猪α-（1，2）岩藻糖转移酶2（FUT2）基因为鞘糖脂生物合成-球系列通路中的重要基因，可能在断奶仔猪抵抗大肠杆菌F18侵染过程中发挥着调控作用。为探究猪FUT2基因的序列结构及其生物学功能，试验采用PCR扩增得到地方猪品种东串猪FUT2基因的CDS全序列，进而预测和分析FUT2基因的蛋白质序列及其功能区域，同时对其在8头35日龄东串断奶仔猪11个组织中的表达水平进行检测与分析。结果显示，FUT2基因的CDS序列全长为1 023 bp，共编码340个氨基酸，FUT2蛋白为脂溶性的亲水蛋白，蛋白结构不稳定，该蛋白存在1个跨膜螺旋结构，但不存在信号肽，表明FUT2蛋白为膜蛋白；FUT2蛋白存在2个N-糖基化位点（185和305位氨基酸），无O-糖基化位点，此外该蛋白还存在14个潜在的磷酸化位点，包括6个Ser、2个Thr和6个Tyr，对其功能区域进行分析发现，FUT2蛋白存在1个超级家族保守结构域：FUT1-FUT2-like（58-319位氨基酸）；系统进化树结果显示，猪与牛的亲缘关系相对较近，与人、黑猩猩、大鼠和小鼠等亲缘关系相对较远；FUT2基因在东串断奶仔猪11个组织中均有表达，在消化道和免疫组织中表达水平较高。试验结果推测FUT2基因在断奶仔猪抵抗大肠杆菌F18中可能具有一定的作用，且可能是通过合成岩藻糖转移酶间接发挥其抵抗大肠杆菌F18的作用。

试验旨在研究枯草芽孢杆菌发酵金樱子饲料添加剂的最佳工艺。通过单因素和响应面相结合的试验方法对枯草芽孢杆菌发酵金樱子生产工艺进行优化。选用枯草芽孢杆菌对中草药金樱子进行发酵，以金樱子多糖含量为检测指标，在碳源、氮源、含水量、接种量和发酵时间5个单因素的基础上选择对发酵效果影响较大的关键因素，进行响应面试验来进一步优化。结果表明，5个单因素中，含水量、接种量和发酵时间对发酵效果影响较大，为关键因素，经响应面法进一步优化后得出最佳条件为：含水量为53.79%、接种量为5.74%、发酵时间为2 d，此条件下测得金樱子多糖平均值为15.47%，与响应面预测值15.36%接近。相较于未发酵金樱子中10.49%的金樱子多糖，发酵后金樱子多糖提高了47.47%。此发酵工艺简单易操作，发酵效果显著，可为安全绿色饲料添加剂的研制提供理论依据。

为研究瘦素（leptin，LP）基因成熟肽第3外显子定点突变前后的结构差异，从而推测其功能差异，本试验根据GenBank公布的牛leptin序列设计特异性引物，扩增leptin成熟肽区域，并对leptin成熟肽序列进行克隆测序。结合生物信息学手段对牛leptin基因E3-125-C>A定点突变前后，leptin编码产物的结构和功能差异进行分析。结果显示，leptin单碱基的突变可改变氨基酸的编码，导致其在一级结构、二级结构形成显著差异，而三级结构相对较稳定。结果表明，leptin基因E3-125-C>A位置的单碱基突变，导致结构变化，可能从而引起功能变化。

为了获得高纯度的白细胞介素-4（IL-4）蛋白，对分离得到的水貂外周血淋巴细胞经植物血凝素（PHA）诱导后，提取淋巴细胞总RNA，根据GenBank中登录的雪貂IL-4基因序列，设计并合成特异性引物，通过RT-PCR扩增获得了水貂IL-4基因序列全长399 bp，编码132个氨基酸，与雪貂氨基酸序列同源性高达99.2%，与熊猫、犬同源性均为90.0%。将编码成熟蛋白基因构建到原核表达载体pProEX-HTb，IPTG诱导后，SDS-PAGE及Western blotting结果显示，IL-4表达产物为15 ku的包涵体蛋白。通过His-Trap HP亲和层析预装柱变性、复性洗脱可获得高纯度的重组IL-4蛋白。本试验为水貂IL-4基因的进一步研究奠定了基础。

试验旨在研究威宁牛、思南牛、关岭牛和黎平牛不同组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptors γ，PPARγ）基因mRNA的表达差异。以这4个贵州地方品种黄牛为试验动物，提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织的总RNA，设计PPARγ基因的实时荧光定量引物，以牛GAPDH基因为内参，应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ基因在4个品种不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示，PPARγ基因在4个品种黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织中均有表达，但在脂肪组织中的表达量高于其他组织，且差异极显著（P<0.01），在脾脏和肺脏中也有较高表达，而在肾脏、肝脏、心脏和背最长肌中表达量较低；不同品种PPARγ基因的表达在部分组织中存在差异。研究表明，PPARγ基因在不同组织中的表达量存在差异，可能与其在不同组织中的功能有关，而品种对于PPARγ基因的表达影响不大。

多肽表位作为抗原的重要组成成分，可以被宿主免疫系统B细胞产生的抗体（Ig）和T细胞受体（TCR）识别，从而诱导机体产生免疫保护作用。传统的研究方法如交叠肽合成等费时费力，极大地限制了多肽表位的研究。随着生物信息学、高通量测序、CRISPR/Cas9、质谱（MS）等技术出现以及TAP非依赖型蛋白加工机制的不断阐述，使表位的研究得到不断完善。作者介绍了最新的多肽表位研究方法，包括利用计算机对B细胞和T细胞表位的预测、基于MHC与抗原肽结构作用为基础的方法、结合高通量测序技术的表位筛选方法、结合新型基因编辑技术的表位筛选方法、TAP非依赖性T细胞表位的最新研究等，并对今后多肽表位研究的发展进行了展望。

