【目的】 筛选鸡胚胎早期发育期间背部皮肤上皮和间充质中调控毛囊生长的关键基因、生物过程和信号通路，为了解鸡胚胎早期发育期间毛囊生长的分子机制提供参考。【方法】 从GEO数据库中下载基因芯片GSE62882数据集，采用R语言limma包对数据集进行差异分析，分别筛选出胚胎期第7和9天皮肤上皮和间充质差异基因以及皮肤上皮和间充质共同上下调基因，通过STRING在线数据库对差异基因和共同上下调基因进行蛋白互作网络分析，用Cytoscape 3.8.2软件进行可视化，运用R语言中的clusterProfiler程序包对差异基因和共同上下调基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】 皮肤上皮在胚胎期第7和9天共筛选出626个差异基因，获得189条相互作用关系、10个生物过程和4条信号通路；皮肤间充质在胚胎期第7和9天共筛选出690个差异基因，获得326条相互作用关系、10个生物过程和3条信号通路；皮肤上皮和间充质在胚胎期第7和9天共同上调基因26个，共同下调基因48个，共同上下调基因存在34条相互作用关系，主要富集在Wnt信号通路上。【结论】 本研究从鸡胚胎期第7和9天皮肤上皮和间充质中筛选到共同上调基因26个，共同下调基因48个，这些基因主要富集在Wnt信号通路上，为探究上皮和间充质在毛囊生长发育中的作用机制提供理论参考。

【目的】 探究猪DNA甲基转移酶（DNMT）基因家族的基因特性及表达模式。【方法】 利用生物信息学方法鉴定猪全基因组范围的DNMT基因家族，并对其染色体定位、理化性质、蛋白质结构、亚细胞定位、基因结构、保守基序、系统进化关系、共线性关系和基因表达模式进行分析。【结果】 共鉴定得到5个猪DNMT基因家族成员：PigDNMT1、PigDNMT2、PigDNMT3、PigDNMT4和PigDNMT5，分别位于2、3、13、14、17号染色体上。猪DNMT基因家族进化树分析发现，PigDNMT1和PigDNMT4、PigDNMT2和PigDNMT5的亲缘关系较近。PigDNMT2和PigDNMT5具有相同数量和排列顺序的保守基序，但在基因结构上差异较大。系统进化树结果揭示，猪、人、小鼠和牛的DNMT基因家族分为4个亚族，其中猪与牛的DNMT基因家族亲缘关系更近。基因共线性分析显示，猪与人、小鼠、牛之间都具有4对直系同源DNMT基因，表明4个物种的DNMT基因间存在较强的共线性关系。猪DNMT家族蛋白长度在228~1 706个氨基酸之间，分子质量在26 133.32~192 267.80 u之间，等电点在6.00~9.06之间。二级结构预测分析结果显示，猪DNMT蛋白主要由无规则卷曲组成。亚细胞定位分析发现，5个猪DNMT蛋白定位于细胞核。母猪性腺轴的转录组数据分析发现，PigDNMT1在下丘脑、垂体和卵巢组织中随着初情启动过程而展现出不同的表达模式。【结论】 本研究在猪基因组上共鉴定出5个DNMT基因，并发现性腺轴组织中的PigDNMT1在初情启动过程中呈现出不同的表达模式，为解析猪DNMT基因家族功能提供一些参考。

【目的】 探究对牛骨骼肌发育具有调控作用的长链非编码RNA （long non-coding RNA，lncRNA），研究其在牛骨骼肌卫星细胞增殖期和分化期的表达量变化，为牛肌肉发育相关机制方面的研究提供参考依据。【方法】 选取实验室前期高通量测序获得的1条lncRNA （lnc721），通过NCBI数据库和CPC网站分析其生物学信息并预测其编码能力，通过核质分离试验确定其亚细胞定位。设计并合成lnc721的siRNA转染牛骨骼肌卫星细胞，通过成熟的体外成肌细胞诱导分化模型培养牛骨骼肌卫星细胞并进行诱导分化。分别采用EdU试验、实时荧光定量PCR和Western blotting分析lnc721在细胞发育不同时期表达量的变化情况。【结果】 lnc721位于牛全基因组的18号染色体上，其蛋白编码能力为―1.33129，主要定位于细胞质内。在干扰lnc721表达量后发现，EdU阳性细胞比率极显著上升，细胞增殖标志因子Pax7和Ki-67基因的mRNA表达水平极显著上调（P<0.01）；Western blotting结果进一步证明，干扰lnc721后极显著促进了Pax7蛋白的表达（P<0.01），在细胞分化期干扰lnc721表达后，细胞分化标志因子MyHC基因的mRNA和蛋白表达水平均极显著下调（P<0.01）。【结论】 干扰lnc721表达可促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖并抑制成肌分化进程。

【目的】 分析bta-miR-377与牛卵泡发育的关键调控因子可卡因-苯丙胺调节转录肽（cocaine and amphetamine regulated transcript peptide，CART）间的靶标关系，明确bta-miR-377对牛CART表达影响的作用机制。【方法】 本研究通过生物信息学手段预测bta-miR-377与牛CART基因mRNA的结合位点，并对miR-377在不同物种间的序列保守性进行分析；利用双荧光素酶报告基因法验证bta-miR-377与CART基因的靶标关系；选择3头健康西门塔尔母牛，采集其下丘脑组织，分析bta-miR-377和CART基因在牛下丘脑中的内源表达情况；以PC12和293T细胞为模型进行细胞功能验证，利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测分别转染bta-miR-377 mimics和NC mimics后的PC12细胞中CART基因mRNA和293T细胞中CART蛋白表达丰度变化。【结果】 bta-miR-377在CART 3'-UTR上存在靶向结合位点，并能极显著下调CART 3'-UTR野生型重组双荧光质粒的相对荧光活性（P<0.01），且结合位点序列在多个物种中高度保守；在牛与大鼠间，miR-377种子区序列保守性较低；bta-miR-377和CART在牛下丘脑中均有表达；过表达bta-miR-377 mimics能够极显著下调CART基因mRNA的表达（P<0.01），显著下调CART蛋白的表达（P<0.05），bta-miR-377与CART的表达存在负相关关系。【结论】 bta-miR-377和CART在牛下丘脑组织中均有表达，bta-miR-377能够通过与CART 3'-UTR特异性结合抑制PC12细胞中CART mRNA的表达。

【目的】 扩增猪血清和糖皮质激素诱导型激酶（SGK）家族基因并进行生物信息学分析，探索其在猪脂肪组织和细胞中的表达模式。【方法】 以藏猪脂肪细胞cDNA为模板PCR扩增SGK家族基因，通过在线工具预测其编码蛋白的理化性质及亚细胞定位；用Mega X软件构建系统进化树；采集30日龄巴马猪心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、背肌、腿肌、颈部脂肪、背部脂肪、腹股沟脂肪、肾周脂肪等组织及7日龄和4月龄猪腹股沟脂肪组织，通过实时荧光定量PCR检测SGK家族基因在猪不同部位组织中的表达；采集30日龄巴马猪腹股沟脂肪组织并分离基质血管成分（SVF）细胞，诱导SVF细胞向白色脂肪细胞分化，通过实时荧光定量PCR检测SGK家族基因及脂肪分化标记基因CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα）、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）在脂肪细胞中的表达。【结果】 SGK1、SGK2和SGK3基因CDS区序列长度分别为1 296、1 104和1 473 bp，分别编码431、367和490个氨基酸；SGK1和SGK2定位于细胞质，SGK3定位于细胞核，三者均为亲水性蛋白，3个蛋白均含有相同基序，保守性高；系统进化树结果表明，猪与牛的亲缘关系最近；SGK1和SGK3基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、多种肌肉及脂肪组织广泛表达，SGK2基因在颈部、背部、腹股沟、肾周脂肪组织中均有较高表达；SGK1和SGK2基因在7日龄猪脂肪组织中表达量极显著高于4月龄猪脂肪组织（P<0.01），SGK3基因在4月龄和7日龄的猪脂肪组织中表达量无显著差异（P>0.05），且SGK3基因的表达量低于SGK1和SGK2基因；与未分化脂肪细胞相比，在分化后的脂肪细胞中SGK1和SGK2基因的表达量极显著上调（P<0.01），且SGK1基因的表达量远高于SGK2基因，而SGK3基因的表达量无显著变化（P>0.05）。【结论】 SGK家族蛋白具有保守结构域，可能发挥着相似的功能，SGK1和SGK2可能参与调控猪脂肪细胞的分化过程，结果可为探究猪脂肪沉积的分子机制提供一定的理论基础。

【目的】 探讨影响鸡长链非编码RNA （long chain noncoding RNA，lncRNA）-骨形态发生蛋白4（bone morphogenetic protein 4，BMP4）启动子转录的因素，并对调控lncRNA-BMP4特异表达的分子机制进行研究。【方法】 以鸡肌肉基因组为模板，PCR扩增并克隆鸡lncRNA-BMP4的启动子区，构建lncRNA-BMP4-EFGP载体，对lncRNA-BMP4启动活性进行定性分析；通过染色体5'-末端缺失的方法和双荧光素酶系统检测筛选lncRNA-BMP4启动子核心区域。通过在线工具预测分析调控核心区域的潜在转录因子；利用点突变和双荧光素酶系统筛查真正影响lncRNA-BMP4的转录因子；通过表观修饰验证DNA甲基化、组蛋白乙酰化对lncRNA-BMP4的转录调控作用。【结果】 试验成功扩增lncRNA-BMP4启动子片段1 288 bp，与pEGFP-N1载体连接后转染鸡成纤维细胞系（DF-1）具有荧光表达，说明lncRNA-BMP4启动子有启动活性。染色体5'-末端缺失和双荧光素酶系统检测发现，核心启动子区域为―832~―651 bp，Jaspar数据库分析筛选到核心区域的转录因子有SOX17、CREB1及STAT1。双荧光素酶系统检测发现，STAT1可促进lncRNA-BMP4核心启动区域的活性；DNA甲基化抑制剂5'-Azacd对lncRNA-BMP4的转录活性未有任何影响，而组蛋白乙酰化抑制剂TSA可极显著提高其转录活性（P<0.01）。【结论】 提示lncRNA-BMP4的转录活性受STAT1和组蛋白乙酰化的正调控，而DNA甲基化不影响其转录。研究结果为详细解析lncRNA-BMP4的功能和分子机制提供了理论依据。

