加，但随着玉米、豆粕等饲料原料价格持续上涨，使羊养殖成本也不断增加，开发羊用非常规饲料意义重大。因此，作者对葡萄残渣的营养成分含量、特殊活性物质及其生物学功能、饲料化利用技术方法、利用局限性以及在羊生产中的应用进行了系统性的梳理，为葡萄残渣在羊饲料中的合理开发与应用提供参考。

【目的】 体内超数排卵(以下简称超排)是现代奶牛繁育关键技术之一，对于奶牛群体遗传改良具有重要意义。试验旨在揭示超排反应性状在荷斯坦牛群体中的表型规律及主要影响因素，以期为奶牛超排反应性状的遗传规律解析提供表型研究基础。【方法】 本研究收集了宁夏和内蒙古地区共9个牧场2021年3月至2023年8月间1 842头荷斯坦牛的1 855条体内超排记录，对总胚胎数、可移植胚胎数、可移植胚胎率、未受精卵数、未受精卵率、退化胚胎数和退化胚胎率共7个性状进行了统计分析，使用SAS 9.2软件中Mixed程序分析了非遗传因素对7个性状的影响，并使用SPSS 21.0软件的双变量相关程序计算了7个超排反应性状间的Pearson相关系数。【结果】 本研究群体中，荷斯坦牛体内超排生产的总胚胎数、可移植胚胎数和可移植胚胎率的平均值分别为9.49枚、6.01枚和61.95%，未受精卵数和未受精卵率的平均值分别为1.50枚和17.16%，退化胚胎数和退化胚胎率的平均值分别为2.29枚和23.34%。各超排反应性状间存在不同程度的表型相关，相关系数介于－0.629～0.882之间。除可移植胚胎率外其余性状均受季节因素的显著影响(P＜0.05)；激素类型及剂量对7个超排反应性状均有显著影响(P＜0.05)；冻精使用剂量显著影响了可移植胚胎数、退化胚胎数、未受精卵数和未受精卵率(P＜0.05)；供体月龄仅对可移植胚胎率和退化胚胎率有显著影响(P＜0.05)。【结论】 中国荷斯坦牛的超排反应性状表型与世界平均水平相近，并受到多种非遗传因素的影响。研究结果为进一步对奶牛超排反应性状进行遗传分析奠定了模型基础。

全基因组选择(genome-wide selection，GS)是一种基于基因组数据的育种方法，通过分析遗传标记和性状的关系，预测个体的遗传值和表型值，从而实现精准选育。随着高通量测序技术的发展，全基因组选择成为了现代畜禽育种的重要手段，在山羊育种中展现了巨大的潜力和应用前景。研究人员通过全基因组选择精确地评估山羊的繁殖性能，提高繁殖效率；同时通过筛选优良基因型，改良山羊的生长发育、肉品质等性状，以获得更高的经济效益。作者主要介绍了全基因组选择的原理和方法，并针对山羊的繁殖性能、生长性状和肉品质等关键性状的应用研究展开论述；讨论了全基因组选择在山羊育种中的优势和挑战，并对全基因组选择在山羊育种中的应用与未来发展趋势进行了总结与展望，以期为山羊育种的进一步发展提供一定的参考和理论支撑。

【目的】 探究Obg样ATP酶1(Obg-like ATPase 1，Ola1)对小鼠早期胚胎发育的影响。【方法】 采用体外受精技术获取小鼠合子并进行胚胎体外发育培养，利用电转siRNA干扰技术敲低Ola1基因，检测Ola1基因干扰效率，并统计卵裂率和囊胚率；通过免疫荧光和TUNEL法检测胚胎的DNA损伤情况和早期凋亡情况；利用实时荧光定量PCR检测胚胎多能性和凋亡相关基因的转录水平。【结果】 与对照组相比，敲低Ola1基因后，小鼠胚胎中Ola1基因相对表达量极显著降低(P＜0.01)，成功实现小鼠胚胎中敲低Ola1基因表达。敲低Ola1基因后，早期胚胎卵裂率与对照组相比无显著差异(P＞0.05)，但囊胚率极显著低于对照组(P＜0.01)，γ-H2A.X荧光强度和囊胚凋亡率极显著高于对照组(P＜0.01)，表明敲低Ola1基因引起早期胚胎体外发育受阻。实时荧光定量PCR结果显示，与对照组相比，敲低Ola1基因后，早期胚胎的多能性相关基因性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和多潜能性基因(Nanog)表达量极显著降低(P＜0.01)，促凋亡基因B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase3)表达量显著或极显著上调(P＜0.05；P＜0.01)，抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达量极显著下调(P＜0.05)。【结论】 Ola1可能通过调控早期胚胎的多能性相关基因表达，参与DNA损伤和早期胚胎凋亡过程，从而影响早期胚胎发育潜力。

近年来，基因编辑技术作为一种基因组修饰工具迅速发展，包括锌指核酸酶(zinc-finger nucleases，ZFNs)、转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases，TALENs)和成簇规则间隔短回文重复序列相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats associated protein，CRISPR-Cas)系统在内的基因编辑工具使生物体的基因组DNA靶向修饰成为可能，尤其是CRISPR-Cas9系统的出现，加速了基因编辑技术的发展，成为基础科学和应用科学中的革命性工具。与ZFNs和TALENs技术相比，CRISPR-Cas9系统因其高灵活性、灵敏度、特异性和成本效益而被广泛使用。CRISPR-Cas9基因编辑技术通过靶向特定序列精确地切割DNA，并通过在特定基因组位点产生双链断裂来添加、去除或替换核苷酸等方式在位点引入特异性修饰对畜牧生产的不同方面做出了重大贡献，产生了改善牲畜生产和具有抗病性等多种动物模型，以研究畜禽关键基因功能，加速性状改良。作者主要阐述了CRISPR-Cas9系统的机制与功能及其在牛、羊生产中的应用进展，以期为今后的相关研究提供参考。

