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1.
东佛里生羊、湖羊及东湖杂交羊的泌乳性能比较分析
安小鹏, 刘楠, 胡郑佳楣, 胡劲草, 徐小龙, 张磊, 宋宇轩
中国畜牧兽医 2023, 50 (
1
): 238-245. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.01.024
摘要
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【目的】本研究旨在探索东佛里生羊、湖羊及东湖杂交羊的泌乳性能。【方法】选取同一养殖场健康东佛里生羊(DF)、湖羊(H)、东湖杂交一代(F1)、级杂二代(F2)各197、313、346、364只。收集其在2020—2021年间的日泌乳量数据,使用六次多项式拟合泌乳曲线,估计泌乳曲线参数;采集奶样,用乳品分析仪测定乳脂、乳蛋白、乳糖、总固形物和尿素氮;对奶绵羊乳房拍照进行形态学描述,测量乳头形态数据,包括乳头长度、乳头间距和乳头直径;麻醉后采集空怀期乳腺组织,制作组织切片,苏木精-伊红(HE)染色后镜检。【结果】东佛里生羊泌乳量显著高于杂交一代(
P
<0.05),东佛里生羊与级杂二代泌乳量差异不显著(
P
>0.05),杂交一代与级杂二代泌乳量均显著高于湖羊(
P
<0.05)。使用六次多项式模型拟合不同杂交代奶绵羊泌乳曲线,拟合度均高于0.90。东佛里生羊、湖羊、杂交一代、级杂二代泌乳高峰日分别为58、18、45与47 d,泌乳高峰日泌乳量分别为2.31、1.27、2.24和1.97 kg。湖羊乳脂含量显著高于其他杂交代奶绵羊(
P
<0.05),东佛里生羊与杂交一代乳蛋白含量差异显著(
P
<0.05),湖羊与级杂二代乳蛋白含量差异显著(
P
<0.05),各杂交代奶绵羊其他乳成分不存在显著差异(
P
>0.05)。测量结果表明,湖羊乳头长度显著小于其他杂交代奶绵羊(
P
<0.05),级杂二代乳头间距显著高于其他杂交代奶绵羊(
P
<0.05)。研究未发现乳头大小与泌乳量存在关系。湖羊乳沟浅,乳头朝向与地面平行;东佛里生羊乳沟深,乳头朝向与地面垂直方向夹角<45°;杂交一代与级杂二代的乳房形态结构相似,乳头朝向呈外"八"字形,适合机器挤奶。东佛里生羊、杂交一代与级杂二代乳腺组织发达,乳腺结构中腺泡导管数量均比湖羊密集。【结论】湖羊与东佛里生羊杂交后,级杂二代泌乳量显著提高,乳房形态与乳腺结构结果表明级杂二代有良好的泌乳基础。
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2.
猪德尔塔冠状病毒致病机理及防治研究进展
胡湘云, 潘鹏丞, 吴倍仪, 陈宝剑, 覃兆鲜, 谢炳坤
中国畜牧兽医 2022, 49 (
10
): 3994-4003. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.10.032
摘要
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713
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猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新发现的猪肠道冠状病毒,能引起猪腹泻、呕吐、脱水甚至死亡,给养猪业带来巨大威胁。深入开展PDCoV的研究对该病的防控有重要意义。PDCoV基因组编码的4种结构蛋白、15个非结构蛋白和3个辅助蛋白在病毒复制、增殖及致病过程中发挥重要作用。PDCoV致病机理复杂,笔者从其侵入宿主细胞以颉颃干扰素反应、诱导细胞凋亡、调控细胞自噬、抑制细胞焦亡途径来逃避宿主免疫应答,以及其他影响PDCoV复制的分子机制方面对其致病机理进行总结。PDCoV呈全球性流行趋势,常用
S
、
M
和
N
基因作为核酸检测和抗体检测靶标进行诊断。目前,尚未开发出针对PDCoV的安全有效的商品化疫苗和治疗方法,随着生物技术的发展,在灭活病毒疫苗、减毒活疫苗、重组载体疫苗、病毒样颗粒疫苗和乳酸菌载体口服疫苗上取得一定进展,且广谱抗病毒药物、抗病毒分子蛋白和新型抗病毒技术在PDCoV抗病毒研究中显示了良好的应用前景。因此,笔者总结PDCoV编码蛋白功能、致病机理、诊断方法及PDCoV的疫苗开发和抗病毒治疗,以期为后续科学研究和有效防治提供借鉴。
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3.
