奶牛精子RNA提取

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (3): 80-83.

奶牛精子RNA提取

王惠娥1，2，孙献莹2，高庆华1，2，韩春梅2，沈波2，武延风2

（1．塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔 843300；2．新疆生产建设兵团塔里木大学畜牧科技重点实验室，新疆阿拉尔 843300)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-03-20 发布日期:2011-03-20
通讯作者: 高庆华

Sperm RNA Extraction from Dairy Cattle

WANG Hui-e1，2，SUN Xian-ying2，GAO Qing-hua1，2，HAN Chun-mei2，SHEN Bo2，WU Yan-feng2

1.College of Animal Science and Technology，Tarim University，Alar 843300,China; 2.Key Laboratory of Tarim Animal Husbandry Science and Technology，Xinjiang Production and Construction Groups，Tarim University，Alar 843300,China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-03-20 Published:2011-03-20
Contact: GAO Qing-hua

摘要/Abstract

摘要： 优选3头公牛细管冻精，采用上游法获得纯化精子，以含体细胞污染的精子作对照，应用离心层析柱方法和Trizol一步法相结合提取总RNA，紫外分光光度计检测总RNA的D260/280值和产量，并对总RNA进行RT-PCR和凝胶电泳。结果显示，纯化的牛精子中不含体细胞，奶牛细管精液总RNA在2 h内完成提取，D260/280值为1.80，大于200 bp的总RNA产量为0.92 μg/107个精子，精子总RNA进行RT-PCR，电泳后可得到清晰的SRY、LEP和RPS23基因3条带，不含18S rRNA基因条带。结果表明，离心层析柱法和Trizol一步法相结合可获得高质量的奶牛精子总RNA，且纯度和完整度高，可满足分子生物学研究的要求。

关键词: 奶牛; 精子; 总RNA; RT-PCR

Abstract: Isolation of high-quality RNA is important for the study of sperm gene expression. Frozen straw semen from three bulls were purified by swimming up. The laminar analysis column method and Trizol single-step method were combined for RNA extraction from swimming-up bovine frozen-thaw sperm，and non-swimming up sperm as control. Sperm total RNA was analyzed with UV spectrophotometer，RT-PCR and garose gel electrophoresis. Results showed that the bovine sperm swimming-up from frozen straws were not contaminated by somatic cells，and high-quality total RNA was obtained in about 2 h. The value of D260/280 was 1.8，and the ≥200 bp total RNA extracted from bovine sperm yielded 0.92 μg/107sperm.Following RT-PCR，clear bands of SRY，LEP，and RPS23 of sperm cDNA were shown in a garose gel electrophoresis respectively，not a band of 18S rRNA. The purity and integrality of total RNA isolated from the bovine sperm of frozen straw with the method of combined the laminar analysis column with Trizol single-step were significantly satisfactory for the demands of molecular biological experiments.

Key words: bovine; sperm; total RNA; RT-PCR

中图分类号:

S823.3

王惠娥;;孙献莹;高庆华;;韩春梅;沈波;武延风. 奶牛精子RNA提取[J]. , 2011, 38(3): 80-83.

WANG Hui-e;;SUN Xian-ying;GAO Qing-hua;;HAN Chun-mei;SHEN Bo;WU Yan-feng. Sperm RNA Extraction from Dairy Cattle[J]. , 2011, 38(3): 80-83.

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