【目的】 酃县白鹅是湖南地区优秀的地方鹅种，为了解酃县白鹅的保种效果，对保种场各家系进行保种工作的评估。【方法】 从酃县白鹅保种场的42个家系中各选取1只公鹅，翅静脉采血，提取DNA，进行全基因组重测序。基于保种场42只酃县白鹅公鹅的重测序数据，对其群体遗传结构和遗传多样性进行分析与评价。【结果】 检测到采样群体的SNPs位点14 270 647个，经数据质控和过滤筛选出13 696 453个SNPs位点。主成分分析(PCA)结果发现，42只公鹅个体可以明显聚为3个亚群；通过群体渗透分析发现，3个亚群之间未发生明显的杂化现象(K=3)。亚群1和亚群3的群体分化指数(Fst值)为0.0842。42只酃县白鹅共检测到832条连续性纯合片段(ROH)，ROH片段长度都集中在0～2 Mb区间；基于ROH得到的近交系数F_ROH值为0.0130。群体的期望杂合度为0.2918，观测杂合度为0.2968，群体近亲系数(Fis)为0.036，多态信息含量(PIC)为0.266，基因多样性指数(Nei)为0.336。【结论】 酃县白鹅保种场的鹅遗传多样性比较丰富，群体近交程度比较低，观测杂合度略高于期望杂合度，并无显著性差异，说明群体处于平衡状态，但部分亚群出现了中度遗传分化，后续保种过程中要使这些亚群进行杂交，以减少酃县白鹅遗传分化的程度。

【目的】 分析云南纳帕海国际重要湿地H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)的遗传进化和分子特征，掌握H9N2亚型AIV在野禽中的流行特点，为禽流感疫情防控提供数据支持。【方法】 采集2022―2023年云南省香格里拉纳帕海国际重要湿地野禽粪样及其周边家禽喉头、泄殖腔和环境水样，经尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚分离病毒，结合HA试验和RT-PCR扩增鉴定AIV亚型。利用MBTuni-12/13引物同时扩增H9N2亚型AIV毒株的8个基因(HA、NA、M、PB2、NS、NP、PA及PB1)节段，利用二代测序获取全基因组序列，并分析遗传进化关系及关键氨基酸突变位点。【结果】 分离到的4株野鸟源H9N2亚型AIV的HA、NA基因源自Y280-like亚系，M、PB2基因为G1-like亚系，NS、NP、PA、PB1基因为F/98-like亚系，表明4株分离株为多种亚型的重组毒株，重组模式与2013年以后在中国流行的G57基因型一致。序列相似性分析结果显示，4株H9N2亚型AIV分离株内部基因与H7N9、H5N6、H5N2等亚型AIV相似性较高，遗传多样性特征突出。HA蛋白裂解位点均符合低致病性禽流感特征，获得了多个可增加跨种感染风险及与哺乳动物致病力增强相关的氨基酸突变位点，包括A198T、Q234L、N166D(HA)，I292V、A558V(PB2)，I368V、L13P(PB1)，N30D、T215A(M1)，以及P42S(NS1)等。4株野鸟源H9N2亚型AIV毒株具有家禽源同亚型毒株特征，野禽源AIV可能源于家禽。【结论】 从云南纳帕海国际重要湿地分离到的4株野鸟源H9N2亚型AIV可能是由家禽传播的多源重配病毒，属于G57基因型，且具有多个适应哺乳动物宿主相关的氨基酸突变位点。

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是猪格拉泽氏病(Glasser’s disease)的病原，感染可致猪浆液纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎等病症。Hps血清型众多，不同菌株之间存在抗原异质性和致病力差异。Hps感染致病过程涉及多种毒力因子，如生物被膜、脂寡糖、荚膜、菌毛等结构物质，以及细胞致死膨胀毒素、神经酰胺酶和α-2,3-唾液酸转移酶、外膜蛋白等功能物质。多种毒力因子参与Hps对宿主细胞的黏附、入侵、定植，进而引起炎症反应，包括穿越血脑屏障引起脑炎，最终对宿主细胞和组织器官造成损伤。Hps具有多种复杂的免疫逃避机制，如突破上皮细胞屏障、降解黏膜表面sIgA、抵抗巨噬细胞吞噬和补体的杀伤作用等，从而帮助其抵御宿主免疫系统的杀伤。笔者综述了Hps不同类型毒力因子及其在致病过程中的作用，总结了Hps的免疫逃避机制研究进展，以期为该病的有效防控及新型疫苗研发提供相关新信息。

【目的】 通过原核表达系统表达小鼠细小病毒(Minute virus of mice,MVM)的非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)，并制备其多克隆抗体，为MVM NS1蛋白生物学功能研究及相关检测方法的建立提供研究材料。【方法】 通过同源重组将MVM NS1基因与质粒pET-N-His-C-His进行连接构建重组质粒，将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达，通过不同诱导条件筛选并纯化出无需复性的可溶性蛋白。将纯化后的重组蛋白NS1免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，通过间接ELISA法测定抗体效价。采用Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定重组蛋白的表达及免疫原性。【结果】 SDS-PAGE分析显示，诱导表达的重组蛋白大小为76 ku，在诱导剂(IPTG)浓度为0.6 mmol/L、诱导温度为28 ℃条件下表达效果最佳。间接ELISA结果显示，制备的多克隆抗体效价为1∶32 000。Western blotting和IFA检测结果显示，制备的NS1多克隆抗体可与NS1蛋白及MVM特异性结合。【结论】 本研究成功表达并纯化获得MVM NS1重组蛋白，并制备了免疫原性良好的多克隆抗体，为进一步研究NS1蛋白生物学功能及其在MVM复制感染机制中的作用、MVM临床诊断方法的建立奠定了基础。

与传统疫苗相比，mRNA疫苗具有易于编译、免疫原性高、安全性强、生产成本低等优点，而将mRNA高效递送至细胞并成功表达，是mRNA疫苗发挥作用的关键环节，也是mRNA疫苗研发的主要瓶颈与痛点。因此筛选经济高效的核酸递送系统对于mRNA疫苗研发至关重要。目前，关注较多的核酸递送系统主要包括物理递送、纳米脂质体递送、聚合物递送、外泌体递送和阳离子乳剂递送等。物理递送主要是通过物理方法使裸mRNA直接穿过细胞膜进入细胞，纳米脂质体、聚合物、外泌体和阳离子乳剂等是以自身作为递送载体保护mRNA，从而提高递送效率、减少免疫反应。笔者基于mRNA疫苗最新研究进展，总结概述了不同递送方法的应用前景和局限性，并对其研究前景进行展望，以期为新型递送系统研发提供理论基础，促进mRNA疗法的临床应用，为更多疾病的预防和治疗提供新的mRNA疫苗解决方案。

