J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (4): 42-46.

J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达

徐延伟, 高宏雷, 高玉龙, 李凯, 高立, 秦立廷, 祁小乐, 王永强, 王笑梅

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨 150001

收稿日期:2011-11-05 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-04-20 发布日期:2012-04-20
通讯作者: 王笑梅

Secretory Expression of Avian Leukosis Virus Subgroup J gp85 Gene in Pichia pastoris

XU Yan-wei, GAO Hong-lei, GAO Yu-long, LI Kai, GAO Li, QIN Li-ting, QI Xiao-le, WANG Yong-qiang, WANG Xiao-mei

Division of Avian Infectious Diseases,State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy Agricultural Sciences,Harbin 150001,China

Received:2011-11-05 Revised:1900-01-01 Online:2012-04-20 Published:2012-04-20

摘要/Abstract

摘要： 为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经Sal Ⅰ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得重组酵母菌株GS115/pPIC9K-gp85。对阳性重组菌进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blotting和Dot-ELISA分析,结果表明,gp85基因在毕赤酵母中获得分泌表达,表达产物与J亚群禽白血病病毒多克隆抗体有良好的反应活性,分泌表达量达40 mg/L。本研究为J亚群禽白血病病毒诊断方法的建立及gp85蛋白的深入研究奠定了基础。

关键词: J亚群禽白血病; gp85基因; 毕赤酵母; 分泌表达

Abstract: To express recombinant gp85 protein of avian leukosis virus subgroup J (ALV-J) in P. pastoris, the gp85 gene was amplified and cloned into the pPIC9K vector. The recombinant plasmid pPIC9K-gp85 was identified, linearized with Sal Ⅰ and transformed into P.pastoris strain GS115 by electroporation. Transformants were selected on MD plates then on YPD plates containing G418 and confirmed by PCR. SDS-PAGE assay demonstrated that gp85 protein was expressed and secreted into the culture medium. The expression product amounted to 40 mg/L of culture under optimized condition. The recombinant gp85 protein showed good antigenicity in Western blotting and Dot-ELISA assays. This study laid the foundation for further study of the gp85 protein and the development of the diagnostic methods for ALV-J.

Key words: ALV-J; gp85 gene; Pichia pastoris; secretory expression

中图分类号:

徐延伟;高宏雷;高玉龙;李凯;高立;秦立廷;祁小乐;王永强;王笑梅. J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达[J]. , 2012, 39(4): 42-46.

XU Yan-wei;GAO Hong-lei;GAO Yu-long;LI Kai;GAO Li;QIN Li-ting;QI Xiao-le;WANG Yong-qiang;WANG Xiao-mei. Secretory Expression of Avian Leukosis Virus Subgroup J gp85 Gene in Pichia pastoris[J]. , 2012, 39(4): 42-46.

[1]	迟丽丽, 刘健, 陈志远, 李树凡, 张玫瑜, 于泽海, 李丹, 尹燕博, 徐守振. 禽腺病毒血清4型和8b型串联截短Fiber2-Fiber蛋白在毕赤酵母中的优化表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(8): 3056-3064.
[2]	布阿依夏木·库尔班, 王义鑫, 杨铖熹, 耿子健, 徐滢清, 罗刚. 天蚕素A和溶菌酶杂合肽在毕赤酵母中重组表达及其活性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(12): 5032-5042.
[3]	李佑君, 伍澜, 杨雨欣, 顾玉芳, 方春, 刘晶, 梁雄燕, 杨玉莹. 1株诱发血管瘤的ALV-J的分离鉴定及其囊膜基因的进化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4557-4567.
[4]	赵明明, 李星颖, 江文康, 樊全宝, 赖健仪, 何诗, 何静, 白银山, 刘璨颖, 陈胜锋, 陈志胜, 张晖, 王丙云. 猫血清白蛋白在毕赤酵母中的分泌表达[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 897-903.
[5]	李爽, 杜家华, 白志辉, 曲可, 苏苗, 姜宁, 张爱忠. 响应面法优化含活性肽CC34毕赤酵母重组菌冻干营养保护剂的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3791-3799.
[6]	刘增素, 汪昭睿, 王雪莹, 姜艳平, 崔文, 王丽, 乔薪瑗, 周晗, 徐义刚, 李一经, 唐丽杰. 重组牛α干扰素的分泌表达及抗病毒活性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1449-1456.
[7]	翟俊琼, 吴亚江, 代军威, 陈安妮, 周妞, 王晨, 杜雪晴, 罗满林, 陈武. 东北虎γ-干扰素基因的克隆、生物信息学分析及其在毕赤酵母中的表达[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(1): 72-82.
[8]	闫伟, 杨娜, 毛若雨, 王秀敏, 郝娅, 马炫炫, 滕达, 王建华. 噬菌体裂解酶Lysep3的毕赤酵母重组表达和活性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(4): 1018-1027.
[9]	张宏刚, 吴剑良, 李莉. 杂合抗菌肽Mel-MytB在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性测定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(11): 3246-3252.
[10]	刘新文, 王秀丽, 郭东春, 郭伟伟, 邹敏, 范根成. 鸡β干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性测定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(7): 2203-2208.
[11]	薛忠, 董淑红, 王善辉. 小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(11): 3327-3333.
[12]	江学斌, 陈嘉蔚, 杨军, 刘顺枝, 肖安吉, 卢志鹏, 楚品品, 黄朝远, 蔡海明, 马苗鹏, 张玲华. 猪源抗菌肽PBD-1在毕赤酵母中的表达及鉴定[J]. , 2016, 43(3): 644-649.
[13]	郁建锋, 何赛, 金泽楷, 周欢庆, 董小敏, 龚道清, 顾志良. 鸡生长激素在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(11): 2970-2975.
[14]	王善辉, 谢金文, 吕颜枝, 李云龙. 鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性与保护性研究[J]. , 2015, 42(10): 2580-2586.
[15]	谭博敏，余希尧，钟泽民，蒋志琼，黄毓茂. 猪流行性腹泻病毒S1基因在毕赤酵母中的表达[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(6): 64-67.