作者对主要乳品贸易国家和国际组织所规定的牛奶中兽药最大残留限量、检测方法、风险评估模式进行了综述,分析了中国与其他国家和组织在兽药限量规定上的异同及原因,并就完善中国牛奶中兽药残留限量规定和风险控制提出了建议。

本研究旨在制备犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)VP2抗体,并建立竞争ELISA检测方法,从而为CPV疫苗免疫效果的检测及血清学调查提供技术支持。参照GenBank中犬细小病毒VP2基因序列设计1对添加EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的引物,PCR扩增VP2基因全长序列,将其克隆到pET28a(＋)载体中,构建原核表达载体pET28a-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白。SDS-PAGE及Western blotting分析表明,目的蛋白分子质量大小为67 ku,可被CPV抗血清识别,证明其能与特异性抗体结合,有良好的抗原性。以纯化的重组蛋白免疫家兔制备VP2多抗,采用辣根过氧化物酶进行标记,初步建立了竞争ELISA方法。结果显示,VP2重组蛋白的最佳包被浓度为5 μg/mL,酶标多抗的最佳稀释度为1∶3200,封闭条件为4 ℃过夜,最适的封闭液为10%小牛血清,山羊抗兔IgG-HRP的最佳工作浓度为1∶5000,显色时间为25 min。竞争ELISA试验结果表明,该方法具有较强的稳定性,有望为CPV疫苗免疫效果的判定及血清学调查提供技术手段。

观察牛磺鹅去氧胆酸 (taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型成纤维样滑膜(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞脂皮素-1(lipocortin 1,LC-1)基因表达的影响,并探讨TCDCA对AA大鼠FLS的作用机制。 制备AA大鼠模型,采用组织块培养法分离培养AA大鼠FLS,应用荧光定量RT-PCR技术检测TCDCA对AA大鼠FLS细胞LC-1 mRNA表达的影响。与模型组相比,TCDCA作用组AA大鼠FLS细胞LC-1 mRNA的表达显著高于模型组(P<0.05)。说明TCDCA能显著促进AA大鼠FLS细胞LC-1 mRNA的表达。

为高效表达黑曲霉糖化酶基因,根据GenBank中糖化酶的氨基酸序列(登录号:AY652617),选用毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏嗜性,全基因合成新的cDNA序列。改造后的基因克隆到pGAPZαA质粒中,获得重组分泌型酵母表达质粒pGAPZαA-EC,经限制性内切酶Bln Ⅰ酶切线性化后,电击转化入毕赤酵母细胞X33内。经高浓度博莱霉素抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测结果显示,糖化酶基因与毕赤酵母染色体稳定结合。糖化酶蛋白获得分泌表达,SDS-PAGE分析其分子质量约为80 ku,其表达量约为180 mg/L。表达产物经Starch-PAGE活性染色,显示其具有酶学活性。

试验通过RT-PCR法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因并克隆到原核表达载体pet-30a中,转入到BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达,使用SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物的特性。利用Ni柱纯化该重组蛋白,采用NC膜皮下包埋法免疫Balb/C小鼠,取免疫后的脾细胞与SP2/0细胞进行融合后筛选杂交瘤细胞株,检测杂交瘤细胞株的特性并制备单克隆抗体。SDS-PAGE和Western blotting结果表明,该重组蛋白表达正确,约为20 ku,能被抗PRRSV的阳性血清特异性识别。超声后用Ni柱纯化,经SDS-PAGE分析可得单一的目的条带。NC膜皮下包埋法免疫效果良好,通过细胞融合、ELISA筛选获得3株能稳定分泌抗PRRSV N蛋白抗体的杂交瘤细胞株(H7、F7、C8),制备出高特异性的针对N蛋白的H7单抗。IFA与Western blotting结果显示制备的单抗可与病毒N蛋白产生特异性反应。亚型鉴定为IgG2b型,染色体分析证实杂交瘤细胞染色体数目正确。结果成功实现了N蛋白的原核表达,并获得高特异性的单克隆抗体,为PRRSV N蛋白抗原的检测奠定基础。

USP9Y是与精子生成密切相关的基因,在动物繁殖育种中起非常重要的作用。为了进一步探讨其在绒山羊精子生成中的作用机理,提高育种率,本研究依据牛的USP9Y基因序列设计引物,运用PCR技术,对绒山羊BAC文库进行USP9Y基因的筛选、克隆、测序鉴定。并将测序所得的部分序列与不同物种进行序列比对,结果显示,目的片段与牛的同源性为98%,与家猫的同源性为95%,与人、恒河猴、黑猩猩等的同源性为89%,表明该基因在进化过程中具有一定的保守性。USP9Y基因的BAC筛选,为后续BAC测序,进一步获得USP9Y全序列及功能研究,充分开发绒山羊的经济价值奠定基础。