单次大剂量和多次小剂量环磷酰胺腹腔注射对小鼠免疫抑制模型的影响
龚蕾, 郎茜, 马莎, 陈翠, 周正宏
中国畜牧兽医 2021, 48 (
10
): 3787-3794. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.10.031
摘要
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647
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试验旨在研究环磷酰胺不同剂量、不同给药次数对建立的小鼠免疫抑制模型免疫指标变化的影响。选择7周龄雄性昆明小鼠200只,随机均分为5组:对照组(生理盐水组,0 mg/g环磷酰胺)、环磷酰胺3次注射低剂量(0.04 mg/g)和高剂量(0.08 mg/g)组、环磷酰胺1次注射低剂量(0.10 mg/g)和高剂量(0.16 mg/g)组。3次注射组在试验第1天按照给定剂量腹腔注射环磷酰胺,连续注射3 d;对照组按照相同方法每天腹腔注射等体积生理盐水;1次注射组仅在试验第1天按照给定剂量腹腔注射环磷酰胺1次。试验期间每天对小鼠称重,在试验的第1、2、4、6、9、10、11天从各组分别选取8只小鼠采取尾静脉血检测血常规,并在试验的第1、4、6、9、11天从各组分别选取8只小鼠处死,测定股骨骨髓有核细胞、胸腺指数、脾脏指数等指标。结果表明,所有剂量环磷酰胺均可成功建立免疫抑制模型。抑制效果上,0.08 mg/g 3次注射对白细胞、骨髓有核细胞、体重增重、脾脏、胸腺的免疫抑制效果最好,0.16 mg/g 1次注射对红细胞免疫抑制效果最好。抑制周期上,环磷酰胺对白细胞、骨髓有核细胞、脾脏免疫抑制周期较短,对红细胞、胸腺的免疫抑制周期较长;1次注射均较3次注射更早且显著地出现白细胞免疫亢进,而脾脏免疫情况则刚好相反。综上,环磷酰胺不同给药剂量及给药次数对动物不同免疫部位的免疫状态及免疫抑制周期均会产生不同的影响。本研究可为药理试验中针对不同免疫指标进行观测时提供适当的检测剂量及检测时间参考。
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4.
GS-441524对自然感染的猫传染性腹膜炎的治疗效果观察
牟丹霞, 董军, 吴凡, 李安琪, 唐雅姝, 王敏, 吕艳丽
中国畜牧兽医 2021, 48 (
5
): 1859-1867. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.05.038
摘要
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试验旨在观察GS-441524对自然感染的猫传染性腹膜炎(FIP)病例的临床疗效,为临床用药提供参考。试验招募了25只于中国农业大学动物医院确诊为FIP的患猫,随机分为高剂量组(5 mg/(kg·d))(12只)和低剂量组(2.5 mg/(kg·d))(13只),每日皮下注射GS-441524治疗并记录体重、体温、注射药物的疼痛反应及每周的实验室及影像学检查结果以评价药物疗效。设定治疗周期为4周,部分病例根据实际情况延长治疗时间。结果显示,共计20只湿性FIP和3只干性FIP患猫完成试验,2只患猫退出。治疗时间为4~18周。20只湿性FIP患猫中,2只在1周内死亡,1只体腔积液增加,17只用药1周后积液减少,用药2~3周后积液消失。3只干性FIP患猫中,2只患猫的肠系膜淋巴结在用药1~2周后减小,1只无明显变化。所有患猫的精神和食欲在用药3~5 d内改善;体重在1~2周内开始增长;5只发烧的患猫用药2~3 d后体温恢复正常;14只贫血的患猫用药1~10周后恢复正常;16只患猫出现白细胞数量升高且淋巴细胞数量下降或中性粒细胞数量升高,用药1~2周内开始好转。所有患猫血清中白蛋白和球蛋白的比值(白球比)均<0.8,其中9只总蛋白升高,4只白蛋白降低,14只球蛋白升高,用药1~2周后开始好转。高剂量组的患猫4周药物有效率和治愈率分别为81.8%和60.0%,低剂量组的患猫4周药物有效率和治愈率分别为75.0%和22.2%。用药4周前后,高剂量组的患猫除白细胞总数(WBC)和白蛋白(ALB)外,其余指标均差异显著或极显著(
P
<0.05;
P
<0.01);而低剂量组的患猫仅体重差异显著。除血红蛋白(HGB)、WBC和ALB外,药物对患猫的体重、红细胞(RBC)、红细胞压积(HCT)、淋巴细胞(LYM)、中性粒细胞(NEU)、总蛋白(TP)、球蛋白(GLOB)及白球比(A/G)改善情况差异显著(
P
<0.05),且高剂量药物效果更佳。综上,GS-441524能有效治疗自然感染的FIP,高剂量(5 mg/(kg·d))疗效更佳,最短治疗周期为4周。
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5.
免疫球蛋白调控动物胃肠道健康及微生物功能的研究进展
卜莹, 郑楠, 王加启, 赵圣国
中国畜牧兽医 2022, 49 (
10
): 3800-3808. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.10.012
摘要
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620
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动物胃肠道被视为抵御外界病原体的一道重要屏障,胃肠道健康与动物机体健康密不可分。动物胃肠道中栖息着大量多样性的微生物种群,微生物之间的相互作用复杂且多样,微生物的功能和种类组成影响着胃肠道的稳态平衡。微生物群通过定植在胃肠道黏膜,在黏膜免疫系统发育中起着至关重要的作用,同时也对胃肠道健康与功能起着重要作用。调控胃肠道健康的方式有很多种,目前主要通过添加益生元、益生素等非营养物质和营养调控剂来调控胃肠道功能和维护胃肠道健康。但相较于其他营养调控剂来说,免疫球蛋白调控胃肠道的研究报道较少,属于新的免疫调控技术,其具有特异专一性、易生产且成本低、效果显著等优点。免疫调节是一种高效且相对安全的调节方式。作者介绍了4种免疫球蛋白(IgG、IgA、IgY、纳米抗体)的主要理化性质,总结了现阶段免疫球蛋白对胃肠道功能调节的进展及展望,从而为应用免疫球蛋白调控动物胃肠道健康和促进营养代谢提供指导。
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6.
