猪源抗菌肽PBD-1在毕赤酵母中的表达及鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.012

›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (3): 644-649.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.012

猪源抗菌肽PBD-1在毕赤酵母中的表达及鉴定

江学斌¹, 陈嘉蔚², 杨军², 刘顺枝¹, 肖安吉², 卢志鹏², 楚品品², 黄朝远², 蔡海明², 马苗鹏², 张玲华²

1. 广州大学生物工程研究所, 广州 510006;
2. 华南农业大学生命科学学院, 广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室, 广州 510642

收稿日期:2015-08-17 出版日期:2016-03-20 发布日期:2016-03-30
通讯作者: 张玲华 E-mail:lhzhang@scau.edu.cn
作者简介:江学斌(1969-),男,江西南昌人,讲师,博士,研究方向:发酵工程,E-mail:jxbcalvin@126.com
基金资助:
广州市属高校科技计划项目(1201420755)

Expression and Identification of Porcine Antimicrobial Peptide PBD-1 in Pichia pastoris

JIANG Xue-bin¹, CHEN Jia-wei², YANG Jun², LIU Shun-zhi¹, XIAO An-ji², LU Zhi-peng², CHU Pin-pin², HUANG Chao-yuan², CAI Hai-ming², MA Miao-peng², ZHANG Ling-hua²

1. Research Institute of Bioengineering of Guangzhou University, Guangzhou 510006, China;
2. Function and Regulation of Agricultural Biotechnology Protein of Guangdong Province Key Laboratory, College of Life Sciences, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China

Received:2015-08-17 Online:2016-03-20 Published:2016-03-30

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在实现猪β防御素1 (poricine-β-defensin 1,PBD-1)在毕赤酵母中的表达,获得有抗菌活性的抗菌肽PBD-1。根据PBD-1的氨基酸序列和酵母密码子偏好性,设计优化其核苷酸序列,利用SOE-PCR技术获得PBD-1基因序列,克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-PBD-1,经SacⅠ线性化后转入毕赤酵母SMD1168中。PCR筛选得到阳性酵母表达菌株,经甲醇诱导后得到分子质量约4.5 ku的抗菌肽PBD-1。抗菌特性研究结果表明,表达产物抗菌肽PBD-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌均有较好的抑制效果。

关键词: PBD-1基因; 表达; 毕赤酵母; PCR

Abstract: In order to produce antimicrobial peptide PBD-1 with bioactivity in Pichia pastoris,according to published amino acid sequence of PBD-1 and the partiality codon of yeast,the PBD-1 gene was amplified by SOE-PCR and cloned into pPIC9K to construct a recombinant expression vector pPIC9K-PBD-1.The recombinant vector was linearized by SacⅠ,and then transformed into SMD1168 by electroporation.Positive yeast expression strain was obtained by PCR.The antimicrobial peptide PBD-1 (approximately 4.5 ku) was expressed by methanol induction.Antibacterial activity assay showed that the antimicrobial peptide PBD-1 had better antibacterial activity against E.coli,S.aureus and B.subtilis.

Key words: PBD-1 gene; expression; Pichia pastoris; PCR

中图分类号:

Q786

江学斌, 陈嘉蔚, 杨军, 刘顺枝, 肖安吉, 卢志鹏, 楚品品, 黄朝远, 蔡海明, 马苗鹏, 张玲华. 猪源抗菌肽PBD-1在毕赤酵母中的表达及鉴定[J]. , 2016, 43(3): 644-649.

JIANG Xue-bin, CHEN Jia-wei, YANG Jun, LIU Shun-zhi, XIAO An-ji, LU Zhi-peng, CHU Pin-pin, HUANG Chao-yuan, CAI Hai-ming, MA Miao-peng, ZHANG Ling-hua. Expression and Identification of Porcine Antimicrobial Peptide PBD-1 in Pichia pastoris[J]. , 2016, 43(3): 644-649.

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Expression and Identification of Porcine Antimicrobial Peptide PBD-1 in Pichia pastoris

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