本研究旨在对广灵驴腺苷琥珀酸裂解酶（adenylosuccinatelyase，ADSL）基因进行克隆及生物信息学分析，并检测其在不同组织中的表达情况，为探究ADSL基因在广灵驴肌苷酸合成及风味形成中的作用机制提供理论参考。根据GenBank中公布的马（登录号：XM_001917207.5）、牛（登录号：NM_001102377.2）、猪（登录号：GU249574.1）等物种的ADSL基因mRNA序列，通过Primer Premier 3.0在线工具设计同源引物，RT-PCR法扩增并克隆ADSL基因序列，对编码序列进行结构与功能分析，最后用实时荧光定量PCR检测ADSL基因在广灵驴心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌组织中的表达水平。结果显示，广灵驴ADSL基因CDS长1 473 bp，编码490个氨基酸，提交至NCBI，登录号：MW037837，其核苷酸序列与马、牛、双峰驼、猪、绵羊、人、小鼠的相似性分别为99.5%、90.8%、92.3%、90.4%、90.7%、90.5%和86.0%。进化树分析结果表明，广灵驴与马的种属关系最近，与小鼠的亲缘关系最远。ADSL蛋白分子质量为55.44 ku，等电点为6.52，平均疏水指数为-0.243，是一种不稳定的酸性亲水蛋白。ADSL蛋白有41个磷酸化修饰位点，6个糖基化修饰位点，没有信号肽和跨膜结构，有1个卷曲螺旋。ADSL蛋白主要定位在细胞质，α-螺旋（68.98%）是主要的二级结构。ADSL基因在广灵驴6个组织中都有表达，其中肺脏中的表达量最高，显著高于其他组织（P<0.05），其次是心脏和肝脏，脾脏、肾脏和背最长肌中的表达量最低。本研究结果为今后探究ADSL基因在广灵驴肌苷酸合成及风味形成的分子机制奠定基础。

研究旨在克隆和分析延边牛过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因，并探讨其在延边牛不同组织中的表达规律。参考GenBank数据库中牛PPARγ的序列（登录号：NM_181024.2）设计引物，以18月龄延边牛为试验对象，利用RT-PCR克隆得到延边牛PPARγ基因，利用NCBI中的BLAST程序与其他物种进行相似性分析并构建系统进化树；用生物信息学软件分析其核苷酸序列及其编码蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜结构域、亚细胞定位、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构、三级结构等；用实时荧光定量PCR检测延边牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、皮下脂肪、肌肉8个组织中PPARγ基因的相对表达水平。结果显示，延边牛PPARγ基因CDS区序列为1 620 bp，相似性比对和系统进化树结果显示，与黄牛的亲缘关系最近，相似性为99.9%，与鸡的亲缘关系最远，相似性为82.1%；该基因编码505个氨基酸，无信号肽和跨膜结构域，为亲水性蛋白，主要分布在细胞核和细胞质中；延边牛PPARγ蛋白二级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲，存在53个潜在的磷酸化位点，24个O-糖基化位点；实时荧光定量PCR结果显示，延边牛PPARγ基因在脾脏、皮下脂肪、肝脏中表达量显著高于心脏（P<0.05），肺脏、肾脏、肌肉和小肠中表达量显著低于心脏（P<0.05）。以上试验结果可为进一步研究PPARγ基因的功能提供借鉴。

研究旨在对驴α1酸性糖蛋白（alpha-1-acid glycoprotein，α1-AGP）进行生物信息学预测和分析，并建立一种高效提纯驴α1-AGP的方法。通过生物信息学在线软件分析驴α1-AGP的基本理化性质，并对其二、三级结构进行预测分析；用阳离子层析-凝胶过滤层析联用的方法对其进行纯化，经SDS-PAGE后用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time offlight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）进行鉴定。结果显示，驴α1-AGP由201个氨基酸组成，理论等电点（pI）为4.99，有5个潜在N-糖基化位点，亲水性总平均值（GRAVY）为-0.386；二级结构中α-螺旋和β-折叠有序出现，占比88.56%；利用GMQE值和QMEAN的z值验证三级结构预测所得模型在合理范围之内。阳离子交换层析-凝胶过滤层析纯化后得到50 mL蛋白液，SDS-PAGE后得到清晰蛋白条带，经MALDI-TOF-MS鉴定后于NCBI数据库检索，驴α1-AGP得分最高且远高于其他蛋白，证明驴α1-AGP为纯化后蛋白液中主要组分。本研究提出一种新的纯化鉴定驴α1-AGP方法，具有纯化率高、操作简便、所需样品少等优点，为驴α1-AGP的后续生物学研究和应用奠定了理论基础。

试验旨在挖掘高肌内脂肪（IMF）含量和低IMF含量鸡胸肌中差异表达的microRNA（miRNA）（DEM），以期从miRNA角度探究鸡IMF沉积的分子调控机制。以120只沐川乌骨黑鸡为研究对象，采用高通量测序分别完成3个IMF含量极高（H组）和极低（L组）鸡胸肌组织的miRNA测序，测序结果经生物信息学分析，鉴定H和L组中差异表达的miRNAs，随机选择6个miRNAs进行实时荧光定量PCR验证。IMF含量测定结果表明，每只鸡平均100 g胸肌中IMF含量为4.08 g，H和L组IMF含量存在极显著差异（P<0.01）；6个测序文库结果表明，每个测序文库获得Clean reads均超过10 000 000条，Clean reads占Raw reads的百分比>93%，21~23 nt的small RNA（sRNA）数量占总sRNA的百分比>50%，其中22 nt长度的sRNA所占比例最高，平均GC碱基含量为48.95%，获得的测序数据可靠；6个测序文库中sRNA注释为rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA以及重复序列的比例较低，分别为2.74%、1.85%、6.21%、1.58%、2.82%和2.81%；6个测序文库共鉴定已知miRNAs成熟体578个，miRNAs前体500个，鉴定差异表达的miRNAs 23个，其中H组中上调表达的miRNAs有16个，下调表达的miRNAs有7个；miRNA靶基因预测分析结果表明，23个差异表达miRNAs共预测靶基因628个；GO分析结果表明，共鉴定了30个显著富集GO条目，包括6个细胞成分、13个生物学过程和11个分子功能；KEGG富集分析表明，差异表达miRNA的靶基因显著富集于胰岛素信号通路、半乳糖代谢、脂肪细胞因子信号通路、鞘糖脂生物合成、糖酵解及淀粉和蔗糖代谢；实时荧光定量PCR结果表明，gga-miR-124a-3p、gga-let-7a-5p在H组中表达量极显著或显著高于L组（P<0.01；P<0.05）；gga-miR-19a-3p在H组中表达量极显著低于L组（P<0.01），gga-miR-6553-3p和gga-miR-128-3p在H组中的表达量显著低于L组（P<0.05），其表达趋势与测序结果一致。以上结果表明，差异表达的miRNA gga-miR-124a-3p、gga-let-7a-5p、gga-miR-6553-3p、gga-miR-128-3p和gga-miR-19a-3p参与脂肪生成，是鸡IMF含量调控重要的候选miRNAs，为阐释miRNA调控鸡IMF沉积分子机制提供理论基础。

试验旨在获得秦川牛肉用新品系（以下简称"秦川肉牛"）具有高干扰效率的脂肪细胞分化相关蛋白2（PLIN2）基因干扰siRNA及高过表达效率的基因超表达载体，为后续研究PLIN2基因在秦川肉牛脂肪细胞分化过程中的功能提供试验依据。通过采用siRNA介导的靶基因沉默技术合成靶向牛PLIN2 mRNA序列的si-PLIN2及构建真核pcDNA3.1（+）-PLIN2过表达载体，利用FuGENE6低毒性转染试剂配制转染复合物，转染秦川肉牛脂肪细胞并进行诱导分化。采用实时荧光定量PCR检测技术检测各试验组与对照组中PLIN2基因的相对表达量，并计算目的基因干扰及过表达效率；采用Western blotting方法检测蛋白水平的表达情况；采用BODIPY脂滴染色的方法观察表型。结果表明，转染秦川肉牛前体脂肪细胞后干扰组3对si-PLIN2（si-PLIN2_01、si-PLIN2_02和si-PLIN2_03）与对照组（si-PLIN2-NC）相比，PLIN2基因表达量下降（P<0.01），干扰效率分别为71%、54%和50%；蛋白水平检测发现，si-PLIN2_01、si-PLIN2_03组蛋白水平表达与对照组（si-PLIN2-NC）相比出现下降趋势；脂滴染色后发现，干扰组与对照组相比，脂滴数目明显减少。过表达组pcDNA3.1（+）-PLIN2与对照组相比，PLIN2基因表达量显著上调，达35倍，脂滴数目明显增多。综上所述，siRNA介导的PLIN2基因沉默或pcDNA3.1（+）介导的体外表达载体均可以成功实现对PLIN2基因在秦川肉牛脂肪细胞分化过程中的干扰或超表达，并影响脂肪细胞分化过程中脂滴的形成数量。本研究为进一步探究PLIN2在秦川肉牛脂肪细胞分化过程中的功能奠定基础。