黑水虻对猪禽肠道健康和肠道菌群影响的研究进展
仲崇华, 桂福星, 曹立亭, 郭荣富
中国畜牧兽医 2022, 49 (
10
): 3829-3837. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.10.015
摘要
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619
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近年来,饲料蛋白质原料价格持续走高,中国饲料蛋白质原料紧缺并且长期依赖进口。因此,寻找并开发新型的蛋白质源已成为当前解决饲料蛋白原料紧缺的研究热点。黑水虻(
Hermetia illucens
L.)是一种双翅目水虻科的营腐生性昆虫,可将有机废弃物快速转化成为高附加值生物物质,具有饲养成本低、繁殖速度快、产出高的明显优势,其含有丰富的氨基酸、抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)和几丁质等多种生物活性物质,其蛋白质和脂肪含量高,因而有望成为高质量动物饲料。大量研究表明,黑水虻部分替代饲料蛋白质成分可有效增强动物机体免疫和抗氧化能力,同时通过正向调节肠道有益微生物种群及增加菌群丰度的方式,起到改善动物肠道健康的作用,其作为一种颇具前景的蛋白质饲料原料有望为畜牧养殖业找到新的突破口。作者简述了黑水虻的营养特性、主要活性成分,系统总结了饲粮中添加黑水虻对猪禽肠道屏障、免疫机能及肠道菌群影响的最新研究进展,并对黑水虻今后的研究思路及发展方向进行了展望,以期为黑水虻的进一步开发研究和在动物养殖生产中的推广应用提供参考依据。
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7.
基于单细胞转录组测序技术筛选牛体内囊胚性别特异性基因
崔宝山, 黄飞, 王杰, 李楠, 高庆华
中国畜牧兽医 2022, 49 (
12
): 4573-4581. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.12.007
摘要
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【目的】探究牛体内雌性和雄性囊胚在mRNA水平上的特异性差异,挖掘雌性和雄性囊胚发育差异相关候选基因。【方法】参考GenBank中牛牙釉质基因(AMEL)序列(
AMELX
基因,登录号:NM_001014984.1;
AMELY
基因,登录号:NM_174240.2)设计引物,以胚胎内细胞DNA为模板,采用巢式PCR扩增技术鉴定单个牛体内囊胚的性别。选用确定性别的单个雌性和雄性囊胚为试验材料,采用Smart-Seq2扩增技术构建单个胚胎测序文库,应用Illumina HiSeq Xten高通量测序平台对单个胚胎进行单细胞转录组测序(scRNA-Seq),并进行了基因差异表达、GO功能和KEGG通路分析。【结果】通过巢式PCR扩增胚胎内细胞中的
AMEL
基因,确定了胚胎性别;基因表达分析筛选出两组之间差异表达基因(DEGs)6 160个,其中雌性特异性基因675个,雄性特异性基因305个;GO功能注释发现雌性特异性基因显著注释在核苷酸结合、信号转导调控、多细胞生物发育、细胞骨架等条目,雄性特异性基因显著注释在氧化磷酸化、线粒体、线粒体内膜、核糖体等条目;KEGG通路富集分析发现7条与雌性和雄性囊胚发育差异相关的通路,分别为代谢途径、糖酵解、磷酸戊糖途径、细胞衰老、氧化磷酸化、调节干细胞多能性的信号通路和Wnt信号通路;并利用GO和KEGG结果筛选出5个在牛体内囊胚期胚胎发育过程中具有直接或间接作用的基因:
FBP
1、
GADD
45
G、FHL
2、
FOSB
和
WNT
2
B
。【结论】牛体内雌性和雄性囊胚之间存在广泛的转录差异,性别特异性基因
FBP
1、
GADD
45
G、FHL
2、
FOSB
和
WNT
2
B
可能是直接或间接影响胚胎发育的关键基因。
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8.
前十字韧带断裂犬胫骨平台角的X线和CT测量
吴楚琳, 王佳尧, 张晗, 谢富强, 袁占奎
中国畜牧兽医 2021, 48 (
10
): 3896-3904. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.10.043
摘要
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581
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为探究胫骨平台角(tibial plateau angle,TPA)在犬前十字韧带断裂(cranial cruciate ligament rupture,CCLR)中的临床意义及为犬CCLR的整体发病规律与风险、诊断和治疗方案提供参考,本研究选用2018年6月至2019年1月在中国农业大学动物医院确诊为CCLR的共15只患犬的30个膝关节,使用X线和CT测量TPA (R-TPA和CT-TPA)并比较X线和CT测量TPA的一致性及优缺点。结果显示,R-TPA大小与年龄、体重、胖瘦、性别及绝育/去势与否均无关(
P
>0.05),前十字韧带是否断裂亦与TPA大小无关(
P
>0.05)。经CT测量所得30个CT-TPA的平均值为26.93°(范围:19.03°~32.67°);左侧膝关节的CT-TPA的平均值为26.82°,右侧为27.04°。R-TPA与CT-TPA值具高度相关性(
r
>0.75,
P
>0.05);21个膝关节(70%)可在CT图像中观察到骨赘生成,其CT图像比X线图像能更清楚地辨识出骨赘与骨皮质的分界。结果表明,TPA与CCLR患犬的临床病理因素无关,X线与CT在测量犬TPA方面具有一致性,CT测量在测量图像的采集上较X线拍摄更方便、快捷与全面,并在骨关节炎病例中的测量精度更高。
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9.
