为提高胰高血糖素样肽-2（GLP-2）生产效率以适应畜牧生产应用的需求，本试验利用基因工程技术表达出定点诱变的p[Gly2]GLP-2。用甘氨酸取代GLP-2氨基末端第2位的丙氨酸后，再根据大肠杆菌的偏好性对p[Gly2]GLP-2序列进行优化并在目标肽序列N-端添加肠激酶识别位点，合成基因序列，通过Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点连接到pET-40b（+）构建原核重组表达载体p[Gly2]GLP-2-pET-40b（+），重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，诱导表达重组蛋白。优化后最适表达条件为：菌液D_{600 nm}值为0.6时，用0.2 mmol/L IPTG在37℃诱导培养5 h；最终得到p[Gly2]GLP-2重组蛋白表达量较高的基因工程菌株。通过镍离子亲和层析柱纯化及分梯度洗脱获得纯度较高的p[Gly2]GLP-2融合蛋白，本结果为后续p[Gly2]GLP-2功能性的研究及其在畜牧生产的应用奠定了基础。

本试验旨在获得陆川猪Occludin基因的编码区（CDS）序列，并对其进行生物信息学分析。根据GenBank中公布的猪Occludin基因序列（登录号：NM_001163647.2）设计1对特异性引物，采集健康陆川猪的回肠组织提取总RNA并反转录成cDNA，以cDNA作为模板进行RT-PCR扩增并获得目的基因片段，将其插入pMD18-T载体，筛选阳性克隆菌测序正确后并利用生物信息学软件对所获序列进行分析。结果表明，试验成功克隆获得陆川猪Occludin基因CDS，长度为1 569 bp，共编码522个氨基酸。序列比对结果显示，陆川猪Occludin基因与参考序列的同源性为99.7%，存在3个差异位点，其中第16 bp处C→T为错义突变，引起第6位的亮氨酸变成苯丙氨酸；第1 059 bp处A→G和第1 218 bp处C→T均为同义突变，该错义突变位点可能是陆川猪肠道屏障功能与其他猪种不同的原因。同源性比对结果显示，陆川猪Occludin基因与小鼠、牛、人、果蝇、猕猴和犬的同源性分别为83.8%、89.5%、88.1%、84.1%、88.3%和86.6%。系统进化树分析发现，陆川猪与牛的遗传距离最近，与犬的遗传距离最远。Occludin蛋白分子质量为59.13 ku，氨基酸组成中丝氨酸含量较高（9.2%），在肽链N端为Met，Occludin蛋白在水溶液中280 nm消光系数为96 415，不稳定指数为62.85，属于不稳定蛋白。疏水性分析结果表明，Occludin蛋白是亲水性蛋白。陆川猪Occludin蛋白存在5个跨膜螺旋区，不存在信号肽，包含2个超家族结构域：MARVEL超家族结构域和Occludin-ELL超家族结构域。二级结构预测结果显示，陆川猪Occludin蛋白中α-螺旋、延伸链及无规则卷曲分别占41.00%、5.36%和53.64%，三级结构与二级结构相一致。本试验成功克隆了陆川猪Occludin基因CDS并进行了生物信息学分析，为深入探讨Occludin基因对地方猪种肠道屏障功能的影响提供参考。