【目的】 探究水热回流法提取蛹虫草培养残基中活性成分虫草素的最佳工艺参数。【方法】 选取液料比、提取次数、提取温度、提取时间4个因素进行单因素试验和正交试验，并通过高效液相色谱法（HPLC）测定虫草素含量，确定水热回流法提取蛹虫草培养残基的最佳工艺参数。【结果】 方法学验证结果表明，蛹虫草培养残基中虫草素含量的HPLC测定方法精密度、重复性、稳定性相对标准偏差（RSD）均<2%，准确度RSD为2.64%，标准曲线线性相关性高。正交试验结果显示，影响水热回流法提取效果的因素依次为提取时间、提取次数、液料比、提取温度，其中提取时间和提取次数对提取物虫草素含量均有显著影响（P<0.05），提取温度和液料比影响不明显（P>0.05）。单因素试验和正交试验结果表明，蛹虫草培养残基的最佳提取工艺参数为：液料比25：1、提取次数5次、提取温度70 ℃、提取时间60 min，该提取条件下测得蛹虫草培养残基中虫草素含量为1.48 mg/g。【结论】 采用本研究确定的水热回流法最佳工艺参数能有效提取蛹虫草培养基活性成分，且操作简单实用，提取物活性成分得率稳定，为后续蛹虫草培养残基产品开发提供参考依据。

【目的】 探究活化核因子红系2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）对热应激肉鸡心肌细胞氧化损伤的缓解作用及其机制。【方法】 利用差速贴壁法结合化学纯化法制备肉鸡原代心肌细胞。将心肌细胞随机分为对照组（Control组）、热应激组（HS组）和Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚（tert-butylhydroquinone，TBHQ）预处理热应激组（TBHQ+HS组）。对照组心肌细胞正常培养不做任何处理，HS组心肌细胞置于高温（43 ℃）培养箱处理2 h，TBHQ+HS组心肌细胞用50 μmol/L TBHQ预处理12 h，再进行热应激处理。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定各组心肌细胞相对活力；用比色法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性；用实时荧光定量PCR检测Nrf2、血红素氧合酶-1（heme oxygenase 1，HO-1）、谷氨酰半胱氨酸连接酶（glutamate cysteine ligase catalytic，GCLC）和NAD （P） H：醌氧化还原酶1（NAD （P） H：quinone oxidoreductase 1，NQO1） mRNA表达水平；用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测Nrf2总蛋白和HO-1蛋白表达量。【结果】 与对照组相比，热应激组肉鸡原代心肌细胞形态发生改变，出现空泡网状结构，心肌细胞的相对活力和SOD活性极显著降低（P<0.01），MDA含量极显著升高（P<0.01），细胞培养液中LDH活性极显著升高（P<0.01），Nrf2/抗氧化反应原件（ARE）信号通路下游NQO1和GCLC mRNA表达升高，但差异不显著（P>0.05），Nrf2和HO-1 mRNA表达显著增加（P<0.05），但Nrf2总蛋白和HO-1蛋白表达量增加不显著（P>0.05）；与热应激组相比，TBHQ预处理热应激组心肌细胞内空泡网状结构减少，心肌细胞的相对活力显著升高（P<0.05），SOD活性极显著升高（P<0.01），MDA含量显著降低（P<0.05），细胞培养液中LDH活性极显著降低（P<0.01），Nrf2/ARE信号通路下游NQO1和GCLC基因的表达水平显著上调（P<0.05），Nrf2基因和总蛋白表达量显著增加（P<0.05），HO-1基因和蛋白表达量极显著增加（P<0.01）。【结论】 活化Nrf2可以上调Nrf2/ARE信号通路下游相关抗氧化基因和蛋白表达，提高热应激肉鸡心肌细胞的抗氧化能力，缓解热应激诱导的氧化损伤，提示Nrf2可能是肉鸡心肌细胞抗热应激氧化损伤的有效分子靶点。

【目的】 新生犊牛被动免疫转移失败（failure of passive transfer，FPT）会导致犊牛发病率和死亡率显著增高，影响后期生长发育。本试验针对国外引进的安格斯母牛初乳产量和质量进行测定，并对其新生犊牛被动免疫效果进行评估，以期为新生犊牛初乳管理措施制定提供科学依据。【方法】 随机选择健康安格斯初产母牛（24月龄）和经产母牛（36~48月龄）各15头，待母牛产犊后立即进行人工挤奶测定初乳产量、营养成分及免疫球蛋白浓度。选取初产和经产新生犊牛各15头，测定其初生重，分别采集犊牛出生后未食初乳（0 h）和食初乳后（24~36 h）血样，测定其血清总蛋白含量及各生理生化指标。【结果】 初产母牛平均初乳产量极显著低于经产母牛，但其初乳中乳蛋白、非脂乳固体、乳糖、灰分含量，以及密度和电导率均极显著高于经产母牛（P<0.01）。初产母牛和经产母牛初乳中免疫球蛋白浓度分别为28.72%和26.24%，合格率分别为93.33%和91.67%，差异均不显著（P>0.05）；初产和经产新生犊牛被动免疫失败率分别为33.3%和25.0%；初产新生犊牛平均初生重极显著低于经产新生犊牛（P<0.01）；被动免疫成功犊牛平均初生重和球蛋白含量均极显著高于被动免疫失败犊牛（P<0.01）。【结论】 新疆安格斯犊牛FPT的主要原因可能是母牛初乳产量低导致新生犊牛初乳摄入不足，初生重较低的犊牛FPT的风险性较高。本研究为制定切实可行的新生安格斯犊牛初乳补饲计划提供了科学基础。

【目的】 试验旨在揭示北京地区荷斯坦泌乳牛鼓膜温度的群体特征及其随昼夜和环境温湿度指数（temperature-humidity index，THI）的变化规律，探究中度热应激下泌乳牛鼓膜温度的影响因素及其与直肠温度的关系。【方法】 2021年8月对北京地区某规模化牧场638头荷斯坦泌乳牛的鼓膜温度、直肠温度及环境温湿度进行测定，并对其进行描述性统计；对161头荷斯坦泌乳牛6 h鼓膜温度和直肠温度进行相关性分析；利用混合线性模型分析THI、测定时间、胎次、泌乳阶段和繁殖状态等因素对鼓膜温度和直肠温度的影响。【结果】 北京地区荷斯坦泌乳牛夏季鼓膜平均温度为（39.01±0.40）℃；测定时间内THI为76.11~83.18，此时泌乳牛处于中度热应激。泌乳牛鼓膜温度昼夜变化较大，昼夜节律表现为上午低、下午和傍晚均较高且在早晨和下午出现不正常峰值，鼓膜温度的变化滞后于THI变化。鼓膜温度与直肠温度呈显著正相关关系（P<0.05，r＝0.35），且两种体温均随着THI的升高而升高，回归系数分别为0.09（P<0.05，R²=0.09）和0.10（P<0.05，R²=0.08）。测定时间和胎次对泌乳牛鼓膜温度有显著影响（P<0.05），胎次和泌乳阶段对泌乳牛直肠温度有显著影响（P<0.05），且THI对两部位温度的回归均显著（P<0.05）。【结论】 本研究揭示了奶牛体温的节律变化和影响因素，鼓膜温度可有效反映奶牛实时体温，可为精细化管理牛群提供理论依据。

【目的】 研究北京油鸡角膜缘干细胞（LSCs）分离、培养、鉴定及多向分化潜能等生物学特性。【方法】 取10胚龄健康北京油鸡鸡胚的角膜缘，采用分散酶Ⅱ（dispaseⅡ）联合胰蛋白酶二步法分离细胞，进行体外培养，绘制生长曲线，通过免疫荧光和RT-PCR技术鉴定LSCs特异性标志物细胞角蛋白3（CK3）、CK12、细胞周期调控蛋白p63、ATP结合盒转运蛋白（ABCG2）和细胞角蛋白19（CK19）的表达；通过成骨和成软骨诱导检测其多向分化潜能。【结果】 获得的北京油鸡细胞折光性强、贴壁后呈多角形，生长曲线呈典型的S型，群体倍增时间（PDT）随着代次的升高逐渐下降；免疫荧光检测结果表明，分离的细胞中ABCG2、p63和CK19均呈阳性表达，CK3和CK12不表达；RT-PCR检测结果表明，分离的细胞表达p63、CK19、ABCG2，不表达CD45，说明分离的细胞为LSCs。LCSs成骨诱导分化后，可见被茜素红染色的矿化钙结节，RT-PCR检测结果表明其表达成骨关键基因骨桥蛋白（OPN）和Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）；成软骨诱导分化后，可见被阿利新蓝染色的软骨组织，RT-PCR检测结果表明其表达成软骨细胞关键基因转录因子性别决定区Y框9（SOX-9）和Ⅱ型胶原蛋白（Col-Ⅱ）。【结论】 本研究成功从10胚龄北京油鸡胚胎角膜缘中分离LSCs，且其具有良好的增殖活力及成骨和成软骨能力，结果可为禽类LSCs的资源保存研究提供参考。

