【目的】探究miR-449a/b在绵羊生长发育和繁殖性能方面的作用，为进一步研究miR-449a/b在绵羊繁殖调控中的作用提供参考。【方法】以湖羊为研究对象，利用实时荧光定量PCR技术鉴定miR-449a/b在湖羊下丘脑、垂体和卵巢中的相对表达量。使用TargetScan、miRWalk、miRDB软件预测绵羊miR-449a/b前体序列的靶基因，利用微生信和KOBAS网站对其进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】试验获得的前体序列与NCBI数据库中绵羊前体序列信息比对结果一致。实时荧光定量PCR结果显示，miR-449a在垂体中的相对表达量显著高于miR-449b （P<0.05），miR-449b在卵巢中的相对表达量极显著高于miR-449a （P<0.01）。利用3个靶基因预测软件做韦恩图分析，取其交集得到miR-449a/b的靶基因数目分别为299和23个。GO功能富集显示，miR-449a/b主要被富集到生物进程；KEGG通路富集结果取前20个通路进行分析发现，主要包括催产素、MAPK等与繁殖调控相关的信号通路。【结论】miR-449a在垂体中的表达量较高，miR-449b在卵巢中的表达量较高。miR-449a/b的靶基因数目分别为299和23个，其基因功能主要集中在生物过程，可能参与湖羊的繁殖调控。

【目的】研究不同氧浓度下猪睾丸间质细胞表达谱差异，筛选缺氧导致猪睾丸间质细胞损伤的关键基因。【方法】将猪睾丸间质细胞分为缺氧组（1%氧气，H24组）、正常组（15.75%氧气，N24组），每组3个重复，在相应条件下分别处理24 h，用CCK8法检测细胞存活率；利用转录组测序技术筛选出缺氧组和正常组睾丸间质细胞中的差异表达基因，利用DESeq 2.0软件进行差异表达基因分析，并对差异表达基因进行GO功能和KEGG通路富集分析，进一步筛选与氧含量相关的调控基因。【结果】缺氧刺激24 h后，与正常组相比，缺氧组猪睾丸间质细胞存活率极显著降低（P<0.01）；转录组测序共获得1 654个差异表达基因，其中1 242个基因上调，412个基因下调。GO功能富集分析发现，共获得富集条目8条，其中生物过程1条，分子功能7条；KEGG通路富集分析发现，共获得10个显著富集的信号通路，包括HIF-1信号通路、JAK-STAT信号通路和糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路等。通过GO功能和KEGG通路富集分析共获得6个与缺氧应激相关的基因，分别为信号传导及转录激活蛋白5（signal transducer and activator of transcription 5，STAT5）、白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）、CC基元趋化因子配体2（C-C motif chemokine ligand 2，CCL2）、Ⅰ型干扰素受体1（interferon alpha and beta receptor subunit 1，IFNAR1）、细胞因子信号传导抑制因子1（suppressor of cytokine signaling 1，SOCS1）和红细胞生成素（erythropoietin，EPO）。【结论】本研究通过对不同氧浓度下猪睾丸间质细胞进行转录组分析，获得了SOCS1、IFNAR1、EPO、STAT5、IL-8和CCL2 6个与猪睾丸间质细胞缺氧损伤和应激修复相关的基因，为解决高原地区公猪生殖能力低下的研究提供参考。

【目的】探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B （CDKN1B）基因在低氧适应中发挥的作用。【方法】对藏猪CDKN1B基因CDS区进行克隆并测序，并对其序列进行相似性比对及系统进化树构建。采用在线软件对CDKN1B蛋白进行生物信息学分析，利用实时荧光定量PCR和Western blotting方法分别检测藏猪和大约克猪心脏、肾脏及肺脏组织中CDKN1B基因的mRNA和蛋白相对表达量。【结果】藏猪CDKN1B基因CDS区序列长597 bp，与野猪的相似性高达100%，且与野猪的亲缘性最近，与斑马鱼的亲缘性最远。CDKN1B蛋白由198个氨基酸组成，共有30个磷酸化位点：17个丝氨酸位点、9个苏氨酸位点、4个酪氨酸位点；氨基酸不稳定指数（Ⅱ）为66.53；该蛋白为亲水性蛋白，疏水性最大值为1.089，最小值为—2.867。藏猪CDKN1B蛋白二级结构由无规则卷曲（73.23%）、α-螺旋（15.66%）、延伸链（10.10%）及β-转角（1.01%）组成，三级结构预测结果与二级结构一致。该蛋白为非跨膜蛋白和非分泌蛋白，主要定位于细胞核中，占比约为82.6%，在细胞质中约占8.7%，在线粒体和细胞骨架中均占4.3%。CDKN1B蛋白与CDK2、CCND1和CDK4相关性高达99.9%。藏猪和大约克猪CDKN1B mRNA表达量与蛋白表达量一致，均为在心脏中表达量最高，其次是肾脏和肺脏；藏猪心脏、肾脏和肺脏组织中CDKN1B基因mRNA表达量极显著或显著高于大约克猪（P<0.01；P<0.05），蛋白表达量只在肾脏组织中显著高于大约克猪（P<0.05）。【结论】本试验成功克隆出藏猪CDKN1B基因CDS区序列，CDKN1B基因在心脏、肾脏及肺脏组织中均具有较高的表达量，且在藏猪心脏、肾脏及肺脏组织中表达量高于大约克猪。该结果为进一步研究藏猪CDKN1B基因及其编码蛋白在低氧适应性中的作用奠定基础。

【目的】从分子水平了解高温季节罗非鱼无乳链球菌病容易暴发的原因。【方法】在35和28 ℃分别培养无乳链球菌，提取总RNA并进行转录组测序；利用华大基因Dr.Tom自主分析平台进行差异表达基因分析，并针对差异基因进行了KEGG通路和GO功能的分类和富集；通过实时荧光定量PCR随机检测10个基因的差异表达，确定转录组数据的可靠性。【结果】共得到35和28 ℃培养条件下的显著性差异表达基因357个，其中上调基因229个，下调基因128个；GO数据库富集能得到多个具有显著性的功能集，多集中在碳源代谢相关的途径，包括碳水化合物分解代谢过程（carbohydrate catabolic process）、糖原代谢过程（glycogen metabolic process）、细胞葡聚糖代谢过程（cellular glucan metabolic process）等；差异基因中发现了多个与无乳链球菌致病性相关的基因，如烷基过氧化氢还原酶亚基、cAMP因子、C5a肽酶等编码基因；实时荧光定量PCR与转录组数据间皮尔逊相关系数R值为0.979（P<0.001），说明转录组数据可靠有效。【结论】高温能够显著影响无乳链球菌碳源代谢相关的途径，可能通过加快菌体利用碳源而促进菌体的生长和扩散。高温也诱导了多个与致病性相关的基因出现上调表达，其中cAMP因子引起的细胞膜溶解和氧化还原酶类引起的免疫逃避可能是高温下无乳链球菌致病性增强的主要因素。

【目的】探讨连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄）诱导大鼠肝细胞（BRL-3A）氧化应激模型的制备方法，以期建立一种稳定的BRL-3A细胞氧化应激模型。【方法】利用含Na₂S₂O₄的培养基造成细胞缺氧，更换正常培养基对BRL-3A细胞进行复氧培养，造成细胞氧化应激损伤。将BRL-3A细胞分为5组，空白对照组（0 mmol/L Na₂S₂O₄）在细胞培养箱中正常培养，试验组给予含不同浓度（0.1、1、5、10 mmol/L） Na₂S₂O₄的培养基进行缺氧培养4 h、复氧培养2 h的处理后，采用CCK-8法检测细胞存活率。采用荧光探针DCFH-DA法检测细胞中活性氧（ROS）的释放，利用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性，以及BRL-3A细胞中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。【结果】BRL-3A细胞经过缺氧/复氧处理后，与空白对照组相比，随着Na₂S₂O₄浓度的增加，试验组BRL-3A细胞存活率逐渐下降（P<0.01），ROS释放量逐渐增高（P<0.01），细胞培养液中LDH活性及细胞内MDA含量呈浓度依赖性增高（P<0.01），细胞内GSH含量及SOD活性呈浓度依赖性降低（P<0.05；P<0.01）。【结论】利用含5 mmol/L Na₂S₂O₄的培养基对BRL-3A细胞进行缺氧培养4 h、复氧培养2 h的处理后，可以建立稳定的BRL-3A细胞氧化应激模型。

【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术，探索脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制，为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚，无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化，过细胞筛后分离培养鹅胚肝细胞并进行PAS染色鉴定。在鹅胚肝细胞中添加不同浓度（0（对照组）、0.1、1.0、10 μg/mL） LPS，分别于12、24、36 h收集细胞，采用试剂盒检测鹅胚肝细胞内活性氧（ROS）水平，流式细胞仪检测细胞凋亡水平，实时荧光定量PCR检测细胞凋亡关键基因（caspase3、caspase9、p38） mRNA表达量。【结果】试验成功从鹅胚中分离出肝细胞并进行培养，鹅胚肝细胞形态完整，贴壁率高，存活率高，能稳定生长。PAS染色结果显示，鹅胚肝细胞质呈深浅不一的紫红色，肝细胞核呈蓝色。添加不同浓度LPS后发现，鹅胚肝细胞有氧化损伤情况，其中1.0 μg/mL LPS组鹅胚肝细胞内ROS水平升高。添加LPS后鹅胚肝细胞晚期细胞凋亡受到抑制，除36 h外，细胞凋亡关键基因caspase3、caspase9、p38表达量均显著降低（P<0.05）。【结论】本研究建立了较稳定的鹅胚肝细胞分离培养方法，添加不同浓度LPS后鹅胚肝细胞内ROS水平升高，激活p38/MAPK通路，且细胞凋亡受到一定抑制。

