C基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.05.037

›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (5): 1368-1373.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.05.037

C基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定

冉旭华, 张峣, 曹思, 卢元赫, 张玲玲, 刘阳阳, 倪宏波, 朱战波, 闻晓波

黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室, 大庆 163319

收稿日期:2015-07-07 出版日期:2016-05-20 发布日期:2016-05-23
通讯作者: 闻晓波 E-mail:wenxiaobo1977@163.com
作者简介:冉旭华(1978-),女,黑龙江哈尔滨人,博士,副教授,研究方向:分子免疫学,E-mail:ranxuhua@163.com
基金资助:
黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目(YJSCX2015-Y19);黑龙江省大学生创新创业训练计划项目(201510223020);"十二五"农村领域国家科技计划课题(2012BAD12B03-3);黑龙江省农垦总局"十二五"重点科技计划项目(HNK125B-11-08A、HNK125B-11-02)

Isolation and Identification of BPIV3 Genotype C

RAN Xu-hua, ZHANG Yao, CAO Si, LU Yuan-he, ZHANG Ling-ling, LIU Yang-yang, NI Hong-bo, ZHU Zhan-bo, WEN Xiao-bo

Provincial Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China

Received:2015-07-07 Online:2016-05-20 Published:2016-05-23

摘要/Abstract

摘要： 为了对宁夏地区患有呼吸系统疾病的舍饲牛进行病原鉴定,试验主要利用RT-PCR方法对样品进行牛副流感3型病毒(BPIV3)M基因序列扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行亚克隆。通过氨苄青霉素平板筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定并利用分子生物学软件与GenBank上参考序列进行同源性比对。测序结果表明,从样品中分离到了1株BPIV3,并命名为NX49,其M基因全长为1056bp;进化分析表明,NX49隶属于BPIV3C基因型,其M基因与中国山东C型分离株SD0835具有较高同源性,核苷酸同源性为99.4%;理化分析表明,该毒株对温度、酸及有机物均敏感,高温孵育下Mg²⁺对该病毒无保护力;血凝试验表明,NX49对豚鼠红细胞凝集效价仅为1∶4,且仅在4℃孵育时出现凝集反应。本研究成功分离得到一株BPIV3C型毒株,这将有助于中国BPIV3分子进化规律及病毒流行特点的进一步研究。

关键词: 牛副流感3型病毒; C基因型; 分离; 鉴定; 同源性比对

Abstract: To identify the infection agents from Ningxia Hui Autonomous region, where feedlot cattle indicated bovine respiratory disease complex (BRDC), the M gene of the bovine parainfluenza virus type 3 was amplified by RT-PCR.The PCR product was ligated to pMD18-T vector and cloned to E.coli DH5α.The positive clones were sequenced and compared with the reference strains in GenBank by the molecular biology software.Sequence alignment results showed that a BPIV3 strain was isolated from the samples and named NX49, the M gene of NX49 included 1 056 nucleotides.Evolutionary analysis showed that the NX49 belonged to BPIV3 C genotype and shared 99.4% nucleotide identity with that of the SD0835 isolated in Shandong province.The characterization of the NX49 demonstrated that it was sensitive to temperature, acid and organic matter.The presence of Mg²⁺showed no protection against the treatment at high temperature.The HA test suggested that the NX49 enables to agglutinate the guinea pig RBC at 4 ℃ and the titer was 1∶4.The study isolated a BPIV3 genotype C strain successfully, which facilitate the study of molecular evolution and epidemiology of BPIV3 in China.

Key words: BPIV3; genotype C; isolation; identification; homologous comparison

中图分类号:

S852.65

冉旭华, 张峣, 曹思, 卢元赫, 张玲玲, 刘阳阳, 倪宏波, 朱战波, 闻晓波. C基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定[J]. , 2016, 43(5): 1368-1373.

RAN Xu-hua, ZHANG Yao, CAO Si, LU Yuan-he, ZHANG Ling-ling, LIU Yang-yang, NI Hong-bo, ZHU Zhan-bo, WEN Xiao-bo. Isolation and Identification of BPIV3 Genotype C[J]. , 2016, 43(5): 1368-1373.