【目的】 探究饲粮中添加两种不同有机锌源对新生犊牛生长性能及锌代谢的影响。【方法】 试验随机选取30头新生荷斯坦母犊牛（体重39.4 kg±0.8 kg），随机分为3组，每组10头牛，对照组只饲喂牛乳，不添加有机锌；蛋白锌组和蛋氨酸锌组每头牛分别添加522.82 mg/d的蛋白锌和467.88 mg/d的蛋氨酸锌（均相当于80 mg Zn/d）。试验期14 d。在犊牛1日龄及14日龄晨饲前，测量每头犊牛体重，计算平均日增重。每天记录牛乳采食量，用于计算平均日采食量和料重比。每天晨饲前，由专人对犊牛粪便进行评分，计算犊牛腹泻率。在14日龄晨饲前，采集犊牛血清样品，用于测定血清中的钙、磷、锌、铜和铁浓度、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性、金属硫蛋白、丙二醛浓度以及总抗氧化能力。【结果】 与对照组相比，添加蛋氨酸锌显著提高了犊牛平均日增重（P<0.05），添加蛋白锌和蛋氨酸锌均降低犊牛腹泻率并提高血清锌浓度（P<0.05），且蛋氨酸锌组犊牛的血清锌浓度显著高于蛋白锌组（P<0.05）。添加蛋氨酸锌显著降低犊牛血清铜浓度（P<0.05），而蛋白锌组犊牛的血清铜浓度与对照组之间无显著差异（P>0.05）。添加有机锌源显著增加了犊牛血清中金属硫蛋白的浓度（P<0.05），但仅蛋氨酸锌提高了犊牛血清碱性磷酸酶活性（P<0.05）；蛋氨酸锌能够显著提高犊牛血清中超氧化物歧化酶活性及总抗氧化能力（P<0.05），但是蛋白锌对其无显著影响（P>0.05）；蛋白锌和蛋氨酸锌均可显著降低血清丙二醛浓度（P<0.05）。【结论】 饲粮中添加蛋氨酸锌能够提高犊牛的生长性能，降低腹泻率，改善机体锌代谢水平，且其效果优于蛋白锌，因此建议在犊牛饲粮中以蛋氨酸锌形式添加80 mg Zn/d。

【目的】 通过研究槲皮素对猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染仔猪肠道形态、肠道抗氧化功能及空肠脂质代谢相关基因相对表达量的影响，旨在探讨槲皮素对PEDV感染仔猪肠道的保护作用。【方法】 选取18头健康的7日龄断奶仔猪，随机分为3组：对照组、PEDV组和槲皮素＋PEDV组，每组6个重复，每个重复1头猪。试验期8 d，于试验第0~7天，对槲皮素＋PEDV组仔猪每天口腔灌服10 mg/kg BW的槲皮素，其余组灌服等体积的人工奶。于试验第5天晚上给PEDV组和槲皮素＋PEDV组仔猪口腔灌服10^4.5TCID₅₀的PEDV，对照组仔猪灌服相同体积的PBS溶液。于试验第8天早上屠宰，取仔猪十二指肠、空肠、回肠及结肠组织样品进行检测。【结果】 与对照组相比，PEDV组仔猪空肠和回肠的绒毛高度以及绒毛高度与隐窝深度比值极显著降低（P<0.01），空肠、回肠和结肠中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和总超氧化物歧化酶（T-SOD）的活力显著降低（P<0.05），十二指肠、空肠、回肠和结肠中过氧化氢酶（CAT）的活力显著降低（P<0.05），回肠和结肠中丙二醛（MDA）的含量显著升高（P<0.05），空肠中载脂蛋白A1（APOA1）、载脂蛋白B （APOB）、载脂蛋白C2（APOC2）、脂肪酸结合蛋白2（FABP2）、酰基辅酶A合成酶长链家族成员3（ACSL-3）和脂肪酸合酶（FASN）基因的相对表达量极显著下调（P<0.01）。与PEDV组相比，槲皮素＋PEDV组仔猪空肠和回肠的绒毛高度以及绒毛高度与隐窝深度比值极显著提高（P<0.01），空肠、回肠和结肠中GSH-Px和T-SOD的活力显著提高（P<0.05），十二指肠、空肠和结肠中CAT的活力显著提高（P<0.05），回肠和结肠中MDA的含量显著降低（P<0.05），空肠中APOB、FABP2和FASN基因的相对表达量极显著上调（P<0.01）。【结论】 添加槲皮素可有效缓解PEDV感染导致的仔猪肠道损伤，提高仔猪肠道抗氧化能力以及空肠脂质代谢的能力。

【目的】 本研究通过比较不同断奶模式对犊牦牛生长发育、血清生化指标及抗氧化能力的影响，以期探索科学的犊牦牛早期培育模式。【方法】 选取体重相近、健康的新生犊牦牛24头，随机分为3个处理组，每组8头，公母各半。对照组（GF）犊牦牛出生后在天然牧场内随母放牧哺乳；早期断奶组（EW）犊牦牛随母放牧哺乳至15日龄时隔离母犊，逐渐过渡为饲喂代乳粉，提供开食料及天然牧草自由采食，至犊牦牛固体饲料采食量达到0.5 kg/d时停喂代乳粉，90日龄后停喂开食料转入天然牧场放牧饲养；早期断奶＋益生菌组（EWP）断奶过程同EW组，并在代乳粉、开食料中添加复合益生菌（乳酸杆菌、芽孢杆菌、酵母菌，≥9.98×10¹¹ CFU/g）。分别于犊牦牛30、60、90、150日龄时测定体重及体尺指标，于30、60、90日龄晨饲前采集犊牦牛颈静脉血，测定血清中生化指标、激素、免疫球蛋白水平及抗氧化能力指标。【结果】 30日龄时，EW、EWP组犊牦牛体重、体尺，血清葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、胆固醇（CHO），生长激素（GH）、胰岛素样生长因子1（IGF-1），以及免疫球蛋白A （IgA）、免疫球蛋白G （IgG）水平均显著低于GF组（P<0.05），EW组皮质醇水平显著高于GF组（P<0.05）；60~150日龄各组犊牦牛体重、体尺均无显著差异（P>0.05）；60日龄时，EW、EWP组犊牦牛血清IGF-1以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）含量均显著高于GF组（P<0.05）；90日龄时EW、EWP组犊牦牛血清GLU、尿素氮（BUN）、IGF-1、甲状腺素（T₄）及IgA水平均显著高于GF组（P<0.05），且EWP组血清TG、GH含量及过氧化氢酶（CAT）活性均显著高于GF组（P<0.05）。【结论】 与随母放牧哺乳模式相比，两种早期断奶方式在断奶初期（30日龄）对犊牦牛均产生了一定负面影响，但在断奶后补饲代乳粉与开食料有利于改善犊牦牛后期的生长发育、营养代谢、机体免疫与抗氧化能力，且补充益生菌能够缓解犊牦牛的早期断奶应激，并对犊牦牛生长发育及抗氧化能力的提升有进一步促进作用。

【目的】 试验旨在探讨槲皮素在防治仔猪感染猪流行性腹泻病毒（PEDV）中的作用。【方法】 选取18头体重相近、健康的7日龄仔猪（杜×长×大），随机分为3组（对照组、PEDV组和PEDV+槲皮素组），每组6个重复，每个重复1头猪，试验期共11 d。经过3 d适应期后，于试验第4~10天给PEDV+槲皮素组仔猪口腔灌服10 mg/kg BW的槲皮素，其他组仔猪口腔灌服等体积的人工乳，于试验第8天给PEDV组与PEDV+槲皮素组仔猪口腔灌服1×10^4.5TCID₅₀的PEDV，对照组灌服等体积的PBS溶液。试验第11天早上空腹称重，全部仔猪灌服D-木糖（0.1 g/kg BW），1 h后经前腔静脉采血，检测血液生化指标、血浆二胺氧化酶（DAO）活性和D-木糖含量；将所有仔猪屠宰取空肠黏膜，检测肠道屏障相关基因，包括肠绒毛蛋白（villin），紧密连接蛋白-1（claudin-1），闭合蛋白（occludin）和肠型脂肪酸结合蛋白（iFABP）的相对表达量。【结果】 与对照组相比，PEDV组仔猪平均日增重显著下降（P<0.05），粪便评分显著升高（P<0.05）；血液中高密度脂蛋白含量显著降低（P<0.05），肌酐和尿素氮的含量显著提高（P<0.05）；血浆中D-木糖含量显著降低（P<0.05）；空肠claudin-1、iFABP基因的相对表达量显著下调（P<0.05）。与PEDV组相比，PEDV+槲皮素组仔猪平均日增重和血浆D-木糖含量显著升高（P<0.05）；血液中肌酐和尿素氮的含量显著降低（P<0.05）；空肠claudin-1、villin和iFABP基因的相对表达量显著上调（P<0.05）。【结论】 10 mg/kg BW槲皮素可在一定程度上缓解PEDV感染导致的仔猪生长抑制和肾功能损伤，增强肠道吸收与屏障功能。

【目的】 本试验旨在研究甘草酸（GA）对黄羽肉仔鸡免疫性能的影响。【方法】 选取300只体重接近的1日龄健康黄羽肉仔鸡，随机分为6组，每组5个重复，每个重复10只，分别为空白对照组、脂多糖处理组（LPS组）、黄芪多糖组（APS组）、高剂量甘草酸组（GA_H组）、中剂量甘草酸组（GA_M组）和低剂量甘草酸组（GA_L组）。空白对照组于14、16、18、20日龄早上腹腔注射0.9%无菌生理盐水2 mL，其余各组同时间注射等量的LPS溶液（1.5 mg/kg BW）建立体内免疫应激模型。空白对照组和LPS组饲喂基础饲粮，APS组、GA_H、GA_M和GA_L组于应激模型建立阶段及前后3 d （即11~23 d）分别在基础饲粮基础上添加400 mg/kg黄芪多糖（APS）和120、100、80 mg/kg的GA；试验期49 d。在21、28、35、42、49日龄每个重复随机选取2只鸡采集翅静脉血，用酶联免疫法（ELISA）测定血清中CD4、CD8分子含量及免疫活性物质IgA、IgG、IgM含量。【结果】 与空白对照组相比，21~49日龄时，其余5组肉仔鸡血清CD4分子含量均极显著下降（P<0.01），而血清CD8分子、IgA、IgG、IgM （除GA_H组和APS组外）含量均有所升高。与LPS组相比，APS组和3个GA组肉仔鸡血清CD4分子含量均有所升高，而血清CD8分子含量均极显著或显著降低（P<0.01；P<0.05），血清IgA、IgG、IgM含量均极显著降低（P<0.01）。此外，在3个GA组间，肉仔鸡血清CD4分子含量均随GA添加量增加而升高，其中GA_H组的升高幅度与APS组最接近，尤其是在42日龄时，GA_H组与APS组间差异不显著（P>0.05），且均极显著或显著高于LPS组（P<0.01；P<0.05）；而肉仔鸡血清CD8分子、IgA、IgG、IgM含量随GA添加量增加呈降低趋势，其中GA_H组的降低幅度与APS组最接近，在CD8分子含量方面，两组间无显著差异（P>0.05），且在35和49日龄时，GA_H组肉仔鸡CD8分子含量与空白对照组差异不显著（P>0.05）；在IgA含量方面，除35日龄外，其他日龄时GA_H组与APS组间均无显著差异（P>0.05），在21和49日龄时，GA_H组与空白对照组差异均不显著（P>0.05）；在IgG含量方面，除28日龄外，其他日龄时GA_H组与APS组间均无显著差异（P>0.05），在35日龄时，GA_H组与空白对照组差异不显著（P>0.05）；在IgM含量方面，除42日龄外，其他日龄时GA_H组与APS组间均无显著差异（P>0.05），在21日龄时，GA_H组与空白对照组差异不显著（P>0.05）。【结论】 GA能有效缓解黄羽肉仔鸡对LPS刺激引起的免疫应激反应，增强免疫调节能力，且与保护效果之间有剂量效应，由强到弱依次为GA_H>GA_M>GA_L。

