猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (6): 136-141.

猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究

杨素¹, 沙才华¹, 顾海洋², 董尚智³, 廖秀云¹, 徐海聂¹, 薄清如¹, 罗宝正¹, 陈伟生¹

1. 珠海出入境检验检疫局,广东珠海 519015;2. 塔里木大学,新疆阿拉尔 843300;3. 珠海市海洋农渔和水务局,广东珠海 519000

收稿日期:2010-11-03 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-06-20 发布日期:2011-06-20

Development of RT-LAMP for Detecting Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

YANG Su¹, SHA Cai-hua¹, GU Hai-yang², DONG Shang-zhi³, LIAO Xiu-yun¹, XU Hai-nie¹, BO Qing-ru¹, LUO Bao-zheng¹, CHEN Wei-sheng¹

1. Zhuhai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Zhuhai 519015, China;2. Tarim University, Alaer 843300, China;3. Zhuhai Sea Agriculture Fishing Water Utilities Bureau, Zhuhai 519000, China

Received:2010-11-03 Revised:1900-01-01 Online:2011-06-20 Published:2011-06-20

摘要/Abstract

摘要： 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63 ℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒; RT-LAMP; 检测方法; 研究

Abstract: Applying reverse transcription LAMP (RT-LAMP), according to the N protein conserved sequence of PRRSV ORF5 genes from six regions, two sets of primers were designed. By optimizing reaction system and conditions, the RT-LAMP method for detecting PRRSV was developed after sensitivity and specificity tests. The research results indicate that PRRSV nucleic acids amplification can be completed within 1 h in the isothermy condition of 63 ℃ only using a common constant temperature water-bath, test results can be judged with naked eyes after adding nucleic acids dye SYBR GreenⅠ. It provided a kind of cheap, simple, speedy, high sensitivity and specificity PRRSV detecting method for work field and grass-roots units.

Key words: porcine reproductive and respiratory syndrome virus; RT-LAMP; detection method; research

中图分类号:

S852.65
Q78

杨素;沙才华;顾海洋;董尚智;廖秀云;徐海聂;薄清如;罗宝正;陈伟生. 猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究[J]. , 2011, 38(6): 136-141.

YANG Su;SHA Cai-hua;GU Hai-yang;DONG Shang-zhi;LIAO Xiu-yun;XU Hai-nie;BO Qing-ru;LUO Bao-zheng;CHEN Wei-sheng. Development of RT-LAMP for Detecting Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2011, 38(6): 136-141.

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