本研究旨在探究草原红牛酰基辅酶A硫酯酶2（Acot2）的基因功能，并对其进行生物信息学分析，检测Acot2基因在草原红牛不同组织中的表达差异。根据GenBank中公布的牛Acot2基因序列（登录号：NM_001101938.1）设计引物，PCR扩增获得草原红牛Acot2基因的完整CDS并进行测序，利用分析软件进行序列同源性比对并构建系统进化树；获得对应的氨基酸序列并分析蛋白理化特性及蛋白亚细胞结构、亲疏水性和磷酸化位点，预测蛋白二级结构并构建蛋白质三级结构模型；利用实时荧光定量PCR方法检测Acot2基因在不同组织中的表达差异。结果显示，草原红牛Acot2基因CDS大小为1 395 bp，编码464个氨基酸，其核苷酸序列与亚洲水牛的同源性较高（98.3%），与猕猴和黑猩猩的同源性较低（80.5%和80.4%）。Acot2蛋白分子式为C₂₃₁₇H₃₆₀₆N₆₄₀O₆₂₈S₁₄，分子质量为50.924 ku，理论等电点为8.84。蛋白质不稳定指数为37.50，氨基酸残基多数为亲水性残基，总平均亲水性为-0.094。亚细胞定位分析表明，Acot2蛋白分布在内质网（30.4%）、线粒体（26.1%）、高尔基体（17.4%）、细胞质（17.4%）、液泡（4.3%）和细胞质（4.3%）中；磷酸化位点分析发现，Acot2蛋白存在20个磷酸化位点。二级结构主要形式有α-螺旋（21.8%）、β-转角（33.4%）、β-折叠（18.4%）和无规则卷曲（26.4%），三级结构预测结果与其相一致。实时荧光定量结果显示，Acot2基因在草原红牛胃中表达量最高，在肺脏中表达量极少。Acot2基因在生物进化过程中具有低保守性，其编码氨基酸组成的蛋白质结构稳定，属于水溶性蛋白，在线粒体和内质网中发挥作用，在草原红牛不同组织的表达量有明显差异。本研究结果为进一步探究Acot2基因对家畜脂代谢的影响和筛选草原红牛肉质候选基因提供资料。

试验旨在克隆牛白细胞介素-6（IL-6）基因，并对其编码蛋白进行生物信息学分析，对荷斯坦奶牛进行尾根采血提取RNA后逆转录为cDNA，根据NCBI数据库中已知的牛IL-6基因mRNA序列设计特异性引物，应用RT-PCR技术克隆得到CDS区全长序列，利用生物信息学软件分析牛IL-6基因序列特征、同源性及编码产物的理化性质等。结果表明，试验成功克隆了牛IL-6基因CDS区，全长627 bp，分子质量为23.759 ku，共编码208个氨基酸，理论等电点为7.58，脂溶系数为93.37，属于亲水性蛋白；牛IL-6基因与猪、绵羊、大鼠、人、猫、犬、鸡、小鼠、马和兔的同源性分别为84.4%、96.2%、66.7%、77.5%、75.9%、79.3%、48.5%、67.0%、79.5%和67.5%；系统进化树分析发现，牛与绵羊亲缘关系最近，猪次之，鸡最远；在二级结构预测中，该蛋白无规则卷曲与α-螺旋分别为34.6%和60.1%；亚细胞定位于细胞质；该蛋白含有信号肽和跨膜螺旋结构。本研究为进一步分析牛IL-6基因的功能奠定了一定的理论基础。

为了探究弗氏柠檬酸杆菌的耐药机制，试验使用氟苯尼考为诱导药物，提取正常培养与400 μg/mL氟苯尼考胁迫下的菌株RNA，利用转录组测序技术对菌株间基因表达水平与差异表达基因进行了分析。结果显示，每个样品平均产出1.31 Gb数据，与参考基因组的平均比对率为67.01%。对样品间差异表达基因进行检测，共筛选出2 019个显著差异表达基因，其中上调963个，下调1 056个，并发现emrA和emrB 2个基因。KEGG Pathway分析中，富集到代谢途径的显著差异表达基因最多，占全部的72%，碳水化合物代谢、能量代谢、氨基酸代谢、膜转运等通路明显富集。GO功能分析中，生物过程分布的显著差异基因最多，占全部的46%。显著差异表达基因主要涉及到代谢进程、催化活性、结合。本试验结果表明，弗氏柠檬酸杆菌耐药性的产生可能与细胞外排泵介导的主动外排作用、靶位改变、酶的水解作用、细胞膜通透性改变及生物膜的形成有关。