【目的】 了解牛环曲病毒(Bovine torovirus，BToV)在云南部分地区牛群中的流行及其S基因遗传进化情况。【方法】 采集云南省内13个地区15个牛场不同年龄牛的粪便样品655份，利用RT-PCR方法检测BToV，并对其中6株BToV阳性样品进行S基因扩增、克隆、测序及遗传进化分析。【结果】 RT-PCR检测结果显示，655份牛粪便样品检出71份BToV阳性，总阳性率为10.8%；其中腹泻样品阳性率为21.2%(59/278)，非腹泻样品阳性率为3.2%(12/377)；1周龄、1周龄～1月龄、1～6月龄和1岁及上样品的阳性率分别为15.0%(3/20)、17.7%(20/113)、14.0%(45/321)和1.5%(3/201)。相似性分析结果显示，6条BToV S基因序列相似性为96.0%～99.8%，且与原始毒株Breda1的相似性为94.7%～96.0%，与国内流行毒株的相似性为95.2%～99.7%。遗传进化分析结果显示，6条S基因均与原始毒株Breda1不在同一大分支，与国内四川、河南毒株及土耳其毒株形成一个大分支，表明云南省BToV毒株与目前国内流行毒株一致，亲缘关系近。氨基酸突变位点分析结果显示，S基因存在少量独特的氨基酸突变位点。重组分析结果显示，BTOV-China/YN03-2021、BTOV-China/YN01-2021和BTOV-China/YN06-2022为重组序列,其中重组序列BTOV-China/YN06-2022得分最高，重组区域为1 438～1 609 bp区间，主要亲本为BTOV-China/YN05-2021；重组序列BTOV-China/YN03-2021，重组区域位于1 668～3 569 bp区域，主要亲本为土耳其毒株BToV-HT2-TUR(MG957146.1)；重组序列BTOV-China/YN01-2021，重组区域位于261～2 552 bp，主要亲本为土耳其毒株BToV-HT2-TUR(MG957146.1)。基因选择压力分析结果显示，BToV S基因的进化方式主要以中性选择为主，但同时也存在净化选择和正向选择的压力影响。【结论】 本研究揭示了BToV已存在于云南省部分地区牛群体中且防控形势较严峻，可为中国研究BToV流行病学和BToV S基因遗传进化关系提供参考，同时也为云南地区制定BToV感染的防控措施提供理论依据。

【目的】 分析细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus sensu lato，Eg)增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白的生物信息学特性，以及去氢骆驼蓬碱(HM)及其衍生物(H-2-168与H-2-104)对EgPCNA蛋白含量的影响，以期治疗囊型棘球蚴病并为药物靶点的筛选奠定基础。【方法】 运用PCR扩增并克隆EgPCNA基因全长序列，采用生物信息学软件预测和分析EgPCNA蛋白相关生物学信息。利用Mega 7.0构建蛋白序列系统发育树，并运用Western blotting分析HM及其衍生物(H-2-168与H-2-104)对EgPCNA蛋白含量的影响。【结果】 EgPCNA基因全长783 bp，编码260个氨基酸，EgPCNA蛋白分子质量为28.36435 ku，等电点为4.62，脂肪指数为96.81，亲水性值为－0.015，为亲水性蛋白，无跨膜结构域。亚细胞定位预测结果显示，蛋白分布于细胞质。该蛋白含有PCNA超家族结构与PCNA保守功能结构域，二级结构主要为无规则卷曲，其次是α-螺旋，有2条可靠的B细胞抗原表位，与人和家鼠等哺乳动物的亲缘关系较远。Western blotting分析结果显示，与DMSO组相比，HM组EgPCNA蛋白表达量极显著上调(P＜0.01)，H-2-168与H-2-104组EgPCNA蛋白表达量均显著下调(P＜0.05)。【结论】 本研究成功克隆了EgPCNA全长基因。EgPCNA蛋白对细粒棘球绦虫的DNA复制和修复具有调控作用，H-2-168与H-2-104具有下调EgPCNA蛋白含量的功能。

【目的】 蜱的蜕皮发育过程与几丁质合成和水解紧密相关，而几丁质的降解主要是通过几丁质酶来完成。试验旨在分析林氏扇头蜱(Rhipicephalus linnaei)不同时期及各组织中几丁质酶RLCht1基因序列表达差异、体外异源表达RLCht1蛋白并验证其几丁质酶活性，为开发安全高效的生物杀蜱剂提供新型靶标思路。【方法】 收集不同吸血状态的各时期蜱及雌性饱血成蜱的不同组织样本用于基因差异表达分析，基于血红扇头蜱合神经节转录组中筛选出的推测的几丁质酶(putative chitinase)序列，在林氏扇头蜱中进行扩增并构建重组原核质粒，使用大肠杆菌系统表达林氏扇头蜱几丁质酶蛋白RLCht1，进行包涵体处理后使用镍柱纯化蛋白，预测RLCht1蛋白结构域；通过与3种不同荧光底物发生催化反应，检测纯化的几丁质酶RLCht1的催化活性大小及作用方式。【结果】 RLCht1基因在不同饱血状态下的各个时期及饱血雌成蜱的不同组织中均有表达，饱血若蜱阶段表达量极显著高于卵期(P＜0.01),显著高于其他时期(P＜0.05),并在饱血雌性成蜱中肠内有较高的表达量；构建了重组质粒RLCht1-pET-28a并成功表达RLCht1蛋白，经包涵体处理后在150 mmol/L咪唑洗脱下得到纯化的RLCht1蛋白，蛋白预测结果显示，RLCht1属于GH18家族几丁质酶；荧光底物酶活性检测表明，RLCht1包涵体溶解液、复性未纯化的原核蛋白、复性纯化浓缩后原核蛋白分别具有0.078与0.350 U/mL的几丁质外切酶活性及0.034 U/mL β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性。【结论】 RLCht1基因与若蜱至成蜱阶段的蜕皮活动相关，影响与免疫、消化、体液调节有关的生命活动过程。本研究在林氏扇头蜱中成功表达几丁质酶蛋白，证明了纯化的RLCht1蛋白具有几丁质催化功能，为林氏扇头蜱几丁质酶RLCht1蛋白在今后杀蜱剂开发中的应用提供了理论基础。

