牛副结核病PCR检测方法的建立

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (5): 192-195.

牛副结核病PCR检测方法的建立

王素华¹, 王忠才¹, 李孝军², 杜爱芳³

1. 温州出入境检验检疫局, 浙江温州 325027;2. 舟山出入境检验检疫局, 浙江舟山 316000;3. 浙江大学动物预防医学研究所, 浙江杭州 310029

收稿日期:2011-11-14 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-05-20 发布日期:2012-05-20

Establishment of PCR for Detecting Bovine Paratuberculosis

WANG Su-hua¹, WANG Zhong-cai¹, LI Xiao-jun², DU Ai-fang³

1. Wenzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Wenzhou 325027, China;2. Zhoushan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Zhoushan 316000, China;3. Institute of Preventive Veterinary Medicine, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China

Received:2011-11-14 Revised:1900-01-01 Online:2012-05-20 Published:2012-05-20

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank上公布的副结核分枝杆菌C-2染色体的ISMav2基因序列设计特异性引物,对牛副结核分枝杆菌进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为246 bp,与预期扩增序列同源性为99.6%。该PCR检测体系的特异性强,不能在非副结核分枝杆菌 DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为1 pg。该检测体系的成功构建为牛副结核病的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。

关键词: 牛; 副结核分枝杆菌; PCR; 检测方法

Abstract: A pair of primers were designed according to the sequence of specific Mycobacterium paratuberculosis gene of C-2 chromosome(ISMav2), the ISMav2 gene was amplified by PCR and cloned into pMD18-T vector and then the gene sequence was detected.The results showed that the target gene band at a length 246 bp was amplified by PCR,with a homology of 99.6% to the gene sequence reported in GenBank. The experiments had proved that PCR assay possessed a high specificity,DNA bands couldn't be amplified in other bacterial except Mycobacterium paratuberculosis. And the sensitivity test results indicated that PCR assay was more sensitive,which could detect ISMav2 with only 1 pg/mL DNA.The successfully construction of the PCR assay provides strongly technical support for detection,identification and epidemiological investigations of bovine paratuberculosis.

Key words: bovine; brucella; PCR; detection

中图分类号:

S855.1

王素华;王忠才;李孝军;杜爱芳. 牛副结核病PCR检测方法的建立[J]. , 2012, 39(5): 192-195.

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