猪口蹄疫免疫防御是控制猪口蹄疫疫情的重要手段，免疫水平指标通常用免疫抗体水平判定。对于其细胞免疫水平检测尚缺乏成熟可靠的技术，本试验利用市售ELISpot试剂盒建立猪口蹄疫特异γ干扰素检测方法，刺激物分别采用疫苗全病毒颗粒（O/Mya98/XJ/2010）、口蹄疫病毒T细胞表位多肽池，以植物血凝素（PHA）为阳性对照，对细胞浓度、刺激物浓度、孵育时间等进行优化。优化条件为：外周血PBMC新鲜提取或冻存细胞成活率90%以上，最佳细胞数为2×10⁵个/孔，最佳反应时间是16 h，病毒粒子146 S含量为100 ng/mL，多肽最佳浓度10 μg/mL，PHA的最佳浓度是20 μg/mL。ELISpot技术检测口蹄疫病毒感染猪γ干扰素方法的建立，为口蹄疫免疫力评价及口蹄疫疫苗免疫效果评估及进一步研究其与疫苗保护力（PD₅₀）的相关性奠定基础。

为研究牛血红蛋白源抗菌肽P3及其类似肽（JH-0、JH-1、JH-2、JH-3）的生物学功能，本研究利用在线软件分析了抗菌肽P3及其类似肽的生物信息学特性，发现这5个抗菌肽均带正电荷，等电点均大于8.00，均为疏水蛋白，定位于细胞外，不含有跨膜区、信号肽序列和糖基化位点，P3和JH-2的二级结构为α-螺旋+β-折叠，JH-3为100%的α-螺旋，JH-0和JH-1为无规则卷曲结构，P3、JH-2和JH-3在第13位氨基酸即苏氨酸（Thr，T）有一个糖基化位点。根据分析结果推测抗菌肽P3及其类似肽可作用于细胞壁或细胞膜，从而使菌体死亡。

试验旨在研究日粮中添加苦玄参提取物对广西麻鸡血清生化指标及免疫功能的影响。选用1日龄广西麻鸡500羽，随机分为5组（A、B、C、D、E组），每组设5个重复，每个重复20羽。其中A、B、C组为试验组，分别在基础日粮中添加0.70%，0.35%和0.175%的苦玄参提取物；D组为阳性药物对照组，在基础日粮中添加0.01%硫酸黏菌素预混料；E组为空白对照组，饲喂基础日粮，预试期3 d，正试期49 d。于21、35和49日龄时分别从每组抽取10羽试验鸡进行心脏采血，测定血清生理生化及免疫指标。结果显示：与E组相比，日粮添加苦玄参提取物对鸡的血清TP、GLU含量无显著影响（P>0.05）；但21和35日龄时，A、B、C组的TBILI含量均极显著或显著低于E组（P<0.01；P<0.05）；35日龄时，A、B、C组的血清AKP活性均极显著高于E组（P<0.01），C组的GOT活性在21和35日龄时显著高于E组（P<0.05）；49日龄时，A、B、C组的IgG和B、C组IL-2含量均显著或极显著低于E组（P<0.05；P<0.01），B组T-AOC显著高于E组（P<0.05），A、B、C组血清GSH含量均显著高于E组（P<0.05）。由此可知，日粮中添加的苦玄参提取物显著降低了广西麻鸡的血清TBILI含量，并在一定程度上降低了IgG、IL-2和IL-6含量，提高了AKP和GOT活性及T-AOC和GSH含量。综合考虑，以0.35%的添加量效果最好。

试验旨在研究移植骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）对萨能奶山羊乳腺发育的影响。选取体重接近的2月龄健康萨能奶山羊16只，随机分为对照组和试验组。将扩增至P6代的BMSCs经颈静脉注射至奶山羊体内，对照组注射等量生理盐水，两组间饲养管理均相同。每月进行空腹采血，并分别在3、5和7月龄采集乳腺组织样品，制备乳腺组织冰冻切片，观察记录各组乳腺组织导管数和腺泡数。结果显示，移植BMSCs后，5和7月龄时，试验组奶山羊的导管数、腺泡数均显著高于对照组（P<0.05）。在5、7、8、9月龄时，试验组奶山羊血清中雌激素（E₂）水平显著高于对照组（P<0.05）；在5~9月龄时，试验组血清中孕酮（P）水平显著高于对照组（P<0.05）；在7~9月龄时，试验组血清中催乳素（PRL）和胰岛素（INS）水平均显著高于对照组（P<0.05）；8、9月龄时，试验组血清中促性腺激素释放激素（GnRH）水平显著高于对照组（P<0.05）；整个试验过程中试验组血清中瘦素（LEP）、促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）和促肾上腺皮质激素（ACTH）水平均高于对照组，但差异不显著（P>0.05）。综上所述，注射BMSCs能增加奶山羊乳腺导管数和腺泡数，提高血清中激素水平，从而促进乳房发育。

试验旨在研究阴离子盐对围产期奶牛产后健康和生产性能的影响。试验选取24头围产前期经产奶牛分为对照组和试验组，对照组饲喂牧场原饲料、试验组于产前21 d饲喂含阴离子盐颗粒料，产犊后统一饲喂牧场原有日粮。结果显示，试验组奶牛尿液pH值维持在5.7~6.9；与对照组相比，试验组血液pH值显著降低（P<0.05），血钙含量、血糖水平、碱性磷酸酶活性在产后1 d显著升高（P<0.05）；试验组低血钙、产乳热、胎衣不下、真胃移位和乳房炎等疾病的发生率降低，其中胎衣不下发病率显著降低（P<0.05）；但两组间产奶量无显著差异（P>0.05）。综上所述，饲喂阴离子盐颗粒料可提高奶牛的健康状况，维持血钙平衡。