【目的】 通过16S rDNA测序技术分析毛滴虫感染对猕猴肠道菌群结构的影响，为临床研究利用微生物替代抗生素治疗毛滴虫病提供参考依据。【方法】 分别收集毛滴虫阳性和阴性的猕猴新鲜粪便样本各6份，通过宏基因组测序进行肠道菌群和功能基因预测分析。【结果】 与健康猕猴相比，感染毛滴虫的猕猴肠道菌群的多样性降低，菌群组成发生显著变化，拟杆菌和纤维杆菌显著减少(P＜0.05)，而弯曲菌和脱硫杆菌显著增加(P＜0.05)；肠道微生物中乳酸杆菌目(Lactobacillales)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、弯曲杆菌科(Campylobacteraceae)等在感染毛滴虫的猕猴中显著富集，而普雷沃菌9菌(Prevotella_9)、拟杆菌目(Bacteroidales)、拟杆菌门(Bacteroidota)等在健康猕猴中更丰富；Brachyspira_hampsonii、Prevotellaceae_bacterium_Marseille_P2831是猕猴毛滴虫感染的生物标记物；肠道菌群功能基因预测显示，与氨基酸的生物合成和抗生素的生物合成途径相关的微生物基因功能在毛滴虫感染的猕猴中显著降低(P＜0.05)。【结论】 毛滴虫感染猕猴可降低肠道菌群的多样性，改变了肠道微生物群的结构，降低肠道菌群的生物合成功能。

【目的】 了解内蒙古地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus，BCoV)流行毒株的全基因组特征和遗传进化情况，为有效防控BCoV感染提供参考。【方法】 本研究对疑似感染BCoV的犊牛脾脏进行宏病毒组测序和步移RT-PCR扩增，获得BCoV全基因组序列，并对其进行生物信息和遗传进化分析。利用Oligo 7.0软件设计特异性引物扩增S基因，并对其进行遗传进化、氨基酸序列变异、抗原表位预测及三级结构预测分析。【结果】 本研究从疑似感染BCoV的犊牛脾脏中成功获得大小为30 971 bp的BCoV全基因组序列，NCBI登录号为PP352170.1，该全基因组核苷酸序列与BCoV爱尔兰株ABGEB0-62相似性最高，为99.2%，并与该株亲缘关系最近，同时与BCoV法国株BCoV_2014_13和挪威株Nes_2012-01-03属于同一进化分支；扩增出的S基因核苷酸长度为4 092 bp，与BCoV爱尔兰株ABGEB0-62 S基因序列亲缘关系最近，处于同一进化分支，但核苷酸序列与BCoV内蒙古株NMG1 S基因相似性最高，为99.4%；S基因编码的氨基酸与Mebus株比对发现，有15个氨基酸变异位点(S1亚基12个，S2亚基有3个)，其中变异的氨基酸残基154、260、499-520、718、1 192、1 344位氨基酸处于抗原表位区，并导致S蛋白三级结构发生改变。【结论】 本研究利用宏病毒组测序和基因组5'-端步移RT-PCR法获得内蒙古BCoV株全基因组序列，其S蛋白抗原表位区氨基酸位点发生变异和三级结构改变，预示S蛋白抗原性发生了改变；S1亚基的多态性区域氨基酸位点的变异预示S蛋白的致病性发生变化。

【目的】 2022年吉林省某地区发现牛赤羽病疑似病例，为明确病因，对发病牛群进行诊断。【方法】 对该牛场进行流行病学调查、临床症状分析，再通过实验室组织病理学观察和血清学检测等方法进行综合诊断,将发病死亡胎牛的组织病料和发病母牛胎盘组织研磨液分别接种Vero细胞、SPF鸡胚和乳鼠鼠脑进行病毒分离。【结果】 发病母牛主要表现为流产、产死胎，胎儿先天性畸形。流行病学统计当地母牛空怀率为29%，母牛产死胎、产畸形牛的发病率为24%，感染后的母牛可正常怀孕分娩犊牛。分娩的畸形牛关节弯曲、视力障碍，部分犊牛因脑发育异常表现为神经反应迟缓；死亡胎牛出现了积水性无脑的典型病变，表现为头部畸形、脑组织发育不成型和大量脑积水，符合赤羽病的临床特征。畸形犊牛的脑组织病理学检查可见神经元发生嗜酸性坏死，小胶质细胞吞噬坏死神经元，淋巴细胞、单核细胞围裹在血管周围形成“管套”，为典型的非化脓性脑炎，符合赤羽病发病牛脑组织的病变特点。在发病死亡胎牛和母牛胎盘的组织匀浆上清和细胞培养物上清中均未检测到病毒核酸，分析可能与赤羽病病毒血症持续期短有关。发病母牛和犊牛的血清赤羽病ELISA抗体检测结果均为阳性。【结论】 诊断该地区母牛异常流产、死产和犊牛畸形为赤羽病，本研究结果为赤羽病的诊断和防控提供了试验数据和参考资料。

