利用TALENs技术建立基因定点修饰的猪Oct-4-EGFP细胞系

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利用TALENs技术建立基因定点修饰的猪Oct-4-EGFP细胞系

刘畅¹, 冯冲¹, 宋志强^1,2, 李西睿¹, 王宁¹, 储明星¹, 潘登科¹

1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室, 北京 100193;
2. 东北农业大学动物医学学院, 黑龙江哈尔滨 150030

收稿日期:2013-05-07 出版日期:2013-11-20 发布日期:2013-12-19
通讯作者: 潘登科 E-mail:pandengke2002@163.com
作者简介:刘畅(1987-),女,河北人,硕士,研究方向:动物遗传育种与繁殖。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目(30972095);中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2011cj-10-2)。

Estblishment of Porcine Oct-4-EGFP Site-directed Transgene Cell Lines using Engineered TALENs

LIU Chang¹, FENG Chong¹, SONG Zhi-qiang^1,2, LI Xi-rui¹, WANG Ning¹, CHU Ming-xing¹, PAN Deng-ke¹

1. Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;
2. College of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China

Received:2013-05-07 Online:2013-11-20 Published:2013-12-19

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在建立一个用于干细胞示踪的报告体系,将EGFP cDNA及两侧带有LoxP位点的neo抗性基因插入五指山小型猪内源性Oct-4基因的终止密码子处,以Oct-4基因完整的5'调控区启动EGFP的表达,为猪干细胞研究提供有价值的工具。试验定制了针对猪Oct-4终止密码子的TALENs,与打靶载体共转染猪耳成纤维细胞,药物筛选得到抗性克隆点514个,经过PCR鉴定,共获得杂合阳性克隆点36个,打靶效率分别为5.6%和13.0%。本研究成功获得了Oct-4-EGFP转基因细胞系,并证明了TALENs技术可以明显提高同源重组效率。

关键词: Oct-4-EGFP; TALENs; 同源重组; 猪; 干细胞; 多能性

Abstract: This study aims to establish a reporting system for stem cells tracer, EGFP cDNA together with LoxP-flanked PGK-neo cassettes were inseet into the Oct-4 gene of Wuzhishan Miniature pig at the stop codon via TALENs mediated homologous recombination, expression of EGFP gene was under control of Oct-4 5'-regulatory region. TALENs directed against sequences flanking the stop codon of Oct-4 were cotrasfected with targeting vector, 514 drug-resistant cell clones were screened, and 36 correctly targeted clones were confirmed by PCR from them, the targeting efficiency were 5.6% and 13.0%. Oct-4-EGFP transgenic cell line was establinshed in this study, and it was also proved that TALENs could significantly improve the efficiency of homologous recombination.

Key words: Oct-4-EGFP; TALENs; homologous recombination; pig; stem cell; pluripotency

中图分类号:

Q813

刘畅, 冯冲, 宋志强, 李西睿, 王宁, 储明星, 潘登科. 利用TALENs技术建立基因定点修饰的猪Oct-4-EGFP细胞系[J]. , 2013, 40(11): 1-6.

LIU Chang, FENG Chong, SONG Zhi-qiang, LI Xi-rui, WANG Ning, CHU Ming-xing, PAN Deng-ke. Estblishment of Porcine Oct-4-EGFP Site-directed Transgene Cell Lines using Engineered TALENs[J]. , 2013, 40(11): 1-6.

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Estblishment of Porcine Oct-4-EGFP Site-directed Transgene Cell Lines using Engineered TALENs

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