西红花苷（crocin）作为西红花的主要生物活性化合物，有清除自由基、缓解氧化应激的能力，具备成为绿色安全抗氧化剂的潜力。西红花苷主要在肠道中分解代谢，通过血液运输至机体各部位。心脏、脾脏、肾脏和肺脏的西红花苷代谢产物较高，即在这些部位发挥其生物学作用。西红花苷为低毒物质，可用于缓解机体发生的氧化损伤。目前，西红花苷抗氧化功能多应用于缓解神经退行性疾病、抑制肿瘤生长、保护生殖系统和心脏系统。缓解氧化应激是西红花苷调控机体适应异常环境的主要方式之一，降低氧化产物产生和提高抗氧化酶活性是其主要调节手段。西红花苷可作用于多条信号通路（TLR2/NF-κB、JAK2-STAT3-ERK、Nrf2等通路），以缓解外界物质刺激所引起的机体内促氧化剂和抗氧化剂之间的失衡。作者综述了西红花苷抗氧化作用在调控动物健康中的应用以及在不同调控系统中的作用机制，为进一步深入研究西红花苷抗氧化作用机制及其调控动物健康提供理论依据；为开发新型天然抗氧化剂在疾病或机体异常中的治疗应用提供指导。

【目的】通过研究低氧环境对牦牛（Bos grunniens）肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs）增殖及氧化应激损伤的影响，初步探究牦牛肺动脉平滑肌对低氧的适应性特点。【方法】分离纯化并利用α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）鉴定牦牛PASMCs。试验分为常氧组和低氧组，采用CCK-8法检测牦牛PASMCs在低氧和常氧状态下0、2、4、6、12、24、48、72、96、120 h的增殖效率；采用ELISA法检测常氧组和低氧组培养24、48、72、96 h细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）的蛋白浓度。【结果】细胞鉴定结果表明，95%以上的细胞均能表达α-SMA，即分离纯化所得细胞为牦牛PASMCs。CCK-8结果表明，低氧组在72、96、120 h细胞增殖倍数极显著低于常氧组（P<0.01）；低氧组和常氧组在72 h的细胞增殖倍数均极显著高于48 h （P<0.01），表明牦牛PASMCs在72 h出现增殖高峰，且长时间的低氧环境能够降低牦牛PASMCs增殖效率。ELISA检测结果表明，与常氧组相比，低氧组牦牛PASMCs培养上清液中LDH蛋白浓度在72 h极显著上调（P<0.01）；SOD蛋白浓度在72、96 h均极显著或显著上调（P<0.01；P<0.05）；CK蛋白浓度在48、72 h均显著或极显著上调（P<0.05；P<0.01）；MDA蛋白浓度在72 h显著上调、96 h显著下调（P<0.05）。在低氧条件下，各时间点上清液中LDH、SOD蛋白浓度差异不显著（P>0.05），CK、MDA蛋白浓度在24、48和72 h均显著高于96 h （P<0.05）。在常氧条件下，上清液中LDH蛋白浓度在48 h显著高于24、72 h （P<0.05）；SOD蛋白浓度在24、48 h均显著高于72、96 h （P<0.05）；CK蛋白浓度在24 h显著高于72、96 h （P<0.05）；MDA蛋白浓度在48 h显著高于72 h （P<0.05）。【结论】长时间低氧能够增强牦牛PASMCs氧化应激反应和细胞损伤，抗氧化作用减弱，细胞增殖效率显著降低，LDH、SOD、CK和MDA 4种蛋白在低氧条件下牦牛PASMCs损伤与抗损伤以及抗氧化中发挥重要调节作用，这可能与牦牛肺脏血管的低氧适应性有关。

【目的】构建稳定表达腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine 5'-monophosphate-activated protein kinase，AMPK）/AMPK-T172D的NIH3T3细胞株，探讨AMPK对过氧化氢（hydrogen peroxide，H₂O₂）诱导的细胞衰老的影响。【方法】采用PCR扩增AMPK基因及其突变形式AMPK-T172D，将其克隆至慢病毒载体pLVX-IRES-Puro中，构建pLVX-IRES-AMPK/AMPK-T172D重组质粒并进行双酶切验证。将构建好的重组质粒包装成慢病毒，感染NIH3T3细胞，并利用嘌呤霉素筛选获得NIH3T3稳转细胞株。采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测稳转细胞株中AMPK的mRNA和蛋白表达情况。利用8.8 mmol/L H₂O₂处理AMPK/AMPK-T172D过表达NIH3T3细胞株，培养2 d后，采用衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associated-β-galactosidase，SA-β-Gal）染色检测细胞衰老情况，利用实时荧光定量PCR检测p53、p21及IL-6基因的表达情况。【结果】双酶切验证结果显示，pLVX-IRES-AMPK/AMPK-T172D表达质粒构建成功。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示，与对照组相比，AMPK/AMPK-T172过表达的NIH3T3细胞中AMPK和AMPK-T172D mRNA和蛋白表达水平均极显著或显著升高（P<0.01；P<0.05），肉毒碱棕榈酰转移酶1（carnitine palmitoyltransferase-1，CPT-1）和脂肪酸合酶（fatty acid synthase，FAS） mRNA表达水平显著或极显著升高（P<0.05；P<0.01），SA-β-Gal细胞阳性率极显著降低（P<0.01）；p53、p21和IL-6基因mRNA表达水平显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01）。【结论】试验成功获得AMPK/AMPK-T172D过表达NIH3T3稳转细胞株，激活AMPK能降低H₂O₂诱导的衰老细胞中SA-β-Gal细胞阳性率和衰老相关因子p53、p21和IL-6的表达。试验结果为研究AMPK在衰老中的作用、可能的分子机制及抗衰老治疗策略提供依据。

白蛋白是血清的重要组成成分，是一种高水溶性的球状蛋白质，可以维持血浆胶体渗透压平衡，兼具抗凝和抗氧化作用。血清白蛋白（serum albumin，SA）的化学结构和构象允许其与许多药物结合，影响药物的转运和代谢过程。作为内源性和外源性配体的载体蛋白，SA对于多种疾病的治疗具有重要的临床意义，包括失血性休克、低白蛋白血症、慢性肝病等。同时，SA还可以作为细胞培养剂，影响卵母细胞的体外成熟和冷冻精子的活性，在动物生产中发挥重要作用。因此，SA的需求在世界范围内逐年增加，获得高纯度、高活性、高回收率的SA至关重要。目前，SA的纯化工艺包括冷乙醇提取法、亲和沉淀、三氯乙酸/丙酮沉淀法、硫酸铵沉淀结合液相色谱法、Cohn法结合液相色谱法、色谱法。作者综述了SA的结构、生理功能、应用及纯化工艺研究进展，并总结不同纯化工艺的原理、纯化效果及优缺点，明晰SA的提取及纯化工艺进程，以期为SA的深入研究和开发利用提供理论依据，进一步推动SA在医药、分子生物学研究、免疫诊断等领域的应用。

【目的】本试验旨在研究锌及乳酸杆菌对乳鸽沙门氏菌感染的防控效果。【方法】选取90只健康、体重相近的10日龄白羽王乳鸽，随机分为5组，每组18只乳鸽。分别为对照组（C组）、感染组（S组，鼠伤寒沙门氏菌）、锌组（Zn组，硫酸锌＋鼠伤寒沙门氏菌）、乳酸杆菌组（LAB组，乳酸杆菌＋鼠伤寒沙门氏菌）、联合处理组（Zn＋LAB组，硫酸锌＋乳酸杆菌＋鼠伤寒沙门氏菌）。试验第5天进行鼠伤寒沙门氏菌攻毒模型的建立，C组灌喂1 mL去离子水，其他组各灌喂1 mL鼠伤寒沙门氏菌悬液（1×10⁹ CFU/mL），连续攻毒3 d。采集血样、肝脏，用于免疫和抗氧化指标测定；采集脾脏和法氏囊并称重，用于计算脾脏指数和法氏囊指数；采集空肠和回肠组织，用于组织切片的制作。【结果】与对照组相比，感染组乳鸽回肠绒毛高度/隐窝深度值比（V/C）显著降低（P<0.05）。与感染组相比，锌组和乳酸杆菌组乳鸽单核细胞比率显著降低（P<0.05）；联合处理组乳鸽空肠V/C、回肠V/C和血清T-SOD活性显著提高（P<0.05）。【结论】乳鸽灌服锌或联合灌服低剂量锌与乳酸杆菌均可通过提高脾脏器官指数及机体抗氧化能力、改善肠道组织形态结构抑制沙门氏菌在机体的系统性感染，且联合灌服效果更好。