近年来，随着中国养猪事业的高速发展，猪流行性腹泻(PED)已成为猪群的重要传染病，PED是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的,以腹泻、呕吐、脱水为特征的急性病毒性传染病。PED主要通过呼吸道和消化道传播，哺乳仔猪最易感，死亡率可高达100%，给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV是单股正链RNA病毒，具有4个主要结构蛋白、16个非结构蛋白和1个辅助蛋白ORF3。自2010年以来，该病毒变异株传播范围不断扩大，流行趋势日益复杂，经典毒株(CV777)相关疫苗已无法提供有效保护。因此，开发更加安全、有效的疫苗已迫在眉睫。灭活疫苗安全性高，但需多次接种且保护效果不佳；弱毒疫苗免疫原性良好，但存在毒力返祖风险；亚单位疫苗不携带病毒其他蛋白结构，使用安全、价格便宜，但其免疫原性差；重组病毒活载体疫苗可诱导产生特异性免疫反应，但安全性不足；重组细菌活载体疫苗能口服刺激机体黏膜免疫，并且载体具有佐剂作用，但其免疫效率不高；转基因植物疫苗安全稳定，但表达量低且研发周期长；核酸疫苗研发周期短、灵活性高，但安全性不高、外源基因易与宿主基因重组。随着相关研究的深入，各类疫苗研究已取得重要研究成果。笔者就PED灭活疫苗、弱毒疫苗、亚单位疫苗、重组病毒活载体疫苗、重组细菌活载体疫苗、转基因植物疫苗、核酸疫苗进行综述，以期为PED的防治和新型疫苗研发提供参考。

【目的】 研究糙皮侧耳菌HXS-M1发酵复方中药对大肠杆菌致小鼠腹泻的临床治疗效果，为临床大肠杆菌性腹泻提供新的治疗手段。【方法】 通过腹腔注射大肠杆菌菌悬液(0.2 mL/只)建立小鼠腹泻模型，选取40只腹泻小鼠随机分为模型组、抗生素组(AB)、中药组(TCM)和发酵中药组(FTCM)，每组10只；另选10只健康小鼠腹腔注射生理盐水(0.2 mL/只)作为空白组。抗生素组小鼠灌胃恩诺沙星溶液(50 mg/mL)，中药组小鼠灌胃中药提取液(1.0 g/mL)，发酵中药组小鼠灌胃发酵中药提取液(1.0 g/mL)，模型组和空白组小鼠灌胃生理盐水，每天定时灌胃给药1次(0.2 mL/只)，连续灌胃给药6 d。每日记录小鼠腹泻、体重、采食量等情况；末次给药12 h后采集小鼠心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏组织，称重并统计脏器系数；收集小鼠肠道内容物进行菌落计数。【结果】 试验成功构建大肠杆菌性腹泻小鼠模型。与空白组相比，模型组小鼠腹泻率为100%，体重、平均日增重、平均日采食量、肠道中乳酸菌数量均极显著下降(P＜0.01)，肝脏指数、脾脏指数以及肠道中大肠杆菌和沙门菌数量均极显著升高(P＜0.01)。与模型组相比，抗生素和中药组小鼠腹泻率均为30%，发酵中药组小鼠腹泻率为0；抗生素组小鼠终末体重、平均日增重和平均日采食量均极显著升高(P＜0.01)，肝脏指数、脾脏指数以及肠道中大肠杆菌和沙门菌数量均极显著下降(P＜0.01)；中药和发酵中药组小鼠终末体重、平均日增重、平均日采食量和肠道中乳酸菌数量均极显著升高(P＜0.01)，料重比、肝脏指数和脾脏指数、肠道中大肠杆菌和沙门菌数量均极显著下降(P＜0.01)。【结论】 糙皮侧耳菌HXS-M1发酵复方中药可降低大肠杆菌性腹泻小鼠的腹泻率，增加平均日采食量和平均日增重，降低肝脏指数和脾脏指数以及肠道中大肠杆菌和沙门菌数量，提高乳酸菌数量，从而对大肠杆菌性小鼠腹泻产生协同保护作用，试验结果可为开发防治大肠杆菌感染致腹泻产品提供参考。

【目的】 研究番茄红素对双酚A(bisphenol A,BPA)致小鼠生殖毒性的缓解作用。【方法】 将30只昆明鼠孕鼠随机分为3组，每组10只。对照组孕鼠妊娠第1～7天灌胃生理盐水同时正常饲喂；BPA处理组孕鼠妊娠第1～7天灌胃生理盐水，妊娠第8～14天混饲500 mg/kg BPA；番茄红素处理组孕鼠妊娠第1～7天灌胃20 mg/kg番茄红素，妊娠第8～14天混饲500 mg/kg BPA，待孕鼠自然分娩，观察记录F1代小鼠存活数。F1代小鼠正常饲喂至8周剖杀，采集睾丸、卵巢组织，通过HE染色观察睾丸、卵巢组织结构变化，利用ELISA法检测F1代小鼠血清睾酮(T)、促卵泡素(FSH)、雌二醇(E₂)及黄体生成素(LH)水平；使用免疫组化法和免疫荧光法检测F1代小鼠睾丸及卵巢中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)的表达。【结果】 BPA处理后，F1代小鼠存活率为62.50%，明显低于对照组(83.65%)和番茄红素处理组(81.25%)。与对照组相比，BPA处理组F1代小鼠血清中生殖激素T、FSH、LH水平均显著降低(P＜0.05)，E₂水平显著升高(P＜0.05)；小鼠睾丸组织曲细精管中细胞排列疏松、紊乱，间质细胞数量减少、管腔变大、管壁变薄；卵巢组织中颗粒细胞过度凋亡，细胞排列疏松。与BPA处理组相比，番茄红素处理组F1代小鼠血清中T、FSH、LH水平显著升高(P＜0.05)，E₂水平显著降低(P＜0.05)；小鼠睾丸组织结构完整，生精小管内各级生精细胞排列紧密、整齐有序；卵巢组织中可见不同发育阶段的卵泡，颗粒细胞排列整齐，少量颗粒细胞发生调亡。免疫组化和免疫荧光检测结果显示，Bax、Bcl-2蛋白表达于睾丸间质细胞及卵巢颗粒细胞中。与对照组相比，BPA处理组F1代小鼠卵巢组织中Bax蛋白表达量显著升高(P＜0.05)，睾丸和卵巢组织中Bcl-2蛋白表达量均显著降低(P＜0.05)。与BPA处理组相比，番茄红素处理组F1代小鼠卵巢组织中Bax蛋白表达量显著降低(P＜0.05)，睾丸和卵巢组织中Bcl-2蛋白表达量均显著升高(P＜0.05)。【结论】 番茄红素通过缓解BPA引起的生殖激素水平紊乱，改善睾丸及卵巢结构，平衡凋亡与抗凋亡水平，从而颉颃BPA对小鼠的生殖损伤，研究结果为番茄红素的临床应用提供了试验依据。