蒸汽爆破技术在玉米秸秆饲料化利用中的研究进展
聂德超, 张卓, 赵琛, 李艳玲
中国畜牧兽医 2021, 48 (
12
): 4488-4496. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.12.017
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玉米秸秆是作物残余物中最丰富的木质纤维素生物质之一,主要由纤维素、半纤维素和木质素通过氢键及其他化学键、分子键结合而成,是具有复杂聚合结构的高分子化合物,作为动物饲料的可利用率较低。蒸汽爆破即汽爆,是应用蒸汽弹射原理实现爆炸过程中对生物质预处理的技术。将蒸汽爆破技术应用于玉米秸秆处理,可高效分离纤维素,对玉米秸秆具有明显的解聚作用,有利于提高玉米秸秆的饲料化利用程度。作者介绍了蒸汽爆破工艺原理与参数,综述了蒸汽爆破处理对玉米秸秆纤维结构、化学成分和酶解产糖的影响,以及对玉米秸秆的营养成分消化率和瘤胃微生物附着的影响。已有研究表明,蒸汽爆破可使蒸汽分子渗入植物组织,经过瞬时释放将内能转化为机械能,作用于生物质组织细胞层间,达到原料分解的目的;蒸汽爆破可改变玉米秸秆的纤维结构,降低半纤维素和木质素含量,提高纤维素含量(随着蒸汽爆破的压强和维压时间的增加,半纤维素含量显著降低,而物料含水率的增加会导致纤维素含量升高);蒸汽爆破可提高玉米秸秆体外发酵酶解产糖率,随着蒸汽爆破压强和维压时间的增加,玉米秸秆体外培养酶解还原糖产量增加;蒸汽爆破可使玉米秸秆的体外发酵产气量、产气速率、干物质和酸性洗涤纤维含量显著提高,可提高反刍动物对玉米秸秆的消化利用率,充分利用玉米秸秆的纤维素,提高玉米秸秆的营养价值;蒸汽爆破通过破坏玉米秸秆的表面结构,可促进瘤胃微生物在玉米秸秆上的附着,从而促进玉米秸秆的降解。综上,蒸汽爆破技术处理玉米秸秆可提高其作为饲料的利用率。
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10.
骨骼肌生长发育过程及调控研究现状
付玉, 张博, 凌遥, 张浩
中国畜牧兽医 2021, 48 (
10
): 3565-3574. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.10.007
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骨骼肌是哺乳动物最大的组织,其功能或再生特性的丧失会导致生长发育不良及肌肉骨骼疾病。骨骼肌有600多块单独的肌肉,起支撑和运动的作用。骨骼肌可以被机体自主控制,这也是其不同于平滑肌和心肌的一个特点。农业动物的骨骼肌是肉产品的主要来源,为人类提供优质的动物蛋白和营养物质。影响生长发育的因素众多,肌肉的生长和发育决定着肉的产量和品质,是农业动物生产中极其重要的经济性状。骨骼肌的生长、发育调控涉及众多基因及其相关通路的激活或沉默,是一个极其复杂的多层次调控网络。作者综述了骨骼肌的结构、组成和生长发育过程,介绍了包括生长因子和细胞因子等在内的多种调节因子对肌肉发育的调控作用,并结合现有研究结果预测到未来发展方向将是重要候选基因的体外和体内试验验证,最终转化到实际生产应用中,为骨骼肌生长发育的分子调控机制研究和肌肉遗传疾病的治疗提供理论基础和参考依据。
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11.