近年来，肠道菌群与宿主整个生命过程的相互作用受到越来越多的关注。肠道菌群可产生具有生物活性的可吸收代谢物，对维持宿主的健康起到了不可替代的作用。短链脂肪酸（short chain fatty acids，SCFAs）是肠道菌群发酵膳食纤维产生的主要代谢产物，主要包括乙酸、丙酸和丁酸，其作为介导肠道菌群与宿主各器官之间互作的媒介，广泛参与到宿主的生理活动中，其中也包括骨骼肌。骨骼肌作为机体最大和最重要的器官之一，维持其正常生理功能对于机体健康至关重要。目前关于SCFAs调控宿主的研究多集中在其他组织器官，调控骨骼肌的相关报道较少。鉴于SCFAs广泛的生理作用和骨骼肌自身的重要性，笔者就肠-肌轴理论、SCFAs的产生途径、转运及其对骨骼肌（质量、耐力、纤维特性）的调控作用进行综述，旨在加深对SCFAs调控骨骼肌这一生理过程的认识，为探索骨骼肌相关疾病的生物靶点提供新的思路。

【目的】研究不同比例孜然秸秆替代小麦秸秆对羔羊生长性能、屠宰性能和血浆生化指标的影响，旨在提高新疆、甘肃等地区孜然秸秆的利用率。【方法】采用单因素设计，选择体重相近的健康雄性羔羊27只，随机分为3组，用孜然秸秆分别替代0（对照组）、30%（CS1组）、60%（CS2组）小麦秸秆，饲粮其余组分相同。每组9只羔羊，单栏饲喂，预饲期15 d，正试期60 d。试验期间测定羔羊生长性能，试验结束后采血并屠宰，测定屠宰性能和血浆生化指标。【结果】①CS1和CS2组羔羊平均日采食量（ADFI）均显著高于对照组（P<0.05）。羔羊初重、末重、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）在各组间均无显著差异（P>0.05）。②羔羊屠宰率、宰前活重、胴体重和眼肌面积在各组间均无显著差异（P>0.05）。CS1组羔羊心脏重量显著高于对照组（P<0.05）。羔羊肝脏、脾脏、肺脏和肾脏的重量及指数在各组间均无显著差异（P>0.05）。③羔羊血浆葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、白蛋白（ALB）、生长激素（GH）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）浓度在各组间均无显著差异（P>0.05）。④羔羊血浆谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及总抗氧化能力（T-AOC）在各组间均无显著差异（P>0.05）。【结论】孜然秸秆替代部分小麦秸秆能够提高羔羊采食量，对生长发育、屠宰性能、血浆生化指标及免疫和抗氧化功能均无负作用，可推广应用。

【目的】探究暗斑对蛋鸡蛋品质的影响以及暗斑蛋形成与蛋鸡肠道功能的关系。【方法】选取100只276日龄、饲养环境相同的济宁百日鸡母鸡，每天09：00收集鸡蛋，统计每只母鸡产暗斑蛋情况，试验期42 d。选择10只连续产1级暗斑蛋率高的蛋鸡为对照组，10只连续产4级暗斑蛋率高的蛋鸡为暗斑组，筛选暗斑蛋与非暗斑蛋各60枚，测定蛋品质；试验于42 d屠宰蛋鸡，采集空肠和回肠组织，观察肠道组织形态，测定空肠与回肠组织消化酶、ATP酶活性和抗氧化因子水平。【结果】与对照组相比，暗斑组的蛋壳厚度、蛋壳比例极显著升高（P<0.01），蛋黄颜色显著降低（P<0.05）；暗斑组蛋鸡空肠脂肪酶、钠钾ATP酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性和总抗氧化能力显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01），回肠淀粉酶、钙镁ATP酶活性显著降低（P<0.05）；空肠和回肠绒毛高度、隐窝深度、绒隐比差异不显著（P>0.05）。【结论】鸡蛋暗斑影响蛋品质，导致蛋壳厚度、蛋壳比例增加，蛋黄颜色降低；产暗斑蛋鸡的肠道部分消化酶及抗氧化能力降低，推测暗斑蛋的产生与肠道消化吸收、抗氧化能力存在关联。

【目的】利用微胶囊技术以果胶、壳聚糖为壁材对姜黄素进行包被处理，制备双层包被微胶囊，通过形态特征、机械强度、包埋率等分析确定最佳制备条件，并对其进行体外人工胃肠道耐受性研究。【方法】以8%果胶、不同浓度姜黄素（3.5、4.0、4.5、5.0和5.5 mg/mL）、氯化钙（CaCl₂）溶液（0.3、0.4、0.5和0.6 mol/L）及不同配比姜黄素与果胶溶液（3：7、2：8、1：9（V/V））为第一层包被，筛选果胶姜黄素微胶囊的最佳制备条件；以不同pH （4.2、4.6、5.0、5.4和5.8）的0.8%壳聚糖为第二层包被，筛选制备果胶/壳聚糖姜黄素微胶囊的最佳条件。以筛选的最佳条件制备3组微胶囊（T1、T2和T3），并对其外貌形态、机械强度、包埋率、载药量及体外人工胃肠道耐受性进行评价。【结果】当以8%果胶、4.5 mg/mL姜黄素、姜黄素与果胶配比为1：9（V/V）、0.5 mol/L CaCl₂为第一层包被条件时制得的果胶姜黄素微胶囊包埋率达98%；以pH为4.6、5.0和5.4的0.8%壳聚糖为第二层包被条件时制备的微胶囊大小均匀、形状规则。以筛选的最佳条件制备的3组微胶囊中T1组机械强度、载药量、体外人工胃液中保护率和肠液中释放率均最高。【结论】本研究以果胶和壳聚糖为壁材、姜黄素为芯材，通过筛选的最佳条件制备的果胶/壳聚糖姜黄素微胶囊颗粒形态、机械强度、载药量及体外胃肠道耐受性均较好。研究结果可为开发果胶、壳聚糖为壁材的姜黄素微胶囊的研究提供参考。

【目的】明确产气荚膜梭菌噬菌体及乳酸杆菌联用对肉鸡的生产性能、肠道形态结构及微生物多样性的影响，为禽健康养殖中产气荚膜梭菌的感染提供关键防控技术。【方法】选取240只1日龄青脚麻鸡，随机分为4组：HN02噬菌体组、乳酸杆菌组、HN02噬菌体+乳酸杆菌联用组及空白对照组，每组6个重复，每个重复10只鸡，试验期14 d，期间连续每天饮用噬菌体和/或乳酸杆菌。统计平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）及料重比（F/G），计算脏器系数。取盲肠内容物测定产气荚膜梭菌数量，并对16S rRNA基因进行扩增，分析肠道微生物群落结构和多样性。【结果】与空白对照组相比，HN02噬菌体+乳酸杆菌联用能显著提高雏鸡平均日增重及绒毛高度/隐窝深度（P<0.05），显著降低雏鸡料重比和空肠、回肠隐窝深度（P<0.05），且处理14 d的抑菌效果最佳，产气荚膜梭菌的数量减少1.17 lg CFU/mL。微生物多样性显示，HN02噬菌体+乳酸杆菌联用饮水后雏鸡盲肠内容物菌群中变形菌门、厚壁菌门、放线菌门及拟杆菌门相对丰度较高，属水平中乳杆菌属相对丰度较高，与空白对照组相比，HN02噬菌体+乳酸杆菌联用连续饮用14 d后葡萄球菌属相对丰度较低。【结论】产气荚膜梭菌噬菌体和乳酸杆菌联用能够改善肉鸡的生长性能及肠道发育，维持肠道微生物群落的多样性，在养禽业的产气荚膜梭菌感染的预防中有巨大应用潜力。

随着畜牧业的快速发展，饲料原料的短缺日益明显，其中蛋白质饲料原料的短缺尤为突出。菜籽粕（rapeseed meal，RSM）的主要营养物质为蛋白质，是低价蛋白质饲料原料的主要来源之一。发酵菜籽粕（fermented rapeseed meal，FRSM）营养价值更高，具有平衡饲料中氨基酸水平、降低饲料成本、保障动物健康等作用。作者首先比较了RSM与FRSM的营养成分差异，发现FRSM的硫代葡萄糖苷、单宁、植酸等抗营养因子水平较RSM显著降低，而粗脂肪、粗蛋白质及各氨基酸水平却有提高；其次，简述了RSM的抗营养因子及其处理方法，发现通过采用发酵方式处理RSM是当前去除饲料中抗营养因子的有效方式之一；最后，总结了FRSM在猪、家禽、反刍动物以及肉兔、红鲷鱼等动物上的研究进展，并对其未来发展进行了展望，以期为FRSM在动物饲粮中的实际应用提供参考。

