大片形吸虫免疫胶体金检测试纸条的研制及初步应用

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.01.036

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (1): 254-261.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.01.036

大片形吸虫免疫胶体金检测试纸条的研制及初步应用

王华俊^1,2, 刘宇¹, 蒋薇¹, 赵雪丽², 曹伟伟², 陈汉忠¹, 闫若潜²

1. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530005;
2. 河南省动物疫病预防控制中心, 郑州 450008

收稿日期:2016-06-02 出版日期:2017-01-20 发布日期:2017-01-19
通讯作者: 陈汉忠, 闫若潜 E-mail:chenhanz211@163.com;yrq1688@126.com
作者简介:王华俊(1984-),男,河南信阳人,硕士,研究方向:动物疫病快速检测新技术,E-mail:wanghuajun2012@163.com
基金资助:
广西教育厅科研项目

Preparation and Primary Application of Immunity Colloidal Gold Test Strip for Fasciola gigantica

WANG Hua-jun^1,2, LIU Yu¹, JIANG Wei¹, ZHAO Xue-li², CAO Wei-wei², CHEN Han-zhong¹, YAN Ruo-qian²

1. College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530005, China;
2. Henan Centre for Animal Diseases Control & Prevention, Zhengzhou 450008, China

Received:2016-06-02 Online:2017-01-20 Published:2017-01-19

摘要/Abstract

摘要：

为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛大片形吸虫检测方法，本试验利用抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株7D1和7D4分别制备和纯化得到单克隆抗体7D1和7D4；采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为30 nm的胶体金，再用胶体金标记纯化单克隆抗体7D1，在硝酸纤维素膜的质控带和检测带处分别包被羊抗鼠IgG二抗和单克隆抗体7D4，经反应条件优化，组装成了大片形吸虫免疫检测试纸条。经测试该检测试纸条对ES抗原的检测下限为0.94 μg/mL，与胰扩盘吸虫、前后盘吸虫、支原体、弓形虫、伊氏锥虫均无交叉反应，特异性好。采集广西地区334份水牛新鲜粪样并用试纸条检测，阳性率为38.62%。结果表明，试纸条方法操作简单、快速、易于判定，特异性好，敏感性高，适合基层大面积普查和现场检测大片形吸虫。

关键词: 大片形吸虫; 单克隆抗体; 胶体金; 试纸条

Abstract:

To establish a rapid, simple, sensitive and adapting field application assay for water buffalo Fasciola gigantica, the monoclonal antibodies of hybridoma cell strains 7D1 and 7D4 against excretory-secretary antigen(ES Ag) of Fasciola gigantica were prepared and purified. Meanwhile, the colloidal gold particle was prepared by the sodium cirrate reduction method, then the affinity purified 7D1 monoclone antibodies was labeled with the 30 nm colloidal gold particles. The 7D4 monoclonal antibodies and the goat anti-mouse IgG antibody using as secondary antibodies were coated on the surface of nitrocellulose filter(NC) membrane as the test line (T line) and control line (C line), respectively. The immune colloidal gold test strip was developed by optimizing the experiment conditions. The test results showed the prepared strip had a detecting prescribed minimum of 0.94 μg/mL of Fasciola gigantica excretory-secretary antigen, and it had no any cross reaction with the antigens of Eurytrema pancreaticum, Paramphistome, Chlamydia, Toxoplasma gondii and Trypanosoma evansi. Using the prepared strip to investigate the 334 fresh feces from buffaloes in Guangxi and the positive rate was 38.62%. These results indicated that this strip method was simple, rapid and easy determination, good specificity, high sensitivity, and adapted field application assay for Fasciola gigantica.

Key words: Fasciola gigantica; monoclonal antibody; colloidal gold; test strip

中图分类号:

S855.9

王华俊, 刘宇, 蒋薇, 赵雪丽, 曹伟伟, 陈汉忠, 闫若潜. 大片形吸虫免疫胶体金检测试纸条的研制及初步应用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(1): 254-261.

WANG Hua-jun, LIU Yu, JIANG Wei, ZHAO Xue-li, CAO Wei-wei, CHEN Han-zhong, YAN Ruo-qian. Preparation and Primary Application of Immunity Colloidal Gold Test Strip for Fasciola gigantica[J]. , 2017, 44(1): 254-261.