新型莫西菌素浇泼剂对羊蜱蝇和消化道线虫驱虫药效评价
李鑫, 陈卓, 钟池, 任强林, 金肖叶, 叶倩文, 夏瑞阳, 李紫仟, 马义诚, 舒展, 郝智慧, 徐玉梅, 姚刚
中国畜牧兽医 2021, 48 (
5
): 1784-1793. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.05.030
摘要
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568
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试验旨在通过新型莫西菌素(moxidectin,MOX)浇泼剂对羊的驱虫试验,评价MOX浇泼剂对羊蜱蝇和消化道线虫的临床药效。将150只阿勒泰羊经产母羊随机分为6组,每组25只,分别为不用药对照组、螨净药浴组、MOX注射组和MOX低(0.05 mL/(kg·BW))、中(0.1 mL/(kg·BW))和高(0.2 mL/(kg·BW))剂量浇泼组,试验期为1周。试验第1天按前述分组中方法和剂量驱虫1次。观察受试动物临床表现,测定给药前1天和给药后第7天体温、脉搏和呼吸(TPR),血液生理、生化和尿常规指标;测定羊蜱蝇减虫率、治愈率。采取粪样测定消化道线虫每克粪中虫卵个数(EPG)减少率及转阴率。结果显示,与不用药对照组相比,给药后第7天各驱虫组TPR、血液生理、生化及尿常规指标均无显著差异(
P
>0.05)。螨净药浴组羊蜱蝇减虫率为43.7%,而MOX注射组及MOX低、中、高剂量浇泼组均为100%。螨净药浴组治愈率为13.0%,而MOX注射组及MOX低、中、高剂量浇泼组均为100%;与不用药对照组相比,螨净药浴组消化道线虫卵减少率为0,而MOX注射组及MOX低、中、高剂量浇泼组分别为91.6%、93.1%、94.9%和97.8%。螨净药浴组虫卵转阴率为0,而MOX注射组及MOX低、中、高剂量浇泼组分别为77.0%、69.2%、69.2%和84.6%。本试验结果表明,新型MOX浇泼剂对体外寄生虫和消化道线虫均有显著疗效,且优于螨净药浴,与MOX注射剂等效。实践应用中最适MOX浇泼剂量推荐为0.05 mL/(kg·BW)(即0.25 mg/(kg·BW))。
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12.
中国与欧盟和美国禽肉、禽蛋中兽药残留限量标准的对比研究
孙星雅, 李强, 王战辉, 余文博, 史为民, 张素霞
中国畜牧兽医 2022, 49 (
6
): 2362-2375. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.06.036
摘要
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555
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【目的】 为推进中国食品安全监控体系建设及完善相关的法规标准提供参考,保障食品安全的同时提升中国禽肉、禽蛋产品在国际市场的竞争力,打破国际技术性贸易壁垒,促进国际禽产品贸易繁荣发展。【方法】 首先对比分析中国新发布的食品安全国家标准GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》及已废除的农业部公告第235号《动物性食品中兽药最高残留限量》中有关禽肉、禽蛋的兽药残留种类和兽药最大残留限量(MRLs)标准;然后对中国新国家标准与欧盟和美国在禽肉、禽蛋的兽药残留种类区别和MRLs标准的严宽程度等几项内容进行了对比分析。【结果】 中国新国家标准对旧标准进行了一定程度上的补充与修改,大部分有关禽肉、禽蛋的MRLs标准与欧盟和美国的标准相同甚至更加严格,这标志着中国兽药残留标准体系进入了新阶段,但部分兽药的MRLs标准仍与欧盟和美国的标准存在一定差异,其中共有包括双氯西林在内的33种兽药的MRLs标准缺失或宽于欧盟和美国。【结论】 未来中国仍需结合禽肉、禽蛋的生产情况、兽药实际使用情况及人民消费升级的需求,进一步完善禽肉、禽蛋产品中兽药残留限量的相关标准,使其向国际标准靠拢,提高中国禽肉、禽蛋产品在国际市场上的竞争力,并对进出口产品中兽药的残留情况进行严格监控,防止其影响消费者的健康安全和禽肉、禽蛋的国际贸易发展。
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13.
牛结节性皮肤病疫苗研究进展
谢士杰, 朱俊达, 王天坤, 胡鑫, 魏雯娟, 吴文学, 彭辰
中国畜牧兽医 2021, 48 (
11
): 4220-4230. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.11.032
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牛结节性皮肤病可对病畜皮肤造成永久性损害,并会导致产奶量下降、生长发育迟缓、公畜不育和孕畜流产等严重后果,对经济生产具有重要影响。目前尚无治疗该病的特效药,使用安全有效的疫苗是防控该病传播的重要手段。牛结节性皮肤病弱毒活疫苗在许多国家已被成功用于该病的防控,除此之外,由于牛结节性皮肤病病毒与山羊痘病毒及绵羊痘病毒在基因组序列上的高度相似性,山羊痘病毒弱毒活疫苗和绵羊痘病毒弱毒活疫苗在许多地区也被用于该病的防控。牛结节性皮肤病病毒编码基因较多,目前尚未发现基因缺失疫苗和亚单位疫苗具有好的保护效果。近年来灭活疫苗在实验室研究中取得了较大进展,但仍需进一步大规模临床试验以证明其有效性。此外,牛结节性皮肤病病毒作为一种痘病毒,已被证明是表达多种病原微生物抗原的有效载体之一。笔者主要总结了当前牛结节性皮肤病疫苗的研究进展,对弱毒疫苗、灭活疫苗、基因缺失疫苗和亚单位疫苗的使用情况、保护效果及研究方向等方面进行了综述,以期为牛结节性皮肤病疫苗的研发和疫病的防控提供新的思路和见解。
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14.