为了研究黄芪多糖缓解肉牛短途运输应激的效果，选择15头（12月龄、体重250 kg左右）健康西门塔尔杂交肉牛，随机分至对照组、运输应激组和黄芪多糖处理组中，每组5头牛，黄芪多糖处理组牛给予10 g/（d·头）的黄芪多糖，运输应激组和黄芪多糖处理组进行3 h的60 km/h模拟公路运输。运输前1 d及运输后1、7 d采集所有试验牛的血样，测定相关生化指标，同时统计肉牛日增重和发病率。结果表明，运输应激组肉牛血清Na⁺在运输后1 d显著升高（P<0.05），对照组和黄芪多糖处理组在试验期间各时间点血清Na⁺、K⁺、Ca²⁺和Cl^-无显著差异（P>0.05）；运输应激组在运输后1、7 d的Na⁺/K⁺-ATP酶活性均极显著低于运输前1 d（P<0.01），血清SOD活性、GSH-Px活性均显著低于运输前1 d（P<0.05），运输后1、7 d血清MDA含量均显著高于运输前1 d（P<0.05），对照组和黄芪多糖处理组上述指标在试验期间均无显著变化（P>0.05）；对照组和黄芪多糖处理组运输后7 d平均日增重均极显著高于运输应激组（P<0.01），黄芪多糖处理组的呼吸道和消化道发病率均低于运输应激组。综上，黄芪多糖对肉牛短途运输应激防治具有一定的应用价值。

试验旨在研究乳酸菌微生态制剂对冬毛期北极狐生长性能、营养物质消化率及血清生化指标的影响。选取135日龄、体重相近的健康雌性北极狐40只，随机分为4组，每组10个重复，每个重复1只。Ⅰ组饲喂基础日粮；Ⅱ组饲喂基础日粮+0.02%硫酸黏杆菌素；Ⅲ组饲喂基础日粮+1 mL乳酸菌微生态制剂（乳酸菌活菌数为3×10⁹ CFU/mL）；Ⅳ组饲喂基础日粮+10 mL乳酸菌微生态制剂。结果显示：与对照组相比，添加乳酸菌微生态制剂可显著提高冬毛期北极狐平均日增重（P<0.05），并显著降低料重比（P<0.05）；可显著提高冬毛期北极狐粗脂肪和总能表观消化率（P<0.05）；添加高水平乳酸菌微生态制剂可显著降低冬毛期北极狐血清总胆固醇水平（P<0.05）。此外，抗生素组北极狐血清谷丙转氨酶水平极显著高于其他各组（P<0.01），谷草转氨酶水平显著高于对照组（P<0.05）。综上所述，在本试验条件下，当北极狐日采食活乳酸菌数达到3×10⁹ CFU/mL时即可促进其生长，粗脂肪和总能表观消化率显著提高；当北极狐日采食活乳酸菌数达到3×10¹⁰ CFU/mL时，血清总胆固醇水平显著降低；长期添加硫酸黏杆菌素可能造成北极狐肝脏损伤。

试验旨在探讨发酵鲜食大豆秸秆（FSBS）对母羊繁殖性能、初乳品质及消化性能的影响。选择16只产前30 d的妊娠崇明白山羊随机分为4组，每组4只，分别饲喂以0（对照组）、17.5%（试验A组）、35.0%（试验B组）、52.5%（试验C组） FSBS制作的TMR颗粒料，试验从产前30 d至羔羊60 d断奶。结果表明，与对照组及试验A组相比，试验C组母羊产后30 d日粮干物质（DM）、粗蛋白质（CP）、粗脂肪（EE）、有机物（OM）的表观消化率显著提高（P<0.05）；母羊产后30 d血清尿素氮（BUN）含量在各处理组之间差异显著（P<0.05），其中试验C组含量最低；与对照组相比，试验C组羔羊的初生窝重和断奶窝重显著提高（P<0.05），母羊初乳中乳脂（MF）、乳蛋白（MP）、乳糖（ML）、乳总固形物（TS）和乳非脂固形物（SNF）的含量显著提高（P<0.05）。综上所述，FSBS具有提高母羊日粮养分消化率和初乳品质、促进羔羊生长发育的作用，且含量为52.5%时作用最佳，可在养羊业推广应用。

体外培养法作为反刍动物营养学研究的重要方法，主要有批次培养法和连续培养法两种。由于连续培养法能够更好地模拟瘤胃内发酵情况，其应用也更为广泛。但连续培养瘤胃模拟装置的主要运行参数多，如温度、pH、稀释率、缓冲液与瘤胃液接种比、搅拌速率与方式等，且不同运行参数设置以及参数的组合对试验结果影响较大，因此作者在总结前人研究结果的基础上，就不同工作参数对连续培养瘤胃模拟发酵过程中挥发性脂肪酸、干物质消失率、pH、酶活、原虫数量、微生物蛋白等指标的影响进行了综述。

为探究鸡蛔虫的种内遗传变异和系统发育关系，对分离自四川省西昌市的15个鸡蛔虫分离株的线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅰ亚基（cox1）基因部分序列和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位Ⅳ（nad4）基因全序列进行PCR扩增、序列测定及分析，并用cox1和nad4基因部分序列构建鸡蛔虫与其他蛔虫的NJ树和贝叶斯树。测序结果显示，所获得的鸡蛔虫cox1和nad4基因全序列长度分别为1 152和1 236 bp，分别有33和40个变异位点，碱基变异率分别为0~2.1%和0~2.3%；分别检测到8和11个单倍型，总的单倍型多样性分别为0.733±0.124和0.933±0.054，核苷酸多样性分别为0.00433±0.00153和0.00541±0.00157，平均遗传距离分别为0.004和0.005。构建的种系发育树均显示15个鸡蛔虫西昌分离株与其他国家/地区的鸡蛔虫分离株聚类形成一个分支，与鸽蛔虫的亲缘关系最近，与其他蛔虫所属的分支相隔较远。研究结果表明鸡蛔虫西昌分离株的遗传变异程度低，且nad4基因比cox1基因更适合作为研究鸡蛔虫分离株遗传变异的分子标记。