为探究湖南省怀化地区白纹伊蚊的基因变异、遗传多样性及其遗传进化关系，本试验以收集于怀化地区的30只白纹伊蚊为研究对象，利用PCR技术扩增其核糖体18S rRNA及细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ（cox1）基因序列，并对其基因变异、遗传多样性及遗传进化关系进行分析。结果显示，所获全部样品的18S rRNA和cox1基因序列长度均为489和1 004 bp；基于18S rRNA基因序列，怀化地区白纹伊蚊的种内差异为0~2.9%，种间差异为28.74%~61.46%；基于cox1基因序列，怀化地区白纹伊蚊的种内差异为0~0.2%，种间差异为6.08%~12.65%。基于18S rRNA、cox1基因序列所构建的进化树发现，来自于怀化市的白纹伊蚊全部位于同一分支上。结果表明，怀化地区白纹伊蚊之间存在一定程度的基因变异和遗传多样性，但它们之间的亲缘关系较近，且其18S rRNA、cox1基因序列的种内差异小、种间差异大，可作为白纹伊蚊鉴定的理想遗传标记。

试验旨在对布鲁氏菌S19毒力因子A（BvfA）基因进行克隆及原核表达，并对其编码的BvfA蛋白结构进行生物信息学分析。登录GenBank下载布鲁氏菌S19的1号染色体（登录号：CP030751.1），根据文献报道的布鲁氏菌S19 BvfA基因的位置和BvfA蛋白的分子质量，在NCBI的ORF Finder中预测编码BvfA蛋白的开放阅读框（ORF），根据ORF预测的BvfA基因设计扩增BvfA基因的引物，克隆该序列并连接到表达载体pET-32a（+）上，构建重组质粒pET-32a（+）-BvfA，并诱导其在大肠杆菌BL21（Ril）感受态细胞中表达，表达产物经SDS-PAGE和Western blotting验证，并用生物信息学方法对BvfA蛋白结构进行在线预测。结果显示，BvfA基因ORF全长为336 bp，表达纯化得到分子质量为11 ku的分泌型BvfA蛋白；生物信息学分析显示，BvfA蛋白属于不稳定的亲水性蛋白，无跨膜结构，第1-28位氨基酸处存在信号肽区域，BvfA蛋白55.6%定位于细胞外，有12个可能的磷酸化位点，无O-糖基化位点，BvfA蛋白二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成。以上结果可为后续研究BvfA蛋白在布鲁氏菌中的致病机制及寻找布鲁氏菌病新的治疗靶点提供一定的参考。

试验旨在克隆副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，Hps）sapA基因，并对其进行生物信息学分析，以期为sapA基因缺失疫苗的开发与应用提供理论依据。以71株临床菌株为研究对象，经PCR扩增鉴定其中的阳性菌株；将扩增得到的sapA基因片段与pGEM-T载体连接，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，经PCR和双酶切鉴定为阳性克隆后进行测序；用生物信息学软件进行核苷酸与氨基酸序列比对、系统进化树分析、蛋白二级和三级结构预测、疏水性预测、柔性区域位预测、B细胞抗原表位预测和Jameson-Wolf抗原指数预测。试验结果显示，在71株临床菌株中，有29株成功扩增出sapA基因，29株Hps的sapA基因核苷酸序列与已公布的SH0165菌株相似性为96.5%~98.8%，除H88菌株外，氨基酸序列与SH0165菌株相似性为98.9%~100%。sapA蛋白二级结构主要有α-螺旋、β-转角和无规则卷曲，有13个亲水区、38个柔性区和23个B细胞潜在抗原表位。以上结果表明，Hps的sapA基因是一个保守基因，各菌株间核苷酸序列、氨基酸序列都有很高的相似性，sapA蛋白具有较强的抗原性。

为比较2、35日龄滩羊皮肤毛囊的发育特点与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）的分布特征，探究出生后滩羊被毛生长发育的变化特点，试验应用常规HE染色及改良Masson胶原纤维染色、Gomori银氨法染色、磷钨酸染色等特殊染色观察2与35日龄滩羊皮肤组织结构特点；应用免疫组织化学法结合免疫荧光染色法观察VEGF及VEGFR2在2与35日龄滩羊皮肤组织中的分布定位，并用IPP图像分析软件进行定量分析。结果显示：与2日龄滩羊皮肤组织比较，35日龄滩羊表皮与真皮间界限更加清晰，毛囊结构发育完整；毛囊密度显著降低（P<0.05）；胶原纤维与弹性纤维含量增加，形成网格状分布。免疫组化及免疫荧光结果显示，VEGF及VEGFR2在滩羊皮肤表皮及毛囊外根鞘、皮脂腺上均有表达。统计表明，VEGF及VEGFR2在2日龄滩羊皮肤组织中的表达量均显著高于35日龄（P<0.05）。综合上述结果，滩羊毛囊发育过程中，胶原纤维和弹性纤维增加明显；VEGF与VEGFR2通路在毛囊角质形成中起直接调节作用。

研究旨在检测信号转导与转录激活因子3（STAT3）的表达规律，克隆STAT3基因，构建真核表达载体，并探索STAT3基因对广西黄牛肌肉干细胞（MuSCs）分化的调控作用。采集6、12、18月龄广西黄牛肌肉组织以及生长期（GM）和分化期（DM）肌肉干细胞，分别提取RNA并反转录为cDNA，通过实时荧光定量PCR检测STAT3基因和成肌相关基因的表达规律；克隆黄牛STAT3基因完整编码区序列，构建过表达载体pCD-STAT3并检测其对黄牛肌肉干细胞分化的影响。实时荧光定量PCR结果表明，STAT3基因在6、12、18月龄黄牛肌肉组织中均有表达，且在18月龄中表达量最高，12月龄中表达量最低；STAT3和成肌调节因子6（MYF6）基因在分化期肌肉干细胞中表达量均极显著高于生长期（P<0.01）。广西黄牛STAT3基因编码区全长2 313 bp，与空载体pCDNA3.1相连成功构建过表达载体pCD-STAT3，将pCD-STAT3转入体外培养广西黄牛肌肉干细胞，肌肉干细胞中STAT3基因及成肌决定蛋白（MyoD1）、骨骼肌肌球蛋白重链（MyHC）基因表达量极显著升高（P<0.01），肌细胞生成素（MyoG）基因表达量显著升高（P<0.05），且肌管数量、大小均显著高于pCDNA3.1组（P<0.05）。本研究检测了转录因子STAT3在广西黄牛背最长肌中的表达规律；且过表达STAT3基因显著促进了广西黄牛肌肉干细胞的成肌分化，为深入研究STAT3基因在肌肉生长发育中的作用及其分子调控机制奠定基础。

乳脂肪是高质量的天然脂肪，其可为人类提供营养和能量，在各种膳食脂肪和油类中，是最容易被消化吸收的。乳脂肪是在乳腺中由从头合成或外源摄取的脂肪酸与甘油酯化形成的一种脂类物质，其含量的高低关系着牛奶品质的优劣和乳制品的加工特性。在奶牛的泌乳周期中，乳腺泌乳功能受多种因素影响，其中内分泌腺分泌的多种激素对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）乳脂的合成具有积极的调控作用。综上所述，作者介绍了氢化可的松、催乳素、胰岛素和生长激素4种泌乳相关激素对BMECs乳脂肪合成的调控机理，即从乳脂合成适宜的激素添加量、激素对乳脂球形态的影响方面初步阐释其调控作用，并从乳脂合成的关键酶及转录因子、激素对乳脂合成相关基因表达量方面深入阐释其作用机理，旨在为研究泌乳相关激素对奶牛乳腺内乳脂肪合成的调控机理提供参考。

