绵羊羊水干细胞外源基因高效转染及快速筛选方法的建立

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (11): 16-20.

绵羊羊水干细胞外源基因高效转染及快速筛选方法的建立

王凤武^1,2, 郝斐³, 魏著英³, 刘东军³, 荣威恒²

1. 内蒙古农业大学动物科学学院, 内蒙古呼和浩特 010018;
2. 内蒙古农牧业科学院, 内蒙古呼和浩特 010031;
3. 内蒙古大学国家动物转基因技术中心, 内蒙古呼和浩特 010021

收稿日期:2013-04-18 出版日期:2013-11-20 发布日期:2013-12-19
作者简介:王凤武(1973-),男,内蒙古人,博士,研究方向:分子生物学与牛羊育种。
基金资助:
内蒙古自然科学基金(2011MS0410)。

Exogenous Gene Efficient Transfection in vitro and Rapid Screening of Sheep Amniotic Fluid Stem Cells

WANG Feng-wu^1,2, HAO Fei³, WEI Zhu-ying³, LIU Dong-jun³, RONG Wei-heng²

1. College of Animal Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China;
2. Inner Mongolia Academy of Agricultural and Animal Husbandry, Hohhot 010031, China;
3. The National Animal Transgenic Technology Centre, Inner Mongolia University, Hohhot 010021, China

Received:2013-04-18 Online:2013-11-20 Published:2013-12-19

摘要/Abstract

摘要： 试验旨在建立绵羊羊水来源多潜能干细胞(amniotic fluid-derived stem cells,AFSC)外源基因高效转染及快速筛选方法,同时保持其多潜能特性。采用脂质体法,以pCMV-DsRed为报告质粒,转染绵羊AFSC,36 h后,流式细胞仪分析外源基因的瞬时转染效率为69.17%。以浓度为6 mg/mL的G418筛选5 h获得纯化转基因绵羊AFSC单克隆。转基因绵羊AFSC RT-PCR检测表达Oct-4、SSEA-1,体外悬浮培养可形成类胚体。结果表明,转基因标记绵羊AFSC保持了发育全能性的潜能,构建的转基因绵羊AFSC可以示踪性研究其在体内的分化路径和最终宿主。

关键词: 绵羊; 羊水干细胞; 报告质粒; 基因转染; 高效转染; 快速筛选

Abstract: The study was designed to establish a method for the efficient gene transfection in vitro and rapid screening of amniotic fluid-derived stem cells (AFSC), while maintaining their pluripotency. pCMV-DsRed was used as the reporter plasmid to transfect amniotic fluid-derived stem cells by liposome. 36 h later, transient transfection efficiency was 69.17% by flow cytometry. The purified transgenic sheep AFSC monoclones were obtained through the selection of G418 at the concentration of 6 mg/mL after the treatment of 5 h. The transgenic sheep AFSC was positive for Oct-4, SSEA-1 by RT-PCR. AFSC could also formed embryoid bodies by in vitro suspension culture. The results implied a possibility that the transgenic sheep AFSC could be used to track down in vivo differentiation path and the definitive host.

Key words: sheep; amniotic fluid stem cells; reporter plasmid; gene transfection; efficient transfection; rapid screening

中图分类号:

Q813.6

王凤武, 郝斐, 魏著英, 刘东军, 荣威恒. 绵羊羊水干细胞外源基因高效转染及快速筛选方法的建立[J]. , 2013, 40(11): 16-20.

WANG Feng-wu, HAO Fei, WEI Zhu-ying, LIU Dong-jun, RONG Wei-heng. Exogenous Gene Efficient Transfection in vitro and Rapid Screening of Sheep Amniotic Fluid Stem Cells[J]. , 2013, 40(11): 16-20.

[1]	王赛桥, 赵路, 翟振翰, 张丙雷, 贾万航, 王玉琴. 绵羊miR-449a/b前体序列组织表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2175-2184.
[2]	刘锦钰, 张杨, 马旭梅, 周千, 周扬, 张春香, 石磊, 任有蛇. 谷胱甘肽对绵羊精液低温保存效果的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2388-2394.
[3]	崔双, 乌日力嘎, 阿拉达尔, 晓敏, 王剑秋, 弓剑. 放牧条件下补充酵母硒对绵羊胃肠道微生物区系的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 952-965.
[4]	马建青, 杨清芳, 宋占锋, 贾丁丁, 吴东蔚, 莫秀芳, 徐增年, 杨克, 吴占勇, 籍颖, 周荣艳. 绵羊骨代谢相关基因VDR密码子偏好性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 2888-2898.
[5]	张雪萍, 石斌刚, 金夏阳, 王向彦, 兰丽娟, 时钰, 祁有鹏, 赵世杰, 李少斌, 胡江. 藏绵羊KLF7基因表达特征分析及其过表达对前脂肪细胞增殖分化的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 2920-2930.
[6]	李卫东, 蒋玉婷, 段宏伟, 何海军, 杨帅, 丁自强, 吴建新, 张恩秋, 胡俊杰. 褪黑素受体MT1和MT2在绵羊胃中的分布及表达[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3256-3262.
[7]	严啊妮, 沈奔, 王洪荣, 冯春燕, 魏宗友. 过瘤胃葡萄糖和缓释尿素对热应激绵羊生产性能及瘤胃发酵功能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2105-2115.
[8]	张丽萌, 刘爱菊, 李闰婷, 李玉华, 李林, 聂晓宁, 王林青, 陈龙欣. 绵羊CREBRF基因克隆、生物信息学及组织表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1599-1609.
[9]	强浩, 梁鹏, 孟科, 荣轩, 冯登侦. 绵羊IGF1R基因多态性及其与生长性状的关联分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1765-1785.
[10]	苏晓慧, 何海迎, 吐尔逊阿依·牙力坤, 王琼, 马海玉, 刘玲玲, 刘武军. 野生盘羊×巴什拜羊杂交二代尾部脂肪差异表达lncRNA的鉴定与分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1796-1805.
[11]	田广原, 王宇琛, 周雅坪, 郭婷, 赵红梅, 赵逢淼, 孙雅婕, 卞宇晨, 于佳梁, 周雨霞. 绵羊肺炎支原体P60_58aa-928aa蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1960-1969.
[12]	翟哲, 陈思, 吴艳茹, 王雪梅, 李崇瑞, 刘志勇, 陈巧玲, 王凤阳, 杜丽, 李昌, 金宁一. 绵羊CCL19基因启动子活性分析及其转录调控元件筛选[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1213-1222.
[13]	李静云, 王新乐, 张云飞, 白俊艳, 李淦, 雷莹, 董智豪, 陈宇, 樊红灯, 王龙威, 陈梦柯, 王兴科, 司马磊阳, 张世文. 绵羊MyoG基因内含子Ⅱ多态性及其与生长性状的关联分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1364-1373.
[14]	张永浩, 肖逸, 郭丽君, 阿布都热合曼·吐尔逊, 王玉涛. 马可·波罗盘羊和5种家养绵羊MHC-DRB3基因第2外显子遗传多态性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 962-972.
[15]	张配颖, 宋鹏琰, 周营, 陈晓勇, 周荣艳. 基于RNA-Seq数据分析葡萄糖诱导绵羊卵泡颗粒细胞衰老的差异表达基因[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 631-640.