本试验采用改良二步全基因合成法人工合成了含大肠杆菌偏爱密码子的天蚕素AD和蛙Buforin Ⅱ成熟片段的融合基因,并克隆至pMD18-T中,经测序确认正确后,与pET-Trx连接,构建了表达载体pET-Trx-CAD-Buforin Ⅱ,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。表达产物占菌体总蛋白的35%,经羟胺裂解后对测试菌具有较好的杀菌效果,为进一步的开发与应用打下了基础。

本试验从内蒙古绒山羊脑垂体中提取总RNA,根据已发表的相近物种褪黑激素受体1a(melatonin receptor 1 a,MTNR1a)基因序列设计引物,利用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(real-time quantitative,RT-PCR)技术、组织原位杂交技术检测MTNR1a基因在内蒙古绒山羊垂体中的表达。结果显示,通过RT-PCR方法检测到MTNR1a基因在内蒙古绒山羊垂体中表达,利用原位杂交技术进一步确定MTNR1a基因在垂体中表达分布。结果提示,垂体是褪黑激素作用的靶器官,褪黑激素对绒山羊季节性繁殖的影响有可能是与垂体分泌的某些激素相互作用而发挥作用的。

为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经Sal Ⅰ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得重组酵母菌株GS115/pPIC9K-gp85。对阳性重组菌进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blotting和Dot-ELISA分析,结果表明,gp85基因在毕赤酵母中获得分泌表达,表达产物与J亚群禽白血病病毒多克隆抗体有良好的反应活性,分泌表达量达40 mg/L。本研究为J亚群禽白血病病毒诊断方法的建立及gp85蛋白的深入研究奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征是目前危害养猪业的一种严重的病毒性传染病,文章从猪繁殖与呼吸综合征的病原及生物学特性、基因组结构及变异、分子生物学诊断等方面进行论述。

将水牛髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)cDNA全长定向克隆至pEGFP-C1真核表达载体,通过酶切和测序鉴定正确后,经脂质体介导将重组质粒转染至HEK293细胞,应用荧光显微镜、流氏细胞术和Western blotting检测MyD88蛋白的表达。结果表明,酶切及测序结果证实重组质粒含有MyD88全长CDS序列,融合蛋白读码正确;荧光显微镜、流式细胞术和Western blotting检测证实,水牛EGFP-MyD88融合蛋白真核表达载体能够在HEK293细胞表达。本研究成功构建了pEGFP-C1-MyD88真核表达载体,并使其在HEK293细胞中获得表达,为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。

多形汉逊酵母以其独特的生物学和遗传学特征已成为一种重要的细胞工厂,被广泛运用于生产药物蛋白、酶制剂、生物能源及药用植物有效成分等。作者概述了多形汉逊酵母的一些基本特性,阐述了其作为微生物细胞工厂的应用研究进展,并对其未来工作的前景进行了展望。

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种折叠的正义RNA病毒,属于动脉炎病毒科(Arteriviridae),尼多病毒目(Nidovirales)。除了动脉炎病毒科,尼多病毒目还包括冠状病毒科(Coronaviruses)。15.1~15.2 kb长的PRRSV基因组通过互相重叠的开放性阅读框编码蛋白质。ORF1a翻译过程中产生pp1a多聚蛋白。ORF1b表达产生了 pp1ab多聚蛋白。pp1a和pp1ab经病毒蛋白酶处理后又生成了14个非结构蛋白。一些非结构蛋白为蛋白酶(NSP1、NSP1β、NSP2和NSP4)、RNA-依赖性RNA聚合酶(NSP9)、解旋酶(NSP10)和核酸内切酶(NSP11)。ORFs2-5编码GP2-GP5,ORF6编码M,ORF7编码N蛋白。ORF2b完全包括在ORF2内,表达小的非糖基化E或2b蛋白。相当一部分的囊膜蛋白是nidoviruses所特有的,所有的结构蛋白都是感染所必需的。

本研究采用液相色谱－质谱分离鉴定技术,比较不同直径卵泡液(直径＜2 mm、直径2~4 mm、直径＞4 mm)的蛋白质组分差异,收集显著差异的馏分,还原烷基化处理后酶解成肽段,再经反相色谱二次分离后质谱鉴定。结果表明,在优势卵泡中(直径＞4 mm)存在显著高表达的蛋白质峰,质谱鉴定结果为转铁蛋白(transferrin,TRF)。转铁蛋白的功能和表达的变化提示,该蛋白质的高表达可作为潜在排卵的标志物之一。同时,本研究采用的LC-MS技术将为卵泡液大规模蛋白质组分离和表达谱构建提供参考。