为研究云南撒坝猪致病性大肠杆菌高致病性毒力岛（HPI）致猪源巨噬细胞焦亡的分子机制，本试验以云南撒坝猪致病性大肠杆菌HPI阳性株感染猪源巨噬细胞为切入点，从云南楚雄州某规模养殖场采集撒坝猪仔猪黄白痢的粪便，对大肠杆菌进行分离纯化，并通过PCR技术对HPI irp2基因进行检测，分别以HPI阳性株（HPI⁺）和阴性株（HPI^-）感染巨噬细胞，并设立LPS+ATP组和空白对照组，于0.5和6 h收集各组细胞及其上清。应用实时荧光定量PCR法检测不同组Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的变化；应用ELISA检测细胞上清pro-IL-1β、pro-IL-18、IL-1β和IL-18含量的变化。结果显示，试验成功分离得到致病性大肠杆菌，经PCR检测成功获得HPI irp2基因阳性株，经实时荧光定量PCR法检测后发现HPI⁺组、HPI^-组与空白对照组相比，Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平均呈上调趋势，且HPI⁺组高于HPI^-组。ELISA检测结果显示，与空白对照组相比，HPI⁺组和HPI^-组pro-IL-1β、pro-IL-18、IL-1β和IL-18的蛋白表达量普遍呈上调趋势，且HPI⁺组均高于HPI^-组。结果表明，云南撒坝猪致病性大肠杆菌HPI可通过上调猪源巨噬细胞中Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA的表达量促进猪源巨噬细胞炎性因子IL-1β和IL-18的释放，诱发炎症，最终促进猪源巨噬细胞发生细胞焦亡。

本研究利用脂多糖（LPS）诱导建立仔猪免疫损伤模型，研究黄芩苷对LPS诱导的仔猪血管紧密连接蛋白表达量和MLCK-MLC信号通路变化的影响，并探讨其保护机制。试验选取42头健康仔猪，分为空白对照组（A组）、LPS模型组（B组）、LPS+丙酮酸乙酯处理组（C组）、LPS+氟尼辛葡甲胺处理组（D）和LPS+黄芩苷处理组（剂量分别为25、50和100 mg/kg，E、F、G组）。饲喂7 d后，攻毒前0.5 h进行药物处理，处理组及模型组腹腔注射LPS，空白对照组注射等量生理盐水，LPS诱导6 h后再次给药。试验1 d后，采集主动脉血管样品2份，通过免疫组化及免疫荧光观察血管中紧密连接蛋白（闭锁小带蛋白-1（ZO-1）、密封蛋白-1（Claudin-1）和闭合蛋白（Occludin））的表达变化；Western blotting法测定血管MLCK-MLC信号通路相关蛋白（肌球蛋白轻链激酶（MLCK）、肌球蛋白轻链2（MLC2）和磷酸化肌球蛋白轻链2（p-MLC2））的表达量。结果表明，LPS诱导后，仔猪血管中ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白表达量均极显著降低（P<0.01），黄芩苷处理能明显提高仔猪血管紧密连接蛋白的表达量。LPS模型组MLCK和p-MLC2蛋白表达量均极显著升高（P<0.01），黄芩苷能显著下调MLCK和p-MLC2表达量（P<0.05），各组间MLC2表达量差异不显著（P>0.05）。综上所述，LPS能引起仔猪的血管损伤，激活MLCK-MLC信号通路，影响紧密连接蛋白表达量及功能，黄芩苷对LPS诱导的仔猪血管紧密连接损伤具有保护作用。本试验结果为黄芩苷用于治疗猪的炎性血管损伤提供了科学依据。

为比较哈多利系博美犬老龄与青年阶段睾丸的组织结构差异及相关蛋白分布特征，探索博美犬不同年龄阶段睾丸组织结构变化及其对生殖功能的影响，本试验应用特殊染色、免疫组织化学法结合免疫荧光观察比较青年与老龄博美犬睾丸组织化学特点，并用IPP图像分析软件进行定量分析。结果显示，与青年博美犬相比，老龄博美犬生精上皮层数与厚度降低，Leydig细胞数及Sertoli细胞数显著增加（P<0.05），生精小管基底膜及血管管壁层胶原纤维与网状纤维含量明显增加。免疫组织化学结果显示，老龄博美犬睾丸细胞外基质（exreacellular matrix，ECM）相关蛋白Ⅳ型胶原（collage，Col Ⅳ）、硫酸乙酰肝素蛋白多糖（heparan sulfate proteoglycan，HSPG）含量极显著低于青年博美犬（P<0.01），层黏连蛋白（laminin，LN）含量显著低于青年博美犬（P<0.05）。免疫荧光结果显示，Col Ⅳ、HSPG和LN主要在Leydig细胞及Sertoli细胞强表达。因此，老龄博美犬胶原纤维与网状纤维含量增加，Leydig细胞数及Sertoli细胞数增多可能与其生精功能的维持相关，其生精功能的下降与Col Ⅳ和HSPG的变化密切相关。

