N-羟乙酰神经氨酸IgY抗体的制备及鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.010

›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (3): 629-636.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.010

N-羟乙酰神经氨酸IgY抗体的制备及鉴定

吴宗澄, 高阳, 胡盼, 李岩松, 周玉, 柳增善, 任洪林, 卢士英

吉林大学人兽共患病研究所, 人兽共患病教育部重点实验室, 长春 130062

收稿日期:2015-10-15 出版日期:2016-03-20 发布日期:2016-03-30
通讯作者: 卢士英 E-mail:lushiying1129@163.com
作者简介:吴宗澄(1989-),男,辽宁瓦房店人,硕士,研究方向:动物性食品安全,E-mail:Wuzongchengguanwai@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(31071539)

Preparation and Identification of N-glycolylneuraminic Acid IgY Antibody

WU Zong-cheng, GAO Yang, HU Pan, LI Yan-song, ZHOU Yu, LIU Zeng-shan, REN Hong-lin, LU Shi-ying

Key Laboratory of Zoonosis Research, Ministry of Education, Institute of Zoonosis, Jilin University, Changchun 130062, China

Received:2015-10-15 Online:2016-03-20 Published:2016-03-30

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在建立N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc) IgY抗体的制备及鉴定方法。通过碳二亚胺法将Neu5Gc和载体蛋白进行偶联,制备Neu5Gc人工完全抗原,用制备的完全抗原免疫海兰褐蛋鸡制备Neu5Gc-IgY抗体,经ELISA检测分析鉴定抗体活性。经紫外光谱扫描、琼脂糖凝胶电泳法初步判断Neu5Gc人工完全抗原制备成功,获得的特异性Neu5Gc-IgY抗体经ELISA检测分析,首次免疫后第7天产生抗体,抗体效价呈动态变化,随着免疫次数的增多,血清效价和抗体效价逐步上升,至初次免疫后63 d达到高峰,效价达1:10 000,停止加强免疫后抗体效价可持续一个月左右,1号鸡产生的IgY抗体具有很好的抗原竞争活性,获得竞争回归方程y=30.28x+16.923,线性系数R²=0.9581。以上结果表明,本试验制备的Neu5Gc IgY抗体取得了理想效果,为红肉、牛奶及肿瘤组织中Neu5Gc的检测奠定了基础。

关键词: N-羟乙酰神经氨酸; 人工完全抗原; 蛋鸡; IgY

Abstract: The experiment was carried out to establish a method for preparation and identification of N-glycolylneuramic acid IgY antibody.Neu5Gc was linked to carrier proteins by carbodiimide(EDC)method.After the immunization of immunogen to laying hens,the IgY antibody was gained.Neu5Gc-IgY was analyzed and identified by ELISA.The results of UV and agarose gel electrophoresis showed that the artificial antigens of Neu5Gc were successfully synthesized.The development of the IgY antibody titer was monitored by indirect ELISA.The result showed that the IgY antibody was generated at 7th day after the first immunization.The titer was gradually increased and reached its peak (1:10 000) at 63th day after the first immunization.The high titer of the IgY antibody maintained through the whole observation period.The sensitivity of anti-Neu5AGc IgY antibody was detected by the competitive blocking ELISA.The linearity about the first chicken of the standard curve showed good,the liner regression equation was y=30.28x+16.923,R²=0.9581.The IgY antibody gained in this study laid the foundation for the establishment of indirect ELISA immunoassay method for detecting Neu5Gc in red meat,milk and tumor tissues.

Key words: Neu5Gc; artificial antigen; laying hen; IgY

中图分类号:

S852.4⁺3

吴宗澄, 高阳, 胡盼, 李岩松, 周玉, 柳增善, 任洪林, 卢士英. N-羟乙酰神经氨酸IgY抗体的制备及鉴定[J]. , 2016, 43(3): 629-636.

WU Zong-cheng, GAO Yang, HU Pan, LI Yan-song, ZHOU Yu, LIU Zeng-shan, REN Hong-lin, LU Shi-ying. Preparation and Identification of N-glycolylneuraminic Acid IgY Antibody[J]. , 2016, 43(3): 629-636.

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N-羟乙酰神经氨酸IgY抗体的制备及鉴定

Preparation and Identification of N-glycolylneuraminic Acid IgY Antibody

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