为了探究重链抗体在骆驼免疫保护中的生物学作用,本研究利用Protein G和Protein A亲和层析纯化新疆双峰驼血清中总IgG和重链抗体IgG2,并免疫昆明小白鼠制备抗双峰驼总IgG和抗双峰驼重链抗体IgG2的多抗血清;通过ELISA检测双峰驼在体液免疫应答过程中针对spaA-N、溶菌酶和蒜氨酸酶3种抗原的重链抗体的滴度变化。结果从新疆双峰驼血清中亲和层析纯化出天然重链抗体IgG2,蛋白质分子质量约为46 ku;免疫昆明小白鼠后获得抗双峰驼总IgG多抗血清的效价为1∶204800,抗双峰驼重链抗体IgG2多抗血清的效价为1∶6400。在spaA-N免疫骆驼诱导的体液免疫应答过程中,重链抗体IgG2出现延迟反应。3种蛋白均能诱导抗原特异的IgG2亚类重链抗体的产生。

肿瘤抑制因子p53是第一个被发现的肿瘤抑制因子蛋白家族成员,该蛋白家族能感知许多细胞信号以调节细胞增殖、凋亡和分化。TGF-β是机体内重要的生理生化调节因子,在机体细胞生长分化、胚胎发育、创伤修复等方面发挥重要作用。p53与TGF-β信号转导密切相关。作者对近年p53与其依赖的TGF-β在细胞生长调控方面的相互联系研究进展作一简要综述。

分别采用改良结晶紫半定量方法和常规PCR方法对180株宠物源性大肠杆菌进行生物被膜形成能力定量研究和相变抗原agn43检测,以分析大肠杆菌毒力因子agn43与生物被膜表型相关性。试验结果表明,30.1%(55/180)的菌株能够检测到agn43基因,96.4%(53/55)agn43阳性菌株具有不同程度的成膜能力,与无成膜能力组差异极显著(P<0.01)。

根据GenBank上公布的牛布氏杆菌外膜蛋白OMP31的基因序列设计特异性引物,对牛布氏杆菌样品进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为602 bp,与预期扩增序列同源性为99.7％;该PCR检测体系的特异性强,不能在非布氏杆菌 DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为0.9 pg/μL。该检测体系的成功构建为牛布氏杆菌病的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。

从广东省发病猪场采集的组织和血清中分离到两株PRRSV,病料经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,可产生明显细胞病变,通过间接免疫荧光可检测到荧光信号,两株病毒分别命名为ZH-GD株和ZS-GD株。对两株病毒的ORF5和Nsp2高变区进行序列测定和分析,结果表明,PRRSV ZH-GD株和ZS-GD株的核苷酸序列与欧洲型代表株LV株间的相似性相对较远,与美洲株经典毒株VR-2332间的相似性分别为88.6%和88.1%,与中国经典美洲毒株CH-1a间的相似性分别为94.4%和93.0%。在Nsp2上有30个氨基酸的缺失,与JXA1、XH-GD等高致病性变异株的Nsp2缺失位置一致。分离的两株PRRSV均属于美洲型的变异株PRRSV。

为了实现以潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)为选择标记的质粒在毕赤酵母中高效表达抗菌肽LL37,在pGAPZαA质粒的基础上,通过EcoRⅤ、BamHⅠ双酶切将Zeocin抗性基因替换成潮霉素磷酸转移酶基因,获得的表达质粒命名为pGAPHαA。根据LL37氨基酸序列,通过毕赤酵母密码子偏嗜性改造,合成的LL37基因片段克隆到pGAPHαA质粒中,获得重组分泌型表达质粒pGAPHαA-LL37,线性化后电击转化毕赤酵母SMD1168,经潮霉素B筛选阳性转化子。72 h表达上清LL37蛋白含量约为167 μg /mL,表达产物耐热性好,对大肠杆菌DH5α、猪链球菌最小抑菌浓度分别为2.94、7.06 μg/mL。

根据GenBank已发表的猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)N蛋白的基因序列,设计合成1对引物,扩增片段长度为730 bp,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测TGEV的RT-PCR检测方法,并用该方法对疑似TGEV的猪群临床腹泻疾病进行了诊断检测和分析。本研究建立的TGEV检测方法,特异、灵敏、可靠,为该病的诊断和流行病学调查研究提供了技术保障。

试验旨在研究赶黄草提取物对肉仔鸡生长性能及血液生化指标的影响。试验选用1日龄肉仔鸡300只,随机分为5组,每组 3个重复,每个重复20只,试验Ⅰ组饲喂基础日粮,试验Ⅱ组在基础日粮中添加0.1%麝香草酚,试验Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别在基础日粮中添加0.1% 、0.2%、0.4%的赶黄草提取物,试验期35 d,分别于21、35 d测定肉仔鸡的生长性能和血液生化指标。结果表明,赶黄草提取物可使21 d以后肉仔鸡的日增重提高,效果优于麝香草酚。21 d时,与试验Ⅰ组相比,添加0.4％赶黄草提取物可显著提高血清球蛋白(GLO)含量(P<0.05),降低谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)的活性(P<0.05),极显著降低胆固醇(TC)含量(P<0.01)。35 d时,试验Ⅳ、Ⅴ组分别显著提高血清中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿酸(UA)含量(P<0.05),极显著提高球蛋白(GLO)、高密度脂蛋白含量 (HDL-C)(P<0.01),极显著降低血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG3)、低密度脂蛋白(LDL-C) 及谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)的活性(P<0.01)。

