Dot-ELISA检测H9亚型禽流感病毒的研究

›› 2008, Vol. 1 ›› Issue (10): 86-88.

Dot-ELISA检测H9亚型禽流感病毒的研究

焦显芹1，廖仲磊2，陈红英2，3，韩玉林4，王磊5，李新生2，3

1.河南省郑州市现代农业科技服务中心，郑州 450002； 2.河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002； 3.河南省动物性食品安全重点实验室，郑州 450002； 4.河南省焦作市畜牧局, 焦作 454150;  5.河南省荥阳市畜牧局，荥阳 450100

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-10-20 发布日期:2008-10-20

Study on Detection of Avian Influenza Virus H9 Subtype by Dot-ELISA

JIAO Xianqin1， LIAO Zhonglei2， CHEN Hongying2，3，HAN Yulin4, WANG Lei5，LI Xinsheng2,3

1.Zhengzhou Modern Agricultural Technology Service Centre, Zhengzhou 450002, China;  2.The College of animal Husbandry And Veterinary，Henan Agricultural University， Zhengzhou 450002， China； 3.Animal Food Safety Key Laboratory，Henan Province，Zhengzhou 450002， China； 4.Husbandry and Veterinary Burearu of Jiaozuo，Jiaozuo 454150， China; 5.Husbandry and Veterinary Burearu of Xingyang,Xingyang 450100, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-10-20 Published:2008-10-20

摘要/Abstract

摘要： 本研究采用兔抗H9亚型禽流感病毒（AIV）IgG包被于硝酸纤维素膜，酶标羊抗兔IgG作二抗，建立检测H9亚型AIV的Dot-ELISA法。经方阵试验确定兔抗AIV IgG工作浓度为1∶400，酶标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶400。作者建立的Dot-ELISA对AIV的最小检测量为3.35×10-9g。Dot-ELISA与HA和HI、AGP及病毒分离法相比，检测63份临床疑似H9亚型AIV病料，Dot-ELISA检出32份(57.14%)，HA和HI检出15份(23.81%)，AGP检出11份(17.46%)，病毒分离检出38份(60.30%)。用抗H9亚型AIV阳性血清可以阻断Dot-ELISA阳性反应，诊断膜片与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒不出现阳性反应，证明Dot-ELISA特异性好。分别置室温(25 ℃左右)、4 ℃和-20 ℃下保存1个月后，膜片诊断效果不变，对照反应均成立，该方法重复性好（重复符合率为93.9%），操作简便（3 h内可完成），不需要特殊检测仪器，结果客观，肉眼易于判断，是微生物和传染病及寄生虫病诊断标准化的新技术之一。

关键词: Dot-ELISA; 检测; H9亚型; 禽流感病毒

Abstract: A Dot-ELISA method was developed for the detection of avian influenza virus (AIV) H9 subtype. The optimum working concentration of rabbit anti-AIV IgG was determined to be 1∶400,and that of goat anti-rabbit IgG labeled with horseradish peroxidase(HRP)to be 1∶400 too. The assay could detect as low as 3.35×10-9g /disc. Comparison of the Dot-ELISA with HA and HI, AGP, virus isolation were conducted. In the Dot-ELISA, 36 of 63 were positive (57.14%), 38 of 63 in the virus isolation were positive (60.30%). The high specify of the Dot-ELISA was shown by the specific blocking test with AIV positive serum and cross-reaction test with newcastle disease virus, infectious bronchitis virus, infectious bursal disease virus, egg drop syndrome virus. The result of test reproducibility in the Dot-ELISA was very good (93.9%). The procedure took about 3 h, and it was economical, results of reaction could be easily read by eye. This rapid and inexpensive method could be proved to be a new diagnostic technique for early diagnosis of avian influenza.

Key words: Dot-ELISA; detection; H9 subtype; avian influenza virus

中图分类号:

S852.65+9.2

焦显芹;廖仲磊;陈红英;韩玉林;王磊;李新生; . Dot-ELISA检测H9亚型禽流感病毒的研究 [J]. , 2008, 1(10): 86-88.

JIAO Xianqin;LIAO Zhonglei;CHEN Hongying;HAN Yulin;WANG Lei;LI Xinsheng;. Study on Detection of Avian Influenza Virus H9 Subtype by Dot-ELISA [J]. , 2008, 1(10): 86-88.

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