参考文献

[1] 王冬英, 张为宇, 黄维义. 广西牛片形吸虫流行情况调查[J]. 广西畜牧兽医, 2006,22(5):200-202.
[2] 王铁成, 杨松涛,王承宇,等. 狂犬病毒胶体金检测试纸的制备及初步应用[J].中国病原生物学杂志, 2009,4(10):734-737.
[3] 李晓栩, 王华俊, 林贤,等. 抗大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体制备及其生物学特性鉴定[J]. 南方农业学报, 2012, 43(9):1395-1399.
[4] Frens G. Controlled nucleation for the regulation of the particle size in monodisperse gold suspensions[J]. Nature Phys Sci, 1973,241(105):20-22.
[5] 王文勇, 李玉松. 一种快速、稳定制备胶体金的新方法[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 1997,13(S1):18-19.
[6] Sun X L,Zhao X L, Tang J, et al. Preparation of gold-labeled antibody probe and its use in immunochromatography assay for detection of aflatoxin B1[J]. International Journal of Food Microbiology, 2005, 99(2):185-194.
[7] Mezo M, González-Warleta M, Carro C, et al. An ultrasensitive capture ELISA for detection of Fasciola hepatica coproantigens in sheep and cattle using a new monoclonal antibody (MM3)[J]. Journal of Parasitology, 2004, 90(4):845-852.
[8] 郭轶斌, 郭威, 秦宇辰,等. 基于Kappa系数的一致性检验及其软件实现[J]. 中国卫生统计, 2016,33(1):169-170.
[9] Reichel M P. Performance characteristics of an enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of liver fluke (Fasciola hepatica) infection in sheep and cattle[J].Veterinary Parasitology, 2002,107(1):65-72.
[10] 倪兆朝, 周仁贵, 柏坤桃, 等. Dot-ELISA与IHA方法诊断肝片形吸虫病的比较[J]. 畜牧与兽医, 2006,38(7):39-40.
[11] Velusamy R, Singh B P, Raina O K. Detection of Fasciola gigantica infection in snails by polymerase chain reaction[J]. Veterinary Parasitology, 2004,120(1):85-90.
[12] 陈汉忠, 蒋金书, 李义平. 应用电化学免疫传感器检测大片形吸虫抗原抗体反应的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2004,35(3):339-342.
[13] Guan H, Zhou P, Zhou X, et al. Sensitive and selective detection of aspartic acid and glutamic acid based on polyhiophene-gold nanoparticles composite[J].Talanta, 2008,77(1):319-324.
[14] 吕娜, 张虹茜, 殷晓平,等. 柱状黄杆菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(10):51-55.
[15] 孟盟, 曹池, 陈汉忠,等. 水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2011, 42(7):988-993.
[16] 庞璐, 宋喆, 吴冬雪,等. PCR-免疫胶体金试纸条方法检测食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7[J]. 食品安全质量检测学报, 2015,6(2):447-451.
[17] Zhou W, Kong W, Dou X, et al. An aptamer based lateral flow strip for on-site rapid detection of ochratoxin A in Astragalus membranaceus[J]. Journal of Chromatography B Analytical Technologies in the Biomedical & Life Sciences, 2016, 1022:102-108.
[18] 张洋, 贾睿, 何培民. 免疫胶体金试纸条快速检测贝类体内的腹泻性贝毒[J]. 生物技术通报, 2013, 35(6):221-225.
[19] Yuan L, Wu A, Jing H, et al. Detection of 3-phenoxybenzoic acid in river water with a colloidal gold-based lateral flow immunoassay[J]. Analytical Biochemistry, 2015, 483(1):7-11.
[20] Wang Y, Deng R, Zhang G, et al. Rapid and sensitive detection of the food allergen glycinin in powdered milk using a lateral flow colloidal gold immunoassay strip test[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry, 2015, 63(8):2172-2178.
[21] 周洁, 徐飞, 吴超,等. 2种不同检测模式下的林可霉素胶体金试纸条的比较研究[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7):159-163.
[22] Saraiva S M, de Oliveira J F. Control of particle size in the preparation of colloidal gold[J]. Journal of Dispersion Science and Technology, 2002,23(6):837-844.

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[1]	章志涛, 李祥龙, 孔令丽, 罗雨昕, 王冬英. 大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1107-1117.
[2]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[3]	王乐铭, 王瑜瑞, 曾子轩, 饶国顺, 吴正姣, 靳纬坤, 王冬英. 抗大片形吸虫Cat L1单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 677-686.
[4]	赵少若, 黄甜, 郝丽影, 吴洪超, 汪志艳, 崔宁宁, 王亚玲, 邓均华, 田克恭. 犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4429-4437.
[5]	莫红芳, 揭凯, 陈鑫, 文威, 刘文强, 陈焕春, 钱平, 李祥敏. 猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 307-317.
[6]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.
[7]	曾建宇, 董振远, 贾文凤, 张国中, 薛佳. 新城疫病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3423-3431.
[8]	李思, 蒋蔚, 程婷婷, 卢春慧, 辛思培, 曹敬政, 王权, 孙卫东. 沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(5): 1772-1783.
[9]	杨松鑫, 冯建远, 郭旋, 韦柳源, 梁翼莹, 严昊, 张子仪, 陈海兰. 小分子化合物单克隆抗体的制备及其在动物医学领域的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(3): 1121-1131.
[10]	李洁森, 孙荣航, 邝燕齐, 陈路漫, 刘青, 郭霄峰. 猪流行性腹泻病毒S1D蛋白的优化表达及其单克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(12): 4641-4651.
[11]	李青梅, 郭军庆, 孟泽锟, 李艳华, 刘肖, 石建州, 李鸽, 柴书军, 罗俊, 邓瑞广, 张改平. H9N2亚型禽流感病毒中和单克隆抗体的制备与应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3761-3769.
[12]	王治平, 张云静, 孙玉洁, 徐鑫, 汪志艳, 黄柏成, 田克恭. 基于单克隆抗体捕获的猪血清和乳汁中PEDV IgA抗体间接ELISA方法的建立和评估[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(7): 2248-2255.
[13]	石建州, 李青梅, 王彦红, 刘肖, 李鸽, 郭军庆, 邓瑞广, 张改平. H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2019, 46(9): 2691-2698.
[14]	林伟东, 隋修锟, 王召阳, 贾红, 房立春, 王海春, 朱良全, 鑫婷. 牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(6): 1774-1782.
[15]	项自来, 王玲, 夏苏干, 邹辉, 顾建红, 袁燕, 刘学忠, 刘宗平, 卞建春. 苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(3): 849-857.