为了探讨雌激素受体（estrogen receptor，ESR）、骨桥蛋白（osteopontin，OPN）和视黄醇结合蛋白4（retinol binding proteins 4，RBP4）的多态性对大白猪繁殖性状的影响，本研究采用PCR-RFLP技术检测试验猪群ESR、OPN和RBP4基因的多态性，并分析其对大白猪总产仔数、产活仔数、健仔数、窝重、初生重、死胎、木乃伊、弱仔数和畸形数等性状的影响。结果显示，在大白经产母猪中，ESR和OPN基因的优势基因为A等位基因，RBP4基因的优势基因为B等位基因；ESR基因AB与BB基因型在总产仔数、产活仔数性状上均高于AA基因型；OPN基因在总产仔数性状上AA基因型最高，在产活仔数、健仔数、窝重性状上均为BB > AA > AB；RBP4基因在总产仔数、产活仔数、健仔数、窝重性状上均为AA > BB > AB；合并基因型分析发现ESR-RBP4最优的分子标记组合为ABAA；OPN-RBP4最优的分子标记组合为BBAA。因此，ESR、OPN和RBP4基因多态性与大白猪繁殖性状相关。

本研究通过对生产性能测定（DHI）数据的挖掘与分析建立预测宁夏地区奶牛体细胞数（SCC）的模型，为奶牛乳房炎的防制提供借鉴，使得DHI数据更加有效、及时地指导奶业的发展。对2011年9月~2016年2月宁夏地区奶牛平均SCC数据进行差分使其达到平稳化，采用季节ARIMA模型对数据进行分析、拟合和预测。利用R软件的auto.arima函数计算出合适的时间序列模型ARIMA（1，1，0）（1，1，0）_[12]，其AIC为-3.67。Acf检验说明残差没有明显的自相关性；Ljung-Box测试显示所有的P值>0.5，表明残差为白噪声，说明此模型可用来对未来的24个月进行预测。再利用R软件的forecast函数对2016年3月~2017年2月的数据进行预测，作出预测图。从预测的结果可以看出，宁夏地区奶牛SCC整体呈现下降趋势。2017年1月SCC最少，预测值约为25.31万个/mL；2016年3月SCC最大，预测值约为43.96万个/mL。从结果也可看出，宁夏地区奶牛SCC均大于隐性乳房炎的临界值（>20万个/mL），说明宁夏地区还应该加大对奶牛乳房炎的防制。同时，若能及时添加新的SCC数据，就能对该数据模型进行更新，使其预测值更接近真实值，对实际生产的指导意义更大。

试验旨在研究拜城油鸡公鸡中脂肪型脂肪酸结合蛋白（adipocyte fatty acid binding protein，A-FABP）基因的多态性及其与生产性能的相关性，寻找可用于拜城油鸡选育的分子遗传标记。随机选取92只6周龄拜城油鸡公鸡，采用PCR-RFLP方法检测A-FABP基因的多态性。每种基因型选取15只体重相近的个体随机分为3组，每组每种基因型个体各5只，分别在12、18、24周龄时屠宰并对生产性能指标进行测定。结果显示，在拜城油鸡公鸡中检测到A-FABP基因有3种基因型：AA、AB、BB，BB为优势基因型，B为优势等位基因，不符合哈代-温伯格平衡定律（P<0.01）。12周龄时，各基因型间各生产性能指标差异均不显著（P>0.05）；18周龄时，BB基因型肌间脂宽显著高于AA基因型（P<0.05），BB和AB基因型腹脂重极显著高于AA基因型（P<0.01），腹脂率显著高于AA基因型（P<0.05）；24周龄时，BB基因型体重、肌间脂宽、腹脂重均显著高于AA基因型（P<0.05）。推测A-FABP基因可以作为与拜城油鸡公鸡脂肪性状相关的候选标记之一。

研究旨在探讨猪卵母细胞核因子在重编程过程中发挥的作用。将体细胞引入未去核的MⅡ期卵母细胞中，构建体细胞核与卵母细胞核共存的核移植四倍体胚胎。通过分析核移植四倍体胚胎的早期发育情况探讨卵母细胞核因子对核移植四倍体胚胎早期发育的影响。结果显示，核移植四倍体胚胎、孤雌二倍体胚胎及孤雌单倍体胚胎这3组胚胎的卵裂率极显著高于核移植二倍体胚胎（P<0.01），且核移植四倍体囊胚率及总细胞数也极显著高于核移植二倍体囊胚（P<0.01）。与通过标准核移植程序构建的核移植二倍体胚胎相比，核移植四倍体胚胎具有更强的发育能力。本研究建立了一个体细胞核与完整卵母细胞核因子物质共存的四倍体胚胎模型，有助于研究供体核与卵母细胞核之间的联系，为研究核因子在重编程过程中发挥的作用提供了平台。