试验选择90头生长育肥猪完全随机设计分成5组, 每组3个重复,每个重复6头。试验组在基础日粮中分别添加1%益生素,0.2%异麦芽低聚糖,0.075‰金霉素和1%益生素+0.1%异麦芽低聚糖,观察其对育肥猪生长性能和抗氧化能力的影响。结果表明, 添加1%益生素,0.2%异麦芽低聚糖和1%益生素+0.1%异麦芽低聚糖组育肥猪平均日增重均显著高于未添加组(P<0.05),和金霉素组相比,无显著差异。添加1%益生素,0.2%异麦芽低聚糖和1%益生素+0.1%异麦芽低聚糖组血清总SOD均高于未添加组,但差异不显著(P>0.05),和金霉素组相比,也无显著差异(P>0.05)。

试验根据豆粕、菜粕和棉粕作为植物性蛋白饲料的营养特性,选择中性蛋白酶活较高的细菌和真菌作为发酵豆粕、菜粕和棉粕的菌种以改善豆粕、菜粕和棉粕的蛋白质品质。通过细菌和真菌的两两组合生长试验,分别筛选出适合发酵豆粕、菜粕和棉粕的最佳复合菌各一组。试验结果表明,发酵豆粕、菜粕和棉粕的最佳菌株组合为BS-2和Ao、BS-natto和Ao、BS-natto和Ao。

试验旨在研究中草药、益生素及其合剂对肉仔鸡生产性能的影响。选择3500只1日龄罗斯308肉仔鸡随机分为7组,每组设5个重复,每个重复100只鸡,对照组饲喂基础日粮,试验1、2、3、4、5组分别在基础日粮的基础上添加0.5%的药方1、药方2、益生素、中草药益生素合剂药方3、中草药益生素合剂药方4组;抗生素组为基础日粮中添加500 mg/kg杆菌肽锌。结果表明,中草药益生素合剂药方3组的体重、料重比、死淘率与对照组相比差异显著(P＜0.05),与抗生素组相比差异不显著(P＞0.05),优于其它处理组。因此,药方3促生长抗病效果较好,可以替代抗生素。

为寻找奶牛乳腺上皮细胞亚细胞结构中与泌乳相关的重要蛋白质、从蛋白质水平揭示乳蛋白合成的调控机制,应用双向凝胶电泳技术分离体外培养的蛋氨酸处理组与正常组奶牛乳腺上皮细胞蛋白质,利用Image Maser 2D软件对图谱进行对比分析,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索鉴定,并采用实时荧光定量PCR技术在mRNA水平上验证2-DE结果。质谱鉴定出8个表达上调的差异蛋白质,大多数差异蛋白质的功能涉及细胞骨架构成、能量代谢等过程。这些差异点的发现为研究奶牛泌乳机理提供了有益的线索。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是调控蛋白质翻译起始阶段的一种蛋白激酶,与细胞的生长和细胞周期关系十分密切,近年来备受关注。文章就mTOR的结构,mTOR组成的上游信号和下游信号传导通路,mTOR在调节细胞增殖、促进细胞生长、参与免疫抑制和能量代谢及肿瘤发生等方面的作用进行了全面阐述,旨在为全面认识其功能并为相关疾病特别是肿瘤的治疗提供新的思路。

试验旨在探讨犬耳部和腹部皮肤成纤维细胞体外培养和纯化方法,为下一步犬体细胞核移植提供基础。结果表明,在组织块培养后的4 d,耳组织周围开始有细胞出现,8~10 d呈优势生长,2周后可长满细胞瓶。腹部皮肤组织则要6~7 d方可见有细胞沿组织块周围爬出,10 d左右可以在组织块周围形成成片细胞,20 d左右可以长满整个细胞瓶。腹部皮肤成纤维细胞建系初期生长速度低于耳成纤维细胞,但传代至第4代时,两种细胞的生长曲线基本相同。

本研究旨在分析垂体特异性转录因子(Pit-1)基因SNPs与中国西门塔尔牛生长和育肥性状的相关性。试验以118头中国西门塔尔牛为材料,利用DNA测序和PCR-RFLP方法检测Pit-1基因Hinf Ⅰ酶切位点多态性,并进行相关分析。结果表明,Hinf Ⅰ酶切位点与料重比和平均日增重性状呈显著相关(P＜0.05),其中BB基因型个体显著优于AA基因型个体,饲料转化率较低,平均日增重较高;在8、15月龄体高性状,12、15月龄体长性状,8、12、15月龄胸围性状和8月龄腹围性状中,Hinf Ⅰ酶切位点多态差异显著,BB基因型个体表型值显著高于AA基因型(P＜0.05);在宰后体尺性状测量性状中,Pit-1基因Hinf Ⅰ多态位点对胴体长、胴体胸深和腰部肉厚性状影响显著,其中BB基因型个体表型值显著大于AA和AB基因型个体(P＜0.05)。初步认为,BB基因型与优良的生长育肥性能显著相关,对B等位基因的选择有利于优良性状的改良。