本研究旨在探究3种不同添加剂对91~115日龄清远麻鸡生长性能、抗氧化能力、肌肉品质、肌肉感官评定及风味物质含量的影响。试验采用单因素随机分组设计，选用1 200只91日龄清远麻鸡母鸡分为4个组，每组10个重复，每个重复30只鸡，饲养周期25 d。对照组饲喂基础饲粮（CON），3个处理组分别在基础饲粮中添加纳米铜复配预混剂（NC）、灵芝孢子粉复配预混剂（GLS）和大豆异黄酮预混剂（SI）。试验结束后，采集试验鸡血浆、空肠黏膜及胸肌样品，测定血液与空肠的抗氧化能力、胸肌肉质性状及风味物质含量。结果显示，与对照组相比，①3种添加剂对91~115日龄清远麻鸡的生长性能及胴体性状均无显著影响（P>0.05）；②3种添加剂组试验鸡胸肌亮度（L^*）值显著降低（P<0.05）、pH显著提高（P<0.05），GLS组胸肌滴水损失显著降低（P<0.05）；③使用蒸的方式烹饪时，SI组肌肉的色泽与外形评分显著提高（P<0.05），GLS组肌肉在蒸和煮的烹饪方式下多汁度均显著提高（P<0.05）；④NC与SI组试验鸡肌肉中肌苷酸与谷氨酸含量显著提高（P<0.05），SI组肌内脂肪含量也显著提高（P<0.05）；⑤NC组试验鸡血浆谷胱甘肽过氧化氢酶（GSH-Px）活性及SI组试验鸡空肠GSH-Px活性均显著提高（P<0.05），GLS组试验鸡空肠丙二醛（MDA）含量显著降低（P<0.05）。综上，在本试验条件下，3种添加剂对91~115日龄清远麻鸡生长性能与胴体品质没有显著影响，但可提高肉鸡抗氧化能力，改善其肉品质，提高肌肉感官特性，其中NC与SI可增加肉中风味物质含量，效果更优。

试验旨在研究舍饲（concentrate feeding，CF）、放牧（pasture feeding，PF）对滩羊股二头肌肉品质、肌纤维特性、宰后成熟过程中超微结构及蛋白降解变化的影响。选取体重接近的4~5月龄滩羊公羔28只，随机分为2组，每组14个重复，每个重复1只羊，分别以舍饲、放牧方式饲养，试验期60 d。试验结束后采集股二头肌作为试验样品，并对其肉质性状、肌纤维特性及宰后成熟过程中超微结构与蛋白降解各项指标进行测定分析。结果显示，放牧组羊肉剪切力、硬度和内聚性均显著高于舍饲组（P<0.05），弹性则显著低于舍饲组（P<0.05）；放牧组羊肉肌纤维密度和Ⅱ型肌纤维的数量比例均显著低于舍饲组（P<0.05），Ⅰ型肌纤维的直径、横截面积和数量比例均显著高于舍饲组（P<0.05）。在宰后成熟过程中，舍饲组羊肉肌浆蛋白溶解度显著高于放牧组（P<0.05）；两组肌原纤维蛋白溶解度在宰后24 h至最低后逐渐回升，但各时间点差异均不显著（P>0.05）；肌原纤维小片化指数显著上升后趋于平稳，舍饲组增加率（50.97%）高于放牧组（41.94%）；超微结构显示，宰后肌肉肌原纤维结构松弛、裂解，Z线发生降解，肌原纤维小片化出现，舍饲组肌原纤维结构破坏程度比放牧组更严重。舍饲组肌浆蛋白变性程度小，宰后降解速率较慢，而肌原纤维蛋白降解较明显，降解产生的小分子蛋白量高于放牧组。综上所述，饲养方式改变了滩羊股二头肌纤维特性，并对宰后成熟过程中肌肉超微结构及蛋白降解产生影响，舍饲饲养使得股二头肌纤维密度增加，肌纤维直径与横截面积减小，并降低了肌肉剪切力；此外，由于Ⅱ型肌纤维比例的增加，舍饲饲养提高了肌肉宰后肌原纤维小片化指数增长率、肌浆蛋白溶解度和蛋白降解速率，使宰后成熟过程加快，改善了股二头肌肉嫩度。

试验旨在研究不同氮源饲粮基础上添加低水平缩合单宁（CT）对延边黄牛瘤胃发酵参数及降解率的影响，以期筛选出缩合单宁的最佳添加比例及利用率更高的氮源，为缩合单宁作为反当动物功能性添加剂提供科学依据。试验选用4头延边黄牛（体重452.3 kg±27.1 kg）提供瘤胃液，以不含缩合单宁的6种饲料为氮源（大豆粕、棉籽粕、菜籽粕、紫花苜蓿、红三叶及山野豌豆），在每种氮源饲料中分别添加不同水平（0（对照组）、0.1%、0.5%、0.9%）缩合单宁，共24组，每组3个重复。采用体外培养法测定不同组合饲粮延边黄牛瘤胃体外发酵pH、氨态氮（NH₃-N）、挥发性脂肪酸（VFA）、产气量以及干物质有效降解率、粗蛋白质有效降解率、中性洗涤纤维有效降解率。结果表明，各试验组的pH、NH₃-N与VFA均在正常范围内变化并且可以满足瘤胃微生物的正常代谢，牧草类0.5%缩合单宁添加组（以下简称0.5%组）与饼粕类0.9%组以上各指标相对较好，且与各自对照组相比，产气量较低；大豆粕0.9%组、菜籽粕0.5%组以及红三叶0.1%组干物质有效降解率均较各自对照组略低（P>0.05）。棉籽粕0.5%组粗蛋白质有效降解率较对照组降低（P<0.05），3种牧草类0.9%组粗蛋白质有效降解率均低于对照组（P>0.05）。除红三叶0.1%组外，其余5种氮源缩合单宁添加组的中性洗涤纤维有效降解率均显著低于各自对照组（P<0.05）。综合考虑，饼粕类0.9%组、牧草类0.5%组更有利于优化瘤胃发酵环境，可降低瘤胃粗蛋白质降解率，能有效保护过瘤胃蛋白，其中山野豌豆、棉籽粕效果更优。

随着人们生活质量的提高，餐饮行业发展迅速，产生大量餐厨废弃物（food waste，FW），严重影响粮食安全并对环境造成污染。目前，FW的资源化利用受到广泛关注，饲料化技术可实现资源价值再生，符合环境可持续性发展的要求，具有经济可行性。FW营养丰富，含有：14.93%~94.20%干物质（DM）、13.53%~42.90%粗蛋白质（CP）、3.89%~31.57%粗脂肪（EE）、0.24%~16.50%灰分（Ash）、2.07%~30.70%粗纤维（CF）、6.72%~38.90%中性洗涤纤维（NDF）、5.29%~25.20%酸性洗涤纤维（ADF）。FW安全性包括物理安全性、生物安全性及化学安全性。FW物理安全性在收集和预处理过程中可以得到保证。FW生物安全性问题主要集中在未经处理的FW容易滋生细菌，如沙门氏菌、大肠杆菌，以及未煮熟的FW饲喂动物可引起口蹄疫、猪瘟及传染性海绵状脑病等疾病的发生。FW化学安全性主要是要求其毒素、农药、重金属等含量要符合卫生标准，同时要注意其中抗营养因子、亚硝酸盐、洗涤剂等的影响。总体上，FW营养价值较高，能在一定程度上满足动物生长的需求，但其生物安全性问题限制了其饲料化应用与发展。

试验旨在分离纯化多黏类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）BLCC1-0402代谢产物中的抗菌肽，为抗菌肽制备及其制品检测提供参考。采用离心、不同分子质量卷式膜超滤浓缩、Superdex peptide 10/300GL凝胶过滤层析对多黏类芽孢杆菌发酵上清液进行逐级分离纯化，对不同时段的收集液做抑菌试验，以大肠杆菌O78标准菌株为指示菌，采用打孔法进行抑菌活性检测，比较评价分步层析效果，以Tricine-SDS-PAGE进行分子质量检测。结果显示，通过5和3 ku卷式膜超滤获得的3~5 ku组分蛋白质样品抗菌活性较强；对于3~5 ku组分经凝胶过滤层析分离纯化，纯化后的抗菌肽A3抑菌活性最强，经Tricine-SDS-PAGE小分子多肽电泳检测，已达到电泳纯，分子质量为4 ku；抑菌活性检测结果显示，该抗菌肽A3对大肠杆菌O78标准菌株具有较强的抑菌作用。同时，抗菌肽A3表现出较好的耐热性，90~100 ℃处理15 min，抑菌活性可保持在96%左右；具有较好的酸碱稳定性，在pH 2.0~9.0下，抑菌活性保持在90%以上；经胃蛋白酶作用后抗菌肽A3抑菌活性降低20%，胰蛋白酶作用后抗菌肽A3抑菌活性降低18%，蛋白酶K对抗菌肽A3的抑菌活性几乎无影响。本研究结果表明，分离得到的抗菌肽A3是一种对大肠杆菌O78具有抑菌活性的新型抗菌肽，具有一定的开发潜力，可为下一步抗菌肽的结构分析、理化特性分析等深入研究提供一定参考依据。