试验旨在研究不同种类、不同浓度的糖对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响，进一步探索和优化牦牛卵母细胞培养体系，提高卵母细胞体外成熟和胚胎生产效率。在牦牛卵母细胞成熟液中添加不同浓度（0、5和10 mmol/L）的葡萄糖或蔗糖，培养24 h或预培养2 h后移入无糖培养基中继续培养22 h，统计卵母细胞体外成熟率及体外受精（IVF）后的胚胎卵裂率和囊胚率。结果显示，与对照组（0 mmol/L）相比，5和10 mmol/L葡萄糖组牦牛卵母细胞核成熟率和体外受精胚胎卵裂率均显著提高（P<0.05），10 mmol/L葡萄糖组的囊胚率最高，且与对照组相比差异显著（P<0.05）。添加10 mmol/L蔗糖可以显著提高牦牛卵母细胞核成熟率（P<0.05），但胚胎囊胚率与对照组相比差异不显著（P>0.05）。此外，用10 mmol/L葡萄糖预处理牦牛卵母细胞后其核成熟率、胚胎卵裂率和囊胚率最高，且均显著高于对照组（P<0.05）。由此可见，糖对牦牛卵母细胞体外成熟和发育有一定的影响，在成熟过程中添加适当浓度的糖能提高卵母细胞成熟率及体外受精胚胎发育能力。

胎盘是哺乳动物在妊娠期间胎儿和母体之间的联系枢纽，因此，胎盘发育是否正常在妊娠中起着关键的作用。Wnt信号通路在胚胎发育和胎盘形成的过程中有着重要的作用，作者通过回顾几条已经研究较为清楚的Wnt信号通路和牛早期胚胎和胎盘的形成过程，介绍了Wnt信号通路的组成部分在体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer，SCNT）牛和正常人工授精的牛的胚胎早期表达，提出了DKK-1和Fzd4的表达对于早期胎盘形成和发育有特殊的作用。此外，抑制MAP2K和GSK3信号可以激活Wnt信号通路，增加内细胞团和滋养层细胞的数量，加速囊胚的发育。SCNT牛和正常人工授精的牛早期胎盘中E-cadherin和β-catenin蛋白的磷酸化程度相似，所以对于Wnt信号通路在牛胎盘的早期形成和发育中的作用还需进一步的了解和研究。

在版纳微型猪近交系（BMI）公猪精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度甘油，并对不同解冻液配方和解冻方法进行研究，对比解冻后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率，优化BMI公猪精液冷冻保存方法。结果表明，解冻后，甘油浓度为2%和3%组的精子活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于1%、4%和5%组（P<0.05）；Ⅰ号解冻液解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率均显著高于Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ号解冻液（P<0.05）；在活力、质膜完整率和顶体完整率方面，40℃ 6 s和50℃ 6 s这两种程序的解冻效果都显著优于38℃ 30 s（P<0.05）。由此可见，2%或3%的甘油作为抗冻保护剂、Ⅰ号解冻液解冻、40℃ 6 s或50℃ 6 s水浴解冻是较为理想的BMI公猪精液冷冻保存方法。

为了研究略阳乌鸡线粒体DNA控制区（mtDNA D-loop）的遗传多样性和起源，本研究对30只略阳乌鸡样品的mtDNA D-loop全序列进行了PCR扩增和测序，结合GenBank中公布的其他鸡的D-loop区序列，分析略阳乌鸡线粒体多态性及其起源。结果表明，略阳乌鸡mtDNA D-loop区全序列中，A、C、G、T平均含量分别为26.6%、26.6%、13.4%和33.4%，26个核苷酸多态位点均为转换位点，核苷酸多样度（Pi）为0.00705，单倍型变异度（Hd）为1.000，中性检验Tajima's D值为-0.47272。通过群体构建的系统进化树发现，略阳乌鸡样品在系统进化树上聚为4大分支。研究结果表明，略阳乌鸡群体内个体序列变异程度较大，遗传多样性丰富，揭示略阳乌鸡在遗传组成上具有4个母系来源。

试验旨在研究疆岳驴催乳素受体（prolactin receptor，PRLR）基因多态性及其与泌乳性状间的关系，探寻可用于疆岳驴选育的分子遗传标记。随机选取120头疆岳驴，对疆岳驴的泌乳性能指标进行测定，并运用PCR-SSCP方法对疆岳驴PRLR基因侧翼区进行多态性分析。结果显示，PRLR基因在疆岳驴群体中存在2种基因型：AA和AB，A为优势等位基因；测序结果显示，PRLR基因的碱基突变位置为g.29764584 C>G，该突变为同义突变，没有导致编码的氨基酸发生改变；经关联分析，PRLR基因AB基因型个体平均日泌乳量显著高于AA基因型（P<0.05），AA基因型个体乳蛋白率显著高于AB基因型（P<0.05），在乳糖率上差异不显著（P>0.05）。疆岳驴PRLR基因突变与泌乳性状存在关联性，推测PRLR基因可以作为疆岳驴乳用型选育的分子遗传标记之一。

试验采用PCR方法扩增出猪嗜淋巴细胞疱疹病毒2型（porcine lymphotropic herpesviruses 2，PLHV-2）gB基因全序列，并进行测序，使用生物信息学软件对gB蛋白进行生物信息学分析和预测。结果显示，gB蛋白由876个氨基酸组成，分子式为C₄₅₀₀H₆₉₇₅N₁₁₉₉O₁₃₅₁S₄₀，分子质量为100.77 ku，等电点为6.45，不稳定系数为38.58；二级结构预测以无规则卷曲为主要结构，1-39位氨基酸为信号肽，761-780位氨基酸为跨膜区结构，具有多种功能位点，存在多处天然非规则结构蛋白；三级结构显示有一个具有溶解作用的环状构象。综合多种方法分析预测结果表明，gB基因存在多个B细胞线性抗原表位，可作为PLHV-2疫苗的候选抗原。