本试验旨在研究添加酿酒酵母和地衣芽孢杆菌对瘤胃体外发酵的影响。在精粗比为50：50的日粮中添加酿酒酵母6×10¹¹ CFU/kg和5种水平的地衣芽孢杆菌[0（C1组）、1×10¹¹（C2组）、2×10¹¹（C3组）、3×10¹¹（C4组）和4×10¹¹CFU/kg（C5组）]，并且设置空白对照组（两种菌均不加）（C组），制成6种发酵底物。测定体外发酵48 h产气参数、CH₄浓度、培养液发酵指标和饲料养分消失率。结果显示：①酿酒酵母和地衣芽孢杆菌共同作用对24、48 h累积产气量、快速发酵部分产气量、慢速发酵部分产气量、潜在产气量和产气速率均有显著影响（P<0.05），且在地衣芽孢杆菌添加量为2×10¹¹ CFU/kg时产气量和各项产气参数均达到最大值。②酿酒酵母和地衣芽孢杆菌共同作用对pH影响不显著（P>0.05），但可显著影响氨态氮（NH₃-N）和微生物蛋白（MCP）产量（P<0.05）。当地衣芽孢杆菌添加量为2×10¹¹ CFU/kg时，NH₃-N浓度最小，MCP含量最大。③酿酒酵母和地衣芽孢杆菌共同作用对干物质消失率（DMD）、有机物消失率（OMD）和代谢能（ME）影响显著（P<0.05），对中性洗涤纤维消失率（NDFD）和酸性洗涤纤维消失率（ADFD）无显著影响（P>0.05），且DMD、OMD、NDFD和ME在地衣芽孢杆菌添加量为2×10¹¹ CFU/kg时最大，ADFD最小。综上所述，酿酒酵母和地衣芽孢杆菌联用能促进绵羊瘤胃体外发酵，整体来看，当酿酒酵母的添加量为6×10¹¹ CFU/kg和地衣芽孢杆菌添加量为2×10¹¹ CFU/kg时，作用效果最好。

共轭亚油酸（CLA）作为一种天然的新型功能性脂肪酸，具有抗高血压、抗癌、抗糖尿病等生物学特性，其发挥不同作用的主要活性异构体不同。近年来，随着CLA人工合成成本的降低及动物营养领域研究的深入，发现CLA既可抑制促炎因子的表达和产生，促进抑炎因子的产生，达到抗炎的效果；又可调控淋巴细胞的增殖和分化、巨噬细胞的活性、促进抗体合成，调节机体体液免疫和细胞免疫，进而增强动物免疫力；CLA还可调节多种核转录因子的表达，影响脂肪酸的摄取和氧化及脂质的合成代谢，从而降低体脂沉积，提高肌内脂肪含量，改变脂肪酸组成，改善肉品质等。因此CLA在畜牧业生产中具有潜在的应用价值和广阔的市场前景。作者主要介绍了CLA在抗炎、免疫功能、脂质代谢和抗氧化等方面的作用，综述了CLA的生物学功能及其在动物生产上的应用研究进展。此外，还探讨了CLA作为饲料添加剂，其合成纯度，在不同种类动物、不同年龄阶段的最适添加量、饲喂方式等问题，旨在为其在动物生产中的合理应用提供理论参考。

日粮能量和蛋白质水平可直接影响毛皮动物的健康状况与生产性能，决定日粮成本，产生环境污染效应。日粮中营养物质的能量比和来源会影响动物对日粮能量的利用率，从而影响日粮的有效能值。因此，探究毛皮动物能量与蛋白质需要量，明确日粮中营养物质的能量比和来源对实际生产具有重要意义。作者介绍了毛皮动物能量体系，综述了国内外毛皮动物日粮营养物质能量比和来源、能量与蛋白质需要量及其代谢规律研究进展，并对未来研究发展方向进行展望，旨在为毛皮动物精准化饲养及日粮配制提供参考。