木本饲料是一种新型的非常规饲料，富含多种氨基酸、维生素和有机物，营养价值丰富，且大部分木本饲料植物粗蛋白质含量较高，可作为优良的蛋白质饲料资源，有效利用能够缓解蛋白质资源匮乏对畜牧业发展的严重制约。但由于抗营养因子的存在，未经处理的木本饲料直接饲喂牲畜适口性较差、消化利用率不高，而通过青贮处理能有效地减少饲料营养物质的损失、提高适口性、改善其营养成分、提升饲喂效果，现已成为一种重要的处理方式。作者基于国内外对木本饲料青贮的相关研究，围绕不同木本饲料营养价值的评定、青贮原料选取、青贮添加剂（化学添加剂、乳酸菌添加剂、酶制剂和营养型添加剂）对青贮发酵的影响、木本饲料与不同原料（禾本科牧草、不同的木本饲料、农业副产品等）混合青贮技术及其对发酵的影响、木本饲料成功青贮后营养成分特征及木本青贮饲料在各项饲喂试验中对不同动物的饲喂效果等方面的研究进展进行系统地综述，并针对木本饲料的研究现状及资源重要性对其未来发展提出建议和展望，以期为木本青贮饲料的后续开发和实际生产应用提供参考。

为探究TBC1蛋白家族第7成员（TBC1 domain family member 7，TBC1D7）基因单核苷酸多态性（SNP）对关岭牛生长性状的影响，试验选取116头贵州关岭牛，测定其8项生长性状指标，提取血液基因组DNA，并利用DNA混池扩增TBC1D7基因全部外显子，通过直接测序法筛查SNP。利用不同独立样本DNA扩增SNP位点对应外显子并测序，以验证位点并进行基因分型。利用SPSS 19.0软件单因素方差分析TBC1D7基因不同基因型和关岭牛生长性状之间的相关性。结果显示，在TBC1D7基因第5、6和8外显子上共发现5个SNPs位点：g.12972 T>C、g.12984 A>G、g.20538 C>T、g.20577 T>C和g.24807 G>A，均存在3种基因型；χ²检验结果显示，5个SNPs位点均显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态（P<0.05）；群体遗传参数分析发现，5个SNPs位点杂合度较高，多态信息含量均表现为中度多态（0.25<PIC<0.5）。关联性分析结果发现，关岭牛TBC1D7基因g.24807 G>A位点GA基因型个体体斜长、胸围和后臀围均显著高于AA基因型个体（P<0.05）。在本试验群体中，5个SNPs存在6种单倍型（H1~H6）和9种双倍型（H1H1、H2H2、H2H3、H2H6、H3H3、H3H4、H3H5、H3H6和H5H5），其中H3和H2为优势单倍型，H3H3、H2H2和H2H3为优势双倍型；双倍型关联分析结果显示，H3H6和H5H5个体体斜长和后臀围相比其他双倍型个体占有明显优势，可能是有利基因型。结果表明，TBC1D7基因g.24807 G>A位点为影响关岭牛生长发育的重要多态位点，本研究为筛选有助于关岭牛生长发育的分子标记提供了理论参考。

研究旨在分析发情和乏情初产母猪下丘脑-垂体-卵巢轴基因表达的差异，探讨母猪乏情调控的分子机制。选用6头健康的断奶初产母猪，分为发情组（3头）和乏情组（3头），屠宰后分别采集下丘脑、垂体、卵巢进行转录组测序（RNA-Seq）、GO功能富集、KEGG通路及相关蛋白的Western blotting分析。结果发现，发情组下丘脑、垂体、卵巢分别获得52 432 800、52 573 730和52 209 252条clean reads，与猪参考基因组（Sus scrofa 11.1）的比对率分别为78.69%、81.49%和79.26%；乏情组下丘脑、垂体、卵巢分别获得52 516 724，52 476 820和52 195 962条clean reads，与猪参考基因组的比对率分别为82.38%、83.05%和80.20%。与发情组母猪相比，乏情组母猪下丘脑中共有710个差异表达基因，其中上调基因392个，下调基因318个；垂体中共有707个差异表达基因，其中上调基因283个，下调基因424个；卵巢中共有956个差异表达基因，其中上调基因635个，下调基因321个。3种组织中的共有差异表达基因为36个。与母猪情期调控相关的亲吻素-1（KISS1）、G-蛋白偶联受体54（GPR54）、速激肽3（TAC3）、速激肽3受体（TACR3）、17-α-羟化酶/17，20碳链裂解酶（CYP17A1）、芳香化酶（CYP19A1）、类固醇激素合成急性调节蛋白（STAR）、促性腺激素释放激素受体（GnRHR）和雌激素受体1（ESR1）基因在乏情组母猪体内显著下调（P<0.05；P<0.01）。Western blotting分析结果显示，TAC3、TAC3R、KISS1和GPR54相关蛋白在乏情组母猪下丘脑中也显著下调（P<0.05）。GO和KEGG通路分析发现，差异表达基因显著富集于正调控胆固醇酯化反应、卵巢类固醇生成、GnRH信号通路、FoxO信号等一些与类固醇激素生成和卵泡发育相关的信号通路。本研究结果表明，发情和乏情初产母猪下丘脑-垂体-卵巢轴上与情期调控相关的基因存在差异表达，尤其是Kisspeptin/GPR54和TAC3/TACR3两大系统的mRNA及蛋白表达水平在乏情组母猪下丘脑中均显著下调，推测可能是Kisspeptin/GPR54和TAC3/TACR表达受损导致了下丘脑调节功能障碍，进而导致了初产母猪乏情。该研究为揭示初产母猪乏情分子调控机制提供了重要支持，为今后利用分子技术改善母猪乏情问题提供了重要理论依据。

为提高云南黄山羊新品种培育的育种效率和遗传进展，准确度量育种素材波尔山羊黄色群体的近交程度及亲缘关系是一个有效途径。本研究采用简化基因组测序（GBS）技术对来自云南省种羊推广中心的37只黄色波尔山羊公羊进行测序，通过质控获取高质量高密度SNP变异信息，并使用Gmatrix v2、Plink v1.90、MegaX v10.0等软件进行主成分分析（PCA）、状态同源距离计算（identity by state，IBS）、基因型亲缘关系G矩阵构建、亲缘系数计算、NJ聚类分析和基因组近交系数计算。结果显示，在37只黄色公羊中检测出位于29条常染色体上的高质量SNPs位点88 393个，共检测出长纯合片段（ROH）1 537条，大小在1 000.582~18 400.12 kb之间，平均每条ROH长2 576.34 kb，平均含有93.15个SNPs；37只黄色公羊被分为11个家系，其中3个家系仅各有1只黄色公羊，家系A与K亲缘关系最远；基于ROH的群体平均基因组近交系数为0.043，其中3只黄色公羊的基因组近交系数>0.125，存在较多的近交积累。本研究结果为波尔山羊黄色群体在云南黄山羊新品种培育中的合理利用提供了科学依据，也为评估山羊个体近交水平、防止近交衰退、优化选种选配方案提供了有力的技术手段。

本研究旨在分析不同体重苏姜猪的全基因组DNA甲基化差异，以期筛选出影响苏姜猪体重的差异甲基化基因（differentially methylated genes，DMGs）。利用全基因组重亚硫酸盐测序（whole genome bisulfite sequencing，WGBS）技术分析了3头180日龄高体重和3头180日龄低体重苏姜猪的全基因组DNA的甲基化程度、差异甲基化区域（differentially methylated regions，DMRs）和DMGs，对DMGs进行GO和KEGG分析，鉴别影响苏姜猪体重的候选基因。结果显示，苏姜猪全基因组范围内胞嘧啶（C）的平均甲基化率为4.1%，胞嘧啶（C）甲基化平均98.41%发生在CG序列上，CG序列环境下外显子、内含子和3'UTR的甲基化水平高于启动子和5'UTR。本研究共检测出1 657个DMRs和575个DMGs，8号染色体上DMRs分布最多，88.89%的DMRs的长度在500 bp以内，62.78%的DMRs分布在远端基因间区，98个DMGs显著富集于TOR信号的负调控、碳水化合物衍生物分解代谢过程、脂肪细胞因子信号通路、FoxO信号通路等53个GO条目和29个信号通路，鉴别到5个与苏姜猪体重相关的候选基因：瘦素受体（leptin receptor，LEPR）基因、肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor receptor associated factor 6，TRAF6）基因、生肌因子6（myogenic factor 6，MYF6）基因、钙依赖性分泌激活因子2（calcium dependent secretion activator 2，CADPS2）基因和表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）基因。本研究利用WGBS绘制了高、低体重组苏姜猪的全基因组DNA甲基化图谱，为深入研究苏姜猪体重差异的分子机制奠定了基础。