【目的】研究饲粮中添加槲皮素延长鸡蛋贮存时间的作用效果。【方法】选择健康、产蛋率和体重接近的380日龄峪口京粉8号蛋鸡270只，随机分5组，每组6个重复，每个重复9只鸡。空白对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮，阳性对照组饲喂基础饲粮+200 mg/kg维生素E，3个试验组分别在基础饲粮中添加0.03%、0.06%和0.09%槲皮素，试验期70 d。试验结束后收集鸡蛋，4 ℃分别贮存0、7、14、28 d后测定蛋品质、丙二醛（MDA）、脂质和脂肪酸含量以及菌落总数。【结果】与空白对照组相比，贮存第0天，阳性对照组和槲皮素组鸡蛋浓蛋白含量及蛋白pH均显著升高（P<0.05），0.09%槲皮素组蛋黄磷脂含量显著升高（P<0.05），0.03%槲皮素组蛋黄棕榈酸含量显著升高（P<0.05）、花生四烯酸甲酯含量显著下降（P<0.05）；贮存第14天，0.09%槲皮素组蛋黄甘油三酯含量显著下降（P<0.05）；贮存第28天，0.06%槲皮素组蛋黄α-亚麻酸甲酯含量显著下降（P<0.05），0.09%槲皮素组蛋黄γ-亚油酸甲酯、花生四烯酸甲酯含量均显著下降（P<0.05）。与阳性对照组相比，贮存第0天，0.03%和0.09%槲皮素组蛋黄磷脂含量均显著升高（P<0.05）；贮存第7天，槲皮素组蛋黄磷脂含量显著升高（P<0.05）；贮存第28天，槲皮素组蛋黄甘油三酯含量显著下降（P<0.05）。除空白对照组在贮存28 d的蛋壳表面检出菌落总数为2.4×10³ CFU/g外，其他各组蛋壳、蛋清和蛋黄中均未检出菌落。【结论】饲粮中添加适量槲皮素可改善鸡蛋品质，提高蛋黄磷脂、饱和脂肪酸含量及抗菌能力，从而延长鸡蛋贮存时间。本研究结果为槲皮素饲料添加剂在延长鸡蛋贮存时间方面的应用提供了参考依据。

【目的】探究BMP/Smad信号通路对水牛卵巢颗粒细胞生长和类固醇激素合成的影响。【方法】利用脂质体转染的方法将合成的Smad4基因的3对siRNAs （Smad4-siRNA1、Smad4-siRNA2和Smad4-siRNA3）和NC-siRNA （对照组）分别转染水牛颗粒细胞，通过实时荧光定量PCR检测Smad4基因的表达水平，比较不同siRNA的干扰效率。然后利用筛选的干扰效率最高的siRNA，转染水牛卵巢颗粒细胞，通过CCK-8法检测对照组和干扰组细胞的增殖情况，实时荧光定量PCR检测上述两组细胞凋亡相关基因Bax和Bcl2，细胞周期相关调控基因CyclinD2和CDK4，以及类固醇激素合成相关基因Cyp19A1和Cyp11A1的表达水平，并通过ELISA检测雌二醇（E₂）和孕酮（P₄）的含量。【结果】基因干扰试验结果表明，3对siRNAs对Smad4基因的表达均具有极显著的干扰作用（P<0.01），其中Smad4-siRNA1的干扰效率最高，达到了64%。CCK-8检测结果显示，与对照组相比，干扰组细胞的增殖效率显著降低（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示，与对照组相比，干扰组Bcl2、CyclinD2、CDK4和Cyp19A1基因的表达量均显著或极显著下调（P<0.05；P<0.01），而Cyp11A1基因的表达极显著上调（P<0.01），Bax基因的表达未受影响。ELISA检测结果表明，与对照组相比，干扰组雌二醇分泌量减少10.2%，孕酮的分泌量增加24.7%，差异均显著（P<0.05）。【结论】通过RNAi介导的Smad4基因沉默对内源性BMP/Smad信号通路的中断不仅能够显著抑制水牛颗粒细胞的生长，而且能够诱导水牛颗粒细胞的凋亡，还会改变类固醇激素生成。BMP/Smad信号通路在调控水牛颗粒细胞生长和类固醇生成过程中具有重要的作用。

【目的】研究丙酮酸钠对山羊冻精质量的影响。【方法】采用假阴道法采集6只云上黑山羊精液，添加含不同浓度（0、1、5、10、20 μmol/L）丙酮酸钠的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装。使用SCA全自动精液分析仪测定精子总活力（TM）、直线运动百分率（PM），通过低渗耐受性试验（HOST）检测质膜完整性，用流式细胞仪检测顶体完整性、磷脂酰丝氨酸（PS）分布和活性氧（ROS）等指标。【结果】与0 μmol/L丙酮酸钠组相比，1和5 μmol/L丙酮酸钠组精子的TM和PM均极显著改善（P<0.01），其他各处理组间无显著差异（P>0.05）；1和5 μmol/L丙酮酸钠组精子曲线速度和平均路径速度、侧幅摆动、鞭打次数、质膜完整性和顶体完整率、ROS水平均极显著或显著升高（P<0.01；P<0.05）。流式分析结果表明，冷冻稀释液中丙酮酸钠浓度为1、5和10 μmol/L时，正常精子比例显著高于0 μmol/L丙酮酸钠组（P<0.05）。【结论】在稀释液中添加丙酮酸钠可有效降低冷冻解冻过程对山羊精子的损伤，冻精运动能力、结构完整性和抗氧化性均显著提升。少量添加丙酮酸钠对精子有改善作用，而过量添加则会出现负面作用。本试验条件下最佳作用浓度为1 μmol/L。

【目的】分析肝素结合型表皮生长因子样生长因子（heparin-binding EGF-like growth factor，HBEGF）基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点在松辽黑猪中的遗传多样性及其与繁殖性状的相关性。【方法】选择90头健康经产松辽黑猪母猪，采用Sanger直接测序法检测HBEGF基因的SNP位点，利用SPSS 26.0软件分析HBEGF基因SNP位点与松辽黑猪繁殖性状（总产仔数、产活仔数、初生重、3周龄重、断奶重、断奶仔猪数和乳头数）的相关性。【结果】在松辽黑猪HBEGF基因第5外显子及第2、3、4、5内含子上共发现22个SNPs位点，其中有8个SNPs位点与繁殖性状存在显著关联。g.142114384 A>G和g.142104389_142104388ins A>G位点存在AA、AG和GG 3种基因型；g.142114375 C>A位点存在CC、CA和AA 3种基因型；g.142111433 C>T位点存在CC和CT 2种基因型；g.142106003 G>A和g.142105707_142105706ins G>A位点存在GG、GA和AA 3种基因型；g.142105965 C>G位点存在CC、CG和GG 3种基因型；g.142105878_142105877ins C>T位点存在CC、CT和TT 3种基因型。卡方适合性检验结果显示，g.142114375 C>A、g.142111433 C>T和g.142104389_142104388ins A>G位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。g.142114384 A>G、g.142114375 C>A、g.142106003 G>A、g.142105878_142105877ins C>T和g.142104389_142104388ins A>G位点均为中度多态（0.25<PIC<0.5），g.142111433 C>T、g.142105965 C>G和g.142105707_142105706ins G>A位点均为低度多态（PIC<0.25）。关联分析结果表明，g.142114384 A>G位点AA基因型个体总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数均显著高于GG基因型，GG基因型个体初生重显著高于AG基因型，GG基因型个体乳头数显著高于AA、AG基因型（P<0.05）；g.142114375 C>A位点AA基因型个体总产仔数、产活仔数均显著高于CC基因型（P<0.05），AA基因型个体断奶仔猪数显著高于CC、CA基因型（P<0.05）；g.142111433 C>T位点CC基因型个体乳头数显著高于CT基因型（P<0.05）；g.142106003 G>A位点GG基因型个体乳头数显著高于AA基因型（P<0.05）；g.142105965 C>G位点CC、GG基因型个体总产仔数、产活仔数和断奶仔猪数均显著高于CG基因型（P<0.05）；g.142105878_142105877ins C>T位点CC、TT基因型个体断奶仔猪数显著高于CT基因型，TT基因型个体乳头数显著高于CC基因型（P<0.05）；g.142105707_142105706ins G>A位点AA基因型个体3周龄重和断奶重均显著高于GG基因型（P<0.05）；g.142104389_14 2104388ins A>G位点AG基因型个体总产仔数、产活仔数均显著高于AA基因型（P<0.05）。【结论】HBEGF基因中存在8个SNPs位点，与松辽黑猪总产仔数、产活仔数、初生重、3周龄重、断奶重、断奶仔猪数和乳头数均有显著关联。