为评价合成的O157：H7 Ivy146-157多肽作为疫苗抗原的可行性，本试验利用生物信息学方法分析Ivy的二级结构、氨基酸亲水性、蛋白柔性区域、表面可及性和抗原指数，筛选获得1条含有B细胞抗原表位的多肽序列Ivy146-157，进行化学合成。多肽免疫BALB/c小鼠，测定免疫后小鼠的抗体水平及Ivy146-157多肽对小鼠脾淋巴细胞的刺激增殖情况。结果显示，合成的Ivy146-157多肽第3次免疫小鼠后抗体水平达到1：6 400，制备的Ivy146-157多克隆抗体能够识别天然菌株中的目的蛋白；MTT试验结果显示，Ivy146-157免疫后小鼠脾淋巴细胞增殖明显，与对照组差异显著（P<0.05）。结果表明，Ivy146-157多肽能够诱导机体产生体液免疫和细胞免疫反应，为其作为疫苗用抗原的进一步研究奠定了理论基础。

为分析绵羊痘病毒L2R蛋白的分子特征，本试验提取了绵羊痘病毒固原株（GY）的基因组DNA，设计L2R基因引物，对L2R基因进行扩增，将扩增的基因连接到pGEM-T Easy载体后转化到大肠杆菌Trans 5α感受态细胞，筛选阳性克隆，进行序列测序。利用生物信息学软件对L2R基因序列进行预测分析。结果显示，L2R基因序列含有一个由279个核苷酸组成的开放阅读框，编码92个氨基酸残基组成的多肽，蛋白质分子质量理论值为10.92 ku，理论等电点为6.56。该蛋白质二级结构组成分别是α-螺旋占69.57%，β-折叠占9.78%，无规则卷曲占8.70%，延伸链占11.96%。多序列比对分析结果显示，不同羊痘病毒分离株L2R序列高度保守。进化树分析结果显示，GY株与NK、TU及SA株在一个分支，表明它们之间亲缘关系较近。本试验结果为进一步研究L2R蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础。

CRISPR/Cas系统是一种存在于细菌和古细菌的免疫系统，该系统包括能靶向入侵宿主的病毒或外源DNA核酸片段的RNA和切割该片段的Cas9核酸酶。与其他基因编辑技术相比，该系统更易操作，效率更高，成本更低，被广泛应用于各种基因工程领域。作者综述了CRISPR/Cas系统的作用机制及其在寄生虫方面的应用。

为获得伽氏疏螺旋体尚志株（B. garinii SZ）的P66蛋白，本研究从培养的螺旋体菌液中提取总RNA，反转录合成第一链cDNA，利用PCR扩增P66基因。将目的片段连接表达载体pET-30a（+），并转化大肠杆菌表达菌BL21（DE3），经PCR、双酶切及测序验证正确后，进行IPTG诱导表达和纯化，然后将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。SDS-PAGE结果显示，获得约70 ku的表达产物；Western blotting分析表明，表达产物与抗His标签的小鼠单克隆抗体、螺旋体鼠源阳性血清、兔抗P66多克隆抗体均能发生反应，获得的多克隆抗体也可识别天然蛋白。本试验成功表达了B. garinii SZ株P66蛋白，并制备了多克隆抗体，为后续B. garinii SZ株P66蛋白的功能研究奠定了基础。

本研究从患病胡子鲶体内分离得到一株菌，通过菌体形态观察、生理生化试验、16S rDNA分析及构建系统发育树对其进行分析，得出该致病菌为摩氏摩根菌。人工感染试验结果显示，该致病菌对胡子鲶具有较强的致病能力，同时对罗非鱼、泥鳅和禾花鲤也有很强的致病能力。药敏试验结果显示，KD01菌株对青霉素G、氨苄青霉素和新生霉素等药物有高度的耐药性，对复方新诺明、恩诺沙星和环丙沙星等药物敏感。本试验结果对胡子鲶出血性肠道坏死疾病研究提供有力的依据，同时可指导养殖户合理用药。

为了解上海地区猪红斑丹毒丝菌在健康猪群中的带菌状况，本试验选择上海地区标准化屠宰场的上市猪为研究对象，采集鼻拭子、肺脏、扁桃体和下颌淋巴结等样本，进行猪红斑丹毒丝菌的分离，采用VITEK 2 Compact系统和VITEK MS快速鉴定系统进行鉴定，并设计1对16S rRNA基因引物，对分离菌株进行PCR扩增，随机选取16株分离菌进行测序及16S rRNA同源性分析。结果显示，49.07%（105/214）的样本中分离到猪红斑丹毒丝菌，分离菌株同参考菌株及疫苗株之间16S rRNA同源性为99.6%~100.0%。本试验结果表明上海地区猪群中确实存在猪红斑丹毒丝菌的健康带菌状况。

为研究蓝舌病1型病毒VP7蛋白关键性氨基酸表位定位，本试验应用抗蓝舌病1型病毒VP7蛋白单克隆抗体淘选噬菌体展示的7肽随机肽库，对筛选的共有序列噬菌体扩增纯化，通过ELISA、竞争性ELISA分析共有噬菌体拟位与蓝舌1型病毒VP7蛋白单克隆抗体的免疫反应性。结果表明，含有LNWPMVR基序的噬菌体拟位能够与蓝舌病1型病毒VP7蛋白单克隆抗体发生特异性结合，并且此结合能被蓝舌病1型病毒抑制或阻断，表明噬菌体7肽模拟了BTV蛋白上与蓝舌病1型病毒VP7蛋白单克隆抗体结合的抗原决定簇，提示蓝舌病病毒VP7蛋白的第163-189位氨基酸（LNAGARGDVQQIFQGRNDPMMIYLVWR）构成蓝舌病病毒VP7蛋白特异性表位。