以中国环颈雉为材料,利用PCR-SSCP结合测序技术对A-FABP基因序列多态性位点进行研究,并分析与屠宰性状和肌内脂肪含量的相关性。结果表明,在中国环颈雉群体A-FABP基因上检测到多态性位点,为中度多态,在1106 bp处存在碱基A缺失,AA、AB基因型个体在活体重和屠体重上显著高于BB基因型个体,与肌内脂肪含量差异不显著。初步推测AA为中国环颈雉体重增长的优势基因型,A为优势等位基因。

在动物卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养体系中添加一定浓度的发情牛血清可能提高卵母细胞的成熟率及胚胎的发育率。本研究以屠宰场卵巢来源的绵羊卵母细胞为试验材料,探讨了发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果表明,成熟液中添加10%第1天的发情牛血清能显著提高绵羊卵母细胞的体外成熟率及孤雌胚卵裂率(P＜0.05);孤雌胚体外培养72 h后,向培养液中添加10% 第7天的发情牛血清能显著提高绵羊孤雌胚的桑囊胚率(P＜0.05)。结果表明,发情牛血清能够促进绵羊卵母细胞的体外成熟率及孤雌胚发育率。

对畜禽存栏量的调查是农业统计调查的重要内容之一,其统计调查方法主要是抽样调查。本研究旨在通过实例抽样调查,拟出合适的抽样方法对全国的基础母牛存栏量进行调查估计。采用二阶PPS(sampling with probability proportional to size)抽样、分层等比例抽样、分层二阶典型抽样对内蒙古敖汉旗肉牛存栏量进行调查,比较3种方法的准确度。结果表明, 在此3种方法10%的样本量下进行比较时,3种抽样方法按相对误差大小顺序排列为:分层二阶典型抽样＜分层等比例抽样＜二阶PPS抽样,其相对误差分层二阶典型抽样比分层等比例抽样、二阶PPS抽样分别小60.38%、92.83%;置信区间按大小顺序排列为:分层二阶典型抽样＜分层等比例抽样＜二阶PPS抽样。总体而言,分层二阶典型抽样的准确度相对较高,相对误差最小,仅为0.0412。故在实际应用当中,分层二阶典型抽样目前较为适用。

以大约克猪、长白猪、杜洛克猪和贵州白香猪杂交及回交的后代为研究对象,根据NCBI公布的序列设计了4对引物,采用测序、PCR-SSCP技术对Calsarcin-2基因第1内含子进行了单核苷酸多态性检测和基因型分析,探讨Calsarcin-2基因第1内含子多态性与肉质性状的关系。结果发现2个SNPs(T613C、C936G),群体遗传学分析表明,在所检测的各多态位点上,不同群体间不同基因型的分布都存在着极显著差异(P＜0.01),结合品种特性分析表明,613及936位点所检测的不同基因型和肉质可能具有一定的相关性。

为探索天祝白牦牛超数排卵的有效方法,选择54头纯种天祝白牦牛,利用国产促卵泡素(FSH)和进口FSH分别等量法和减量法进行超数排卵处理,比较其超数排卵效果。结果显示,应用等量法注射国产FSH超排的有效率为40%,减量注射法超数排卵的总有效率为50%;等量法和减量法注射进口FSH的超排有效率均为50%;使用大剂量FSH进行超排处理的有效率为50%;而应用FSH重复进行超数排卵处理的有效率为67%。结果表明,国产FSH与进口FSH在处理供体白牦牛进行超数排卵时,其效果差异不显著(P＞0.05),等量注射法和减量注射法对超排效果也无显著影响(P＞0.05)。在同等条件下,使用大剂量的FSH对供体进行超数排卵,其有效率与使用正常剂量FSH处理的有效率没有显著差异(P＞0.05),但重复超数排卵处理的效果显著高于一次处理的效果(P＜0.05),平均每头牛的排卵数也明显高于其他试验组。

试验旨在对宁夏六盘山区肉牛杂交改良群体肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的多态性进行研究,为宁夏肉牛杂交改良选育提供理论基础。采用PCR-RFLP对该群体110头个体MSTN基因多态性进行检测。结果扩增出1346 bp的目的片段,其PCR产物被限制性内切酶DraⅠ消化后表现出多态性,共检测到2种基因型:AT和TT,其中AT基因型频率为0.0545,TT基因型频率为0.9455;T为优势等位基因,TT基因型为优势等位基因。因此,宁夏六盘山区的肉牛杂交改良群体MSTN基因具有多态性。