试验通过开展快慢羽群体的鉴定，并对比其在羽毛发育、生长和繁殖性能方面的差异，旨在为北京油鸡种鸡选育和科学养殖提供数据支持。选用北京油鸡纯系公鸡，出雏时，按照主翼羽与覆主翼羽的羽长差值将其分为快慢羽亚群，其中快羽包括K1（主翼羽长于覆主翼羽>5 mm）和K2（主翼羽长于覆主翼羽2~5 mm），慢羽包括M1（主翼羽与覆主翼羽等长或主翼羽长于覆主翼羽<2 mm）和M2（主翼羽短于覆主翼羽）和M3（主翼羽未长出）。1~7日龄每隔1 d测量1次主翼羽与覆主翼羽羽长，7~42日龄每隔1周测量1次；1~8周龄每周测量体重，9~18周龄每隔1周测定体重；10周龄时，观测公鸡全身羽毛发育情况；47周龄时，测定公鸡常规精液品质性状、精子动力学参数、受精率及孵化率。结果显示，快羽公鸡占北京油鸡公鸡总数的11.60%，慢羽占88.40%，慢羽又以M2型为主，有少量M1型和M3型。育雏育成期（1~18周）北京油鸡快慢羽公鸡各周龄体重均无显著差异（P>0.05）。在育雏育成期，慢羽公鸡主翼羽和覆主翼羽生长均慢于快羽公鸡。其10周龄时，背部和腿部羽毛生长完全的鸡的比例仅为44%，且不同类型的慢羽公鸡的比例也不一，其中等长型或微长型慢羽最高，超过90%，未长出型慢羽最低，仅为17%左右。47周龄时快羽鸡和慢羽鸡的常规精液品质无差异，但是快羽公鸡精子直线性显著高于慢羽鸡（P<0.05），直线速率高于慢羽公鸡（P=0.06），快羽北京油鸡公鸡受精率显著高于慢羽公鸡（P<0.05），且入孵蛋孵化率和受精蛋孵化率有高于慢羽公鸡的趋势，但差异不显著（P>0.05）。本研究结果表明，快慢羽北京油鸡公鸡的羽毛生长和繁殖性能有一定差异，需要加强慢羽公鸡羽毛发育缓慢原因和鉴定方法的研究，也需加强慢羽公鸡精液品质选育。

为探究寡腺苷酸合成酶1（oligoadenylate synthase 1，OAS1）基因多态性与松辽黑猪繁殖性状的关联性，试验选取130头松辽黑猪母猪为研究对象，利用Sanger直接测序法测序查找OAS1基因外显子1~8的SNP位点，使用SPSS 19.0软件分析OAS1基因SNP位点与松辽黑猪繁殖性状的关联性。结果显示，在松辽黑猪OAS1基因外显子2、3和6上共检测到33个突变位点；其中在外显子2的110 bp处存在1个SNP位点（G110C），存在3种基因型：GG、GC和CC；在外显子3的176 bp处存在1个SNP位点（C176T），存在3种基因型：CC、CT和TT；在外显子6的145 bp处存在1个SNP位点（C145T），存在3种基因型：CC、CA和AA；在166 bp处存在1个SNP位点（G166A），存在3种基因型：GG、GA和AA；在206 bp处存在1个SNP位点（A206G），存在3种基因型：AA、AG和GG。卡方适合性检验结果显示，松辽黑猪OAS1基因G110C突变位点符合Hardy-Weinberg平衡状态，C176T、C145A、G166A和G206A位点均偏离Hardy-Weinberg平衡状态。群体遗传参数分析结果显示，各SNPs位点遗传杂合度均位于中等水平，为中度多态（0.25<PIC<0.5）。关联分析结果发现，G110C位点GC基因型个体总产仔数、产活仔数和断奶仔猪数均显著高于GG基因型个体（P<0.05）；C176T位点CT基因型个体断奶仔猪数显著高于CC基因型个体（P<0.05）；C145T位点CC基因型个体总产仔数和产活仔数均显著高于AA基因型个体（P<0.05）；G166A位点GA基因型个体断奶仔猪数显著高于GG基因型个体（P<0.05）；A206G位点GG基因型个体总产仔数和产活仔数显著高于AA基因型个体（P<0.05）。结果表明，OAS1基因外显子区存在突变位点，对松辽黑猪部分繁殖性状有显著性影响。

试验旨在研究卵巢类固醇生成信号通路中腺苷酸环化酶3（adenylatecyclase 3，ADCY3）、胰岛素样生长因子1（insulin like growth factor 1，IGF1）基因结构变异的遗传多样性及其与香猪母猪繁殖性状的相关性。采用PCR技术对269头香猪进行ADCY3和IGF1基因结构变异研究，利用在线软件计算遗传杂合度（He）、遗传纯合度（Ho）、有效等位基因数（Ne）及多态信息含量（PIC），并利用单因素方差分析、LSD法分析不同基因型与初产和经产香猪的总产仔数、产活仔数、初生重及乳头数等繁殖性状的关联性。结果显示，2个结构变异ADCY3-I₁-sv506和IGF1-I₃-sv302在香猪群体中均存在多态性，均有3种基因型：DD、DI和II，2种等位基因：D和I。其中，ADCY3-I₁-sv506中DI基因型为优势基因型（0.569），D为优势等位基因（0.601）；IGF1-I₃-sv302中II基因型为优势基因型（0.717），I为优势等位基因（0.816）。ADCY3-I₁-sv506和IGF1-I₃-sv302多态信息含量（PIC）均为中度多态（0.25<PIC<0.5），杂合度分别为0.479和0.300。关联性分析结果发现，ADCY3-I₁-sv506位点DD基因型个体的初产和经产母猪总产仔数显著高于II基因型个体（P<0.05）；IGF1-I₃-sv302位点II基因型个体的初产、经产母猪总产仔数和经产母猪产活仔数均显著高于DI基因型型个体（P<0.05）。结果表明，2个结构变异位点ADCY3-I₁-sv506和IGF1-I₃-sv302与香猪母猪的繁殖性能有直接关联，可作为香猪母猪繁殖性能选育的候选分子标记。

本试验旨在探讨于猪精液基础稀释液（BTS）中添加不同浓度的对香豆酸（P-coumaric acid，PCA）对猪精液质量及抗氧化酶活性的影响。在猪常温稀释制剂中添加浓度为0、0.03、0.06、0.09、0.12、0.15 g/L的PCA，利用CASA全自动精子分析仪与荧光探针技术分别在1~5 d内检测精子运动学参数与精子功能完整性；利用抗氧化试剂盒在1、3和5 d检测精子活性氧（reactive oxygen species，ROS）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性。试验结果表明，在精液保存的第5天，0.09 g/L的PCA处理组与空白组相比，精子活力显著提高（P<0.05），精子的顶体功能完整性、质膜功能完整性、线粒体功能完整性也显著升高（P<0.05），不仅如此，0.03、0.06、0.09和0.12 g/L PCA处理可显著降低精子ROS与MDA水平，提高SOD活性（P<0.05），其中0.09 g/L处理组相比其他组抗氧化活性效果最佳，而当添加浓度为0.15 g/L时，精子的抗氧化活性与0.09 g/L组相比显著降低（P<0.05）。综上，猪常温基础稀释液中添加PCA可改善精子常温保存品质，添加0.09 g/L效果最佳。

近年来，中国肉牛产业不断调整优化，母牛存栏量持续增长，但国内可繁殖肉用母牛数量持续减少，母牛受胎率普遍不高，犊牛成活率低，已成为制约肉牛产业发展的瓶颈环节。同期排卵-定时输精技术通过应用生殖激素处理调控母牛发情周期，促进母牛发情，从而提高母牛参配率，在提高母牛繁殖力中得到广泛应用，是当今家畜繁殖技术的一个重大突破。由于中国肉牛养殖集约化程度低，同期排卵-定时输精技术在肉牛上的应用尚未得到广泛重视。不同同期排卵-定时输精处理程序各有特点，在实际应用中影响同期排卵-定时输精程序处理母牛发情配种妊娠率的因素很多，如何对该技术实现进一步优化是当前面临的重大难题。国内外针对于同一生殖激素的不同浓度、不同激素组合及激素注射的间隔时间、激素的替换等做了大量的研究。文章综述了定时输精技术原理、主要程序及国内外肉牛同期排卵-定时输精技术研究进展，以期为建立高效的肉牛同期排卵-定时输精技术体系实现该技术在肉牛产业上的应用提供参考。