白藜芦醇是一种含有茋类结构的天然非黄酮类多酚类化合物，具有多种生物学功能：可抑制和清除体内过量的自由基，激活机体抗氧化酶系统，发挥抗氧化功能；通过调控一系列炎症或抗炎通路，降低机体内炎性因子表达，降低炎症反应。白藜芦醇还具有调节糖脂代谢、保护心血管、抗癌、抗病毒等重要生物学功能，且具有安全高效、无残留、不产生耐药性的优点，在动物生产中的应用具有广阔的应用前景。动物试验表明，白藜芦醇能提高肉鸡平均日增重、平均采食量，降低料重比；提高育肥猪肉品质，增加背最长肌pH_{24 h}、红度、粗蛋白质和肌红蛋白含量，还可降低24 h后肌肉亮度、剪切力、滴水损失、背膘厚度；提高动物机体内抗氧化酶活性；降低炎性因子的产生，增强机体免疫；改善肠道菌群组成和肠道黏膜形态；抑制癌细胞的生成。本试验针对白藜芦醇生物学特性、生理功能及其在畜禽生产中的应用现状进行综述，旨在为其在畜禽生产中的应用提供参考依据。

为研究日粮磷（P）水平对空怀云南半细毛羊养分消化率的影响，选择25只空怀期云南半细毛羊随机分为5组，分别饲喂5种不同磷水平（0.19%、0.32%、0.45%、0.56%和0.64%）日粮，14 d预饲期后进行消化试验（5 d）。采样期每天采集各组精料200 g，粗料200 g。每只羊的鲜粪样混匀称重后取20%分成两份，一份按5%的比例加入10%的稀盐酸进行固氮。每天采集的饲料样和粪样经55℃风干后回潮24 h，粉碎过40目筛，进行相应指标的测定。结果表明：日粮磷水平对钙（Ca）的表观消化率无影响（P>0.05）。随着日粮磷水平的增加，干物质（DM）和粗蛋白质（CP）表观消化率逐渐降低，且0.19%、0.32%磷水平组极显著高于0.64%磷水平组（P<0.01）；能量（EG）、粗脂肪（EE）、粗灰分（Ash）、中性洗涤纤（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）表观消化率逐渐升高后降低再逐渐升高，拐点出现在0.45%磷水平组。随着日粮磷水平的增加，磷的表观消化率逐渐降低，0.19%磷水平组极显著高于0.45%、0.56%、0.64%磷水平组（P<0.01），其他组间差异不显著（P>0.05）。通过回归分析发现，日粮磷水平与干物质、粗蛋白质、磷的表观消化率之间呈显著的线性关系（R²分别为0.7823、0.8386、0.9976）。综上所述，在本试验条件下，日粮磷水平对空怀期云南半细毛羊钙的表观消化率无影响，随日粮磷水平的增加，干物质、粗蛋白质和磷的表观消化率逐渐降低。当日粮磷水平为0.32%时空怀期云南半细毛羊对主要营养成分的表观消化率最高。

本试验旨在研究日粮中长期添加藤茶提取物对肥育猪血清游离氨基酸、胴体性状和肉品质的影响。选用平均初始体重为30 kg的三元杂交（杜×长×大）去势公猪90头，随机分成3个处理组，分别为对照组（CON组，饲喂基础日粮）、植物精油复合物组（A组，基础日粮中添加0.03%植物精油复合物）、藤茶提取物组（B组，基础日粮中添加0.03%藤茶提取物），每组6个栏，每栏5头猪。试验猪体重达到130 kg左右出栏称重，每栏挑选最接近该栏平均体重的猪进行采血、屠宰，以A组为阳性对照。结果表明：①与CON组比较，B组的血清游离氨基酸中必需氨基酸赖氨酸（Lys）、蛋氨酸（Met）、异亮氨酸（Ile）等的含量显著升高（P<0.05），组氨酸（His）的含量显著降低（P<0.05），非必需氨基酸谷氨酸（Glu）、丙氨酸（Ala）、脯氨酸（Pro）等的含量显著降低（P<0.05）；与A组比较，B组的血清游离氨基酸中必需氨基酸Met、苏氨酸（Thr）含量显著升高（P<0.05），His含量显著降低（P<0.05），非必需氨基酸均不存在显著差异（P>0.05）。②与CON组比较，A、B组猪的腹脂重均显著提高（P<0.05），但A、B组之间腹脂重不存在显著差异（P>0.05）；宰前重、胴体重、屠宰率、背膘厚、眼肌面积等3组间均无显著差异（P>0.05）。③宰后背最长肌肉色、pH、滴水损失、大理石评分、肌内脂肪和剪切力3组间均无显著差异（P>0.05）；与CON组比较，B组肌肉嫩度评分显著提高（P<0.05），A、B组的肉汤清浊度评分均显著降低（P<0.05），而肌肉外形、气味、异味、多汁性、肉汤鲜度评分在3组间无显著差异（P>0.05）；3组的肌纤维直径和密度均无显著差异（P>0.05）。综上，日粮中长期添加0.03%藤茶提取物可以显著改变肥育猪血清游离氨基酸组成，并一定程度改善猪肉嫩度；长期添加藤茶提取物或植物精油复合物对肥育猪胴体和肌肉性状均无显著改善效果，且均易造成腹部脂肪沉积。