【目的】研究α-亚麻酸（ALA）对水牛卵巢颗粒细胞体外培养过程中细胞活力、细胞凋亡、细胞周期相关基因表达及激素分泌功能的影响。【方法】为了筛选体外培养水牛卵巢颗粒细胞ALA最适浓度，在96孔板中加入起始细胞数量为1×10⁴/mL的水牛卵巢颗粒细胞，细胞贴壁12 h后更换含0（对照组）、10、50、100、200 μmol/L ALA的培养液，在相同条件下处理24 h，用CCK-8进行细胞活力检测，筛选出最适处理浓度，并用于后续试验。后续试验分为对照组（0 μmol/L）和处理组（50 μmol/L）两组，用实时荧光定量PCR检测颗粒细胞中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白1（p21）和增殖细胞核抗原（PCNA）基因的相对表达量，用免疫荧光对颗粒细胞中细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和细胞周期相关蛋白p21进行荧光检测和定量分析，用ELISA法检测培养液中水牛颗粒细胞分泌的雌二醇（E₂）和孕酮（P₄）含量。【结果】与对照组相比，水牛卵巢颗粒细胞经ALA处理24 h后，在10~50 μmol/L范围内随着ALA浓度升高水牛卵巢颗粒细胞的细胞活力随之升高，处理浓度为50 μmol/L时细胞活力相比对照组极显著提高（P<0.01），随着浓度继续增加，水牛卵巢颗粒细胞活力下降，200 μmol/L时细胞活力极显著低于对照组（P<0.01），因此后续试验选用ALA的浓度为50 μmol/L。与对照组相比，50 μmol/L ALA处理后颗粒细胞中抗凋亡基因Bcl-2和增殖细胞核抗原基因PCNA相对表达量均无显著差异（P>0.05），但促凋亡基因Caspase-3和细胞周期基因p21在mRNA和蛋白水平上的表达量均极显著降低（P<0.01），E₂和P₄水平显著或极显著增高（P<0.05；P<0.01）。【结论】培养液中添加50 μmol/L ALA能够提升水牛卵巢颗粒细胞增殖活力、抗凋亡能力及激素分泌能力，本研究为调控水牛卵泡发育提供理论参考。

【目的】研究不同浓度谷胱甘肽（glutathione，GSH）对绵羊精液低温保存效果的影响。【方法】采集8只湖羊精液，用含0、2、4、8和16 μmol/L GSH的精液稀释液进行稀释，5 ℃保存。分别于保存24和120 h时，检测精子运动参数指标（精子活力、精子活率、路径速度（average path velocity，VAP）、曲线运动速度（curvilinear velocity，VCL）和直线运动速度（straight line velocity，VSL））、精子质量指标（精子质膜、顶体和DNA完整性、线粒体活性）以及精浆中总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量。【结果】绵羊精液低温保存24 h时，4 μmol/L GSH处理组精子活力、DNA完整性、线粒体活性及SOD活性均显著高于0和16 μmol/L GSH组（P<0.05）。低温保存120 h时，4 μmol/L GSH处理组的精子活力、精子活率、VAP、VCL、VSL、质膜完整率、顶体完整率、DNA完整率、线粒体活性及T-AOC水平均显著高于0和16 μmol/L GSH组（P<0.05）。此外，低温保存24和120 h时，4 μmol/L GSH处理组MDA含量显著低于8和16 μmol/L GSH组（P<0.05）。【结论】在精液稀释液中添加GSH可提高绵羊精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、精浆抗氧化能力等，显著改善绵羊精液低温保存效果，其最适添加浓度为4 μmol/L。

【目的】本研究选择原核表达系统表达鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）核衣壳蛋白（Capsid protein），并制备其多克隆抗体，为DTMUV分子机制研究奠定基础。【方法】根据DTMUV-201909株基因序列，运用一步克隆技术将Capsid基因克隆至表达载体pET-30a （+）中，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，利用IPTG进行诱导表达，通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白；使用ISA206佐剂与纯化后的重组蛋白混合乳化后免疫BALB/c小鼠，以获得多克隆抗体。间接ELISA方法测定获得的多克隆抗体效价，并对多克隆抗体进行Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）验证。【结果】试验成功构建pET-30a-Capsid重组质粒，SDS-PAGE结果显示，表达的重组蛋白大小约为18 ku，主要以包涵体形式存在；Western blotting结果表明，该蛋白能与抗His标签鼠单克隆抗体发生特异性反应，具有良好反应原性。间接ELISA结果显示，制备的鼠抗Capisd蛋白多克隆抗体效价可达1：256 000；Western blotting和IFA结果显示，制备的多克隆抗体能特异性识别DTMUV感染细胞样品的Capsid蛋白。【结论】本研究成功制备小鼠抗Capsid蛋白多克隆抗体，为深入研究DTMUV Capsid蛋白的结构和功能提供了试验材料，为进一步阐明DTMUV的致病机制奠定基础。

【目的】研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪丁型冠状病毒（PDCoV）的N基因密码子偏好性差异及其影响因素。【方法】从GenBank数据库中下载上述3种猪冠状病毒（PoCoV）的全基因组序列，通过EMBOSS explorer、CALcal、DAMBE及CodonW等网站及软件计算有效密码子数（ENC）、相对同义密码子使用度（RSCU）等参数并进行ENC绘图、奇偶偏好性和中性绘图分析等。【结果】3种猪冠状病毒的N基因序列的ENC分布在48.99~54.96，其中PEDV、TGEV和PDCoV的ENC分别为53.74±0.61、50.09±0.88和0.72±0.65；RSCU分析显示，3种猪冠状病毒N基因偏好的密码子各不相同，但一般都偏好以U结尾；ENC绘图分析显示，3种猪冠状病毒的N基因数值点均位于标准曲线下方位置；奇偶偏好性分析显示全部散点位于y=0.5以下，且矢量向左下侧偏倚；中性绘图分析显示，3种病毒N基因绘图分析中回归曲线的斜率均接近0。3种猪冠状病毒的S和N基因在牛、猪、犬、人、鸡中的CAI值逐渐增高，RCDI值逐渐降低并接近于1。【结论】PEDV、TGEV、PDCoV的N基因密码子偏好性存在差异且密码子偏好性均较弱，3种猪冠状病毒的N基因表现为"CpG二核苷酸缺失"；自然选择作用是这3种猪冠状病毒N基因密码子偏好性形成的主要进化压力；人、猪、鸡3种宿主均适合3种猪冠状病毒的N基因表达，且PDCoV的S和N基因均更适合在鸡中表达。

【目的】探究重组猪RegⅢγ蛋白的生物功能及相应分子机理，为该蛋白的开发应用提供参考。【方法】利用PCR扩增RegⅢγ基因片段，并连接至pDCP载体，以构建RegⅢγ蛋白重组表达系统。加入IPTG低温诱导促使重组蛋白高效表达，利用镍柱亲和层析纯化蛋白并进行透析后研究其对不同细菌的抑制作用，以及对猪小肠上皮细胞（IPEC-J2细胞）的促增殖与损伤修复及抗氧化与凋亡的功能，进一步探究其分子机理。【结果】纯化后重组蛋白Western blotting鉴定结果显示，17 ku处存在特征条带，确定重组猪RegⅢγ蛋白成功表达。重组猪RegⅢγ蛋白对金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌2种革兰阳性菌有明显的抑菌效果，MIC₉₀均为39.1 μg/mL，对大肠杆菌和肠炎沙门氏菌2种革兰阴性菌未产生抑菌圈；可促进IPEC-J2细胞的增殖及损伤修复，且浓度为10 μg/mL时增殖与修复效果最佳。与对照组相比，表皮生长因子受体（EGFR）、细胞外调节蛋白激酶1（ERK1）、ERK2、细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）、CDK4、细胞周期蛋白E （Cyclin E）和Cyclin D基因mRNA表达水平显著升高（P<0.05），而丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）基因mRNA表达水平显著降低（P<0.05）。将重组蛋白作用于氧化损伤IPEC-J2细胞时，与对照组相比，超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性极显著增强（P<0.01），丙二醛（MDA）含量（P<0.05）、乳酸脱氢酶（LDH）（P<0.01）活性均降低，并发现其通过降低促凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及Bax基因的mRNA表达水平，提高抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达水平，发挥对氧化损伤IPEC-J2细胞的抗氧化与凋亡作用。【结论】重组猪RegⅢγ蛋白对革兰阳性菌有选择性抑制作用，对IPEC-J2细胞增殖与损伤修复均有促进作用，且具有一定抗氧化与凋亡作用。

畜禽肌肉是人类生命活动所需蛋白质的主要来源，进行肌肉生长发育的研究对于提高畜禽肉产品的产量和质量至关重要。畜禽肌肉的生长发育是一个极其复杂的过程，除了受到多种肌源性调节因子（MyoD、MyoG、Myf5等）的调控外，还受到各种非编码RNA （non-coding RNA，ncRNA）的调控，如长链非编码RNA （long non-coding RNA，lncRNA）、微小RNA （microRNA，miRNA）、环状RNA （circular RNA，circRNA）等。其中，lncRNA是一类长度>200 nt、缺乏开放阅读框（open reading frame，ORF）的功能性ncRNA，具有干扰基因表达、与蛋白质相互作用、作为内源竞争RNA （competing endogenous RNA，ceRNA）及编码肽类等生物学功能。近年来，越来越多与畜禽肌肉生长发育相关的lncRNAs被发现和鉴定，其具体作用机制和功能也逐渐被确定。大量研究证实，lncRNA广泛参与畜禽肌肉生长发育的各个阶段，影响畜禽肌肉的产量和质量。作者介绍了畜禽肌肉生长发育的大致过程、lncRNA的发现、分类以及生物学功能，综述了与猪、鸡、牛、羊等各种畜禽动物肌肉发育相关的lncRNA及其作用机制，旨在为lncRNA在畜禽肌肉生长发育方面进行深入研究提供参考。

