山羊痘病毒和羊口疮病毒双重PCR检测方法的建立与初步应用

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (1): 88-91.

山羊痘病毒和羊口疮病毒双重PCR检测方法的建立与初步应用

向智龙1，程振涛1，卓建华3，周碧君2，欧德渊2，鲜思美1，刘芳1，冉光鑫1

（1.贵州大学动物科学学院，贵州贵阳 550025； 2.贵州省动物疫病研究所，贵州贵阳 550025；3.湖北省京山县畜牧兽医局，湖北京山 431800）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-01-01 发布日期:2011-01-01
通讯作者: 欧德渊;鲜思美

Establishment and Rudiment Application of Duplex PCR for Goatpox Virus and Orf Virus

XIANG Zhi-long1，CHENG Zhen-tao1，ZHUO Jian-hua3，ZHOU Bi-jun2，OU De-yuan2，XIAN Si-mei1，LIU Fang1，RAN Guang-xin1

(1.College of Animal Scence,Guizhou University，Guiyang 550025,China；2.Insitute of Animal Disease，Guizhou Province，Guiyang,550025, China；3.The Bureau of Livestock and Veterinary of Jingshan Country，Hubei Province，Hubei 431800,China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-01-01 Published:2011-01-01
Contact: OU De-yuan;XIAN Si-mei

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank发表的山羊痘病毒（goatpox virus，GPV）和羊口疮病毒（orf virus，ORFV）基因序列，分别合成针对GPV ITR和ORFV H2L基因片段的2对引物，以GPV和ORFV的核酸混合物作为模板，经优化反应条件，成功建立了快速鉴别检测GPV、ORFV的双重PCR方法。特异性试验结果显示，该方法对GPV与ORFV核酸的扩增能获得289和507 bp的特异性目的片段，而对FMDV、FPV、BTV、健康山羊皮肤的核酸扩增均为阴性；敏感性试验结果显示，该方法对GPV核酸的最小检出量为4 pg，对ORFV核酸为0.4 pg；对临床采集的12份病料进行双重PCR扩增，GPV检出率为25%（3/12），ORFV的检出率为75%（9/12）。结果表明，建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点，可用于GPV或/和ORFV临床感染病例的联合检测与鉴别诊断。

关键词: 山羊痘病毒; 羊口疮病毒; 双重PCR; 检测

Abstract: Two pairs of primers were designed according to the sequences of ITR gene of Goatpox virus (GPV) and H2L gene orf virus(ORFV) available in GenBank，respectively.Nucleic acids of GPV and ORFV were mixed as template, a duplex PCR assay was developed based on optimization of reaction conditions. Using the duplex PCR assay，the specific fragments 289 bp and 507 bp were amplified respectively from DNA samples of GPV and ORFV，but not amplified from foot-mouth disease virus，fowl pox virus，bluetongue virus and skin from normal healthy goat. The sensitivity of the duplex PCR reached 4 pg for GPV DNA and 0.4 pg for ORFV DNA，respectively. 12 clinical material were amplified by the duplex PCR assay，detection rate of GPV was 25%(3/12)，detection rate of ORFV was 75%(9/12).The results showed that this duplex PCR assay was rapid，sensitive and specific for simultaneous diagnosis or differentiation of GPV and/or from ORFV infections.

Key words: goatpox virus; orf virus; duplex PCR; detection

中图分类号:

S858.26

向智龙;程振涛;卓建华;周碧君;欧德渊;鲜思美;刘芳;冉光鑫. 山羊痘病毒和羊口疮病毒双重PCR检测方法的建立与初步应用[J]. , 2011, 38(1): 88-91.

XIANG Zhi-long;CHENG Zhen-tao;ZHUO Jian-hua;ZHOU Bi-jun;OU De-yuan;XIAN Si-mei;LIU Fang;RAN Guang-xin. Establishment and Rudiment Application of Duplex PCR for Goatpox Virus and Orf Virus[J]. , 2011, 38(1): 88-91.

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