牛肌肉生长抑制素基因打靶载体的构建与鉴定

中国畜牧兽医

牛肌肉生长抑制素基因打靶载体的构建与鉴定

朱和平，吴凯峰，苏小虎，王一超，周欢敏，赵瑞媛，张焱如

（内蒙古农业大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特 010018）

修回日期:2014-02-01 出版日期:2014-06-20 发布日期:2014-07-24
通讯作者: 吴凯峰。E-mail: wukaifeng@126.com
作者简介:朱和平（1989—），女，内蒙古人，硕士生，研究方向：发育生物学。
基金资助:
内蒙古生物高新科技项目（20030301）。

Construction and Identification of Bovine Myostatin Gene Targeting Vector

ZHU He-ping, WU Kai-feng, SU Xiao-hu, WANG Yi-chao, ZHOU Huan-min, ZHAO Rui-yuan, ZHANG Yan-ru

(College of Life Sciences, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China)

Revised:2014-02-01 Online:2014-06-20 Published:2014-07-24

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在构建用于牛肌肉生长抑制素(MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。基于已发布的MSTN基因序列，选取第3外显子约600 bp作为靶位点，在其上、下游设计2条同源臂，分别为4.4和1.4 kb。以pPNTⅢ为骨架载体，在其2个多克隆位点处插入同源臂，构建出置换型打靶载体MSTN-KO-pPNTⅢ。结果显示，经DNA测序及酶切鉴定证实1.4 kb同源短臂和4.4 kb同源长臂均正确插入基础载体中。结果表明，成功构建出牛MSTN-KO-pPNTⅢ打靶载体。

关键词: 牛; 肌肉生长抑制素基因; 同源臂; 基因打靶

Abstract: The objective of this study was to construct a targeting vector for knocking-out bovine myostatin (MSTN) gene. Based on the bovine MSTN gene sequence, we chose third exon about 600 bp as a target site. The homologous arms of bovine MSTN gene were amplified from the genomic DNA, which were about 4.4 and 1.4 kb in length, respectively. The two fragments were cloned into pPNTⅢ vector and located at both sides of the neomycin resistance gene to construct targeting vector MSTN-KO-pPNTⅢ. By sequence analysis and restricted endonucleases digestion, the 1.4 kb short arm and 4.4 kb long arm were detected in the targeting vector. In conclusion, the replacement targeting vector for bovine MSTN gene had been successfully constructed.

Key words:

bovine; myostatin gene; homologous arms; gene targeting

朱和平，吴凯峰，苏小虎，王一超，周欢敏，赵瑞媛，张焱如. 牛肌肉生长抑制素基因打靶载体的构建与鉴定[J]. 中国畜牧兽医.

ZHU He-ping, WU Kai-feng, SU Xiao-hu, WANG Yi-chao, ZHOU Huan-min, ZHAO Rui-yuan, ZHANG Yan-ru. Construction and Identification of Bovine Myostatin Gene Targeting Vector[J]. .

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