【目的】 试验旨在研究肌球蛋白重链3（myosin heavy chain 3，MYH3）和肌球蛋白重链13（myosin heavy chain 13，MYH13）基因遗传变异对猪肉质性状的影响。【方法】 利用北京黑猪背最长肌样本进行肉质性状（肌内脂肪（intramuscular fat，IMF）、水分、滴水损失、酸碱度（pH）、肉色L^*值、肉色a^*值和肉色b^*值）表型数据的测定。利用PCR和Sanger测序技术对MYH3和MYH13基因启动子区和CDS区进行基因分型。将性别、场、日龄作为协变量，采用协方差分析，确定与猪肉质性状相关的SNPs，利用实时荧光定量PCR检测基因表达水平。【结果】 试验共筛选到9个SNPs，其中MYH3基因CDS区有1个错义突变（c.5782 G>C）与IMF显著相关（P<0.05），且MYH3基因表达水平与IMF呈正相关；MYH13基因CDS区有4个SNPs，其中2个（c.1923 G>A、c.1308 G>A）与肉色a^*值显著相关，1个（c.963 G>A）与滴水损失显著相关，1个（c.237 G>T）与肉色L^*值显著相关（P<0.05）；MYH13基因启动子区有4个SNPs，其中2个（rs699287502、rs318639161）与肉色L^*值显著相关，2个（rs321315318、rs330770991）与滴水损失显著相关（P<0.05），且MYH13基因表达水平与滴水损失呈负相关。【结论】 MYH3基因有1个SNP与IMF显著相关，且其基因表达水平与IMF呈正相关。MYH13基因中存在3个SNPs与滴水损失显著相关，且该基因启动子区2个SNPs基因表达水平与滴水损失呈负相关；3个SNPs与肉色L^*值显著相关；2个SNPs与肉色a^*值显著相关。以上SNPs均可作为影响北京黑猪肉质性状的候选基因功能位点。

【目的】 探究磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶催化亚单位β（PIK3CB）基因多态性及其与中国荷斯坦牛繁殖和产奶性状的关系。【方法】 通过混池测序对中国荷斯坦牛PIK3CB基因进行单核苷酸多态性（SNP）位点筛选，采用竞争性等位基因特异性PCR （KASP）技术在1 160头健康泌乳中国荷斯坦牛中进行SNP分型并进行群体遗传学分析，采用线性模型进行SNP与11个繁殖和产奶性状基于单位点和单倍型组合的关联分析。【结果】 在PIK3CB基因中共检测到了17个SNPs，筛选出7个SNPs用于后续分析。关联分析发现，7个SNPs与多个目标性状存在显著或极显著的关联（P<0.05；P<0.01）；位于外显子区域的g.130433743 A>G位点AA基因型个体和位于可变剪接区域的g.130448069 G>A位点GG基因型个体，其经产牛首末次配种间隔、产奶量、乳蛋白量和乳脂量最低，体细胞评分最高，上述基因型个体具有较短的首末次配种间隔，而产奶性能相对较差；g.130387717 G>A位点AA基因型个体，其初配日龄和青年牛首末次配种间隔最低，产奶量、乳蛋白量和乳脂量最高，该基因型个体的繁殖和产奶性能均较好，上述3个SNPs位点可作为中国荷斯坦牛繁殖和产奶性状的候选位点重点关注。单倍型分析发现，PIK3CB基因的g.130387717 G>A、g.130430832 A>－、g.130433743 A>G、g.130433982 C>T、g.130446073 C>T和g.130448069 G>A 6个SNPs紧密连锁形成一个单倍型块，且与多个目标性状存在显著或极显著关联（P<0.05；P<0.01），其中H2H3和H2H4单倍型组合个体的繁殖和产奶性能较好，为优势单倍型组合。【结论】 中国荷斯坦牛PIK3CB基因存在丰富的遗传变异，其多态性与繁殖和产奶性状存在关联，g.130433743 A>G、g.130448069 G>A和g.130387717 G>A位点可作为潜在分子标记，为中国荷斯坦牛的平衡育种提供理论依据。

【目的】 试验旨在从代谢组学角度探究关中奶山羊睾丸发育代谢机制。【方法】 选择1月龄断奶雄性关中奶山羊和24月龄体成熟的雄性关中奶山羊各6只，采集睾丸组织，使用液相色谱-质谱（LC-MS）技术对睾丸组织进行化学检测，通过多维和单维分析相结合的方式对两组不同代谢物进行化学检测、对比与鉴别，通过富集差异代谢物分析筛选关中奶山羊发育代谢中的潜在关键通路。【结果】 在1和24月龄关中奶山羊睾丸组织中共筛选出334个差异代谢物，其中显著上调137个，显著下调197个。对前36个差异代谢物进行比较鉴定发现，分别为脂质和类脂质分子、有机酸及其衍生物、未分类化合物和苯丙烷和聚酮化合物四大类。经相关性分析发现，在1和24月龄关中奶山羊睾丸发育过程中，脂质和类脂质分子与甘油磷脂呈最大正相关，羧基及其衍生物与甘油磷脂呈最大负相关。对不同的代谢物进行富集分析，筛选出7条潜在的重要代谢通路，分别为肿瘤中的胆碱代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、肿瘤中的中心碳代谢、铁死亡、谷胱甘肽代谢、氨酰-tRNA生物组成以及牛磺酸和亚牛磺酸代谢。【结论】 本试验从代谢组学角度揭示了1和24月龄关中奶山羊睾丸的差异代谢物及代谢机制，为今后哺乳动物睾丸的发育研究奠定了基础。

【目的】 试验旨在研究多形性腺瘤基因1（plemorphic adenoma gene 1，PLAG1）基因序列特征、多态性以及对山羊出生体重、体尺的影响。【方法】 以波尔山羊为研究对象，克隆PLAG1基因序列并测序，采用实时荧光定量PCR鉴定其在不同年龄和体重波尔山羊组织中的表达模式，采用Western blotting方法检测PLAG1在不同体重羔羊腿肌中的表达水平，进一步筛选PLAG1基因CDS和3'-UTR区SNP，并分析各位点不同基因型与波尔山羊出生体重、体尺的相关性。【结果】 波尔山羊PLAG1基因CDS全长1 500 bp，编码499个氨基酸，PLAG1蛋白相对保守。组织表达谱显示，PLAG1基因在出生体重较大的羔羊心脏、小肠和腿肌中表达水平显著或极显著高于出生体重较小的羔羊，在胎羊各组织中mRNA表达水平均显著或极显著高于成年母羊（P<0.05；P<0.01）；PLAG1蛋白在出生体重较大的羔羊腿肌中表达量极显著高于出生体重较小的羔羊（P<0.01）。在波尔山羊PLAG1基因3'-UTR区共筛选到6个SNPs位点，分别为：2664 A>G、2712 A>G、2721 T>C、2879 T>A、2990 A>T和3270 A>G。关联分析发现，2664 A>G位点AG基因型个体出生管围显著大于GG基因型（P<0.05）；2721 T>C位点TT基因型个体出生体长显著大于TC基因型（P<0.05）；2879 T>A位点TA基因型个体出生管围显著大于AA基因型（P<0.05）；2990 A>T位点AA基因型个体出生体重显著高于AT基因型（P<0.05）；3270 A>G位点GG基因型个体出生体长显著大于AA基因型，AG基因型个体出生胸围显著大于AA基因型（P<0.05）。【结论】 PLAG1基因在波尔山羊胎羊各组织中表达水平均高于成年母羊，发育早期的表达水平与出生羔羊体重相关。PLAG1基因可作为分子标记用于波尔山羊早期生长选育。

【目的】 探究荷斯坦牛泌乳速度相关指标的群体规律及非遗传因素对其的影响。【方法】 收集华东地区某规模化牧场8 757头泌乳牛的906 748条挤奶记录，定义了班次产奶量、前两分钟产奶量、挤奶时间、前两分钟产奶量占比、平均流速和最高流速6个泌乳速度指标，并对其进行了描述性统计，计算了各指标间的Pearson相关系数，采用固定模型分析了测定季节、胎次、泌乳阶段、初产月龄和挤奶班次对泌乳速度相关指标的影响。【结果】 6个泌乳速度指标中，除前两分钟产奶量占比之外，班次产奶量、前两分钟产奶量、挤奶时间、平均流速和最高流速均基本呈对称分布，各个指标的变异较大，变异系数在30%左右；各指标两两之间存在极显著相关关系，相关系数在-0.84~0.89之间，泌乳速度与产奶量呈中等或强相关，与挤奶时间呈弱负相关，与前两分钟产奶量占比呈弱正相关。测定季节、胎次、泌乳阶段、初产月龄和挤奶班次对泌乳速度指标均有极显著影响（P<0.01）；不同季节中，冬季的班次产奶量和挤奶时间最大，夏季的平均流速最快，而秋季的最高流速最快；不同泌乳阶段中，在第Ⅱ泌乳阶段（45~99 d），奶牛的班次产奶量、挤奶时间、平均流速和最高流速均最大；不同班次中，在夜间班次（00：00—06：00），奶牛的班次产奶量、挤奶时间、平均流速和最高流速均为最大。【结论】 奶牛泌乳速度指标存在较大变异，对季节、胎次等环境和生理因素较为敏感，可为奶牛产奶性能的选育提供信息。