文章总结了畜禽生产中可利用的藻类及其营养成分，重点介绍了含藻饲料对以猪和鸡为代表的畜禽生长、免疫、肌肉品质、产蛋性能和禽蛋品质等方面的影响，还指出了藻类在畜禽饲料应用中存在的问题并提出建议，旨在为藻类资源在猪、鸡养殖生产中的广泛应用提供参考。藻类分布广、易生长、产量大，尤其是海藻，含有陆生植物不具有的生物活性物质和营养物质。将富含不饱和脂肪酸和色素的微藻添加到饲料中能改善畜禽肉品质，提升禽蛋品质；将富含多糖等活性物质的大型海藻添加到饲料中有助于提升畜禽免疫力。饲料中添加少量藻类可提高饲料稳定性，提升畜禽生长性能和饲料利用率；当藻类添加量过高时，其所含的抗营养因子会对畜禽产生负面影响，但通过适当的预处理可消除部分抗营养因子，减轻负面效应。

能量是肉鸡各种生命活动的基础，也是肉鸡饲料中价格占比最高的元素，主要源于日粮中碳水化合物、脂肪和蛋白质的化学能。准确评估肉鸡能量需要量和日粮成分能量水平在肉鸡营养和生产中具有重要的科研和经济价值。代谢能（ME）体系是目前用于家禽饲料原料能值评定的成熟体系，在家禽营养和配方中被广泛使用。但和净能（NE）体系相比，代谢能体系忽略了饲料中不同原料成分摄食和消化过程中的热增耗（HI）差异对原料能值评价的影响，降低了原料能值评定的准确性。因此，作者结合国内外肉鸡净能相关研究进展，重点就肉鸡净能测定方法、肉鸡原料净能预测方程和影响肉鸡净能体系应用因素等方面进行综述讨论，以期为净能体系在肉鸡生产中的应用提供参考。

试验旨在从分子遗传学角度探讨戴云山羊夏季维持较高繁殖力的遗传机制，从中发掘有用的遗传变异信息。利用转录组测序方法对福清山羊和戴云山羊夏季发情期卵巢组织进行研究，筛选品种间的差异表达基因（differentially expressed genes，DEGs），利用基因本体（gene ontology，GO）、蛋白相邻类的聚簇（cluster of orthologous groups of proteins，COG）和京都基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）数据库对筛选的差异表基因进行功能注释，并进行差异表达基因聚类分析，通过实时荧光定量PCR验证测序结果。结果显示，福清山羊和戴云山羊发情期卵巢的DEGs共357个，其中上调基因221个，下调基因136个。357个DEGs中的287个基因能够被GO数据库注释，78个DEGs能够被COG数据库注释，219个DEGs能够被KEGG数据库注释。KEGG数据库注释结果显示，这些差异基因显著富集的信号通路为蛋白消化吸收（protein digestion and absorption）、吞噬体（phagosome）、肺结核（tuberculosis）、胞外基质受体互作（ECM-receptor interaction）、金黄色葡萄球菌感染（Staphylococcus aureus infection）、同种异体移植物排斥（allograft rejection）等通路。经实时荧光定量PCR验证，所选基因（转录本）表达变化模式与转录组测序结果一致，表明测序结果可靠。本试验利用高通量测序获得大量山羊卵巢转录组信息，有助于从分子水平对山羊卵巢进行深入研究。