参考文献

[1] Ellis J A.Bovine parainfluenza-3 virus[J].The Veterinary clinics of North America Food Animal Practice,2010,26(3):575-593.
[2] Neill J D,Ridpath J F,Valayudhan B T.Identification and genome characterization of genotype B and genotype C bovine parainfluenza type 3 viruses isolated in the United States[J].BMC Veterinary Research,2015,11:112.
[3] 刘鹏,侯喜林,周玉龙,等.牛副流感病毒3型的分离鉴定[J].微生物学通报,2009,36(9):1384-1389.
[4] Zhu Y M,Shi H F,Gao Y R,et al.Isolation and genetic characterization of bovine parainfluenza virus type 3 from cattle in China[J].Veterinary Microbiology,2011,149(3-4):446-451.
[5] Wen Y J,Shi X C,Wang F X,et al.Phylogenetic analysis of the bovine parainfluenza virus type 3 from cattle herds revealing the existence of a genotype A strain in China[J].Virus Genes,2012,45(3):542-547.
[6] 王海勇,童钦,王炜,等.我国牛副流感病毒3型血清学调查[J].中国预防兽医学报,2014,36(2):154-156.
[7] 师新川,温永俊,王凤雪,等.牛副流感病毒3型RT-LAMP检测方法的建立及应用[J].中国畜牧兽医,2012,39(7):31-34.
[8] 薛娟,曹思,张峣,等.牛副流感病毒3型N基因的克隆与系统进化分析[J].动物医学进展,2015,36(3):32-34.
[9] Frank G H,Marshall R G.Relationship of serum and nasal secretion-neutralizing antibodies in protection of calves against parainfluenza-3 virus[J].American Journal of Veterinary Research,1971,32(11):1707-1713.
[10] Takimoto T,Portner A.Molecular mechanism of paramyxovirus budding[J].Virus Research,2004,106(2):133-145.
[11] Abinanti F R,Huebner R J.The serological relationships of strains of parainfluenza 3 virus isolated from humans and cattle with respiratory disease[J].Virology,1959,8(3):391-394.
[12] Andrewes C H,Bang F B,Chanock R M,et al.Para-influenza viruses 1,2,and 3:Suggested names for recently described myxoviruses[J].Virology,1959,8(1):129-130.

[1]	刘鹏, 李静静, 乔彦良, 朱连勤, 朱风华. 黄芩多糖的提取及结构表征[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2518-2530.
[2]	卢玉葵, 刘佳琪, 钟嘉诚, 陈济铛, 朱婉君, 张溢珊, 张济培. 鹅源副鸡禽杆菌的分离鉴定及致病性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2562-2572.
[3]	李志杰, 赵莹, 马鑫, 王萌, 余四九, 王立斌, 潘阳阳. 动物卵泡液外泌体分离方法及主要生殖功能研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1480-1488.
[4]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[5]	田常青, 张坤中, 齐玉梅, 史文静, 董志杰, 张浩浩, 何曾文, 芝吉, 赵学慧, 崇倩, 薛慧文, 苟惠天. 1株环境源单增李斯特菌的分离鉴定及生物特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1543-1555.
[6]	曹颖颖, 梁亮, 曾怡蓉, 钟清华, 袁小芳, 唐海波, 冷静. 滇西树鼩源沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1718-1728.
[7]	刘可欣, 王超, 张傲, 刘佳利, 谭斌, 张淑琴. 牛病毒性腹泻病毒LN-1株的分离鉴定及基因组序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1150-1159.
[8]	陈栋, 张言浩, 张阳, 李森, 周祖涛, 李自力. 3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1250-1258.
[9]	王冰艺, 马弘财, 邹明昊, 樊世杰, 元振杰, 拉巴次仁, 董海龙, 曾江勇. 牦牛源链球菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 745-753.
[10]	肖洋洋, 李芮芮, 马忠臣, 唐恬, 王娜, 陈创夫, 郑炜, 王勇, 王鹏雁. 新疆石河子地区牛支原体的分离鉴定及药物敏感性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 754-763.
[11]	钟华晨, 王丽芳, 郭晨阳, 刘嘉琳, 宋洁. 内蒙古地区乳房炎奶样与环境中细菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 817-826.
[12]	孙愉, 张昊, 李畅洋, 陶燕子, 王秋菊. 牛源抗氧化芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 359-367.
[13]	魏津, 王甲, 赵浩然, 刘博, 刘元杰, 姚文生, 刘燕, 马欣. 不同地区鸡毒支原体的分离鉴定及药物敏感性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 368-376.
[14]	杨福梅, 杨林富, 曾成, 杨志, 王康, 段纲, 代飞燕. 1株麂子源麦芽香肉杆菌的分离鉴定及生物学特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 398-407.
[15]	张薇, 武华, 阴雅洁, 李松励, 侯绍华. 新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定及其σC基因序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3520-3529.

C基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定

Isolation and Identification of BPIV3 Genotype C

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