猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (6): 136-141.

猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究

杨素¹, 沙才华¹, 顾海洋², 董尚智³, 廖秀云¹, 徐海聂¹, 薄清如¹, 罗宝正¹, 陈伟生¹

1. 珠海出入境检验检疫局,广东珠海 519015;2. 塔里木大学,新疆阿拉尔 843300;3. 珠海市海洋农渔和水务局,广东珠海 519000

收稿日期:2010-11-03 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-06-20 发布日期:2011-06-20

Development of RT-LAMP for Detecting Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

YANG Su¹, SHA Cai-hua¹, GU Hai-yang², DONG Shang-zhi³, LIAO Xiu-yun¹, XU Hai-nie¹, BO Qing-ru¹, LUO Bao-zheng¹, CHEN Wei-sheng¹

1. Zhuhai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Zhuhai 519015, China;2. Tarim University, Alaer 843300, China;3. Zhuhai Sea Agriculture Fishing Water Utilities Bureau, Zhuhai 519000, China

Received:2010-11-03 Revised:1900-01-01 Online:2011-06-20 Published:2011-06-20

摘要/Abstract

摘要： 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63 ℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒; RT-LAMP; 检测方法; 研究

Abstract: Applying reverse transcription LAMP (RT-LAMP), according to the N protein conserved sequence of PRRSV ORF5 genes from six regions, two sets of primers were designed. By optimizing reaction system and conditions, the RT-LAMP method for detecting PRRSV was developed after sensitivity and specificity tests. The research results indicate that PRRSV nucleic acids amplification can be completed within 1 h in the isothermy condition of 63 ℃ only using a common constant temperature water-bath, test results can be judged with naked eyes after adding nucleic acids dye SYBR GreenⅠ. It provided a kind of cheap, simple, speedy, high sensitivity and specificity PRRSV detecting method for work field and grass-roots units.

Key words: porcine reproductive and respiratory syndrome virus; RT-LAMP; detection method; research

中图分类号:

S852.65
Q78

杨素;沙才华;顾海洋;董尚智;廖秀云;徐海聂;薄清如;罗宝正;陈伟生. 猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究[J]. , 2011, 38(6): 136-141.

YANG Su;SHA Cai-hua;GU Hai-yang;DONG Shang-zhi;LIAO Xiu-yun;XU Hai-nie;BO Qing-ru;LUO Bao-zheng;CHEN Wei-sheng. Development of RT-LAMP for Detecting Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J]. , 2011, 38(6): 136-141.

[1]	刘丁语, 何振文, 刘宝玲, 王刚, 王晓虎, 谭臣, 蔡汝健. 戊型肝炎病毒研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(2): 736-747.
[2]	王慧, 冯保亮, 向光明, 黄雷, 刘志国, 李奎, 牟玉莲. CD163单等位基因表达的iPAMs细胞系的构建及其介导PRRSV感染的特征分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2617-2628.
[3]	康溥, 任照文, 蔡汝健, 吕宗吉, 黄育浩, 王晓虎. 广东及周边省份猪繁殖与呼吸综合征病毒2型谱系8毒株变异规律和传播研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2001-2011.
[4]	陈天宝, 王娅妮, 刘宝玲, 王刚, 王晓虎, 柳旭辉, 蔡汝健, 贺东生. 中药抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用机制研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2114-2129.
[5]	陈吉敏, 李辉煌, 赖连杰, 杨银华, 杨悦, 林瑞意. 鸭坦布苏病毒检测方法及疫苗研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1329-1339.
[6]	李华玮, 郭科威, 王旭英, 张小雨, 路紫微, 李新锋, 马辉, 侯文静. 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7真核表达及亚细胞定位[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1160-1168.
[7]	何振文, 刘丁语, 刘宝玲, 陈天宝, 王刚, 王晓虎, 刘文俊, 蔡汝健. 猪源沙门菌的耐药现状、检测方法与防治技术研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(12): 5123-5135.
[8]	闫普普, 刘欣, 林冰, 刘佳丽, 夏瑾瑾, 黄永熙, 白若男, 刘国平, 杨小林, 郭利伟. 基于生物信息学探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒感染特征及银花甘草汤防治机制[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(10): 4196-4209.
[9]	张振宇, 王勇. 乳与乳制品中黄曲霉毒素检测研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(7): 2820-2830.
[10]	王迁迁, 于永乐, 李月华, 董雅琴, 尼博, 刘拂晓. A型塞尼卡病毒检测方法及疫苗研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2336-2346.
[11]	郭銮英, 李家磊, 金芹芹, 马骏, 刘全. 牛丙型肝炎病毒研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1994-2000.
[12]	刘庆庆, 吴鹏, 李培东, 张江伟, 陈创夫, 肖陈诚. 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的重组腺病毒的构建及其免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1024-1031.
[13]	王兆丽, 杨思宇, 吴艳梅, 宋晓晓, 穆祥, 张涛. 猪繁殖与呼吸综合征病毒-脂多糖刺激对中性粒细胞黏附猪肺微血管内皮细胞的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 471-479.
[14]	孙璐, 张静, 尹苗, 程耀蝶, 代锟, 吴倩, 赵洪, 陈希文. 4种清热解毒复方中草药体外抑菌及抗PRRSV活性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 746-754.
[15]	楚品品, 蒋智勇, 李春玲, 勾红潮, 李艳, 蔡汝健. 纳米银体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4356-4363.