支持细胞对维持精子形成过程中的微环境起决定作用，它可以通过分泌功能、细胞间连接形成的血睾屏障功能以及吞噬功能等来促进精子的形成过程，其发育异常会导致不同程度的雄性生殖缺陷。基于支持细胞在雄性动物生殖过程中的作用，体外培养高纯度支持细胞可成为研究睾丸两大核心功能-精子发生和性激素分泌功能相关调节机制重要的细胞模型。此外，体外培养睾丸支持细胞也可作为生殖毒理学等新兴热点领域的细胞模型，为评估和研究环境因素对雄性生殖的影响提供便利。因此，作者系统地归纳、总结了目前关于动物支持细胞生物功能的研究及常用的体外分离纯化、培养及鉴定方法，以期为利用动物支持细胞开展雄性生殖领域的研究提供参考。

肌肉参与机体的运动、协调和体温调节等一系列生命活动，同时畜禽肌肉是人类重要的蛋白质来源。肌肉发生过程中的不同调控机制可引起肌肉发育的阶段性差异，而整个肌肉发育主要以两个时期（胚胎期和出生后）的发育状态体现。长链非编码RNA（lncRNA）是一类不具有蛋白编码能力且长度>200 nt的RNA分子。近年来，随着基因组学和分子生物学技术的高速发展，发现lncRNA广泛参与到肌肉发育的各个阶段，以多种作用机制调控肌肉的发育过程。作者介绍了肌肉的发育过程，综述了目前发现的与肌肉发育相关的lncRNAs及其作用机制，并阐述其在肌肉发育的不同阶段发挥的重要作用，为进一步研究肌肉发育相关lncRNAs提供了参考。

试验旨在构建能表达牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）E2抗原蛋白的重组乳酸乳球菌（Lactococcus lactis），为进一步研制BVDV乳酸菌口服活载体疫苗奠定基础。将BVDV E2基因克隆后测序，根据乳酸乳球菌的密码子偏嗜性进行优化，再将优化的基因片段插入表达载体pNZ8148中，并电转化乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞，构建重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000，经1 ng/mL乳链菌肽诱导表达后，对菌体物进行了SDS-PAGE和Western blotting分析。将重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000口服免疫6~12月龄健康犊牛，在免疫后不同时间点采集血液样品并分离血清，用间接ELISA方法检测抗体水平。结果显示，PCR扩增到了1 149 bp的目的片段，乳酸菌密码子偏嗜性优化后，GC含量从45.28%变为34.30%。重组质粒pNZ8148-E2经酶切鉴定插入片段与预期大小相符，在菌体裂解物中出现大小约42 ku的条带，与预期蛋白大小一致，且该蛋白可与BVDV E2抗体反应。在免疫犊牛的血清中检测到特异性抗BVDV E2蛋白的抗体。本研究结果表明，表达BVDV E2蛋白的重组乳酸菌口服免疫可诱导犊牛产生特异性的体液免疫反应，该重组菌具有较好的免疫原性。

本研究旨在获得猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus，PDCoV）地方分离株，并对其生物学特性和致病性进行初步研究。使用猪睾丸（ST）细胞分离来自河南某猪场PDCoV阳性病料中的病毒，并通过观察细胞病变效应（cytopathic effect，CPE）、反转录PCR、间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay，IFA）、电镜观察、S基因序列分析等方法进行鉴定，同时评价分离毒株在仔猪上的致病性。结果显示，阳性病料接种ST细胞后，病毒稳定增殖并连续传代至第10代；自第4代开始，感染细胞发生CPE，呈圆缩、拉网、碎裂、脱落状态；IFA鉴定为PDCoV阳性，且电镜观察可见带有刺突的冠状病毒粒子。将分离到的PDCoV命名为HeN10，其S基因序列与中国SD株相似性最高，达99.8%，与国内报道毒株CHN-JS-2017株和CHN-HeB1-2017株等处于同一分支。将HeN10株以5×10^6.3 TCID₅₀/头的剂量口服感染5头10日龄健康易感仔猪，可导致所有感染仔猪发生水样腹泻。本研究成功分离了PDCoV HeN10株，其与SD株等国内流行毒株处于同一分支，攻毒后可引起仔猪典型腹泻症状，可为下一步诊断方法及疫苗相关研究奠定一定的基础。

试验旨在构建pET28a-DCpep-GSE原核表达载体，并制备猪链球菌（Streptococcus suis）重组表位蛋白。应用生物信息学方法预测猪链球菌保护性抗原三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）、烯醇化酶（Enolase）、DNA核酸酶（SsnA）的跨膜区结构、信号肽、B细胞表位、辅助T细胞（Th细胞）表位及蛋白的二级结构；设计重组蛋白（DCpep-GSE蛋白）的氨基酸序列并分析其理论等电点、亲疏水性等理化性质；构建重组原核表达载体pET28a-DCpep-GSE，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，优化诱导表达条件，His镍柱纯化并检测目的蛋白的细胞毒性和溶血性。结果显示，SsnA蛋白第1-50及1 036-1 059位氨基酸为胞内或跨膜片段，第1-56位氨基酸为信号肽片段，GAPDH和Enolase无跨膜区及信号肽；B细胞和Th细胞表位处于二级结构中的无规则卷曲与β-转角区域，表位抗原性良好；DCpep-GSE蛋白共373个氨基酸，分子质量为45.3 ku，理论等电点（pI）为4.57，平均亲水性（GRAVY）为-0.677，属于酸性亲水性蛋白；质粒双酶切得到5 369 bp的载体条带和1 131 bp的目的条带，PCR扩增产物测序结果与设计序列一致，载体构建正确；以1 mmol/L IPTG于37 ℃诱导6 h蛋白表达量最高，超声破碎后得到可溶性蛋白；试验组蛋白浓度为500 μg/mL时，RAW264.7、PK15和MARC145细胞的相对增殖率分别达到92.3%、99.5%和99.7%，细胞形态与对照组一致，生长旺盛；各样品组的溶血率均<5%。本研究设计了重组蛋白DCpep-GSE，成功地表达和纯化了DCpep-GSE蛋白，并验证了其安全性，为后续猪链球菌病亚单位疫苗的研制奠定了基础。

为了解广西边境地区低致病性禽流感病毒（low pathogenic Avian influenza virus，LPAIV）的流行情况，本研究对2013-2019年在广西边境地区的规模养殖场和活禽市场采集的33 964份家禽棉拭子样品，采用鸡胚接种方法进行病毒分离，并结合血凝抑制试验和RT-PCR等方法鉴定禽流感病毒的亚型。结果显示，共有3 892份样品分离到LPAIV，2013-2019年的样品病毒分离率分别为17.39%、11.23%、13.59%、9.31%、9.09%、9.12%和15.21%，总分离率为11.46%，其中2013年样品的病毒分离率最高。分离到的LPAIV包括H1、H3、H4、H6、H9、H10和H11 7种亚型，样品病毒分离率分别为0.14%、4.37%、0.19%、4.06%、2.69%、0.01%和0.003%。其中活禽市场分离到H1、H3、H4、H6、H9、H10和H11 7种亚型流感病毒，样品病毒分离率分别为0.19%、5.53%、0.21%、5.29%、3.41%、0.01%和0.004%，总分离率为14.64%；而养殖场分离到H3、H4、H6和H9 4种亚型流感病毒，样品病毒分离率分别为1.26%、0.12%、0.79%和0.78%，总分离率为2.95%，养殖场的分离率远低于活禽市场（14.64%）。鸡源样品的病毒分离率为5.77%，水禽样品的病毒分离率为15.10%，环境样品的病毒分离率为21.67%，水禽和环境样品的病毒分离率远高于鸡。结果表明，当前广西边境地区家禽携带多种亚型LPAIV，水禽是高风险禽群，应进一步加强监测和防控；活禽市场污染严重，应进一步加强对活禽市场的监管力度，建立和实施更加科学有效的活禽市场运营机制。