青春期前卵母细胞的来源广泛,作为体外胚胎生产的试验材料,国外这方面的研究报道较多。作者就青春期前山羊卵母细胞体外成熟、成熟后细胞质中细胞器的变化情况、体外受精技术和胚胎体外培养等方面研究情况作一综述,供研究者参考。

乳酸菌基因组学的研究有助于揭示乳酸菌的遗传和代谢机制,通过分析相关功能基因与益生功能的联系,能够充分发挥乳酸菌应用潜力。作者就乳酸菌基因组基本特征、代谢特点、重要功能基因、乳酸菌的比较基因组学进行了综述。

瘦素是由白色脂肪细胞分泌的一种蛋白类激素,对动物的采食量及能量平衡调控具有明显的作用。除此之外,瘦素对生殖系统也有着重要的调节作用。瘦素通过JAK-STAT途径及与KiSS-1/GPR54系统的相互作用,对动物初情期的启动,下丘脑—垂体—性腺(HPG)轴及胎盘与子宫等产生广泛的影响。

本试验旨在研究土庄绣线菊水浸液对小鼠急性酒精肝损伤的保护作用。将试验小鼠随机分为低剂量组、中剂量组、高剂量组、模型组和空白组5组。采用一次酒精灌胃法建立急性酒精性肝损伤小鼠模型。建模后,测定各小鼠肝组织谷胱甘肽(GSH)与丙二醛(MDA)含量及血清中冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸转移酶(ALT)的活性,并进行肝组织病理切片观察。结果显示,土庄绣线菊水浸液能够明显降低酒精性肝损伤引起的AST和ALT活性的升高,能有效保持肝脏中GSH含量和明显降低MDA含量,说明土庄绣线菊水浸液对乙醇所致肝损伤具有保护作用,能明显改善酒精引起的肝脏损害。

本研究建立了一种快速的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H52株定量检测方法,为进一步研究疫苗的效价检测和质量监控新方法奠定基础。针对IBV核蛋白(N)基因,设计特异的H52株荧光定量PCR检测引物和TaqMan-MGB探针,优化反应体系和条件后进行特异性、敏感性、重复性试验,探讨荧光定量RT-PCR与EID₅₀方法测定病毒含量的相关性,并通过体外转录技术对病毒基因拷贝数进行定量分析。该方法特异性强,与其他禽源病毒均无交叉反应;该方法可检测到5.60×10¹拷贝/μL的病毒核酸,与常规PCR相比,敏感性高10倍;重复性试验的变异系数为0.9%~3.2%;与EID₅₀检测结果的相关系数r＝0.934,两种方法在检测H52株病毒效价上具有很好的相关性。本研究建立的TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法,适合于对鸡传染性支气管炎病毒H52株病毒含量的快速定量检测。

为了开发布鲁氏菌病新型标记疫苗,本研究对流产布鲁氏菌基因缺失株RB6的培养特性、染色特性、凝集特性、稳定性及小鼠体内毒力和免疫保护力进行了系统鉴定,旨在阐明该菌株具备的生物学特性。通过对亲本菌株和RB6的比较,发现固体培养基上RB6菌株单菌落可被结晶紫染成紫色,RB6菌株液体培养物可与0.1%吖啶黄染料以及抗布鲁氏菌粗糙型抗体发生凝集反应,证明该菌株为粗糙型。将RB6菌株在体外连续传代培养20次和牛体内连续5次继代,检测结果证明其表型未发生变化,说明该菌株遗传稳定性良好。通过小鼠体内试验发现该菌株毒力显著降低,并对流产布鲁氏菌强毒菌株2308攻毒的免疫保护力与现有疫苗A19接近。本研究结果表明,流产布鲁氏菌基因缺失株RB6为粗糙型菌株,毒力较低、安全性高、遗传性状稳定,并具有良好的免疫保护效力,有望开发成为动物布鲁氏菌病粗糙型标记疫苗。

本研究利用3种方法对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)进行检测,并对这3种检测方法的灵敏度和特异性作出比较。根据新城疫病毒的融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,利用水浴LAMP法、PCR及LAMP实时浊度仪进行检测。通过对恒温水浴中的反应温度、反应时间及反应液中Mg^2＋浓度进行优化获得最佳反应条件,结果用凝胶电泳分析;用优化的温度进行LAMP实时浊度仪检测,同时都与PCR方法进行比较。结果显示,获得了最佳反应条件,水浴LAMP方法最低检测限是1.58 pg,比PCR高100倍,而LAMP实时浊度仪检测灵敏度比水浴LAMP方法高10倍,最低检测限是0.158 pg。3种方法对其他非新城疫病毒均无检出。结果表明,新城疫病毒水浴LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,有望在核酸扩增领域取代PCR技术,LAMP浊度仪法检测灵敏度更高,但是所需仪器和试剂比较昂贵。