试验旨在探讨解耦联蛋白1（UCP1）基因核苷酸变异对绵羊生长性状的性别差异和胴体性状的影响，以期能够筛选出可以提升绵羊生长及胴体性状的核苷酸变异，为提高绵羊相关重要经济性状的分子遗传标记提供材料。以9个绵羊品种为研究对象，用PCR-SSCP方法检测不同性别绵羊中UCP1基因内含子5区和外显子6区变异。利用Minitab 16.0软件中一般线性模型分析内含子5区等位基因与不同性别绵羊生长性状、公羔胴体性状的关联性。结果显示，绵羊UCP1基因内含子5区和外显子6区共检测到8个核苷酸变异，其中位点c.910 G/A突变导致p.Ala304Thr氨基酸变异。生长性状关联分析结果表明，内含子5区等位基因对绵羊生长性状的影响存在性别特异性，母羔中携带等位基因A₁的群体较缺失群体具有较低的初生重（P<0.05），公羔中携带等位基因C₁的群体较缺失群体具有较高的断尾重（P<0.05），未发现其他等位基因与羔羊的生长性状存在性别特异性。胴体性状关联分析结果表明，携带等位基因A₁的群体具有较低后腿瘦肉量、腰部瘦肉量和较高的肩部瘦肉比例（P<0.05），携带等位基因C₁的群体具有较低的后腿瘦肉比例（P<0.05），其他胴体性状均没有发现与等位基因存在显著相关，基因型分析结果与等位基因分析结果一致。结果提示，UCP1基因对绵羊的生长性状影响具有性别特异性，且携带等位基因A₁的公羔群体具有较低的胴体生产性状，为提高公羔胴体生产性能提供了理论依据。

本研究旨在探究促卵泡素（follicle stimulating hormone，FSH）处理对体外培养的牛有腔卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇激素合成相关基因表达的影响。采集牛卵巢表面直径9~11 mm的有腔卵泡，用含不同浓度FSH的DMEM/F12体外培养牛有腔卵泡24 h。提取卵泡颗粒细胞、膜细胞RNA并反转录成cDNA，利用实时荧光定量PCR检测卵泡颗粒细胞、膜细胞中类固醇激素合成酶基因（CYP11A1、3β-HSD、CYP17A1、CYP19A1、17β-HSD）和促性腺激素受体基因（FSHR、LHR）的表达水平。结果显示，FSH处理上调了颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP19A1基因表达，其中，25 ng/mL FSH处理极显著上调了CYP11A1基因表达（P<0.01），10 ng/mL FSH处理显著上调了3β-HSD基因表达（P<0.05），50 ng/mL FSH处理显著上调了CYP19A1基因表达（P<0.05）；50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达（P<0.05；P<0.01），但在10和25 ng/mL FSH处理组中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达显著或极显著下调（P<0.05；P<0.01）。对FSHR、LHR基因研究结果显示，不同浓度FSH处理对颗粒细胞中FSHR、LHR基因的表达均无显著影响（P>0.05），只有25和50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中LHR基因表达水平（P<0.05；P<0.01），且不同处理组之间膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达变化与LHR基因表达变化趋势较一致。结果表明，FSH处理可提高牛有腔卵泡颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达，膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因对LH的刺激更敏感，FSH可能通过影响LHR基因的表达来调节膜细胞中类固醇合成酶基因的表达。

该文主要针对2018年国内外家兔传统育种、分子育种和繁殖技术3个方面的研究进展展开综述，其中传统育种方面主要研究了选择效应及性状评定、遗传与环境互作和种质性能测定；分子育种方面主要涉及生长、肉质、皮毛、繁殖等性状相关基因的研究；而家兔繁殖技术方面主要包括精液冷冻研究及添加物和环境对家兔繁殖的影响。2018年国内在家兔传统育种和分子育种方面研究较多，传统育种主要对一些地方品种种质性能进行了测定和比较；分子育种主要集中于肉质、皮毛和繁殖性状的研究，并获得了新的相关分子标记和基因；但家兔繁殖技术方面研究相对较少。而国外传统育种主要研究了选择与性状评定和遗传与环境互作；分子育种主要集中在筛选生长与肉质及繁殖性状分子标记的研究方面，但在皮毛性状方面的研究相对欠缺，且国外分子育种主要是使用传统的研究方法筛选分子标记或研究性状相关基因的功能，而国内多采用高通量测序技术筛选对研究性状具有重要调控功能的基因及调控网络。作者对2018年国内外家兔育种研究进行了综述，以期为今后家兔育种提供参考。