为建立更敏感、特异的牛片形吸虫病早期诊断方法，本试验将收集的大片吸虫分泌排泄产物（Fasciola gigantica excretory-secretory products，FgESP）进行凝胶过滤层析并从中筛选出检测效果最优的UV280吸收峰，从此峰对应的组分中筛选出诊断效果最优的层析组分后将其作为抗原，通过棋盘滴定试验优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度、显色时间等，确定临界值，建立牛片形吸虫病间接ELISA诊断方法。对建立的方法进行敏感性和特异性试验，检测试验感染0~14周的水牛血清和临床160份水牛血清样本，并与已有的诊断抗原FgESP（阴阳临界值为0.320）进行诊断效果比较。结果显示，层析组分F22具有较优的检测效果。间接ELISA的最佳反应条件为：F22抗原包被浓度0.157 μg/mL，待测血清与酶标二抗的稀释度分别为1：400和1：40 000，显色时间为25 min。应用建立的方法检测15份水牛阴性血清，确定D_{450 nm}阴阳性临界值为0.408。比较F22与FgESP发现，二者特异性相似，但F22作为抗原的敏感性高于FgESP。检测试验感染大片吸虫的水牛0~14周血清，结果表明，从感染第2周开始F22-IgG水平极显著高于FgESP-IgG水平（P<0.01），因此，F22比FgESP诊断效果更优。对160份水牛血清检测发现，F22阳性检出率为71.25%，FgESP阳性检出率为63.75%。上述结果表明，相比于FgESP，以F22作为诊断抗原建立的大片吸虫病间接ELISA诊断方法敏感性更高，可更有效地进行牛大片吸虫病的早期诊断。

为掌握豫南地区猪群中流行的伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）分子遗传特征，本研究利用PCR方法从PRV感染猪的组织中扩增其主要毒力基因gB、gE、gC、gD和TK，并进行核苷酸序列测定。利用MegAlign软件进行流行毒株的主要毒力基因与已发表的参考序列的相似性、进化树和关键位点氨基酸变异分析。测序结果表明，本研究成功从5份PRV感染猪组织中扩增出PRV的gB、gE、gC、gD和TK基因。氨基酸相似性和进化树分析结果表明，豫南地区的5株PRV流行株与国内流行毒株在G1群，与G1群国内流行毒株的gB、gE、gC和gD氨基酸相似性分别为98.5%~100%、97.2%~100%、97.5%~100%和98.3%~100%；与G2群亲缘关系较远（以Bartha、Becker、NiA3株为代表的欧美地区流行毒株），与G2群内毒株的gB、gE、gC和gD氨基酸相似性分别为96.4%~97.4%、94.6%~95.7%、92.7%~94.0%和96.3%~99.0%。关键氨基酸变异分析结果表明，与Bartha株（或Becker和NiA3株等）相比，5株流行毒株的gB氨基酸存在75-77位"PGL"的缺失，94位"G"的插入；gE氨基酸存在48和496位有"D"的插入，gC氨基酸存在57-63位"VSGTTGA"的插入和65-69位"SPEAG"突变为"ASTPA"，gD氨基酸存在278-281位"RP"或"RPRP"的插入。此外，流行株的gB、gE、gC、gD和TK氨基酸序列存在多个单位点的氨基酸突变。因此，豫南地区PRV流行株具有PRV变异毒株的分子遗传特征。上述结果证实，5株PRV流行毒株均为变异毒株，与疫苗毒株Bartha-K61株亲缘关系较远。

本研究旨在分离1株驴源马疱疹病毒8型（Equine herpesvirus type 8，EHV-8）毒株并分析其遗传特征。从山东省聊城地区某驴场采集病驴肺脏组织，经PCR方法鉴定EHV-8的感染情况；对EHV-8感染阳性的肺组织进行研磨，经反复冻融后接种于兔肾细胞（RK-13）细胞中，盲传3代，待出现细胞病变（CPE）时收集细胞，并通过PCR、间接免疫荧光试验、透射电镜等技术对EHV-8进行鉴定。利用PCR扩增获得分离株的ORF70全基因组序列，并进行生物信息学分析。研究结果显示，经PCR鉴定获得EHV-8感染阳性的肺脏组织，病料接种易感细胞RK-13后出现典型CPE，分别收集前3代的细胞培养物，经PCR扩增，均获得与预期大小一致的ORF70基因片段，将分离获得的EHV-8毒株命名为SDLC66，序列上传GenBank，获得登录号：MW816102。经测序和序列比对发现，SDLC66毒株与AHV-3毒株（GenBank登录号：U24184.1）ORF70基因的相似性为99%，与国内的EHV-8 wh毒株（GenBank登录号：JQ343919.1）、国外EHV-8/IR/2015/40（GenBank登录号：MF431614.1）、EHV-8/IR/2003/19（GenBank登录号：MF431611.1）参考毒株的相似性最高，均为99.8%。经遗传进化树分析发现，SDLC66与EHV-8（EHV-8 wh、EHV-8/IR/2015/40和EHV-8/IR/2003/19株）在一个小分支上，亲缘关系最近；与EHV-1型参考毒株（Hong Kong/57/1984、United Kingdom/32/1982、Oxfordshire/206/2013株）序列来源于同一大分支，亲缘关系较近，与EHV-4毒株（91c1和TH20p株）亲缘关系较远。间接免疫荧光试验可见与病毒蛋白特异结合的红色荧光信号；透射电镜观察可见直径约110 nm的圆形病毒粒子，并且核衣壳外有一层亮晕，亮晕外有一层囊膜。说明本试验成功分离得到1株驴源EHV-8毒株，为进一步研究其致病性和致病机制奠定基础。

鸡滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae，MS）能引起家禽呼吸道疾病、传染性滑膜炎、蛋壳顶端异常及生长迟缓等，给全球家禽业带来巨大经济损失。MS无细胞壁，只有1个血清型，分离培养要求苛刻，基因组较细菌小，有极强抗原变异能力，表面膜蛋白与其免疫应答和细胞黏附等有关。MS具有宿主特异性，主要侵害幼龄鸡和火鸡，水平和垂直均可传播，呈世界性分布。MS通过膜蛋白黏附宿主细胞、释放有毒产物、免疫逃避、掠取营养成分等，从而导致宿主细胞损伤或死亡。MS灭活苗安全性和保护率高，能阻止其在气囊和气管定植；活疫苗无法保护已感染鸡群，接种后会诱发鸡群发病或加重症状；基因工程疫苗安全性高、易量产，将是未来MS疫苗研发方向。大环内酯类、四环素类等药物联合疫苗免疫防控效果最好，不同国家和地区MS耐药性存在差异。针对MS防治存在的问题，开发能突破母源抗体和抗生素干扰的新型高效疫苗、抗生素替代品，将是今后的重点工作。作者介绍了MS的病原学特性、流行特点、国内外流行现状、实验室诊断方法及致病机制，重点阐述了MS疫苗免疫和药物防治，最后对该病防治发展趋势进行了展望。

为筛选出理想的鸡白痢沙门氏菌宿主感染模型的建立方法，本研究通过选择不同接种方式配合不同菌液浓度接种不同胚龄鸡胚建立感染模型，将90枚SPF鸡胚随机分成9组，每组10枚，分别为A、B、C、D、E、F、G、H、I组，A组为空白对照组，其余各组为模型组，模型组分别以气室接种、蛋壳接触接种的方式对不同胚龄（11和14胚龄）SPF鸡胚接种不同浓度（1×10³、3×10³、9×10³、3×10⁵、9×10⁵ CFU/mL）的鸡白痢沙门氏菌C79-3菌株。每天观察情况直至出雏，待雏鸡孵出后按组分笼饲养，每隔12 h观察1次，连续观察7 d，观察各组雏鸡的临床症状、死亡情况，观察期结束对死亡和存活雏鸡进行剖检、组织病理学检查及鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定。结果显示，各模型组均有雏鸡出现明显的鸡白痢病症状并死亡，相较于其他模型组，以11胚龄蛋壳接触感染方式接种9×10⁵ CFU/mL的C79-3菌液的F组和14胚龄气室感染方式接种3×10³ CFU/mL C79-3菌液0.1 mL的H组，鸡胚出壳率较高，可分别达到80%和90%，出壳雏鸡呈现明显鸡白痢病特征，剖检可见肝脏出血、盲肠膨大、卵黄囊吸收不良；组织病理切片可观察到肝脏、盲肠、心脏各有不同程度的损伤，发病率分别100%和88.8%，并且鸡白痢沙门氏菌阳性检出率分别达70%和90%。本研究结果表明，以11胚龄蛋壳接触感染方式接种0.1 mL 9×10⁵ CFU/mL的C79-3菌液和14胚龄以气室感染方式接种0.1 mL 3×10³ CFU/mL的C79-3菌液的两种方法均可用于建立稳定的鸡白痢沙门氏菌宿主感染模型。