LbCas12a蛋白的原核表达及活性检测
刘茹, 李小龙, 张晓倩, 田小欢, 余梅, 赵书红, 曹建华
中国畜牧兽医 2022, 49 (
5
): 1621-1629. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.05.003
摘要
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【目的】 获得具有体外切割活性的来自毛螺旋菌属(
Lachnospiraceae
) ND2006的LbCas12a蛋白,以期为LbCas12a的应用研究提供重要的生物学工具。【方法】 根据pMBP-LbCas12a质粒(Addgene,113431)的基因序列合成
LbCas12a
基因,并将其与pET-28a(+)线性化载体进行同源重组,构建重组质粒pET28a-LbCas12a,经测序和
Nhe
Ⅰ、
Sal
Ⅰ双酶切鉴定后将阳性重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行IPTG诱导表达。通过12% SDS-PAGE凝胶电泳检测确定IPTG诱导的最佳浓度及温度,鉴定重组蛋白的表达形式,通过Ni-NTA树脂亲和层析的方法进行纯化、超滤法浓缩,BCA法检测蛋白浓度。将浓缩后的LbCas12a与猪细小病毒(PPV)靶标DNA、CRISPR RNA (crRNA)及偶联荧光基团的非特异性单链DNA(ssDNA)探针FQ共孵育,设置1个无LbCas12a蛋白的对照组、4个不同蛋白浓度(125、250、500、1 000 nmol/L)的试验组,检测不同组别ssDNA探针的荧光强度,检测测试位点PPV活性。【结果】 测序和
Nhe
Ⅰ、
Sal
Ⅰ双酶切鉴定结果表明,重组质粒pET28a-LbCas12a构建成功且无移码突变。12% SDS-PAGE凝胶电泳检测结果表明,IPTG诱导表达的最佳浓度为0.5 mmol/L,最佳温度为37 ℃,表达形式主要为可溶性表达。蛋白浓度检测结果表明,浓缩后的蛋白浓度为485 ng/
μ
L,质量为143 ku。活性检测结果表明,125、250、500、1 000 nmol/L LbCas12a蛋白组的荧光强度均极显著高于对照组(
P
<0.01)。【结论】 本研究成功表达出高活性的LbCas12a蛋白,且LbCas12a蛋白具有体外切割ssDNA的反式活性,为后续基于CRISPR-LbCas12a系统的分子检测技术奠定了基础。
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15.
β-葡聚糖的生物学功能及在水产养殖中的应用
侯冬强, 赵红霞, 彭凯, 曹俊明
中国畜牧兽医 2022, 49 (
12
): 4625-4634. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.12.012
摘要
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531
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β-葡聚糖来源广泛,主要存在于植物和微生物细胞壁中,由葡聚糖单体构成,具有多种结构,因其侧链残基种类和数量的不同而具有多种生物学功能,如通过降低炎症相关基因表达及提高免疫因子的表达发挥调节免疫的作用;通过减少脂质的产生和吸收发挥调节脂质代谢的作用;通过提高抗氧化酶、自由基、超氧阴离子的清除活性及激活Nrf2信号通路、上调抗氧化基因的表达来增强机体的抗氧化能力,发挥抗氧化作用;通过增强缺氧耐受性及提高抗氨氮应激能力、能量代谢和抗氧化酶基因的表达等发挥抗应激作用。自抗生素禁用以来,β-葡聚糖在水产动物中的研究和应用逐渐深入,β-葡聚糖在预防水产动物疾病和减少抗生素使用等方面发挥着重要作用。在水产养殖中,β-葡聚糖可通过提高消化酶活性、改善肠道结构、优化肠道菌群及增强非特异性免疫力来提高水产动物生长性能,β-葡聚糖的联合使用比添加单一种类的免疫刺激剂具有更好的免疫效果。作者就β-葡聚糖的结构特征、生物学活性、作用机制及在水产动物中的应用进行了综述,并对β-葡聚糖今后的发展方向进行了展望,为实现水产动物生态健康养殖提供材料。
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16.
新型滴鼻灭活鹦鹉热衣原体疫苗的免疫效力评价
陈思宇, 隋卓君, 王占新, 李强, 陈艺, 王飞, 陈爽, 刘心怡, 严专强, 何诚
中国畜牧兽医 2022, 49 (
5
): 1951-1959. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.05.036
摘要
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521
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【目的】 探究由霍乱弧菌菌影(
Vibrio cholerae
ghosts,VCG)和纳米壳聚糖凝胶(Gel)组合制作的一种新型灭活衣原体疫苗复合佐剂是否可增强鹦鹉热衣原体原体(elementary body,EB)灭活抗原诱导动物机体产生的免疫应答。【方法】 将60只7日龄SPF鸡随机分为4个组,分别为:EB+VCG+Gel组、EB+VCG 组、Gel组和EB组。通过滴鼻途径免疫鸡群,免疫2次,每次间隔14 d,免疫后检测鸡血清中IgG抗体水平、淋巴细胞增殖指数、CD4
+
/CD8
+
T 细胞比例、细胞因子(白介素-4(IL-4)、IL-10、IL-12和干扰素-γ(IFN-γ))含量及攻毒后鸡喉头排菌量和肺脏的病理损伤程度。【结果】 与Gel和EB组相比,EB+VCG+Gel和EB+VCG组IgG 抗体水平、淋巴细胞增殖指数、IFN-γ含量和CD4
+
/CD8
+
T细胞比值显著或极显著升高(
P
<0.05;
P
<0.01)。此外,与Gel和EB组相比,攻毒后第12天,EB+VCG+Gel组喉头排菌量极显著降低(
P
<0.01),攻毒后第7天,肺脏损伤评分极显著降低(
P
<0.01)。【结论】 壳聚糖凝胶、VCG、灭活衣原体 EB 组合构成的新型滴鼻衣原体疫苗经鼻腔接种动物后可刺激动物机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,阻断鹦鹉热衣原体经呼吸道途径传播,防止鹦鹉热衣原体从动物向人群传播。
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17.