【目的】 探讨负压条件下向Modena稀释剂中添加不同浓度牛磺酸对长白公猪精子常温保存质量及抗氧化能力的影响，以期为猪精液保存体系的完善提供参考。【方法】 向Modena稀释剂中分别添加浓度为0（对照组）、1、5及10 mmol/L牛磺酸，各组精液在―0.04 Mpa条件下保存11 d。于第1、3、5、7、9及11天利用计算机辅助精子分析系统（CASA）检测精子活力、活率、畸形率、平均路径速度（VAP）、曲线速度（VCL）及鞭打频率（BCF）；利用试剂盒测定精液的总抗氧化能力（T-AOC）及H₂O₂含量。【结果】 在保存1~11 d期间，3个牛磺酸组猪精子的活力及活率均显著高于对照组（P<0.05）；第11天时5 mmol/L牛磺酸组猪精子畸形率显著低于其他各组（P<0.05）；自第3天开始，1、5及10 mmol/L牛磺酸组猪精子的VAP均显著高于对照组（P<0.05），其中以5 mmol/L牛磺酸组效果最佳；第11天时，5 mmol/L牛磺酸组猪精子的VCL、BCF均显著优于其他各组（P<0.05）；牛磺酸可显著提升猪精子的T-AOC （P<0.05），但第11天时T-AOC较弱；第1~3天时，所有试验组间猪精子H₂O₂含量无显著差异，第5~11天时，3个牛磺酸组的H₂O₂含量均显著低于对照组（P<0.05）。【结论】 在―0.04 Mpa条件下，向Modena稀释剂中添加牛磺酸可以显著改善常温保存猪精液的质量参数与抗氧化性能，其中以5 mmol/L添加量最好，保存时间在9 d以内为宜。

【目的】 检验长期保存在国家家畜基因库的湖羊冷冻胚胎和冷冻精液的质量，评价超低温冷冻保存技术保种的效果。【方法】 对保存于国家家畜基因库的冷冻胚胎（保存20年）和冷冻精液（保存20和30年）进行复苏，进行相应鉴定后分别进行胚胎移植和人工授精，同时以0年冷冻精液和新鲜精液为对照，测定其受胎率和后代的羔皮性能、生长性能及繁殖性能，检验保存效果。【结果】 本试验共解冻胚胎36枚，其中，A级胚胎22枚，B级胚胎7枚，C级胚胎5枚，D级胚胎2枚，冷冻胚胎复苏利用率达到94.44%（34/36），A级胚胎率达到61.11%（22/36），移植34枚，产羔17只，冷冻胚胎复苏移植产羔率达50.00%；保存30年的冷冻精液复苏后平均精子活力达35%，受胎率为58.57%，平均产羔1.90只；保存20年冷冻精液复苏后平均精子活力达31%，受胎率为53.66%，平均产羔1.95只；胚胎复苏移植羊、30和20年冷冻精液后代体型外貌鉴定均符合纯种湖羊特征，没有畸形个体；羔羊一级羔皮率分别是31.25%、42.03%和23.81%，保持了当年湖羊的羔皮特性；生长发育及繁殖性能与现有湖羊群体性能基本保持一致。【结论】 利用超低温冷冻技术长期保存湖羊冷冻胚胎和冷冻精液的方法是可行的，对地方品种保种具有重要意义。

野生型p53诱导的磷酸酶1（wild-type p53-induced phosphatase 1，Wip1）是蛋白磷酸酶2C （protein phosphatase type 2C，PP2C）家族中的一员，可以靶向调控机体内多种重要的信号分子，如p53、MAPK和Chk1/Chk2等，在动物细胞周期、增殖、分化、凋亡、衰老、自噬及DNA损伤修复等生理过程中发挥重要作用。Wip1基因缺失会使小鼠生殖激素水平失衡，且该基因通过ATM、Wnt、凋亡和炎症等信号通路影响精子生成过程，导致雄性动物繁殖力下降。此外，Wip1基因还可通过动态平衡调节DNA损伤反应和去磷酸化作用来影响卵母细胞和胚胎发育，从而调控雌性动物的生殖。免疫系统是机体执行免疫应答及免疫功能的重要系统，其与炎症反应和肿瘤发生有着紧密的联系。Wip1基因缺失会使病原体敏感性增强，影响T细胞、B细胞和中性粒细胞迁移及凋亡，进而导致炎症反应。作为原癌基因，Wip1基因通过调控各种信号分子影响DNA损伤修复、细胞周期进程及细胞凋亡等，参与肿瘤发生。因此，Wip1基因在动物繁殖调控和免疫调节中扮演着重要角色。目前，Wip1基因受到越来越多学者的关注，特别是其调控动物疾病发生发展的机制已成为研究热点。本研究主要综述了Wip1基因对动物繁殖及免疫的调节作用，以期为家畜育种、疾病防治及靶向治疗提供新思路。

【目的】 建立快速、准确检测猪链球菌自溶素（atl）抗体的间接ELISA方法。【方法】 根据GenBank登录的猪链球菌atl基因序列设计1对引物，采用PCR方法从猪源链球菌中获得atl基因序列；构建pET-32a-atl和pGEX-4T-1-atl重组质粒，并将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达；以表达纯化后的atl-His融合蛋白为免疫原，免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体；以兔多克隆抗体为一抗，用Western blotting方法检测atl-GST融合蛋白的反应原性；以纯化后的atl-GST融合蛋白为包被抗原，猪链球菌感染阳性血清作为标准血清，建立猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA检测方法。利用本试验建立的ELISA方法与商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒同时对184份血清样品进行检测并用本试验建立的方法进行临床样品检测。【结果】 从猪链球菌中成功扩增出atl基因；构建的重组质粒，经诱导表达和纯化，获得大小为40 ku的atl-His和48 ku的atl-GST融合蛋白；经Western blotting验证，兔抗atl-His抗血清与atl-GST融合蛋白具有良好的反应原性；间接ELISA结果显示，该检测方法的阴阳临界值为0.318，阳性血清稀释至1：1 280检测仍为阳性；批内批间变异系数均<10%，表明该方法具有良好的重复性及敏感性。本试验所建立的ELISA方法检测出96份阳性样品，商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒检测出66份阳性样品，符合率为71.7%。应用建立的方法检测458份不同饲养阶段的猪血清样品，其中检出277份阳性样品，阳性率为60.4%。【结论】 本试验成功建立了检测猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA方法并进行了初步应用，为猪链球菌病血清流行病学调查奠定了基础。

【目的】 了解并掌握新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus，NDRV）流行特点及生物学特性，为NDRV的防治提供理论基础和技术支持。【方法】 采集河北某鸭场疑似发生鸭呼肠孤病毒感染的组织，无菌处理后接种SPF鸡胚分离病毒，收获第3代尿囊液进行血凝试验，通过PCR、透射电镜观察、间接免疫荧光法（IFA）鉴定病毒，对分离得到的病毒进行体外细胞培养和动物回归试验，并采用Mega 7.0对其σC基因进行遗传进化分析。【结果】 分离得到的病毒不能凝集鸡红细胞，可致死鸡胚，死亡鸡胚出血、充血严重；经PCR鉴定，病毒呈NDRV阳性，其他病原（禽呼肠孤病毒、鸭病毒性肝炎、鸭坦布苏病毒、鸭瘟病毒、禽腺病毒血清4型）均呈阴性，将分离得到的病毒命名为BD/CHN/2020株；病毒纯化后，经电镜观察可见直径为60~80 nm、无囊膜的球形病毒粒子，该毒株可在BHK和LMH细胞上稳定增殖并产生细胞融合的细胞病变效应（CPE）；IFA结果显示，BD/CHN/2020株接种BHK细胞后在激光共聚焦显微镜下观察可见特异性绿色荧光；BD/CHN/2020株经皮下接种后，发病鸭出现精神沉郁、排白色稀粪等临床症状，剖检可见脾脏出血、肿大、有白色坏死灶等病理变化；序列比对发现，BD/CHN/2020株与NDRV毒株（TH11、091等毒株）在同一分支，与NDRV SY株核苷酸和氨基酸序列相似性最高，均为99.7%，属于NDRV。与灭活疫苗TH11株（KC493571.1）和弱毒疫苗JS01-105P株（V202168）相比，BD/CHN/2020株第93、120、132、158、253、298位氨基酸处发生了位点突变。【结论】 成功分离得到1株NDRV BD/CHN/2020株，分离毒株对北京鸭有较强的致病性，与国内疫苗株相比，BD/CHN/2020株的σC蛋白已经发生了氨基酸位点的突变，结果可为新型鸭呼肠孤病毒病的流行病学及疫苗研发奠定基础。