为探究目前海南地区罗非鱼无乳链球菌病的流行性，了解该地区无乳链球菌耐药情况，本研究2020年8月从海南地区部分渔业养殖场的病鱼中共分离获得15株无乳链球菌，对各分离菌株的血清型、主要毒力基因及耐药性进行检测，并对多重耐药情况进行分析。血清型检测结果显示，15株分离菌株的血清型与对照菌株A909一致，均为Ⅰa型。毒力基因检测结果显示，15株分离菌株均未检出毒力基因scpB，但该毒力基因在参考菌株人源无乳链球菌2603V/R中检出，而主要毒力基因cylE、sodA、gapC的检出率均为100%。药敏试验结果表明，15株分离菌株对甲氧胺嘧啶、磺胺异噁唑、复方新诺明、链霉素、新霉素、庆大霉素的耐药率达85%以上；对头孢克洛、头孢曲松、头孢哌酮、头孢拉定、卡那霉素、红霉素、利福平、克林霉素敏感性达80%以上；未发现对甲氧胺嘧啶、氟罗沙星、链霉素、新霉素、庆大霉素敏感的菌株。多重耐药检测结果表明，15株分离菌株均至少对4种药物表现耐药，其中6重及以上耐药的菌株占总分离菌株数的86.67%，并有2株为13重耐药菌株。本研究为海南地区鱼源无乳链球菌病的用药提供参考，为华南地区罗非鱼无乳链球菌的流行病学和疾病防控提供调查依据。

本研究旨在调查山东地区鸡源沙门氏菌的流行情况及毒力基因分布。在山东地区规模化养鸡场采集病料，利用四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）进行沙门氏菌选择增菌，并对分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色、生化试验、培养基菌落形态鉴定，利用沙门氏菌属及血清型特异性引物对分离菌进行PCR扩增鉴定，并利用PCR方法检测分离菌中33种毒力基因分布。结果显示，分离菌在LB固体培养基和麦康凯培养基上呈无色半透明、光滑且边缘整齐的菌落，镜检为革兰氏阴性、两端钝圆的小杆菌。生化试验、培养基菌落形态鉴定、沙门氏菌属及血清型特异性引物PCR扩增结果显示，共分离到25株鸡源沙门氏菌，其中肠炎沙门氏菌9株，鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌各8株。毒力基因检测结果显示，33种毒力基因在25株分离菌中均有检出，其中20种毒力岛基因（invJ、virK、sopA、mogA、hilA、hisJ、ssaB、ssaQ、ssiD、misL、mgtC、orf319、siiE、siiD、bcfA、pipC、sopB、araB、spoB和avrA基因）、肠毒素基因（stn基因）及菌毛毒力基因（fimA基因）检出率均为100%；2种毒力岛基因（sipA和sodC基因）及4种毒力质粒基因（spvA、spvC、spvD和spvR基因）检出率均为96%，spoE基因检出率为68%，fliC基因检出率为36%，gipA与spvB基因检出率均为32%，sseL基因检出率为4%；25株鸡源沙门氏菌中，分别携带31种（8株）、30种（1株）、29种（15株）和24种（1株）毒力基因；毒力基因gipA和spvB只在鼠伤寒沙门氏菌中检出，且在鼠伤寒沙门氏菌中检出率为100%。本研究结果表明，山东地区鸡源沙门氏菌主要为肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌，分离菌皆携带多种毒力基因，其中gipA和spvB毒力基因只在鼠伤寒沙门氏菌中检出，可作为鼠伤寒沙门氏菌鉴定的备选基因之一。

本研究旨在阐明金黄色葡萄球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响，为金黄色葡萄球菌致病性研究提供理论参考。以金黄色葡萄球菌野生株SA113（WT SA113）和SA113 lgt：：ermB脂蛋白表达缺失菌株（SA113Δlgt株）体外感染M1型小鼠骨髓源巨噬细胞，分为3组：空白对照组、WT SA113感染组（MOI：3：1）、SA113Δlgt感染组（MOI：3：1）。采用ELISA法检测M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、趋化因子（RANTES）和白细胞介素10（IL-10）的水平，实时荧光定量PCR检测Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）和含NLR家族Pyrin域蛋白3（NLRP3）基因的表达，免疫荧光法检测脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌作用的影响。结果显示，与空白对照组相比，WT SA113感染组和SA113Δlgt感染组均可显著上调M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、RANTES、IL-10分泌量以及WT SA113感染组TLR2、NLRP3基因表达水平（P<0.05），而TLR4基因表达量显著降低（P<0.05）；与WT SA113感染组相比，SA113Δlgt感染组M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、IL-1β、RANTES、IL-10分泌量以及TLR2（12 h除外）、NLRP3基因表达水平显著降低（P<0.05）。免疫荧光结果显示，M1型巨噬细胞对SA113Δlgt株的吞噬作用显著低于对WT SA113株的吞噬作用（P<0.05）。综上，金黄色葡萄球菌的脂蛋白在M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中主要通过激活TLR2和NLRP3受体，诱导细胞因子TNF-α、IL-1β、RANTES和IL-10的产生和释放。

为了深度开发双黄连可溶性粉（金银花、连翘、黄芩，1：1：2），并为家禽、家畜合理选择用药提供科学依据，本研究以双黄连口服液生产工艺生产的双黄连可溶性粉及其醇沉物（多糖组分）、滤液（黄酮组分）作为研究材料，以哺乳动物牦牛源轮状病毒、鸡新城疫病毒，牦牛源致病性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌为研究对象，采用牛津杯结合平板二倍稀释法，探讨其体外抗菌活性；以牦牛MA-104细胞株、鸡胚成纤维细胞株UMNSAH/DF-1为宿主细胞，采用噻唑蓝比色法（MTT）和细胞病变（CPE）检测法，探讨其体外抗病毒活性。研究结果表明，双黄连可溶性粉对革兰氏阴性菌（牦牛源大肠杆菌、牦牛源沙门氏菌、大肠杆菌质控菌株）的抑菌效果优于对革兰氏阳性菌（牦牛源金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球质控菌株）的抑菌效果，从双黄连可溶性粉中分离的黄酮组分可能是双黄连可溶性粉抑菌的主要成分，而多糖组分则无抑菌活性；黄酮组分对革兰氏阳性菌的抑菌效果优于对革兰氏阴性菌的抑菌效果；双黄连可溶性粉及其黄酮组分和多糖组分对鸡胚胎成纤维细胞UMNSAH/DF-1的最小无毒浓度（TC₀）分别为：2.58、1.17和1.56 μg/mL，对牦牛细胞MA-104的TC₀分别为：1.290、0.585和0.780 μg/mL，对牦牛轮状病毒均具有良好的抗病毒效果，双黄连可溶性粉对鸡新城疫病毒的抗病毒效果优于黄酮和多糖组分。研究结果为双黄连可溶性粉深度开发和对畜禽合理选择用药提供了科学依据。

试验旨在通过天冬糖苷散对小鼠的急性毒性试验和大鼠亚慢性毒性试验，评价该药物制剂的安全性。在急性毒性试验中，分别进行了预试验（5 000、1 000、200、40 mg/（kg·BW）），正式试验（5 000、2 500、1 250、625 mg/（kg·BW））和最大给药量试验（60 g/（kg·BW））。给药后，连续7 d观察小鼠精神状态和死亡情况，试验结束后对小鼠进行剖检。在亚慢性毒性试验中，将80只Wistar大鼠，随机分为4组，即高剂量组（10 g/（kg·BW））、中剂量组（5 g/（kg·BW））、低剂量组（2.5 g/（kg·BW））和对照组，各组连续给药30 d，试验期间每天观察大鼠的临床表现，并记录大鼠的体重、摄食量和饮水量，计算增重率。给药30 d后，采集血液进行血常规和血液生化指标检测，剖检并计算脏器系数，并对主要脏器进行组织病理学检查。结果显示，在急性毒性试验的预试验、正式试验和最大给药量试验中均未出现小鼠死亡，剖检脏器无肉眼可见病变。在亚慢性毒性试验中，天冬糖苷散中、低剂量组受试大鼠体重、血液学指标、血液生化指标、脏器系数和组织病理学检查结果与对照组相比均无显著差异（P>0.05）。高剂量组雄性大鼠红细胞平均体积（MCV）、丙氨酸转氨酶（ALT）含量均显著高于雄性对照组（P<0.05）；红细胞计数（RBC）、红细胞分布宽度（RDW）、单核细胞百分率（MONO%）均显著低于雄性对照组（P<0.05），但在正常范围内，且各脏器病理组织学检测结果与对照组无显著差异（P>0.05），表明10 g/（kg·BW）剂量天冬糖苷散对受试大鼠的血液学指标和肝肾功能有一定影响。以上结果表明，天冬糖苷散对小鼠的LD₅₀>5 000 mg/（kg·BW），天冬糖苷散在10 g/（kg·BW）范围内连续灌胃大鼠30 d，对大鼠无明显毒副作用，安全性好。