【目的】掌握中国规模化猪场猪呼吸道疾病综合征主要细菌性病原的感染情况。【方法】2021年采集来自全国26个省、市、自治区的647个规模化猪场中有明显呼吸道症状猪的肺脏、气管及分泌物、脾脏和淋巴结等病料2 204份。将病料接种平板后进行纯化培养，可疑菌落通过形态学观察、革兰染色和PCR进行鉴定，对分离的猪链球菌（Streptococcus suis，SS）、副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，Hps）、多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida，Pm）、支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica，Bb）和胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）进行血清型分析、混合感染分析和药敏试验。【结果】从病料中分离鉴定出647株病原菌，病原菌分离率为29.35%（647/2 204），其中包括306株SS （13.88%）、137株Hps （6.22%）、86株Pm （3.90%）、74株Bb （3.35%）和44株APP （2.00%）。对分离到的SS、Hps和APP进行血清型鉴定，其中SS以血清2型为主，Hps以血清5、13和4型为主，APP以血清1型为主。混合感染结果显示，单一病原菌感染猪场407家，分离到214株SS、82株Hps、38株Pm、47株Bb、26株APP。二重混合感染猪场70家，以SS＋Hps （22家）及SS＋Pm （18家）为主。三重混合感染猪场6家，以SS＋Hps＋Pm （2家）及SS＋Hps＋APP （2家）为主。药敏试验结果显示，分离菌对19种抗菌药表现出不同程度耐药，所有的分离菌对强力霉素和林可霉素耐药，其中Bb表现出严重的多重耐药。【结论】本研究共分离到647株猪呼吸道病原菌，SS以血清2型为主，Hps以血清5、13和4型为主，APP以血清1型为主。不同病原菌之间的混合感染类型复杂，SS＋Hps是最常见的混合感染类型。不同病原菌对19种抗菌药表现出不同程度耐药。本研究结果为监测中国规模化猪场细菌性疾病的流行病学提供数据，对其防控提供参考依据。

【目的】克隆柔嫩艾美耳球虫巨噬细胞迁移抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）基因CDS区，探究其生物信息学特征，为后续抗原表位筛选提供理论依据。【方法】采集晋中地区疑似柔嫩艾美耳球虫感染的阳性样本进行PCR鉴定，根据GenBank中公布的柔嫩艾美耳球虫MIF基因序列，利用RT-PCR技术扩增MIF基因CDS区，构建pET28a-EtMIF重组质粒，经PCR和双酶切鉴定后测序并进行序列分析；利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化性质、结构和功能等进行预测。【结果】成功克隆了柔嫩艾美耳球虫MIF基因CDS区序列，全长348 bp，共编码115个氨基酸，相对分子质量为1.203×10⁴。系统进化树结果表明，柔嫩艾美耳球虫MIF基因氨基酸序列与毒害艾美耳球虫的亲缘关系最近，相似性为98.3%。MIF蛋白为非跨膜、可溶性、非分泌型蛋白，亚细胞定位主要在细胞质中，共有10个磷酸化位点；含有1个保守结构域，二级结构由无规则卷曲（35.65%）、延伸链（30.43%）、α-螺旋（27.83%）和β-转角（6.09%）组成，三级结构预测结果与二级结构一致。存在3个最佳潜在抗原表位。【结论】本试验成功克隆出柔嫩艾美耳球虫MIF基因，并对其进行了生物信息学分析，为今后MIF基因的功能研究及基因工程疫苗候选分子的筛选提供参考。

佐剂是增强和调节疫苗抗原免疫反应的免疫刺激物，与抗原一起使用能产生更强的免疫反应。佐剂能激活机体的天然免疫系统，当佐剂和抗原同时或预先注射到机体内，可改变抗原的形态并延长抗原在体内的滞留时间，促进单核吞噬细胞对抗原的递呈能力及刺激淋巴细胞增殖分化，从而增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂的发展史长达一百多年，目前使用最广泛的疫苗佐剂是铝佐剂，传统的灭活疫苗在很大程度上依靠以铝盐为主的复合物作为主要佐剂。但近年来，随着基因工程技术和生物技术的飞速发展，重组疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗等新型疫苗逐步被开发出来，这些新型疫苗与传统疫苗相比往往存在免疫应答能力差等问题，早期的抗原不纯导致传统的铝盐佐剂已无法满足需要。为解决新型疫苗免疫原性差的问题，科研人员致力于开发广谱且高效的新型疫苗佐剂用来增强新型疫苗的作用。新型疫苗佐剂种类繁多，功能各不相同且机制较为复杂，可分为新型油乳佐剂、脂质体佐剂、CpG寡核苷酸佐剂、细胞因子佐剂、纳米佐剂、多糖佐剂及复合系统类佐剂等。笔者对疫苗佐剂的发展史、作用机制及新型疫苗佐剂的分类进行分析和评述，以期为新型疫苗佐剂的研制及开发提供参考。

【目的】了解2020―2021年猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）的流行情况和遗传变异情况。【方法】本研究对中国部分地区73个猪场的525份样本进行RT-PCR检测，对检测为阳性的样本进行PEDV S1基因扩增与测序，并进行流行病学统计分析，使用DNAStar软件进行核苷酸相似性分析和氨基酸位点变异分析，利用Mega 6.06软件对PEDV S1基因进行遗传进化分析，对疑似重组的序列使用RDP4软件进行S1基因重组分析。【结果】在2020—2021年的525份临床样本中PEDV检出阳性率为26.29%（138/525）。流行病学统计分析显示，冬季属于PEDV高发季节，1日龄仔猪感染率最高，为42.75%（59/183），并在中国6个地区大范围流行。S1基因遗传进化分析显示，138株PEDV S1基因序列主要位于两个分支，131株毒株属于G2群，其中126株属于G2a亚群，与HBXY2、SNJ-P在同一亚群，5株属于G2b亚群，与AJ1102、LW/L、S14在同一亚群；其余7株毒株位于G1群和G2群之间，形成一个独立分支。经重组分析发现，该分支的7株毒株存在同一种重组事件，断点位于第59―695 bp处，可能为跨群重组毒株；138个S1基因序列之间核苷酸相似性为85.7%~100%，与经典毒株CV777的核苷酸相似性为85.2%~92.3%，其中131株G2群分离毒株与经典毒株CV777相比，在S1基因N端第56、59-62、138-139、159-160位，与G2群参考株氨基酸序列存在相同并具有特征性的缺失和插入。【结论】2020―2021年PEDV流行株呈变异趋势，其主要流行基因型为G2群，与2010年以后流行的变异株亲缘关系较近，与经典毒株亲缘关系较远，且存在跨群重组，对中国持续监测PEDV流行性和变异性具有重要意义。

【目的】构建溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素（LktA）原核表达系统，表达融合蛋白并进行纯化和鉴定，为溶血性曼氏杆菌检测方法的建立提供物质基础。【方法】设计并合成特异性引物，PCR扩增羊溶血性曼氏杆菌lkta截短基因；用限制性内切酶EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ对PCR产物和pET-28b （+）载体进行双酶切，用T4 DNA连接酶将溶血性曼氏杆菌lkta 截短基因克隆到pET-28b （+）载体；使用IPTG诱导融合蛋白LktA的表达。通过Ni²⁺亲和层析纯化后采用SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行鉴定。用融合蛋白LktA免疫4月龄健康雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体，4次免疫完成后进行抗体效价测定。【结果】测序结果表明，构建的表达载体中溶血性曼氏杆菌lkta基因序列正确；融合蛋白LktA的分子质量约为30 ku，在大肠杆菌中高效表达并以包涵体形式存在，在变性条件下纯化融合蛋白LktA电泳图显示条带单一，确定其纯度>90%；纯化的融合蛋白LktA可与His抗体进行特异性结合。将纯化的融合蛋白LktA免疫新西兰大白兔后成功制备出多克隆抗体，抗体效价达1：256 000以上。【结论】本研究成功构建了羊溶血性曼氏杆菌截短型LktA的原核表达载体并制备其多克隆抗体，为后期溶血性曼氏杆菌检测方法的建立提供试验材料。

【目的】原核截短表达猪细小病毒6型（Porcine parvovirus type 6，PPV6）ORF2基因，并制备PPV6 VP1_{（348 aa-675 aa）}蛋白多克隆抗体，为后续研究该蛋白的生物学功能提供材料。【方法】以PPV6分离毒株基因组为模板，PCR扩增获得ORF2截短基因片段，将其克隆至原核表达载体pET30a （+）中构建重组质粒pET30a-PPV6-ORF2。经酶切和测序鉴定后，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达，Ni-NTA树脂亲和层析纯化，通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化后重组蛋白。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化，免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体，采用Western blotting、间接免疫荧光试验（IFA）和间接ELISA鉴定免疫兔血清特异性。【结果】成功构建了pET30a-PPV6-ORF2重组表达载体，原核截短表达了PPV6 VP1_{（348 aa-675 aa）}蛋白；SDS-PAGE结果显示，重组PPV6 VP1_{（348 aa-675 aa）}蛋白大小约为40 ku，主要以包涵体形式存在；Western blotting结果显示，该蛋白可与PPV6阳性猪血清发生特异性结合，具有良好的反应原性；Western blotting间接与ELISA结果显示，纯化后免疫兔血清与PPV6全病毒蛋白发生特异性反应，抗体效价为1：25 600；IFA鉴定结果表明，PPV6 VP1_{（348 aa-675 aa）}蛋白兔源多克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本研究成功原核截短表达了PPV6 ORF2基因并制备了兔抗PPV6 VP1_{（348 aa-675 aa）}蛋白多克隆抗体，为PPV6血清学检测方法的建立和PPV6 VP1蛋白的进一步研究提供了参考。