【目的】 试验旨在对新疆某规模牛场患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定及基因型分析。【方法】 采用抗原诊断试剂盒方法对在新疆某牛场随机采集的15份腹泻犊牛粪便样品进行检测，对抗原检测结果为阳性的样品进行反复冻融和过滤处理，然后将样品接种于Marc-145细胞进行病毒的分离和传代。对分离毒株进行间接免疫荧光试验（IFA）和负染电镜观察进一步确定病原。对分离株的VP6和VP7基因进行PCR扩增测序，并对其进行基因相似性比对和进化树分析。【结果】 抗原诊断试剂盒结果显示，3份粪便样品呈牛轮状病毒（Bovine rotavirus，BRV）抗原阳性。将阳性粪便样品分别接种于Marc-145细胞，仅有1份样品连续盲传至第9代出现明显的细胞病变效应（CPE）。IFA结果显示，接种该分离株的Marc-145细胞有亮绿色荧光，对照组未见荧光。电镜观察可见约65 nm的圆形病毒粒子，并命名为XJ-2022株。经PCR扩增获得VP6和VP7基因的目的条带，长度分别为1 356和342 bp。基因相似性比对和遗传进化分析表明，VP6基因与人源A群轮状病毒参考株DB2015-066（LC367318.1）相似性最高且遗传进化亲缘关系最近；VP7基因与牛源G10轮状病毒参考株XJX2（MN937506.1）相似性最高，遗传进化亲缘关系最近，确定该分离株为A群G10型轮状病毒。【结论】 试验成功分离到基因型为A群G10型BRV XJ-2022株，该毒株为新疆地区首次发现的多宿主来源的基因重配病毒。

【目的】 建立抗犬细小病毒（CPV）纳米抗体（Nb）库，从中筛选出具有中和活性的Nb。【方法】 以高免比格犬脾脏组织cDNA进行重链可变区（VH）扩增，与pBSD载体连接，构建pBSD-Nb库。结合细菌展示、流式细胞仪检测，在pBSD-Nb库中筛选高亲和力的Nb，获得阳性克隆并测序。利用Primer Premier 5.0软件设计Nb基因的上、下游引物，将阳性克隆质粒中Nb基因片段进行PCR扩增。利用pET-27b表达目的蛋白，通过变性、复性手段纯化目的蛋白，用SDS-PAGE分析纯化后的蛋白。将Nb包被96孔板，采用ELISA法检测Nb对CPV的亲和力。通过病毒微量中和试验检测Nb抑制CPV感染猫肾细胞（F81）的情况。【结果】 PCR扩增结果显示，在384 bp处可见明显条带，与预期大小相符，证明pBSD-Nb库构建成功。细菌展示后，流式细胞术检测结果显示，有9株阳性峰偏移率高的Nb，分别命名为Nb1、Nb2、Nb3、Nb4、Nb5、Nb6、Nb7、Nb8和Nb9。PCR扩增9株Nb基因片段，获得384 bp的条带。SDS-PAGE结果显示，在约14 ku处有一条带，说明成功获得纯化蛋白。ELISA检测结果表明，9株Nb中有6株Nb对CPV的亲和力较强。体外病毒中和试验检测发现，1株Nb能够中和病毒，抑制F81细胞病变，中和病毒的有效浓度为0.05 mg/mL。【结论】 本研究成功建立pBSD-Nb库，筛选出6株对CPV具有高亲和力的Nb，并成功获得1株具有中和活性的Nb，为CPV治疗性抗体制剂的开发提供了新的思路。

【目的】 研究牛病毒性腹泻病毒（BVDV）感染对新西兰白兔的致病性以及BVDV E2重组蛋白的免疫效果。【方法】 将实验室培养保存的BVDV病毒纯化并按照Reed-Muench法测定其病毒滴度。在致病性试验中，将10只新西兰白兔随机分为感染组和对照组，每组5只。感染组用1 mL纯化的BVDV病毒攻毒（滴鼻500 μL、耳缘静脉注射500 μL），对照组用等体积的生理盐水处理，连续3 d，每天1次，每天观察各组兔的临床症状并测量体温；分别于接种病毒后第6、9、12、15、17天通过耳缘静脉采集血液检测血常规；感染病毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定，采集后剖杀并采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织，制备病理切片观察病理变化。在免疫效果评价试验中，将10只新西兰白兔随机分为免疫组和对照组，每组5只，免疫组用E2重组蛋白（1 mg/只）与佐剂混合后经肌内多点注射免疫新西兰白兔，对照组接种等体积生理盐水；共免疫2次，2次免疫间隔为14 d。在一免后0、7、14、21、28 d采集血清，通过间接ELISA方法检测血清中抗重组蛋白特异性抗体水平；在一免后第28天按致病性试验中方法攻毒，在攻毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定，采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织制备病理切片观察病理变化及免疫组织化学检测。【结果】 纯化后BVDV的病毒滴度为4.16×10⁶ TCID₅₀/mL。与对照组相比，感染组部分新西兰白兔6 d内活动减少，采食略微减少，6 d后逐渐恢复正常，在感染第13天出现腹泻症状，从第5天开始体温略微升高，但均在正常范围内波动。与对照组相比，在攻毒第6和9天，感染组白细胞和血小板分别显著和极显著降低（P<0.05；P<0.01）；在攻毒第12、15和17天，感染组白细胞、血小板和淋巴细胞均极显著降低（P<0.01）。鼻拭子RT-PCR检测为阳性，气管、肺脏、脾脏及小肠组织表现出轻度至重度的组织病理学变化。间接ELISA检测结果表明，在一免后7 d时，血清抗体滴度为1：16~1：32；在一免后28 d时，血清抗体滴度为1：256~1：512；免疫攻毒组新西兰白兔鼻拭子经RT-PCR检测为阴性；组织病理学观察显示，免疫攻毒组气管及肺脏表现出轻微的组织病理学变化。免疫组化检测结果显示，免疫组结果均呈阴性，对照组结果均为阳性。【结论】 通过滴鼻及耳缘静脉注射BVDV的方式可以构建新西兰白兔致病模型，BVDV E2亚单位疫苗能够刺激机体产生特异性抗体，起到免疫防御的作用。

猪的繁殖力是决定其生产效率的重要因素，而病毒感染导致的猪流产问题严重影响猪的繁殖效率。了解猪流产相关病毒的致病机制有助于提高猪的繁殖效率，然而大量的研究主要集中在病毒与宿主的蛋白质或基因组DNA上，近年来，长链非编码RNA （long noncoding RNA，lncRNA）从新的视角揭示了病毒与宿主的相互作用，为研究二者之间的互作关系提供了新的途径。lncRNA是一组长度>200 nt的转录本，主要通过与DNA、RNA、染色质和蛋白质互作发挥功能，在某些发育阶段、组织和疾病状态中发生特异性表达，参与机体的多种调控。lncRNA是调控病毒与宿主相互作用的关键因子，在病毒感染宿主后lncRNA发生差异性表达，对应的靶基因富集到炎症和免疫相关的信号通路，参与机体的炎症、免疫和抗病毒反应。深入了解lncRNA在猪流产相关病毒与宿主之间的调控作用，对预防和治疗病毒感染导致的猪流产具有重要意义。作者对lncRNA及其与猪流产相关病毒的关系、宿主lncRNA与病毒的互作及调控通路展开了综述，并对其存在的问题及应用前景进行了展望，以期为猪的抗病育种、猪流产药物的开发和设计及流产类相关疾病的靶点治疗等提供理论依据。

寄生虫病严重影响全球人类、动物的健康安全，所带来的经济损失巨大。因此，有必要研制针对寄生虫病的疫苗，以阻断寄生虫病在动物与动物、动物与人类之间的传播。寄生虫存在多种免疫逃避机制，已开发的亚单位疫苗、减毒活疫苗、灭活疫苗均未达到理想的预防效果，且商品化疫苗多为针剂疫苗，普通针剂疫苗操作繁琐、运输储藏要求高且易使动物发生应激，直接影响经济成本，因此在实际生产当中需更多操作简单、便于储存、免疫成本更低的新型疫苗，以有效防控寄生虫病。诸多研究表明口服疫苗操作方便，只需通过口服方式投喂且宿主获得的抗体效价水平较高，有望成为预防寄生虫病的有效手段。口服疫苗是一种新型疫苗，依靠宿主的黏膜免疫系统来产生作用，即通过机体黏膜表面接种便可同时诱导机体产生持久的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫，为宿主提供高效的免疫保护。与传统疫苗相比，口服疫苗最显著的优点就是便于接种且应激小，还能形成强大的黏膜免疫屏障。但胃肠道的环境及易形成免疫耐受等因素也为口服疫苗的开发带来很大的挑战。笔者就黏膜免疫系统与口服疫苗作用机理、近几年寄生虫口服疫苗的研究进展及优点与挑战进行综述，以期为寄生虫口服疫苗的开发提供理论依据。

【目的】 采用分子对接以及体外试验确定青蒿素对牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）复制的抑制作用，为抗病毒药物和制剂开发提供新思路。【方法】 以BVDV-NS5B蛋白为作用靶点，通过PDB数据库检索蛋白三维晶体结构，并对其结构进行适当修饰处理；检索TCMSP数据库中的青蒿素结构，应用Autodock软件将两者进行分子对接及结合能打分。随后采用CCK-8试剂盒测定青蒿素对MDBK细胞的最大安全浓度；将选定浓度的青蒿素进行梯度稀释，采用先加病毒后加药物、先加药物后加病毒、中药和病毒同时作用的3种不同加药方式进行药物抗病毒试验，确定对病毒的最佳药物抑制浓度、预防浓度和杀灭浓度。应用实时荧光定量PCR法检测3种药物作用方式下BVDV的拷贝数，进一步明确药物对BVDV复制的作用。【结果】 分子对接数据表明青蒿素与BVDV-NS5B存在相互作用，结合自由能为-28.6748 kJ/mol。青蒿素在MDBK细胞上的最佳药物安全浓度为100 μmol/L。3种作用方式下青蒿素浓度为100 μmol/L时均可有效影响BVDV的复制，青蒿素对BVDV的抑制作用最为明显。【结论】 青蒿素可与BVDV-NS5B蛋白靶点互作，并能在MDBK细胞上有效抑制BVDV的复制，本研究为抗BVDV中药筛选奠定了基础。