【目的】 了解某种鸡场鸡白痢沙门菌感染情况，并对其耐药性及毒力基因情况进行分析，旨在为鸡白痢防控提供依据。【方法】 试验采集疑似患鸡白痢的病鸡肝脏病料进行沙门菌的分离培养，利用特异性引物通过PCR扩增对分离株进行菌种鉴别。使用多位点序列分型(MLST)技术获得其分子分型，利用琼脂稀释法测定分离株的最小抑菌浓度；运用二代基因测序技术分析分离株的耐药性与毒力基因特征。【结果】 本研究共分离获得5株鸡白痢沙门菌分离株，分别命名为SPNH05-1～SPNH05-5。MLST分型结果显示，5株分离株均为ST92型。药敏试验结果显示，分离株均为多重耐药，共存在2种耐药谱：氨苄西林＋萘啶酸＋磺胺异噁唑和氨苄西林＋萘啶酸＋磺胺异噁唑＋多黏菌素B。对分离株SPNH05-1、SPNH05-2进行二代基因测序，结果显示，2株分离株存在β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、磺胺类、多肽类等28种耐药基因，存在151种毒力基因，主要与沙门菌黏附、三型分泌系统、应激、毒素等有关。【结论】 本研究结果表明该种鸡场存在多重耐药鸡白痢沙门菌感染，分离株携带多种耐药和毒力基因，试验结果为该种鸡场鸡白痢净化提供参考。

【目的】 研究槲皮素对沙门菌生物被膜形成的抑制作用及其作用机制。【方法】 通过结晶紫染色法绘制沙门菌生物被膜生长曲线，测定槲皮素对沙门菌的最小生物被膜抑制浓度(MBIC)，并以此浓度槲皮素处理沙门菌，利用XTT法和扫描电镜观察沙门菌生物被膜内细菌的代谢活性和菌膜形态结构；采用苯酚-硫酸法、BCA法和紫外分光光度计检测沙门菌生物被膜胞外多糖、蛋白和胞外DNA含量；通过微生物黏附碳氢法和软琼脂平板法测定沙门菌的疏水性和运动能力。【结果】 生长曲线结果显示，沙门菌生物被膜的黏附期、聚集期、成熟期和分散期分别为0～48、48～72、72～120和120～168 h。槲皮素对沙门菌生物被膜的MBIC为256 μg/mL。在槲皮素作用下，不同时间沙门菌生物被膜内细菌的代谢活性均极显著降低(P＜0.01)。扫描电镜观察发现，槲皮素处理后，沙门菌生物被膜结构被破坏，膜状物质消失。与对照组相比，槲皮素组沙门菌生物被膜胞外多糖、蛋白和DNA含量均极显著下降(P＜0.01)；沙门菌的疏水性指数、泳动圈直径及群集运动圈直径均极显著下降(P＜0.01)。【结论】 槲皮素通过影响沙门菌生物被膜内细菌的代谢活性、降低胞外聚合物的生成、干扰沙门菌的表面疏水性和运动能力从而抑制生物被膜的形成。

【目的】 利用响应面法优化紫花地丁总黄酮的提取工艺，采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)鉴定化合物组成，并研究其抗炎活性。【方法】 用芦丁标准品测定510 nm处的吸光度，以吸光度(Y)为纵坐标，以样品浓度(X)为横坐标，建立黄酮标准曲线。紫花地丁打成粉末过100目筛网、乙醇浸泡12 h、利用超声波仪超声提取，以紫花地丁粉末与乙醇的比例(料液比)、超声提取的时间(超声时间)、所用乙醇的浓度(乙醇浓度)为考察因素，以总黄酮提取量综合评分为响应值，结合Box-Behnken响应面法优化紫花地丁总黄酮提取工艺。利用D101型大孔树脂对提取的紫花地丁总黄酮进行纯化，通过LC-MS/MS法鉴定其化合物组成。60只6周龄健康昆明种小鼠随机均分成空白组、模型组、低剂量组(150 mg/kg)、中剂量组(300 mg/kg)、高剂量组(600 mg/kg)、左氧氟沙星组(5 mg/kg)，除空白组外其余各组小鼠鼻腔滴注LPS(1 g/L，50 μL/只)建立急性肺损伤(ALI)模型，造模成功后用药干预1周(1 次/d，连续7 d)；末次给药1 h后采集血液，采血后进行麻醉、处死，采集肺脏；HE染色观察肺损伤程度，ELISA法检测小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。【结果】 料液比1∶20、提取时间22 min、乙醇浓度73%时紫花地丁总黄酮提取量最高，为25.134 mg/g。经鉴定，提取物中含37种黄酮(槲皮素、木犀草素、芹菜素等)，少量异黄酮类、糖类、香豆素类、木脂素、单萜类、倍半萜类物质。病理切片显示，各给药组与模型组相比，肺组织出血点逐渐减少、面积缩小，有不同程度恢复：高剂量组与左氧氟沙星组的肺组织在颜色与形态上见轻微损伤：低、中剂量组小鼠肺组织相比模型组损伤程度减轻，但仍有一定程度水肿和部分出血点。ELISA结果表明，经给药后，低、中、高剂量组的TNF-α、IL-β、IL-6、IL-10水平相比模型组均有不同程度的降低，除低剂量组小鼠血清中TNF-α、IL-β水平相比于模型组无显著差异，其余各给药组均有明显降低(P＜0.05)；高剂量组小鼠血清中各炎症因子水平与左氧氟沙星组差异较小，均略高于空白组水平。【结论】 利用响应面法有效提高了紫花地丁总黄酮的提取量，通过小鼠急性肺损伤模型证明了紫花地丁总黄酮能够改善小鼠急性肺损伤，降低血液中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平，紫花地丁总黄酮具有良好的抗炎作用。

