梅花鹿鹿茸总蛋白提取方法对双向电泳图谱的影响

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (7): 25-28.

梅花鹿鹿茸总蛋白提取方法对双向电泳图谱的影响

赵东^1,2, 邢秀梅², 杨福合²

1. 江苏科技大学生物与化学工程学院,江苏镇江 212018;
2. 中国农业科学院特产研究所, 吉林省特种经济动物分子生物学国家重点实验室,农业部特种经济动物遗传育种与繁殖重点实验室, 吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林 132109

收稿日期:2011-12-19 出版日期:2012-07-20 发布日期:2012-07-16
通讯作者: 邢秀梅(1973-),女,黑龙江人,副研究员,博士,研究方向:特种经济动物种质资源保护与遗传育种。E-mail:xingxiumei2004@126.com E-mail:xingxiumei2004@126.com
作者简介:赵东(1988-),男,江苏人,硕士生,研究方向:动物分子生物学与生物技术。
基金资助:
中国农业科学院院长基金资助(采用蛋白质组学方法鉴别不同发育阶段鹿茸蛋白(201004)。

Methods of Antler Total Protein Extraction on the Effect of Map Quality of Two-dimensional Electrophoresis in Sika Deer

ZHAO Dong^1,2, XING Xiu-mei², YANG Fu-he²

1. School of Biology and Chemical Engineering, Jiangsu University of Science and Technology, Zhenjiang 212018,China;
2. State Key Laboratory of Special Economic Animal Molecular Biology,Key Laboratory of Special Economic Animal Genetic Breeding and Reproduction,Ministry of Agriculture,Jilin Province Key Laboratory of Special Economic Animal Molecular Biology, Institute of Special Economic Animal and Plant Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences,Jilin 132109,China

Received:2011-12-19 Online:2012-07-20 Published:2012-07-16

摘要/Abstract

摘要： 鹿茸是唯一可以重复再生的哺乳动物器官。利用不同的提取方法制备梅花鹿鹿茸总蛋白样品,分别进行双向电泳,从得到的蛋白点的数量和点的圆滑程度、分辨率等确定适合的提取方法。分别用全蛋白提取试剂盒、自制裂解液、丙酮沉淀制备蛋白样品,并对得到的3种2-DE图谱进行比较分析。结果显示,试剂盒提取法和自制裂解液法得到的蛋白点比较多、圆滑,图谱清晰;丙酮沉淀法得到的蛋白点不如前者多,图谱有横竖纹。

关键词: 鹿茸; 蛋白样品; 提取方法; 双向电泳

Abstract: Deer antlers are the only mammalian organs capable of repeated regeneration. To prepare total protein samples of sika deer antler for 2-DE by different extraction methods, and then find a suitable one from the spots number and resolution condition in the map. Total protein extraction kit, manual lysate and acetone precipitation were used and three kinds of 2-DE maps were analyzed. The results showed that spots number and resolution of kit and manual lysate were better than that of acetone precipitation, and stripes in the map of acetone precipitation were visible.

Key words: deer antler; protein sample; extraction methods; two-dimensional electrophoresis

中图分类号:

赵东, 邢秀梅, 杨福合. 梅花鹿鹿茸总蛋白提取方法对双向电泳图谱的影响[J]. , 2012, 39(7): 25-28.

ZHAO Dong, XING Xiu-mei, YANG Fu-he. Methods of Antler Total Protein Extraction on the Effect of Map Quality of Two-dimensional Electrophoresis in Sika Deer[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2012, 39(7): 25-28.