Nrf2/Keap1-ARE通路的生物学功能及其信号调控
冯志强, 王腾飞, 赵善江, 郝海生, 杜卫华, 赵学明, 邹惠影, 朱化彬, 庞云渭
中国畜牧兽医 2022, 49 (
1
): 81-90. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.01.009
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氧化应激是机体内一种有害的氧化还原失衡状态,是导致组织损伤和疾病发生的重要因素之一。当前畜牧业生产中出现的畜禽繁殖障碍、抗病力下降、生产性能与畜产品品质降低等都与氧化应激有关。核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2 related factor,Nrf2)/Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)-抗氧化应答元件(antioxidant response element,ARE)信号通路是机体对抗氧化应激的最重要防御机制之一,通过调控下游多个细胞保护基因的转录,维持胞内氧化还原平衡及代谢和蛋白质稳态,发挥抗炎、抗癌和抗衰老等生物学功能。Nrf2是一种对氧化应激高度敏感的转录因子,在正常生理状态下,与其负调控蛋白Keap1结合,通过泛素-蛋白酶体系统被泛素化和降解。氧化应激导致Nrf2与Keap1解离,Nrf2转位到细胞核内,与小Maf(sMaf)蛋白形成异二聚体并识别ARE序列,启动下游目标基因的转录。由于Nrf2处于复杂调控网络的中心,其活性受到多个水平的严格调控,包括转录及转录后调控、蛋白质稳定性调控、亚细胞定位调控和翻译后修饰调控等。作者介绍了Nrf2/Keap1-ARE信号通路的分子结构基础、生物学功能、Nrf2活性调控等的研究进展,以期深入了解该通路的调控机制,为提高畜禽健康和提供疾病治疗策略提供理论依据。
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18.
稳定表达T7 RNA聚合酶BHK-21细胞株的构建
陈宇婧, 张艺艺, 黄正阳, 石建州, 刘阳坤, 邱礽, 姚伦广, 李娜
中国畜牧兽医 2022, 49 (
4
): 1253-1261. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.04.006
摘要
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515
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【目的】 通过建立过表达T7 RNA聚合酶(T7 RNA polymerase,T7 RNAP)的慢病毒系统,构建可稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞株。【方法】 根据GenBank中公布的大肠杆菌BL21(DE3)基因组中T7
RNAP
基因序列(登录号:NZ_CP081489.1)设计引物,并采用PCR扩增T7
RNAP
基因片段,将其克隆至慢病毒载体中,构建pCDH-CMV-T7 RNAP重组质粒。筛选阳性克隆及测序鉴定后,利用脂质体将包含重组质粒pCDH-CMV-T7 RNAP的包装系统和辅助包装质粒共转染至HEK-293T细胞,进行慢病毒的包装及纯化,获得高病毒滴度的重组慢病毒。将收集的病毒液分别以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1、5、10和20感染BHK-21细胞,72 h后观察荧光情况,筛选最佳MOI。将重组慢病毒在最佳MOI条件下感染BHK-21细胞,通过绿色荧光蛋白copGFP的表达观察感染细胞的阳性率。使用4 μg/mL嘌呤霉素作为抗性筛选物进行多轮筛选,最终筛选得到BHK-21-T7 RNAP细胞株。进一步对所筛选的细胞株设计3对检测引物进行RT-PCR检测,并通过检测试验组与空白对照组细胞中海肾荧光素酶(hRluc)报告基因的活性差异来反映T7 RNAP驱动T7启动子下游基因的能力。【结果】 本研究成功扩增了大肠杆菌BL21(DE3)细胞基因组中T7
RNAP
基因,成功构建重组慢病毒载体,并获得了滴度为1.0×10
8
TU/mL的重组慢病毒。成功筛选到BHK-21-T7 RNAP细胞株,此重组细胞株经RT-PCR扩增能够检测到T7 RNAP的特异性DNA序列。将含有T7启动子驱动的hRluc的质粒(pT7-hRluc)转染此细胞株后发现,BHK-21-T7 RNAP细胞株中hRluc的活力与空白对照组BHK-21细胞相比极显著升高(
P
<0.01)。【结论】 本研究获得了稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞株,且所筛选的BHK-21-T7 RNAP细胞株中的T7 RNAP能够驱动pT7启动子下游基因
hRluc
的转录,研究结果为RNA病毒的反向遗传学平台建立奠定了细胞基础。
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19.