【目的】 筛选抗奶牛热应激的中药组方及适用剂量，为中药抗奶牛热应激提供参考。【方法】 以“补气养血，养阴生津”兼顾“清热凉血”为原则，组建中药组方TCM1、TCM2和TCM3。选择产奶量、乳指标相似的奶牛40头，随机分为TCM1、TCM2、TCM3和对照组(CON),每组10头。CON组饲喂常规饲粮，其他各组分别饲喂添加TCM1、TCM2和TCM3的饲粮。分别于试验第1、7、14、21、28、30天采集奶样，检测乳脂率、乳蛋白率、乳糖率和体细胞数，并记录每头牛产奶量，筛选最佳中药组方。针对选定组方，选择产奶量和乳指标相近的健康奶牛40头，随机分为高(30 g/(头·d))、中(20 g/(头·d))、低(15 g/(头·d))剂量组和对照组，每组10头。对照组饲喂常规饲粮，其他各组分别饲喂添加不同剂量中药的饲粮。分别于试验第1、15、31天采集奶样并检测乳脂率、乳蛋白率、乳糖率和体细胞数，记录每头牛的产奶量，筛选最佳用药剂量。【结果】 组方筛选结果显示：①乳脂率测定结果显示，第21天，TCM1组显著高于CON和TCM2组(P＜0.05)，与TCM3组无显著差异(P＞0.05)；第28天，TCM1、TCM2和TCM3组显著高于CON组(P＜0.05),且各中药组间无显著差异(P＞0.05)；第30天，TCM1和TCM3组显著高于TCM2和CON组。乳蛋白率测定结果显示，第14、21天，TCM1组显著高于CON组(P＜0.05)；其他时间点各组间无显著差异(P＞0.05)。整个试验期间，各组乳糖率均无显著差异(P＞0.05)。②产奶量测定结果显示，第14、21、28、30天,各中药组产奶量均显著高于CON组(P＜0.05)，且第28天时TCM3组显著高于TCM2组(P＜0.05)。4%标准乳(4% FCM)测定结果显示，第14天及以后各时间点，各中药组均显著高于CON组(P＜0.05)；第14天，TCM3组显著高于TCM1组(P＜0.05)；第28、30天，TCM3组显著高于TCM2组(P＜0.05)。③体细胞数测定结果显示，第14天，TCM3组显著低于CON组(P＜0.05)；第21、28、30天，TCM3组显著低于TCM1组(P＜0.05)。剂量筛选结果显示：①各组间乳脂率、乳蛋白率、乳糖率均无显著差异(P＞0.05)。②产奶量测定结果显示，第15天，中、高剂量组产奶量显著高于低剂量组和对照组(P＜0.05)，各组间的4% FCM均无显著差异(P＞0.05)；第31天，中、高剂量组产奶量和4% FCM均显著高于对照组(P＜0.05)。③体细胞数测定结果显示，第15天，中、高剂量组显著低于低剂量组和对照组(P＜0.05)；第31天，各中药组显著低于对照组(P＜0.05)，且中、高剂量组显著低于低剂量组(P＜0.05)。【结论】 筛选出具有良好的抗奶牛热应激效果的中药组方TCM3,推荐应用剂量为20 g/(头·d)。

【目的】 构建甲氧苄啶(trimethoprim,TMP)纳米抗体(nanobody,Nb)噬菌体展示文库，制备TMP高亲和力纳米抗体，为TMP免疫分析方法的建立提供新型抗体材料。【方法】 通过活性酯酶法将TMP半抗原Hapten B与牛血清白蛋白(BSA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联制备2种免疫原，Hapten A和Hapten B与卵清白蛋白(OVA)偶联制备2种包被原。采用磺胺增效剂类药物单克隆抗体5C4，通过间接ELISA方法验证免疫原和包被原偶联效果。将免疫原与弗氏佐剂混合，先后对羊驼进行基础免疫和加强免疫，监测每次免疫后羊驼抗血清效价及对TMP的亲和力，选取效价及TMP亲和力最高的外周血作为纳米抗体基因来源，构建噬菌体展示文库。分离羊驼外周血总淋巴细胞，扩增重链抗体可变区纳米抗体基因(VHH)，插入噬菌粒，电击转化大肠杆菌XL1-Blue感受态细胞构建初始噬菌体纳米抗体展示文库。经辅助噬菌体救援，采用同源包被原浓度梯度递减包被、酸洗脱、TMP浓度梯度递减洗脱筛选策略筛选TMP高亲和力噬菌体并测序，原核表达纳米抗体，通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纳米抗体融合蛋白。【结果】 间接ELISA检测结果显示，2种免疫原与2种包被原在稀释18 000倍时D_{450 nm}值仍高于1.25。免疫原Hapten B-BSA 5次免疫后羊驼抗血清效价为1∶88 000，对TMP的半数抑制浓度(IC₅₀)为12.21 μg/L，但Hapten B-KLH 4次免疫后羊驼抗血清效价为1∶11 000，对TMP的IC₅₀为30.56 μg/L。以Hapten B-BSA五免后羊驼外周血为纳米抗体基因来源构建噬菌体展示文库，初始库容量为6.08×10⁷ CFU/mL，目的片段插入率为96%，噬菌体展示文库多样性良好。经4轮筛选后，获得3株TMP高亲和力噬菌体，测序分析后获得1株TMP高亲和力纳米抗体及序列。SDS-PAGE和Western blotting鉴定融合蛋白大小约为17 ku，蛋白含量80%以上。【结论】 本研究成功构建TMP纳米抗体噬菌体展示文库，获得1株TMP高亲和力纳米抗体。研究结果为磺胺增效剂类药物纳米抗体的制备提供了理论依据和技术支持，为兽药等小分子新型识别材料的制备提供了新的思路。