参考文献

1 龙峰. TCA/丙酮沉淀对脑脊液标本中蛋白质双向电泳的影响分析[J].四川医学,2010,31(4):532~533.
2 刘悦萍,杨爱珍,郭蓓,等.适合水稻悬浮培养细胞蛋白质组分析的双向电泳技术[J].生物技术通报,2010,(11):81~86.
3 向明钧,余敏,马明星,等. 4种不同血清样本处理方法对双向电泳效果的影响[J].云南大学学报(自然科学版),2008,30(2):207~210.
4 李芸,杨明冲,刘师莲. 脑脊液双向电泳中去除高丰度蛋白技术的研究[J].山东大学学报(医学版),2010,48(12):113~119.
5 刘荣,髙学军,李庆章,等. 奶牛乳腺上皮细胞核蛋白质组双向电泳方法的建立[J].中国畜牧兽医,2012,39(2):31~34.
6 范云峰,谢虹,梁建生. 双向电泳中4种常用染色方法的灵敏度比较[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版),2008,29(4):80~83.
7 党军强,李学文,刘卫平,等.两种方法提取脑组织总蛋白的色谱串联质谱分析[J].中华神经外科疾病研究杂志,2009,8(5):413~416.
8 赖童飞,董薇,贾银华,等.棉花胚珠蛋白三氯乙酸丙酮法与酚抽提法的比较分析[J].农业生物技术学报,2009,17(2):317~322.
9 蔡来来,李灵顺,邹琦,等.小菜蛾血淋巴蛋白质双向电泳技术体系的建立及优化[J].应用昆虫学报,2011,48(2):332~337.
10 蔡静.蛋白质丙酮沉淀对2-DE图谱的影响[J].第三军医大学学报,2006,28(3):270~271.
11 Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding[J]. Anal Biochem, 1976,72(1~2):248~254.
12 Grg A, Boguth G, Obermaier C, et al. Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis with immobilized pH gradients in the first dimensin (IPG-Dalt): The state of the art and the controversy of vertical versus horizontal systems[J]. Electrophoresis, 1995,16(1):1079~1086.
13 Grg A, Weiss W, Dunn M J. Current two-dimensional electrophoresis technology for proteomics[J]. Proteomics, 2004, 4(12): 3665~3685.
14 Pathak N N, Pattanaik A K, Patra R C, et al. Mineral composition of antlers of three deer species reared in captivity[J]. Small Ruminant Res, 2001, 42(1): 61~65.
15 Patrick H, O’Farrell. High resolution two-dimensional electrophoresis of protein [J].The Journal of Biological Chemistry, 1975,250(10): 4007~4021.
16 Rabilloud T. Two-dimensional gel electrophoresis in proteomics: old, old fashioned, but it still climbs up the mountains[J]. Proteomics,2002,2(1):3~10.
17 Shaw M M, Riederer B M. Sample preparation for two-dimensional gel electrophoresis[J]. Proteomics, 2003,3(8):1408~1417.

[1]	于顺钦, 地力非热·那地尔, 阿地兰·阿不都热依木, 刘诗杰, 麦吾兰·麦麦提, 张欣欣, 库尔班·吐拉克. 人工补光对阿山马鹿茸生长及粪便激素水平的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 70-79.
[2]	周雅, 张禾垟, 刘琳玲, 李浩东, 郑军军, 王桂武. 梅花鹿成纤维细胞因子受体2基因多态性及其与茸重性状的关联分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3006-3014.
[3]	李勋胜, 史婉婉, 邢宝瑞, 周珏, 李春义, 孙红梅. 半乳糖凝集素1的生物学功能及其在鹿茸再生过程中的作用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3746-3755.
[4]	翁秀秀, 刘欣欣, 乐祥鹏, 李万宏, 李发弟. 基于双向电泳技术研究湖羊初乳和常乳乳蛋白质组差异[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(3): 865-872.
[5]	贺维朝, 张会艳, 王浩, 赵青余, 汤超华, 张军民. 卵黄抗体提取方法及其在畜禽细菌性肠道疾病防治中的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(2): 640-649.
[6]	曹英, 库尔班·吐拉克, 杨开伦, 贺贺千, 华兴耀, 李璐, 金大智, 杨玮, 李彦林. 精料中维生素A添加水平对生茸期马鹿日粮营养物质消化、血液生化指标及鹿茸产量的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(8): 2454-2463.
[7]	李可可, 孙旭阳, 陈超, 荆焕松, 许学林, 游思, 赵靖波, 熊家军. 外源褪黑素对鹿茸软骨细胞生长发育的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(7): 1997-2004.
[8]	鞠妍, 刘华淼, 何金明, 王磊, 赵佩, 张然然, 董依萌, 董世武, 唐丽昕, 邢秀梅. 基于高通量测序技术的敖鲁古雅驯鹿鹿茸转录组分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(7): 1981-1989.
[9]	赵佩, 王磊, 王洪亮, 邢秀梅, 胡鹏飞. TMEM219基因可变剪切体相对表达量及其对鹿茸重量的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(7): 2150-2158.
[10]	刘俊峰, 王晓婷, 钟婷, 郭雪峰. 塔里木马鹿鹿茸VEGF基因克隆及其在不同鹿茸组织中的表达研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(5): 1289-1294.
[11]	杨佐青, 陶金忠, 陈信, 马瑞华, 张鑫荣. 一周岁内滩羊皮肤差异表达蛋白研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(4): 986-993.
[12]	张然然, 刘华淼, 邢秀梅, 胡大勇. 鹿茸组织中内参基因的筛选和验证[J]. , 2015, 42(4): 883-889.
[13]	郭宪, 裴杰, 褚敏, 王宏博, 丁学智, 阎萍. 牦牛卵泡液差异蛋白质组双向电泳图谱的构建与质谱分析[J]. , 2015, 42(11): 3037-3043.
[14]	杨洁, 付雪峰, 黄锡霞, 徐新明, 石刚, 詹振宏, 张恩平, 田可川. 细毛羊皮肤组织中毛囊蛋白质2-DE图谱的建立与初步分析[J]. , 2015, 42(1): 124-130.
[15]	陆黎敏, 李庆章, 黄建国, 刘荣, 王佳丽, 金鑫, 高学军. 双向电泳分析蛋氨酸对奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的影响[J]. , 2013, 40(6): 53-57.