【目的】 试验旨在获得分子质量小、溶血性低、稳定性好的抗菌肽。【方法】 以牛血红蛋白β亚基的氨基酸序列为基础，以抗菌肽的构效理论为指导，筛选出1条多肽（YKK-18），并以其为模板肽设计了3条长度为18个氨基酸残基的改造多肽（LJ-1、LJ-2和DLK-3），通过最小抑菌浓度的测定反映4条多肽的抗菌活性，采用琼脂糖扩散法分析有抗菌活性多肽的热稳定性、酸碱稳定性、盐离子稳定性和反复冻融稳定性，用分光光度法测定有抗菌活性多肽的溶血性。【结果】 设计的4条多肽均为带正电荷的亲水性多肽，与APD3数据库中收录的抗菌肽氨基酸序列相似性均低于50%，二级结构中均有较高含量的α-螺旋，改造多肽的两亲性程度均高于模板肽，模板肽对测试菌株没有抗菌活性，而改造多肽对测试的大肠杆菌、沙门菌、绿脓假单胞菌、葡萄球菌、白色念珠菌等均有不同程度的抗菌活性，其中DLK-3和LJ-1的抗菌活性优于LJ-2，但对奇异变形杆菌均没有抗菌活性，在100 ℃高温、pH 4.0~10.0、生理浓度的盐离子（Na⁺、K⁺、Ca²⁺、Mg²⁺、Fe³⁺、Cu²⁺）和14次反复冻融等条件下仍有较好的抗菌活性，DLK-3的溶血作用呈剂量依赖性，在200 μg/mL时的溶血率已超过50%，而LJ-1和LJ-2的溶血率在高浓度（200 μg/mL）时仍低于5%。【结论】 本研究结果为抗菌肽的分子设计和改造提供了参考，获得的抗菌肽LJ-1和LJ-2具有成为抗生素替代物的潜力。

【目的】 研究长链非编码RNA （lncRNA） Gm35082-202对布鲁氏菌侵染引起的细胞焦亡的影响，旨在为研究lncRNA参与布鲁氏菌引起的先天性免疫反应提供参考。【方法】 在Ensemble数据库中查找并分析Gm35082-202在染色体上的位置、外显子等信息；采用RNAfold在线软件预测Gm35082-202的二级结构；通过KEGG、GO富集分析预测Gm35082-202功能；用牛种布鲁氏菌（S2308）以感染复数（MOI）为0.01侵染小鼠巨噬细胞（RAW264.7），在侵染不同时间点（0、4、8、12、24、36、48 h）收集细胞，用实时荧光定量PCR检测Gm35082-202的表达量；利用LncLocator网站预测Gm35082-202亚细胞定位，用实时荧光定量PCR检测Gm35082-202在细胞质、细胞核的表达；将3条Gm35082-202 siRNAs （siRNA1、siRNA2和siRNA3）、siRNA NC转染RAW264.7细胞，实时荧光定量PCR检测Gm35082-202的表达量，筛选干扰效率最高的siRNA进行后续试验。Gm35082-202-siRNA、Gm35082-202-siRNA-NC转染RAW264.7细胞24 h后，再用布鲁氏菌侵染，以PBS为空白对照组（PBS），只用布鲁氏菌侵染的细胞为侵染对照组（Bru）。侵染24 h后收集PBS组、Bru组、Gm35082-202-siRNA组（Bru-siRNA）、Gm35082-202-siRNA-NC组（Bru-NC）细胞，用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测各组细胞中NOD样受体蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、Caspase-11、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-18的相对表达量，用ELISA法检测各组上清液中细胞因子IL-1β、IL-18分泌水平；通过菌落计数，比较各组布鲁氏菌的胞内生存能力。【结果】 基因结构分析表明，Gm35082-202是大小为525 nt的lncRNA （Trianscript ID：ENSMUST00000208164.2），含有2个外显子，位于小鼠7号染色体（Chr7：100 324 295~100 326 967），其二级结构含有多个茎环及多分枝内部环结构；KEGG信号通路富集分析表明，Gm35082-202主要参与NOD样受体、钙调节以及细胞因子信号通路的调控；GO功能分析结果显示，Gm35082-202功能主要涉及DNA转录、线粒体组分以及金属离子结合。布鲁氏菌侵染RAW264.7细胞后，与0 h组相比，侵染4和8 h时Gm35082-202表达量显著增加（P<0.05），侵染12、24、36和48 h时表达量极显著增加（P<0.01）；亚细胞定位预测结果表明，Gm35082-202主要分布于细胞核（58.3%），其次是细胞质（35.1%），布鲁氏菌侵染RAW264.7细胞0 h时，Gm35082-202在细胞核中分布比例为63.4%，在侵染4、24和36 h Gm35082-202在细胞核中的分布减少，分别为24.5%、29.6%和30.4%。Gm35082-202-siRNA1、Gm35082-202-siRNA3均极显著降低Gm35082-202的表达量（P<0.01），Gm35082-202-siRNA1干扰效率最高。与Bru组相比，Bru-siRNA组中NLRP3、Caspase-1、Caspase-11、IL-1β和IL-18基因的表达量均极显著降低（P<0.01），NLRP3和Caspase-11蛋白的表达量显著降低（P<0.05），Caspase-1蛋白的表达量极显著降低（P<0.01）；细胞上清中IL-1β和IL-18分泌水平均极显著下降（P<0.01）；Bru-siRNA组胞内布鲁氏菌数显著升高（P<0.01）。【结论】 布鲁氏菌通过上调Gm35082-202表达促进巨噬细胞焦亡，该结果可为进一步探究布鲁氏菌侵染时Gm35082-202参与调控宿主细胞焦亡的分子机制提供参考。

【目的】 研究连花柴芩可溶性粉对风热犯肺所导致的鸡发热、咳嗽、食欲减退、口渴喜饮等证候的临床疗效。【方法】 采用鸡传染性支气管炎病毒人工攻毒建立风热犯肺证肉鸡病例模型，将出现典型风热犯肺证临床症状的150只鸡纳入到试验中，并随机分为5组，30只/组，分别为连花柴芩可溶性粉高、中、低剂量组（连花柴芩可溶性粉浓度分别为4、2、1 g/L），麻杏石甘颗粒药物对照组（1 g/L），模型对照组，另设30只为健康对照组。除健康对照组和模型对照组外，各试验组连续饮水给药5 d，记录给药前后鸡的精神状态、体温、呼吸道症状、采食及饮水的变化，并检测各组鸡的免疫器官指数、外周血免疫细胞亚群指标，综合考察连花柴芩可溶性粉的临床疗效。【结果】 连花柴芩可溶性粉高、中剂量组对风热犯肺所致的鸡发热、咳嗽的总有效率分别为90.00%和86.66%，显著高于模型对照组（P<0.05），且对病鸡采食量下降、饮水量增多具有较好的缓解效果（P<0.05）；连花柴芩可溶性粉能提高病鸡免疫器官指数，促进病鸡外周血中CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞增殖，且连花柴芩可溶性粉高、中剂量显著高于模型对照组（P<0.05）。【结论】 连花柴芩可溶性粉对风热犯肺所致的鸡发热、咳嗽、食欲减退、口渴喜饮具有较好的缓解和治疗效果，结合药物量效关系和经济成本等因素综合考虑，推荐连花柴芩可溶性粉临床应用剂量为2 g/L，饮水给药，连用5 d。

【目的】 基于网络药理学方法探究中药槐花主要活性成分的抗炎作用机制。【方法】 依托TCMSP数据库筛选槐花有效成分及相应靶点，利用Uniprot数据库和Cytoscape 3.6.1软件构建有效成分-靶点网络图；结合NCBI、GeneCards、OMIM等数据库检索槐花抗炎相关靶点，上传至STRING平台，构建蛋白互作网络图；利用DAVID数据库对关键靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】 槐花中主要有槲皮素、异鼠李素、山奈酚、β-谷甾醇、N-[6-9-吖啶基氨基己基]苯甲酰胺和槲皮素-3-甲基醚6种有效成分，可作用于IL10、NFKBIA、ICAM1、MMP2、BCL2L1、STAT1、VCAM1、IFNG、MAPK14和IL2等152个抗炎靶点。与生物过程相关的条目16个，即RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、正调控转录DNA模板、凋亡过程的负调控、基因表达的正调控、炎症反应和细胞对脂多糖的反应等；与分子功能相关的条目6个，即酶结合、转录因子结合、蛋白结合等；与细胞组分相关的条目2个，即细胞外间隙和细胞质基质；21条相关信号通路，即TNF信号通路、Toll样受体信号通路、T细胞受体信号通路、NOD样受体信号通路、癌症通路、乙型肝炎、HTLV-Ⅰ感染、甲型流感等。【结论】 槐花可能通过槲皮素、异鼠李素、山奈酚、β-谷甾醇等活性成分作用于RB1、CDKN1A、IKBKB、CHUK、IL2和CXCL10等关键靶标，参与TNF信号通路、Toll样受体信号通路、T细胞受体信号通路、NOD样受体信号通路联合发挥抗炎作用，揭示了槐花多成分、多靶点、多通路的抗炎作用机制。