鸭疫里默氏菌是造成雏鸭死亡最重要的病原菌之一,主要侵害2~6周龄雏鸭,严重阻碍了养鸭业的发展。作者从全基因组序列、基因分型、毒力因子、蛋白质组学、耐药基因及分子生物学检测等方面概述了鸭疫里默氏菌的分子生物学研究现状,为鸭疫里默氏菌病的防制提供指导和方向。

犬巴贝斯虫病是经蜱传播的血液寄生虫病,其临床症状是高热、贫血、血红蛋白尿和脾肿大。通过血涂片检验,血常规检验并结合临床特征,对西安市103只宠物犬进行了巴贝斯虫的感染情况检测。结果显示,犬血液中巴贝斯虫的感染数为16例,占总数的15.53%,其中5月份的感染犬最多,为13例,占感染数的81.25%(13/16)。

猪乙型脑炎又称流行性乙型脑炎、日本脑炎,是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种急性、人畜共患的自然疫源性传染病。作者对某养殖户的病死猪进行临床症状观察,病理剖检及实验室诊断,通过病毒分离及鉴定,确诊病死猪为乙型脑炎病毒感染。鉴于养殖户中该病的存在及对养猪业的危害,建议加强对猪乙型脑炎病的诊断及监控。

犬瘟热是危害犬、狐、貂最严重的烈性传染病之一。作者对某试验动物犬饲养厂的病死犬进行临床症状观察,病理剖检及实验室诊断,通过病毒的分离培养及间接免疫荧光鉴定,确诊为犬瘟热病毒感染。鉴于该病的危害程度,建议加强对犬瘟热病的诊断及监控。

文章综述了国内外猪瘟(classical swine fever,CSF)疫苗的研究现状。对灭活疫苗、弱毒疫苗和新型疫苗的研究情况进行概述,重点阐述了新型疫苗的研究进展,为进一步研究和开发新的猪瘟疫苗、制定良好猪瘟免疫方案有效控制猪瘟提供参考。

为了解目前母猪和仔猪猪圆环病毒2型(PCV2)感染情况,本试验对来自于15个猪场的85份母猪血清和29个猪场的55份仔猪可疑病料(脾脏、淋巴结、肾脏等),分别采用间接ELISA和PCR法进行PCV2抗体和病毒核酸检测。结果显示,在15个猪场中,1个猪场母猪抗体呈阴性,其他14个猪场母猪抗体均呈阳性,猪场PCV2阳性检出场为93.3%(14/15),85份母猪血清抗体总阳性率为75.3%(64/85)。29个猪场的仔猪,PCV2核酸检测阳性猪场为19个,猪场阳性率为65.5%(19/29),55份仔猪可疑病料病毒核酸检测总阳性率61.8%(34/55)。可见,母猪和仔猪感染PCV2相当普遍。对母猪群PCV2抗体阳性率及其仔猪群病毒核酸阳性率进行比较发现,母猪群PCV2抗体阳性率越高其仔猪群病毒核酸阳性率却越低。

奶牛酮病是围产期奶牛常见的由碳水化合物和脂肪代谢紊乱引起的一种群发性代谢病,该病主要以酮血症、酮尿症、酮乳症为特征,常表现为低血糖症、血浆中游离脂肪酸升高、脂肪肝、糖原水平下降等。酮病多发于高产奶牛,可对奶牛业造成巨大损失,及时有效地预防和治疗奶牛酮病对提高奶牛养殖业水平具有重要意义。

本研究主要是从江西省新余市某梅花鹿养殖场送检来的一只病死梅花鹿崽中分离细菌,进行培养特性观察、生化鉴定、动物试验和体外药敏试验,从而为临床诊断治疗提供理论指导。试验结果表明,从病死梅花鹿的心脏、肝脏、肺脏各分离到一株革兰氏阴性,短杆状细菌;通过培养特性观察和生化鉴定确定该病由大肠杆菌引起;通过试验动物攻毒试验得出3株菌都是强毒力致病菌,为本病例的病原菌;对于3株菌在体外进行药物敏感性试验,得出3株菌对药物的耐药性都非常强,而且敏感性都或多或少存在差异,对于3株菌都较敏感的药物为痢特灵、卡那霉素、庆大霉素;不敏感的药物有先锋Ⅴ、先锋Ⅵ、阿莫西林、左氧沙星。

本试验旨在对3种食蟹猴早孕诊断方法进行比较,找出比较准确、可靠的诊断方法。在食蟹猴怀孕第20天时用直肠触诊、B超检查和孕酮值检测3种方法进行早孕诊断,在怀孕第30天时B超确诊是否怀孕。结果表明,B超检查的准确率为96.4%;直肠触诊的准确率为92.9%;孕酮值检测的准确率为64.3%。因此B超检查准确率高,是食蟹猴怀孕诊断的金标法;直肠触诊准确率较高且方便、经济,适合基层生产中进行大批量诊断;孕酮值检测确诊率较低,但可作为早孕诊断的辅助方法。