为了解不同地区鸭疫里氏杆菌病的流行情况，并进一步测定这些地区鸭疫里氏杆菌对常用抗菌药物的敏感性。本试验从广东云浮、广东开平、浙江常山3个地区疑似传染性浆膜炎病鸭中进行了细菌分离，通过鉴别培养、染色镜检、生化试验等对分离菌进行鉴定。采用微量稀释法测定了分离菌株对常用药物的最小抑菌浓度。结果从3个地区共分离鉴定出16株鸭疫里氏杆菌。药敏试验结果表明，3个地区鸭疫里氏杆菌均对头孢类和氟苯尼考高度敏感，对多西环素、大观霉素比较敏感；对恩诺沙星，新霉素等其他受试药物呈不同程度的耐药。本研究为鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药物敏感性测定提供了系统方法，为临床选择合理药物防制鸭传染性浆膜炎提供了理论指导。

黑龙江省某规模化奶牛场部分新生犊牛发生了严重腹泻且犊牛病死率较高。为了确诊，无菌采集病料，通过病毒检测、细菌分离、生化试验、细菌和病毒特异性基因PCR扩增、动物致病性试验及药敏试验等方法进行了病毒抗原和微生物检测。结果显示，病毒检测中牛轮状病毒（BRV）呈阳性，PCR扩增得到400 bp的特异性片段；从病料中分离到1株含K99和F41兼性菌毛抗原的高致病性产肠毒素大肠杆菌（ETEC），该分离菌株对恩诺沙星、头孢唑啉、氯霉素敏感，对其他抗生素有一定的耐药性。流行情况调查结合病原学检查确诊该牛场新生犊牛严重腹泻是由BRV和大肠杆菌混合感染造成的，根据诊断结果进行了针对性地防制，取得了良好的防控效果。

为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛大片形吸虫检测方法，本试验利用抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株7D1和7D4分别制备和纯化得到单克隆抗体7D1和7D4；采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为30 nm的胶体金，再用胶体金标记纯化单克隆抗体7D1，在硝酸纤维素膜的质控带和检测带处分别包被羊抗鼠IgG二抗和单克隆抗体7D4，经反应条件优化，组装成了大片形吸虫免疫检测试纸条。经测试该检测试纸条对ES抗原的检测下限为0.94 μg/mL，与胰扩盘吸虫、前后盘吸虫、支原体、弓形虫、伊氏锥虫均无交叉反应，特异性好。采集广西地区334份水牛新鲜粪样并用试纸条检测，阳性率为38.62%。结果表明，试纸条方法操作简单、快速、易于判定，特异性好，敏感性高，适合基层大面积普查和现场检测大片形吸虫。

为探讨产肠毒素大肠杆菌（ETEC） K88感染仔猪发生炎症反应的分子机制，试验用ETEC K88灌服断奶仔猪，ELISA法检测攻毒后仔猪血清中白细胞介素8（IL-8）含量，实时荧光定量PCR方法检测淋巴结中Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）及其信号通路相关基因（髓样分化因子88（MyD88）、Toll相互作用蛋白（Tollip）、B细胞淋巴瘤因子3（Bcl3））的mRNA相对表达水平。结果发现，仔猪攻毒ETEC K88后6和24 h血清IL-8含量和淋巴结TLR2/4的表达水平均极显著或显著高于对照组（P<0.01；P<0.05），且感染后24 h显著低于感染后6 h（P<0.05）；仔猪感染ETEC K88后24 h淋巴结中MyD88、Tollip和Bcl3的表达水平均极显著高于对照组（P<0.01），但是感染后6 h时与对照组相比均无显著差异（P>0.05）。综上所述，ETEC K88感染仔猪可能是通过TLR2/4-MyD88信号通路产生炎症因子IL-8，促使仔猪出现炎症反应，且该炎症反应可能受Tollip和Bcl3蛋白的调控而被减弱。

为了研究微生物发酵床不同发酵等级垫料中大肠杆菌的分布及其特性，试验采集了微生物发酵床猪舍不同发酵程度的垫料，进行大肠杆菌的分离鉴定和药敏试验，分析了发酵床中大肠杆菌的致病性和抗生素抗性。试验结果表明，在10^-5稀释倍数下，仅在垫料发酵级别为一级的垫料中，即垫料使用时间较短、发酵程度较低（0<△E≤7.63）的条件下，分离到41株大肠杆菌；而在发酵程度较高的垫料中，即垫料发酵程度二级以上（△E>7.63）的环境中未分离到大肠杆菌。随着发酵的进行，发酵床中大肠杆菌数量逐渐减少。41株大肠杆菌中含有致泻性大肠杆菌15株，其中具有热稳定肠毒素（astA）基因的大肠杆菌9株，占总数的22%，含耐药性因子（sepA）基因的大肠杆菌2株，占总数的4.8%；耐强力霉素的大肠杆菌11株，占总数的27%。含有sepA基因的大肠杆菌具有强耐药性。从以上结果来看，微生物发酵床对猪舍大肠杆菌具有抑制作用，可为发酵床的推广应用及垫料再利用提供一定依据。

试验旨在探讨复方忍冬藤提取物对骨折愈合和抗炎的作用。采用牙科电钻制备兔右侧桡骨骨折模型，通过测定血清中钙、磷和碱性磷酸酶的含量，探明其对骨折家兔血清生化指标的影响。利用LPS诱导的RAW264.7细胞建立炎症模型，采用ELISA法测定复方忍冬藤提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞释放的炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β和NO含量的变化。结果显示，利用牙科电钻可成功制备兔骨折模型，复方忍冬藤提取物可增加骨折家兔血清中钙和碱性磷酸酶的水平，降低血清中磷含量。与LPS组相比，50~200 μg/mL复方忍冬藤提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌的炎症因子TNF-α、IL-1β和NO的含量具有显著的抑制作用（P<0.05），对IL-6的含量无显著影响（P>0.05）。综上所述，复方忍冬藤提取物对骨折愈合有促进作用，并具有较好的抗炎效果。

