家猪Fosmid基因组文库的构建

›› 2007, Vol. 34 ›› Issue (10): 53-55.

家猪Fosmid基因组文库的构建

李冰1，闫守庆1，孙金海1,2

1.吉林大学畜牧兽医学院,长春 130062；2.青岛农业大学动物科技学院，青岛 266109

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-10-20 发布日期:2007-10-20

Construction of Fosmid Library in Domestic Pig

LI Bing1,YAN Shouqing1,SUN Jinhai1,2

1.College of Animal Science and Veterinary Medicine，Jilin University，Changchun 130062，China;2.College of Animal Science and Technology, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-10-20 Published:2007-10-20

摘要/Abstract

摘要： 本研究采用蛋白酶K和苯酚抽提法提取基因组DNA，通过物理方法随机剪切DNA，经T₄DNA聚合酶和T₄多聚核苷酸激酶末端修饰，琼脂糖凝胶电泳回收大小为25~40 kb的片段，与pCC1FOS载体连接，噬菌体包装蛋白体外包装，转染大肠杆菌EPI300，构建了家猪Fosmid基因组文库。文库容量为8.50×10⁹CFU/ml，平均插入片段大小约25 kb，用家猪MC1卫星DNA做探针对文库进行初步筛选，获得含该卫星DNA的阳性克隆，该文库的构建为进一步筛选并研究猪卫星DNA序列奠定了基础。

关键词: 猪; Fosmid文库; 卫星DNA

Abstract: Genomic DNA prepared for library construction was digested by proteina
se K and extracted by phenol. The DNA was randomly sheared and endrepaired by T₄DNA Polymerase and T₄ Polynucleotide Kinase.25~40 kb fragment was recovered by 1% agarose gel electrophoresis and ligated with pCC1FOS Vector. Recombinant molecules were packaged in vitro with the Phage Packaging Extract, then transformedinto E coli EPI300. A fosmid genomic library of domestic pig was successfully constructed with the titer of 8.50×10⁹ CFU/ml in which the insert fragment size was about 25 kb.Positive clones were achieved by in stitu hybridization with MC1satellite DNA as probe.It was indicated that the library was of high quality which can be used to screen new satellite DNA in domestic pig.

Key words: domestic pig; fosmid library; satellite DNA

中图分类号:

Q785

李冰;闫守庆;孙金海;. 家猪Fosmid基因组文库的构建[J]. , 2007, 34(10): 53-55.

LI Bing;YAN Shouqing;SUN Jinhai; . Construction of Fosmid Library in Domestic Pig [J]. , 2007, 34(10): 53-55.

[1]	陈楷文, 赵云娇, 王磊, 张剑搏, 马玉红, 吴国芳. 不同氧浓度下猪睾丸间质细胞转录组分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2185-2195.
[2]	韦明邦, 边巴琼达, 肖青青, 段梦琪, 强巴央宗, 商鹏. 藏猪CDKN1B基因克隆、生物信息学及表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2196-2206.
[3]	张方玮, 张琪, 雷亮亮, 孙武胜, 张迪, 张云鹏, 张净搏, 王修权, 张晶, 张树敏. 松辽黑猪HBEGF基因多态性及其与繁殖性状的关联分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2370-2379.
[4]	孙守湖, 陈志飞, 郭智轩, 俞婷, 王修武, 李松倍, 魏文康, 贺东生. 3种猪冠状病毒N基因密码子偏好性及宿主适应机制研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2403-2413.
[5]	曹琪, 金清, 袁意, 冯逸雪, 孔丹妮, 陈翔鸿, 吴斌, 宋文博, 汤细彪. 规模化猪场常见呼吸道细菌性病原的流行病学调查[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2439-2449.
[6]	史秋颖, 段宝敏, 李颖, 牛登云, 耿晨阳, 周佳伟, 王蕊, 冯敬敬. 2020—2021年中国部分地区猪流行性腹泻病毒S1基因遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2468-2478.
[7]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[8]	潘鹏丞, 雷宗全, 李显, 胡湘云, 秦谦涛, 覃兆鲜, 关志惠, 陈宝剑, 谢炳坤. 陆川猪MYL2基因生物信息学分析、真核表达载体构建及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1796-1806.
[9]	欧阳坤, 魏立民, 孙瑞萍, 解娅立, 齐琪, 李想, 刘圈炜, 晁哲, 张永亮, 陈婷. 姜黄素对海南屯昌猪生长性能、饲料养分表观消化率和血清生化指标的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1867-1875.
[10]	吴静璇, 孙征, 马雪莲, 张丽阳, 廖秀冬, 罗绪刚, 李素芬, 吕林. 中国畜禽饲料资源中镁含量的调查研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1888-1898.
[11]	黎明国, 李清春, 陈鑫, 卢世豪, 何凡, 祁梦凡, 张化鹏, 任玉军, 张庆泽, 符彬彬, 徐梦思, 艾子凯, 闫坤, 冯赟, 华再东, 黄涛, 毕延震. TET去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1907-1917.
[12]	王泽平, 王飞飞, 张芮铭, 付言峰, 赵为民, 戴超辉, 程金花, 廖超, 李辉. 苏紫猪SLA-1基因多态性及其抗病潜能分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1918-1927.
[13]	宋承磊, 张哲, 韦怡林, 杨松柏, 豆雅晴, 李晨雷, 刘蓥珂, 李新建, 杨峰, 李秀领, 王克君, 乔瑞敏, 韩雪蕾. 不同品种、季节和月龄对公猪精液品质的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1938-1946.
[14]	卓娜, 朱忠武, 李静, 胡世享, 王建昌, 林华, 陈朝林, 韩佃刚, 艾军, 陈培富. 猪源戊型肝炎病毒ORF2蛋白生物信息学分析及真核表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1959-1970.
[15]	康溥, 任照文, 蔡汝健, 吕宗吉, 黄育浩, 王晓虎. 广东及周边省份猪繁殖与呼吸综合征病毒2型谱系8毒株变异规律和传播研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2001-2011.