HO-1在巨噬细胞中的抗炎和抗氧化作用
付京城, 何俊辉, 仝江, 吴魏, 郭爽, 杨彦宾, 韩莹倩, 王月影, 李和平
中国畜牧兽医 2023, 50 (
2
): 807-816. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.02.038
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【目的】旨在揭示血红素加氧酶1(HO-1)在巨噬细胞中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度脂多糖(LPS,0、3、5、10、15、20、25 μg/mL)、HO-1(0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 μg/mL)及锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZPP;0、5、10、15、20、30 ng/mL)分别处理巨噬细胞(RAW264.7),12 h后通过CCK8法检测RAW264.7细胞活力,计算LPS、HO-1和ZPP处理RAW264.7细胞的最佳浓度。将RAW264.7细胞随机分为对照组(CT)、LPS组(LPS)、LPS+HO-1组(LH)、HO-1组(HO-1)、LPS+HO-1+ZPP组(LHZ),每组3个重复。CT组细胞用含10%胎中血清的DMEM培养基培养;LPS组细胞用LPS处理;LH组细胞用LPS和HO-1共处理;HO-1组细胞用HO-1处理;LHZ组细胞用LPS、HO-1和ZPP共处理,各组细胞的处理时间均为12 h,收集细胞和上清。采用ELISA法检测上清液中白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)含量,实时荧光定量PCR法检测细胞中IL-6、IL-8、TNF-α、核因子E2相关因子2(Nrf2)、HO-1 mRNA表达,Western blotting检测细胞中Nrf2、HO-1蛋白的表达。【结果】与0 μg/mL LPS处理细胞相比,20 和25 μg/mL LPS均能极显著降低 RAW264.7细胞活力(
P
<0.01);与0 μg/mL HO-1处理细胞相比,0.08和0.10 μg/mL HO-1均极显著提高细胞活力(
P
<0.01);与0 ng/mL ZPP处理细胞相比,15、20、30 ng/mL ZPP极显著降低细胞活力(
P
<0.01),后续选用20 μg/mL LPS、0.08 μg/mL HO-1、15 ng/mL ZPP处理RAW264.7细胞。与CT组相比,LPS组细胞中IL-6、IL-8、TNF-α mRNA表达极显著上调(
P
<0.01),IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、ROS含量均极显著升高(
P
<0.01),GPx、SOD含量均极显著降低(
P
<0.01);与LPS组相比,LH组细胞中IL-6、IL-8、TNF-α mRNA表达均极显著下降(
P
<0.01),IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、ROS含量均极显著降低(
P
<0.01),GPx、SOD含量均极显著升高(
P
<0.01);与LH组相比,LHZ组细胞中IL-6、IL-8、TNF-α mRNA表达均极显著上调(
P
<0.01),IL-6、IL-8、TNF-α、MDA、ROS含量均极显著升高(
P
<0.01),GPx、SOD含量均极显著降低(
P
<0.01)。Nrf2/HO-1信号通路分子表达结果表明,与CT组相比,LPS组细胞中Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达极显著上调(
P
<0.01);与LPS组相比,LH组细胞中Nrf2和HO-1 mRNA表达极显著下调(
P
<0.01),Nrf2蛋白表达极显著下降(
P
<0.01),而HO-1蛋白表达极显著上升(
P
<0.01);与LH组相比,LHZ组细胞中Nrf2和HO-1 mRNA表达均极显著上调(
P
<0.01),Nrf2蛋白表达极显著上升(
P
<0.01),HO-1蛋白表达极显著下降(
P
<0.01)。与CT组相比,HO-1组各项指标均差异不显著(
P
>0.05)。【结论】20 μg/mL LPS诱导巨噬细胞产生炎性反应和氧化应激,0.08 μg/mL HO-1具有抗炎和抗氧化作用,HO-1调节Nrf2信号通路发挥抗炎和抗氧化作用。
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动物血液转录组测序的应用研究进展
孙燕勇, 马凤英, 郭丽丽, 刘在霞, 刘斌, 张文广, 刘永斌
中国畜牧兽医 2023, 50 (
2
): 460-468. DOI:
10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.02.004
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近年来,随着转录组测序(RNA-Seq)技术的普及与成本的降低,越来越多地被应用于动物科学研究。一些血液中的基因与疾病紧密相关,参与免疫、应激、代谢与疾病相关的功能,如突触融合蛋白1A(STX1A)基因可能成为预测酮病的分子靶标;血液RNA-Seq可以预测早产、复发性受精失败与流产等早期妊娠诊断相关的血液标记物溶血磷脂酸受体3(LPAR3)基因等;使用血液RNA-Seq鉴定饲料效率的可靠预测因子是减少表型数据收集的一种策略,有助于家畜营养调控基因组学领域的发展;血液中存在家畜生长性状与生产性能的相关标记物,如
CD
48基因是调节肉牛生长的关键基因;血液是免疫系统的重要防线,能够运输各种免疫活性物质与免疫细胞,血液RNA-Seq的分析提供了全身免疫的概览;血液RNA-Seq在生态环境与应激反应等多方面的应用取得进展,白细胞介素1 受体Ⅱ(IL1R2)基因是野生状态下免疫调控的主要基因。多年来哺乳动物尤其是家畜的血液RNA-Seq的相关应用研究表明,血液富含有关健康状况的信息,有望替代病理组织取样来研究不同生理状况的分子特征并预测疾病;不同饲料营养水平的动物血液中基因的表达量不同,有助于家畜营养调控基因组学领域的发展。综上,血液RNA-Seq的微创诊断不仅有助于动物不同生理状态的分子调控机制解答,更有助于未来家畜分子标记辅助管理的应用,具有成为候选的实用生物样本的可能。
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