动物福利是影响动物产品品质与安全的重要因素。肉牛作为重要肉品来源,为人们生活提供营养丰富的牛肉产品,并且因产业链长,面临的福利问题多很受人们关注。文章根据国内外肉牛福利研究的一些资料,主要阐述肉牛在饲养、运输和屠宰过程中的福利问题及肉牛福利对牛肉品质的影响研究进展,为中国肉牛福利标准的制定以及肉牛养殖业饲养管理规范提供参考。

本试验选用A、B、C、D 4种商品化鸡传染性法氏囊病活疫苗免疫SPF鸡,进行攻毒试验以评估不同疫苗的免疫效果。10日龄SPF鸡分组后分别用A、B、C、D 4种商品化法氏囊病活疫苗按1羽份/只剂量接种免疫,21日龄时用1000 LD₅₀剂量的法氏囊超强毒株(GD0104)进行攻毒,各组疫苗的保护率分别为100%、85%、100%、100%;35日龄时用1000 LD₅₀剂量的法氏囊超强毒株(GD0104)进行攻毒,各组疫苗的保护率分别为100%、75%、95%、100%。免疫后抗体检测显示,抗体滴度水平D＞A＞C＞B,抗体转阳速度A＞D＞C＞B,免疫应激作用A、D＞B、C。综合考虑疫苗免疫攻毒后各项指标的变化,A、D疫苗免疫效果优于其他两种活疫苗,可以有效地为SPF鸡提供保护作用。

为了对生物除臭剂的除臭机理进行初步研究,试验将制备的生物除臭剂接种新鲜猪粪,采用实时定量PCR技术(real-time PCR)测定了不同发酵时间猪粪中大肠杆菌和葡萄球菌的含量。结果表明,制备的生物除臭剂对发酵猪粪中大肠杆菌和葡萄球菌均有一定的抑制作用,且持续时间较长。这些研究结果为微生态制剂除臭机理的初步研究提供了一定依据。

本试验旨在建立牛传染性鼻气管炎病毒的攻毒模型,明确病毒在牛体内的分布及确定最佳攻毒方式,建立牛传染性鼻气管炎的发病标准,用来评价IBRV LNM弱毒疫苗的保护效力。试验共使用健康断乳牛9头,设鼻内喷雾组、滴鼻组和对照共3组,每组3头牛。将实验室分离保存的IBRV LN01/08强毒株采用鼻内喷雾和滴鼻两种方式接种试验组动物后,连续14 d,每日观察临床症状,监测体温及采集鼻拭子,对收集的试验数据进行对比分析。选取临床发病不同时期剖杀动物,采取主要脏器进行病毒分离。结果显示,所有动物攻毒后有不同程度的临床表现,以鼻内喷雾组临床表现最为严重,剖检可见肺部病变明显。病毒主要分布在呼吸道和眼结膜组织中。研究结果显示,采用IBRV自然感染方式攻击动物,喷雾方法攻毒临床效果明显强于滴鼻方式,保证了临床发病模型的建立,可以用来IBRV疫苗免疫效果评价,为研制IBR疫苗提供前提基础。

本研究旨在建立同步测定多种磺胺类药物残留的高效液相色谱—紫外法。通过对磺胺嘧啶(SD)、磺胺醋酰(SA)、磺胺喹噁啉(SQ)、磺胺氯丙嗪(SUL)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺对甲氧嘧啶(SMD)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM')、磺胺异噁唑(SIZ)、磺胺噻唑(ST)、磺胺噻唑钠(ST-Na)、酞磺胺噻唑(PST)、磺胺甲噁唑(SMZ)、琥珀酰磺胺噻唑(SST)等13种磺胺类药物进行紫外波长扫描分析,选择色谱检测的波长为270 nm。由于磺胺类药物的酸碱度不同及结构差异,在经过多种组合比较后,选择乙腈和乙酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,建立的条件可将这些药物分开,13种药物可以分离得到10个色谱峰,ST-Na、PST和ST 3种成分重叠,SDM'和SMZ重叠。用乙腈—氯仿作样品提取并抽提,杂质干扰较少,回收率80%以上,分析用时相对较短。

为了研究高邮鸭的早期生长发育规律,本试验运用Gompertz、Logistic和Von Bertalanffy 3种非线性生长模型对高邮鸭1~10周龄生长情况进行了分析和曲线拟合。结果表明,高邮鸭早期生长迅速,3周龄时体重增加最大;3种模型均能较好地拟合高邮鸭早期生长,其中Gompertz曲线模型的拟合度为0.99902,拟合估计值与实际观测值最接近,拟合效果最佳,更适合早期生长发育较快的高邮鸭。