丝状噬菌体广泛分布于革兰阴性细菌中，与裂解性噬菌体裂解杀死宿主不同，丝状噬菌体在侵染宿主之后，通过特异性识别位点将其基因组整合到宿主染色体上，并利用宿主DNA复制机制完成自身DNA复制，最后成熟的丝状噬菌体通过宿主细胞膜分泌释放，而宿主菌依然能增殖，但生长速度减缓。自1996年研究者发现丝状噬菌体CTXφ编码霍乱弧菌的主要毒力因子霍乱毒素基因ctxAB以来，细菌基因组中普遍存在的前噬菌体与宿主菌之间的相互作用关系引起了广泛关注。近年来越来越多的研究证实，作为可移动遗传元件，丝状噬菌体不仅在细菌基因水平转移中发挥重要作用，且赋予了宿主菌很多致病性和生存力相关的特征。笔者着重从丝状噬菌体参与生物被膜的形成、编码细菌毒素和调控毒素的产生与释放、协助细菌适应海洋极端环境、协助细菌抵抗噬菌体的重复感染方面论述了丝状噬菌体对宿主适应性的影响，以增强人们对丝状噬菌体-宿主相互作用的了解，进而为噬菌体疗法防控细菌性疾病提供指导和依据。

【目的】探究中兽药复方乳康颗粒（RKG）治疗奶牛乳房炎的作用机制。【方法】通过中药系统药理学分析平台（TCMSP）、中医药百科全书（ETCM）平台获取中兽药复方乳康颗粒中黄芪、王不留行、益母草的有效成分及靶点，利用Cytoscape v 3.7.2构建中兽药复方乳康颗粒中药-成分-靶点网络图，从NCBI、OMIM、GeneCards、MalaCards平台获取奶牛乳房炎靶点，使用Cytoscape v 3.7.2中的Bisogenet插件对中兽药复方乳康颗粒成分靶点及奶牛乳房炎的靶点进行综合分析，构建蛋白互作（PPI）网络图，并使用DAVID进行GO功能和KEGG通路富集分析，探讨其治疗奶牛乳房炎的作用机制。采用分子对接对网络药理学预测结果进行初步验证。【结果】通过网络药理学筛选出槲皮素、山奈酚、异鼠李素等23个中兽药复方乳康颗粒相关的活性成分，文献检索得到奶牛乳房炎相关靶点有肿瘤坏死因子（TNF）、Toll样受体4（TLR4）、白细胞介素17A （IL17A）等49个，通过Bisogenet插件对其进行PPI分析后得到中兽药复方乳康颗粒作用于奶牛乳房炎的关键靶点77个，涉及到靶点肿瘤蛋白P53（TP53）、核因子κB P65（RELA）及乳腺癌1号基因（BRCA1）等。GO功能富集分析结果表明，生物过程富集在DNA修复、蛋白质泛素化等；主要通过泛素蛋白连接酶结合、ATP结合等分子功能发挥作用；细胞组分条目涉及胞浆、细胞质和细胞核等。KEGG通路富集分析结果表明，中兽药复方乳康颗粒主要调节丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）、PI3K-Akt等信号通路。分子对接结果表明，槲皮素、山奈酚、异鼠李素与BRCA1、RELA和TP53之间均形成了氢键，且结合能<－3 kJ/mol，其中RELA与上述成分亲和力最强。【结论】网络药理学分析表明，中兽药复方乳康颗粒主要通过槲皮素、山奈酚、异鼠李素等有效成分作用于TP53、MAPK、BRCA1、RELA等靶点，调节MAPK、PI3K-Akt等信号通路，从而达到治疗奶牛乳房炎的作用。

【目的】优化水提醇沉法提取黄芩多糖最佳工艺条件，提高黄芩多糖提取率，并探究黄芩多糖的结构，为工业化提取黄芩多糖提供依据。【方法】采用单因素试验考察提取时间、提取温度、料液比和提取次数对多糖提取率的影响。运用Box-Behnken中心组合试验设计法，选取提取时间、提取温度、料液比和提取次数为优化的4个因素，以多糖提取率为响应值，设计4因素3水平试验方案，通过响应面分析确定水提醇沉法提取黄芩多糖的最佳条件；采用柱层析法对多糖进行分离纯化，采用红外光谱、紫外光谱、高效液相色谱（HPLC）、凝胶色谱对黄芩多糖的基团、纯度、分子质量和单糖组成进行分析。【结果】经响应面分析确定当提取温度为98 ℃，料液比为1：12.40（g/mL），提取时间为138 min，提取次数为4次时，黄芩粗多糖提取率为12.23%。用DEAE-52纤维素柱层析分离和葡聚糖G-100凝胶柱层析进行纯化，得到Hq-3-1组分。凝胶渗透色谱分析表明，其Hq-3-1为均一多糖，分子质量为58 794 u。HPLC法柱前衍生化分析Hq-3-1组分的单糖组成结果显示，其包含果糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖。紫外吸收图谱显示，Hq-3-1在260和280 nm处均无吸收峰，说明其不含核酸和蛋白质。红外光谱分析显示，Hq-3-1具有多糖特征的吸收峰，是α-型D-甘露糖吡喃型杂多糖。【结论】采用水提醇沉法在最佳提取条件下黄芩多糖提取率为12.23%，该方法操作简便且多糖提取率高，同时本研究证明黄芩多糖是一种分子质量为58 794 u的杂多糖。

【目的】探讨锦灯笼提取物对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。【方法】将108只SPF级雄性昆明小鼠随机分为6组：空白对照组（CON）、模型对照组（DSS）、阳性对照组（SET）、锦灯笼提取物低（EPCF-L）、中（EPCF-M）、高剂量组（EPCF-H），每组18只。试验开始后，除CON组外的其余小鼠自由饮用3.0% DSS溶液，CON组小鼠正常饮水，不做任何特殊处理；从第8天起，SET组小鼠灌胃给予柳氮磺吡啶（100 mg/kg），EPCF-L、EPCF-M和EPCF-H组小鼠分别灌胃给予锦灯笼提取物0.25、0.5、1 g/kg，CON和DSS组小鼠以相同的方式给予蒸馏水，每日1次，每只0.2 mL，连续7 d。试验期间每日逐只称量小鼠体重，观察小鼠粪便情况，计算小鼠疾病活动指数（DAI）、结肠黏膜损伤指数（CMDI）及组织病理学变化，测定小鼠结肠组织超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）及炎性因子白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、IL-1β mRNA表达水平。【结果】与CON组相比，DSS组小鼠体重下降明显，粪便不成型甚至出现血便，DAI评分和CMDI评分显著升高（P<0.05），结肠组织可见大量炎性细胞，肠黏膜结构被破坏，SOD、CAT、GSH-Px活性显著降低（P<0.05），IL-6和IL-1β基因mRNA表达水平显著升高（P<0.05），表明小鼠溃疡性结肠炎模型建立成功。与DSS组相比，结肠组织中炎性细胞浸润、黏膜充血和出血等情况减少，SET、EPCF-M、EPCF-H组的DAI和CMDI评分显著降低（P<0.05），SOD、CAT、GSH-Px活性显著升高（P<0.05），IL-6和IL-1β基因mRNA表达水平显著降低（P<0.05）。【结论】锦灯笼提取物对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有治疗作用，其可能途径是提高机体的抗氧化功能及减少炎性因子的产生。

【目的】探究贝莱斯芽孢杆菌发酵对自拟乳康方剂中主要药物活性成分王不留行黄酮苷、咖啡酸和芦丁含量变化的影响。【方法】试验建立测定乳康方剂中药中王不留行黄酮苷、咖啡酸和芦丁含量的高效液相色谱（HPLC）检测方法，考察该方法的线性范围、精密度、稳定性、重复性、加样回收率；以乳康方剂中药王不留行、蒲公英、黄芪、当归、甘草药粉为主要成分占30%，黄豆粉占10%、CaCO₃占0.2%、超纯水占59.8%，配制发酵中药培养基，发酵组接种2%（v/w）贝莱斯芽孢杆菌种子液混合均匀后发酵，发酵后加入2倍量水，反复文火煎煮，过滤为待测样；HPLC测定发酵与非发酵乳康方剂中药水煎提取液中的王不留行黄酮苷、咖啡酸和芦丁含量。【结果】建立的测定乳康方剂中王不留行黄酮苷、咖啡酸和芦丁含量的HPLC方法分别在0.01~0.5、5~120和10~100 μg/mL范围内线性关系良好，建立的方法经考察精密度、稳定性、重复性、加样回收率均良好。在相同物理提取条件下，经贝莱斯芽孢杆菌发酵的乳康方剂中药提取液中王不留行黄酮苷、咖啡酸和芦丁含量分别为4.99、6.86和5.81 mg/mL，非发酵的乳康方剂中药提取液中王不留行黄酮苷、咖啡酸和芦丁含量分别为3.70、3.01和3.27 mg/mL，二者相比差异极显著（P<0.01），说明贝莱斯芽孢杆菌适用于发酵乳康方剂中药，与非发酵水煎提取相比提取效果更佳，有利于王不留行黄酮苷、咖啡酸和芦丁药效活性成分释放。【结论】贝莱斯芽孢杆菌发酵乳康方剂中药能显著提高主要有效成分含量，为乳康方剂中药成分高效提取提供了技术参考。