【目的】 探究薯蓣皂苷元（diosgenin，Dio）对顺铂（cisplatin，CP）诱导大鼠肾损伤的缓解作用。【方法】 选取24只健康的雄性Wistar大鼠，随机分为对照组（C）、Dio组（Dio）、模型组（CP）和Dio干预组（Dio+CP）。C和CP组每天灌胃6 mL 0.5% CMC-Na，Dio和Dio+CP组每天灌胃Dio （60 mg/kg），连续灌胃10 d。在试验第7天，CP和Dio+CP组大鼠经尾静脉注射CP （6 mg/kg），然后每天继续灌胃Dio，CP给药72 h后处死各组大鼠，无菌分离肾脏组织，用HE染色观察肾脏病理变化；用试剂盒检测总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）含量；用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测肾脏肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子κB p65（NFκB p65）、环氧合酶-2（COX-2）、白细胞介素-1β（IL-1β）和IL-10 mRNA和蛋白的表达；用免疫化学法检测肾脏受体相互作用蛋白激酶-1（RIPK1）和RIPK3蛋白的表达。【结果】 HE染色结果显示，对照组和Dio组肾脏结构正常；CP组大鼠肾小管上皮细胞发生脱落以及空泡变性，肾脏结构被破坏，Dio+CP组肾小管的损伤明显减轻。与对照组相比，CP和Dio+CP组肾脏中MDA含量极显著升高（P<0.01），T-AOC和CAT活性均极显著降低（P<0.01）；与CP组相比，Dio+CP组肾脏中MDA含量极显著降低（P<0.01），T-AOC和CAT活性均极显著增加（P<0.01）。实时荧光定量PCR和Western blotting结果表明，与对照组相比，CP组大鼠肾脏中TNF-α、COX-2、NFκB p65和IL-1β mRNA和蛋白的表达量均极显著升高（P<0.01），IL-10 mRNA和蛋白的表达量均极显著降低（P<0.01）；与CP组相比，Dio+CP组TNF-α、COX-2、NFκB p65和IL-1β mRNA和蛋白的表达量均显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01），IL-10 mRNA和蛋白的表达量均极显著升高（P<0.01）。免疫组化结果表明，与对照组相比，CP组大鼠肾脏中RIPK1和RIPK3蛋白的表达量均极显著升高（P<0.01）；与CP组相比，Dio+CP组大鼠肾脏中RIPK1和RIPK3蛋白的表达量分别极显著（P<0.01）和显著（P<0.05）降低。【结论】 Dio通过抑制肾脏氧化应激、炎症反应和细胞程序性坏死缓解CP诱导的大鼠肾损伤。

【目的】 通过网络药理学研究丹参-川芎药对治疗缺血性脑卒中的有效性成分及相应基因靶标，探讨其作用机制。【方法】 应用中药系统药理学计数平台（TCMSP）、GeneCards、OMIM数据库，筛选出丹参-川芎药对治疗缺血性脑卒中的潜在靶点并进行GO功能和KEGG通路富集分析。分别设置假手术组、模型组、丹参-川芎低、中、高剂量组，采用预防和治疗给药方式对线栓制备的脑缺血再灌注模型大鼠进行干预，采用Zea-longa评分法对脑缺血再灌注24 h模型大鼠进行神经功能评分，苏木素-伊红（HE）染色法观察脑组织病理学变化进行初步验证。【结果】 本研究共筛选到丹参-川芎药对主要有效活性成分共72个，其中川芎7个，丹参65个，缺血性脑卒中的靶点基因1 972个，有效活性成分与缺血性脑卒中共同作用靶标94个，包括IL6、IL10、TNF、MMP9、VEGFA、CASP3等；GO功能和KEGG通路富集结果提示，丹参-川芎药对治疗缺血性脑卒中与PI3K-Akt、cGMP-PKG、VEGF等多个信号通路有关。动物试验结果表明，丹参-川芎可减轻脑组织病理改变，减轻神经功能缺损，改善脑缺血再灌注损伤。【结论】 丹参-川芎药对可能是通过PI3K/Akt信号通路改善脑缺血再灌注损伤，发挥抗细胞凋亡的作用。

【目的】 明确福建漳州地区罗非鱼无乳链球菌临床分离株的血清型、毒力基因携带情况与耐药特性，为鱼源无乳链球菌研究提供新的数据。【方法】 于福建省漳州市部分罗非鱼养殖场采集疑似无乳链球菌感染的病鱼样品，通过分离培养、形态观察及生化试验初步分离鉴定病原菌。经由16S rDNA特异性片段引物、16S rDNA通用引物进行PCR鉴定及测序比对鉴定分离株。用PCR方法检测分离株血清型及4个主要毒力基因（cylE、sodA、gapC和scpB基因）分布情况。通过纸片扩散法对分离菌株进行11大类共29种抗菌药物的药敏试验，并进行多重耐药分析。【结果】 分离株菌落呈白色圆形、边缘整齐、表面光滑湿润，呈β溶血；革兰染色阳性，菌体排列为长短不一的链状，单个或成对存在；VP试验、CAMP均为阳性，触酶试验阴性，能发酵海藻糖，均符合无乳链球菌的典型特征，经鉴定共分离获得14株鱼源无乳链球菌。14株分离菌株的血清型均为Ⅰa型。分离株毒力基因cylE、sodA、gapC的检出率均为100%，而毒力基因scpB均未检出。分离菌株对磺胺异噁唑、庆大霉素、卡那霉素耐药率均为100%，对链霉素、新霉素、甲氧胺嘧啶耐药率均>70%。分离株均为多重耐药菌株，6重及以上耐药的菌株占总分离菌株数的78.57%。【结论】 本研究明确了当前福建漳州地区罗非鱼源无乳链球菌的血清型、毒力基因和耐药特性，为进一步研究鱼源无乳链球菌的致病机理和临床有效防控措施提供参考。

【目的】 了解广西地区不同饲养模式下不同季节水牛奶霉菌毒素污染状况。【方法】 随机采集2020年10-11月（秋季）和2021年4月（春季）每季3种饲养模式（规模化、养殖合作社或养殖小区、散养）原料水牛奶样品各8个，共计48个样品，利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定水牛奶的霉菌毒素（黄曲霉毒素M₁（AFM₁）、赭曲霉毒素A （OTA）、HT-2毒素（HT-2）、T-2毒素（T-2）、α-玉米赤霉烯醇（α-ZEL）、玉米赤霉烯酮（ZEN）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON））污染状况。【结果】 在48个样品中，有16个样品（33.33%）检测出AFM₁，养殖合作社或养殖小区模式检出率最高（43.75%），散养模式检出率最低（18.75%）。检出样品的AFM₁含量均低于中国的国家限量标准0.5 μg/kg，其中2个样品（4.17%）超过欧盟限量标准（0.05 μg/kg）。原料水牛奶中HT-2、T-2、α-ZEL、ZEN和DON的成人每日最大容许摄入量（PMTDI）均远低于联合国粮农组织和世界卫生组织下的食品添加剂联合专家委员（JECFA）设定值，原料水牛奶中OTA的成人每周耐受摄入量（PTWI）也低于JECFA设定值，且OTA含量均低于欧盟限量标准（<2 ng/mL）。与养殖合作社或养殖小区模式相比，散养和规模化模式生产的原料水牛奶中HT-2含量均显著降低（P<0.05）。规模化模式生产的原料水牛奶T-2含量显著低于散养模式（P<0.05）。原料水牛奶中秋季AFM₁平均含量和超欧洲限量标准率高于春季，但春季AFM₁的检出率高于秋季；3种饲养模式中，春秋两季散养模式样品中AFM₁检出率均最低；秋季各养殖模式原料水牛奶中OTA和DON的平均含量均高于春季。【结论】 目前广西地区原料水牛奶质量在安全范围（AFM₁含量低于0.5 μg/kg，HT-2、T-2、α-ZEL、ZEN和DON的成人PMTDI及OTA的成人PTWI均低于JECFA设定值），但多种霉菌毒素在水牛奶中均有检出，污染风险仍应引起人们的警惕。

【目的】 查明江苏某鹅场鹅发病及死亡原因。【方法】 剖检病死鹅，运用细菌分离纯化、染色观察、生化试验、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）鉴定、16S rDNA测定方法进行病原菌分离鉴定，通过药敏试验和小鼠致病性试验探究分离菌株的特性。【结果】 从患病鹅肝脏分离到1株革兰氏阴性短杆状细菌；生化试验结果显示，此菌株可发酵葡萄糖、麦芽糖、枸橼酸盐、尿素；MALDI-TOF MS鉴定结果显示，此菌株为类志贺邻单胞菌；16S rDNA序列对比分析发现，分离菌与类志贺邻单胞菌相似性最高，达98%以上；药敏试验结果显示，分离菌对左氧氟沙星、美罗培南、头孢西丁、庆大霉素等10种抗菌药敏感，对四环素、头孢吡肟、头孢他啶、头孢唑林表现为中介，对阿奇霉素、复方新诺明、氨苄西林等6种药物表现为耐药，是典型的多重耐药菌；小鼠致病性试验结果显示，分离菌对小鼠的半数致死量为5.0×10^6.5 CFU。【结论】 本试验首次报道了从鹅体内分离到致病性类志贺邻单胞菌，通过药敏试验筛选了左氧氟沙星、美罗培南、头孢西丁等有效的临床常用抗菌药，分离株对小鼠致病性较强，提示其带来的潜在风险不可忽视。

【目的】 分析河北省奶牛源大肠杆菌的致病性及中草药体外抑菌效果。【方法】 于河北省收集30份具有典型临床症状的奶牛粪便样品，对样品进行细菌培养观察、生化鉴定、血清型鉴定、透射电镜观察、PCR扩增及致病性研究。采用传统煎煮法与醇提法提取9种中草药，通过96孔板-二倍稀释平板法测定最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）及最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration，MBC），筛选出抑菌效果较强的中草药；将中草药进行两两联合，采用牛津杯法测定抑菌圈直径（inhibition zone diameter，IZD），并通过96孔板-二倍稀释平板法测定MIC和MBC，评价药物的抑菌效果。【结果】 分离获得12株奶牛源大肠杆菌，检出率为40%，均具有致病性，其优势血清型为O55，检出率为58.3%。在中草药水提取液中，五倍子、五味子抑菌效果最强，MIC和MBC均为7.80 mg/mL，其次为乌梅、夏枯草、石榴皮，具有较好的抑菌效果，MIC和MBC均为15.63 mg/mL；在中草药醇提取液中，五倍子抑菌效果最强，MIC和MBC均为3.97 mg/mL，其次为五味子抑菌效果较好，MIC和MBC均为7.80 mg/mL。在中草药两两联合中，五味子与乌梅联合用药表现出协同作用，抑菌效果最强，IZD为26.00 mm，MIC和MBC均为3.97 mg/mL，其次为五倍子与乌梅，IZD为23.66 mm，MIC和MBC均为7.80 mg/mL。【结论】 本研究成功分离到具有致病性的大肠杆菌，优势血清型为O55型，筛选出抑菌效果较好的单味及复方中草药，为大肠杆菌引起的奶牛腹泻临床应用中药防治提供科学依据。