【目的】 探究外泌体在沙门菌感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2 细胞)过程中的作用及分子调控机制。【方法】 利用间接免疫荧光试验观察沙门菌感染前后IPEC-J2细胞中沙门菌抗体分布水平，用超速离心法提取沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体，并通过透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析测定外泌体粒径、Western blotting检测外泌体标记蛋白分子(CD9、CD63、CD81、TSG101)进行外泌体鉴定；利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测N6-甲基腺嘌呤(m⁶A)相关蛋白表达，同时结合转录组测序筛选上清液外泌体差异表达基因。【结果】 间接免疫荧光试验结果显示，感染组IPEC-J2细胞中可观察到大量沙门菌分布，表明沙门菌可感染IPEC-J2细胞；透射电镜和外泌体粒径分析结果显示，IPEC-J2细胞分泌的外泌体为双层膜的囊泡，直径为30～150 nm；Western blotting结果显示，C-J2细胞分泌的外泌体存在CD9、CD63、CD81和TSG101特异性标记蛋白。沙门菌感染后外泌体中m⁶A修饰相关基因表达检测发现，ALKBH5、YTHDC2及YTHDF1基因的mRNA和蛋白表达均显著或极显著上调(P＜0.05；P＜0.01)。转录组测序结果显示，沙门菌感染IPEC-J2细胞前后外泌体中存在1 524个差异表达基因，包括842个下调基因和682个上调基因。GO功能富集分析表明，沙门菌感染主要影响免疫系统过程、细胞连接和酶调节剂活性等生物过程；KEGG通路富集分析表明，其与IgA生产的肠道免疫网络、T细胞受体信号通路和Toll样受体信号通路等密切相关。【结论】 本研究成功分离和鉴定了沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体，并且表明外泌体中m⁶A修饰可介导免疫信号通路来调控沙门菌感染宿主细胞，该研究可为今后深入探究外泌体对猪肠道沙门菌感染的分子机制提供理论参考。

【目的】 外泌体是细胞通讯和组织微环境建立的关键因素，其对炎症过程具有一定的调节作用。本研究旨在探究奶牛血浆源外泌体对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T细胞)炎症的调控作用。【方法】 采集健康及患有乳房炎的奶牛静脉血，离心后获得血浆，并对血浆进行超速离心，分离得到血浆源外泌体。通过实时荧光定量PCR检测孵育奶牛血浆源外泌体后MAC-T细胞中促炎因子的表达。Western blotting验证孵育奶牛血浆源外泌体后NF-κB通路相关蛋白Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。通过CCK8和Hoechst染色验证奶牛血浆源外泌体对MAC-T细胞的增殖及凋亡效果的影响。【结果】 实时荧光定量PCR结果显示，与LPS组相比，奶牛乳房炎血浆源外泌体可显著下调促炎因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-23、IL-1α、NFRK、MyD88、TNF-α、IL-1β基因mRNA的表达(P＜0.05);健康奶牛血浆源外泌体仅对IL-1β基因mRNA表达有显著抑制作用(P<0.05)。Western blotting结果显示,与LPS组相比，奶牛乳房炎血浆源外泌体显著降低NF-κB通路蛋白TLR4、MyD88和TNF-α的表达(P＜0.05)；健康奶牛血浆源外泌体NF-κB通路蛋白表达与LPS组无显著差异(P>0.05)。CCK8与Hoechst染色结果显示，与LPS组相比，奶牛乳房炎血浆源外泌体可促进细胞增殖，缓解细胞凋亡；健康奶牛血浆源外泌体可恢复一定的细胞活力。【结论】 奶牛乳房炎血浆源外泌体可通过NF-κB通路缓解LPS诱导的MAC-T细胞炎症。本研究结果将为血浆源外泌体在奶牛乳房炎中发挥的抗炎作用提供理论依据，同时为血浆外泌体的临床应用奠定基础。

【目的】 明确莫能菌素耐药虫株与敏感虫株在基因水平的差异，进而解析莫能菌素耐药性产生的分子机制。【方法】 通过模拟田间感染的方式诱导柔嫩艾美耳球虫对莫能菌素的耐药性。第1次诱导试验，将 400 只 14 日龄无球虫鸡平均分为2组，分别为Ⅰ组(接种不加药组)和Ⅱ组(莫能菌素推荐剂量组),按照100 mg/kg 在基础饲粮中添加莫能菌素。从Ⅰ组中随机选择 10 只鸡，接种对莫能菌素敏感的柔嫩艾美耳球虫豪顿株，剂量为5 000卵囊/鸡。自接种后 8 d开始，将Ⅰ组新鲜粪便抛洒到Ⅱ组垫料上模拟球虫田间感染，连续抛洒17 d。接种后33 d，随机剖检Ⅱ组10只鸡，收集盲肠内卵囊。第2次诱导试验，将100只14日龄无球虫鸡作为Ⅲ组(莫能菌素高剂量组)，按照133 mg/kg在饲料中添加莫能菌素，随机选择10只鸡接种收集的卵囊，剂量为 5 000 卵囊/鸡。接种后17 d，莫能菌素添加量提高至400 mg/kg。接种后27 d，收集盲肠卵囊。以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和最适抗球虫活性百分率(POAA)四项指标综合判定诱导株的耐药性。提取耐药株或敏感株孢子化卵囊基因组并进行基因组重测序，通过单核苷酸多态性(SNP)密度分布解析耐药株与敏感株之间的差异。【结果】 第1次诱导试验，接种后33 d获得耐100 mg/kg莫能菌素的卵囊(1×莫能菌素诱导株)。第2次诱导试验,接种后27 d获得耐400 mg/kg莫能菌素的卵囊(4×莫能菌素诱导株)。4×莫能菌素诱导株的ACI为 121，POAA为 25.4%，RLS为33%，POP为 64%。与参考基因组相比，敏感株基因组SNP共12 191个，耐药株基因组SNP共74 931个，耐药株在第11号染色体3.3～4.2 Mb 区间内SNP富集分布，该区间内3个基因ETH2_1113700、ETH2_1113500和ETH2_1113600的SNP位于编码区。【结论】 本研究获得了对莫能菌素完全耐药的柔嫩艾美耳球虫耐药株。在第11号染色体，耐药株与敏感株的SNP分布具有显著差异，筛选到 3个耐药候选基因。