【目的】分析预测菟丝子黄酮缓解孕期暴露双酚A （bisphenol A，BPA）致仔鼠生殖损伤的潜在活性成分和靶点，探究其可能的作用机制，进而保护动物生殖功能。【方法】通过检索CTD数据库确定BPA潜在靶点，使用TCMSP数据库和TCMIP平台筛选菟丝子黄酮中活性成分和潜在靶点，获得菟丝子黄酮与BPA的共同靶点，利用STRING数据库构建蛋白互作（PPI）网络，使用DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析。应用AutoDock Tools 1.5.7软件将主要活性成分与核心蛋白进行分子对接。在临床试验中用8周龄SPF小鼠制造孕期BPA暴露模型，设置对照组（妊娠1~17 d灌胃玉米油0.2 mL/d）、BPA组（妊娠1~17 d灌胃含5 mg/kg BW BPA的玉米油0.2 mL/d）和菟丝子黄酮组（妊娠1~17 d灌胃含5 mg/kg BW BPA和40 mg/kg BW菟丝子黄酮的玉米油0.2 mL/d）。仔鼠21日龄时测定血清中雌激素（estrogen，E₂）水平及卵巢中E₂受体ESR1和ESR2含量。【结果】菟丝子黄酮中主要活性成分可能为槲皮素、山奈酚和异鼠李素，其与BPA交集的潜在靶点有59个。菟丝子黄酮干预BPA的PPI网络中关联度最高的5个靶点分别为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（serine/threonine-protein kinase，AKT1）、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、ESR1、丝裂原活化蛋白激酶1（mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1）和丝裂原活化蛋白激酶3（mitogen-activated protein kinase 3，MAPK3）。GO功能富集分析显示，潜在靶点共富集到375个条目，主要涉及磷酸化、细胞对活性氧的反应、膜、细胞质、蛋白质结合、核苷酸结合、转移酶和激酶活性等。KEGG通路富集分析显示，菟丝子黄酮干预BPA损伤过程主要在癌症通路富集，其次在雌激素信号通路、松弛素信号通路、内分泌抵抗等通路富集，这些可能是菟丝子黄酮干预BPA的主要信号通路。此外，该干预过程也与丝氨酸/苏氨酸激酶Akt信号通路（PI3K-Akt）、促性腺激素释放激素信号通路（GnRH）有一定关系。分子对接结果显示，槲皮素、山奈酚、异鼠李素与关键作用靶点AKT1、EGFR、ESR1和MAPK1具有较好结合活性，配体化合物均能稳定地置于受体蛋白的活性对接口袋中。临床试验发现，BPA可极显著降低子代小鼠血清E₂水平（P<0.01），极显著升高ESR1和ESR2含量（P<0.01），扰乱了内分泌稳态，而菟丝子黄酮使激素和受体水平趋于正常。【结论】菟丝子黄酮缓解孕期暴露BPA致仔鼠生殖损伤的作用机制呈多靶点、多系统的特性，除影响机体内分泌相关途径外还可影响癌症通路。

【目的】了解广东地区鹅源副鸡禽杆菌（Avibacterium paragallinarum，Apg）的生物学特性及其与国内外Apg菌株的差异。【方法】于2019年12月― 2022年1月从广东地区采集疑似鹅传染性鼻炎病例，通过特异性PCR扩增、细菌分离纯化及16S rRNA基因测序鉴定后进行比对并构建系统进化树，确定分离菌株种类并对其进行药敏试验和动物回归试验。【结果】本试验共分离鉴定获得3株鹅源Apg，分别命名为G-AP1、G-AP2、G-AP3，均属于NAD依赖型菌株。分离菌株发酵葡萄糖、蔗糖产酸不产气，氧化酶试验阳性。系统进化树结果显示，3株分离菌株血清型均为A型且亲缘关系较近，与国内大部分分离株亲缘关系较近，与国外分离株亲缘关系较远。分离菌株接种试验鹅，24 h后鹅出现面部肿胀与流鼻液，48 h后挤压肿胀部位可见乳白色絮状的黏稠鼻液流出，剖检病鹅可见肿胀部皮下和鼻窦、鼻甲黏膜水肿、出血、纤维性渗出，鼻窦腔蓄积干酪样渗出物。药敏试验结果表明，头孢噻呋、头孢噻诺、阿米卡星、喹诺酮类药物、氟苯尼考和克林霉素对3株分离菌株具有较强的体外生长抑制作用。【结论】本试验成功分离3株鹅源Apg菌株，可引起鹅群感染发病且具有传染性，研究结果为广东地区防治鹅传染性鼻炎提供了参考依据。

【目的】预测并分析炭疽芽孢杆菌携带前噬菌体的比例、前噬菌体携带抗生素耐药基因与毒力基因的情况，了解并分析炭疽芽孢杆菌前噬菌体对菌株耐药性与毒力的影响，为后续研究与应用炭疽芽孢杆菌前噬菌体提供借鉴。【方法】利用PHASTER在线分析软件预测炭疽芽孢杆菌携带的前噬菌体，采用抗生素耐药基因数据库（comprehensive antibiotic research database，CARD）和毒力因子数据库（virulence factors database，VFDB）预测前噬菌体携带的抗生素耐药基因和毒力因子。【结果】预测到1 421条炭疽芽孢杆菌前噬菌体，其中完整型前噬菌体267条，疑似型前噬菌体321条，不完整型前噬菌体833条。每株炭疽芽孢杆菌所携带的全部前噬菌体基因组占其基因组比例为3%~4%。771条前噬菌体携带1 075个耐药基因。耐药表型共有29种，分别来自28种不同的耐药家族，涵盖6种抗生素耐药的作用机制。394条前噬菌体编码688个毒力因子，归类为71种毒力基因和52种毒力因子。分析毒力因子可能的宿主菌株来源构成发现，除炭疽芽孢杆菌外，嗜肺军团菌亚种、蜡样芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌等也有较高的结构比例，是毒力因子可能的宿主来源。【结论】炭疽芽孢杆菌普遍携带前噬菌体，但前噬菌体基因组在炭疽芽孢杆菌基因组中所占的比例较低。约54%前噬菌体携带抗生素耐药基因，以膦酸类、β-内酰胺类抗生素等为主。约28%前噬菌体携带毒力基因。前噬菌体在炭疽芽孢杆菌抗生素耐药基因的获取与传递、毒力基因的获得与传播及致病性演变过程中可能发挥着一定作用。

【目的】基于网络药理学和分子对接方法探讨野黄芩苷抗卵泡闭锁的作用机制，以筛选野黄芩苷抗玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA）致颗粒细胞损伤的作用途径。【方法】利用PharmMapper、TCMSP、SymMap和GeneCards数据库获得野黄芩苷发挥抗卵泡闭锁作用的靶点，使用Cytoscape v 3.7.2软件构建靶蛋白互作网络关系图并筛选关键靶点；利用DAVID数据库对靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析，构建药物-靶点-通路网络图；使用AutoDock Tools 1.5.6软件进行分子对接验证。【结果】共获得34个交集靶点，筛选得到胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor，IGF1R）、丝裂原活化激酶3（mitogen-activated protein kinase 3，MAPK3）、血管紧张素原（angiotensinogen，AGT）、G1/S-特异性周期蛋白-D1（G1/S-specific cyclin-D1，CCND1）、纤连蛋白1（fibronectin 1，FN1）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、半胱天冬酶-3（caspase-3，CASP3）、神经源性基因位点切口同源物蛋白1（neurogenic locus notch homolog protein 1，NOTCH1）和白细胞介素6（interleukin 6，IL6）共9个核心靶点。GO功能富集分析得到基因表达调控、细胞增殖正调控、凋亡过程负调控等264个生物过程条目；线粒体、内质网、细胞质等25个细胞组分条目；生长因子活性、蛋白质结合、细胞外基质结构组成等23个分子功能条目。KEGG通路富集分析得到癌症通路、IL17信号通路、PI3K-Akt信号通路等115条相关通路。分子对接验证结果显示，野黄芩苷与9个核心靶点蛋白的结合能均<0 kJ/mol，说明蛋白可与野黄芩苷自发结合。【结论】野黄芩苷可能通过多靶点、多通路来治疗卵泡闭锁，本研究结果可为阐明野黄芩苷抗ZEA致颗粒细胞损伤的作用机制提供思路。