为验证新兽药白虎定喘口服液的药效作用，进行了鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV）鸡胚增殖抑制试验、气管纤毛运动试验及SPF雏鸡人工感染IBV疗效试验。将试验药液与等量IBV液混合作用后，接种11日龄SPF鸡胚，37℃孵育168 h，取存活鸡胚肾脏进行IBV的RT-PCR检测，结果表明，药物组168 h鸡胚存活率为80%，阳性对照组为20%，两组间差异显著（P<0.05）；试验药物组RT-PCR检测无目的条带出现，而阳性对照组有目的条带出现。40日龄SPF鸡连续用药3 d后，气管内注入0.02 mL墨汁，测量1 min内墨汁移动的距离，结果表明药物组墨汁移动距离极显著大于生理盐水对照组（P<0.01）。17日龄SPF鸡用IBV-M41滴鼻，0.3 mL/只，24 h后开始灌服药液，1 mL/kg，连用5 d，结果表明，试验药物组与攻毒对照组在临床症状计分、痊愈率上均存在显著差异（P<0.05）；试验组气管黏膜组织切片未见明显病变，而阳性对照组有明显病理变化。以上试验结果表明，白虎定喘口服液对IBV具有较好的体外抑制作用，可显著促进气管纤毛的运动，对鸡传染性支气管炎（IB）具有较好的临床防制效果。

为研究莫能菌素包合物的制备工艺，以β-环糊精为包合材料，采用饱和水溶液法制备莫能菌素β-环糊精包合物。用红外光谱法（IR）对包合物进行物相鉴定。以包合率为指标，运用正交设计法，确定最佳处方和工艺条件。IR结果表明，药物与环糊精形成了包合物。当投料比为3：1，包合温度为40℃，搅拌时间1.5 h时，该制备工艺最佳，包合率为57.54%。该制备工艺可行，扩大了莫能菌素的应用，为莫能菌素的剂型改进奠定了基础。

佐剂可通过增强巨噬细胞活性促进机体T细胞或B细胞的反应，参与半抗原或抗原免疫应答。随着人们对疫苗免疫效果的研究，细胞因子作为新型分子佐剂能增强疫苗的特异性免疫反应而被广泛研究。细胞因子在调节先天免疫和适应性免疫中发挥着关键作用，能增强疫苗的特异性免疫反应。最近几年，白细胞介素、干扰素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肿瘤坏死因子、趋化因子的研究已取得了很大进展，现对细胞因子佐剂的应用进展进行阐述，以期为其在将来的应用中提供参考。

通过接种疫苗实现猪对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的持续保护仍较困难。最近研究发现干扰素诱导的PRRSV疫苗候选株A2MC2可减毒并可诱导机体产生中和抗体。本研究旨在确定A2MC2第90代毒株（A2P90）保护猪抵抗中毒性PRRSV毒株VR-2385（与A2MC2核苷酸同源性为92.3%）和高毒性非典型PRRSV毒株MN184（与A2MC2核苷酸同源性为84.5%）的功效。将40只3周龄的猪随机分为5组，包括阴性对照组（未接种疫苗，未攻毒）、VAC-VR2385组（接种疫苗，用VR-2385攻毒）、VR2385组（用VR-2385攻毒）、VAC-MN184组（接种疫苗，用MN184攻毒）和MN184组（用MN184攻毒）。3周龄接种疫苗，8周龄攻毒。接种猪中均未检测到病毒血症，然而，在攻毒时，用ELISA方法检测到15/16接种疫苗的猪出现血清转化，并具有针对同源毒株的中和抗体，其滴度范围为8~128。感染毒株VR-2385导致轻度至中度的临床疾病和病变。攻毒后9 d，与VR2385组（用VR-2385攻毒）相比，VAC-VR2385组（接种疫苗，用VR-2385攻毒）PRRSV病毒血症和鼻甲骨纤毛脱落显著降低，肉眼可见的肺脏损伤显著减少，且平均日增重显著增加。无论接种状况如何，用MN184攻毒可导致猪出现中度至严重的临床疾病和病变，然而，与未接种疫苗的猪相比，接种疫苗组猪在攻毒后5 d鼻甲骨纤毛脱落显著降低。本试验结果显示，A2P90疫苗株是减毒的，未检测到鼻甲骨纤毛脱落，可提高平均日增重，且通过减少病毒载量和肉眼可见的肺脏损伤对经VR-2385攻毒的猪提供保护。下一步工作将研究不同的疫苗接种和攻毒方案，包括途径、剂量、时间和毒株。

在野生禽类中流行的禽流感病毒（AIV）对公众健康构成严重威胁，迫切需要针对多种禽流感亚型的人用和兽用疫苗。本试验制备了针对H5、H7和H9 3种AIV亚型抗原的病毒样颗粒（VLPs）（分别源自H5N1、H7N3和H9N2病毒）。VLPs还含有流感N1神经氨酸酶和逆转录病毒gag蛋白。利用杆状病毒表达系统制备H5/H7/H9/N1/gag VLP。本试验测定了其包括血凝素和神经氨酸酶活性在内的生化特性、功能和抗原特性。在鸡禽流感攻击模型中进一步评估VLPs的安全性、免疫原性和针对异源AIV（包括H5N2、H7N3和H9N2亚型AIV）的保护功效。结果显示，接种疫苗的禽类在H5N2和H7N3高致病性AIV的攻击中未出现死亡，而对照组全部死亡。用低致病性H9N2亚型AIV攻毒后也可检测到免疫应答，结果表明H5/H7/H9/N1/gag VLP为具有广泛免疫保护作用的禽流感疫苗的开发提供了新方法。