为探索胰高血糖素样肽-2受体（glucagon-like peptide-2 receptor，GLP2R）基因多态性与绵羊肉质性状的相关性，试验选用68只南非肉用美利奴羊×东北细毛羊和102只杜泊羊×小尾寒羊的杂交后代为研究对象，采用Sanger测序方法寻找GLP2R基因外显子11序列的突变位点，根据测序结果分析该突变位点的基因型频率和基因频率及卡方适合性检验、纯合度（Ho）、杂合度（He）和多态信息含量（PIC）。结果显示，绵羊GLR2R基因外显子11处存在C/T突变，存在3种基因型：CC、TC和TT，2种等位基因：C和T，其中在南非肉用美利奴羊×东北细毛羊群体中，TC基因型为优势基因型，在杜泊羊×小尾寒羊群体中，CC基因型为优势基因型；2个群体中C均为优势等位基因。卡方适合性检验结果显示，2个群体的C/T位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）；C/T突变位点在群体内变异较小且处于中度多态（0.25 < PIC < 0.5），有一定遗传学意义。不同基因型肉质性状差异结果显示，南非肉用美利奴羊×东北细毛羊TC基因型剪切力显著高于CC和TT基因型，TT基因型失水率显著高于CC和TC基因型（P<0.05）；杜泊羊×小尾寒羊CC基因型剪切力显著高于TC和TT基因型，TT基因型失水率显著高于CC和TC基因型（P<0.05）。本研究在GLP2R基因外显子处发现C/T突变，可能是影响肉质性状的潜在位点，是否能够作为遗传标记还需要进一步探索。

为了探究牛乳中体细胞评分（SCS）对日产奶量（DMY）和乳成分之间的关系，了解奶牛乳房的健康状况，本研究使用新疆昌吉地区规模化牛场共2 338头荷斯坦牛的33 290条DHI记录和生产性能数据，将DHI记录中的体细胞数（SCC）转化为SCS后分析SCS对DMY与乳成分的影响。运用SAS 9.2软件对产奶量和乳成分进行最小二乘方差分析及多重比较，并对SCS与产奶量和乳成分进行相关性分析，其固定效应主要包括SCS、场、年份、季节及胎次效应。结果表明：SCS、场效应、年份效应、季节效应和胎次效应均对DMY与乳成分有极显著影响（P<0.01）。随着SCS的增加，DMY和乳糖率（MLP）呈下降趋势，当SCS为0水平，且SCC为9×10³~17×10³个/mL时，DMY和MLP极显著高于其他SCS水平（P<0.01）；MFP和MPP呈上升趋势，当SCS为9水平，且SCC为4 529×10³~4 904×10³个/mL时，MFP和MPP最高。相关性分析结果显示，SCS与DMY、MLP呈极显著负相关（P<0.01）；SCS与MFP、MPP呈极显著正相关（P<0.01）。因此，通过分析SCS对产奶量和乳成分间的关系，可为规模化牧场奶牛日常管理提供科学依据，预防和降低患乳房炎的风险。

为探究品种、进群和配种季节、首配日龄对后备母猪繁殖性能的影响，本研究观察并记录了1 656头后备母猪的繁殖情况，分别按照品种、进群季节、配种季节、首配日龄将其分组，并进行组间统计分析。结果表明：①长白后备母猪的配种利用率（89.73%）极显著（P<0.01）高于大白后备母猪（75.00%）和长大二元杂后备母猪（80.57%）；长大二元杂后备母猪的窝均总仔数（11.36）极显著（P<0.01）高于大白后备母猪（10.35），显著（P<0.05）高于长白后备母猪（10.74）；②春季和冬季进群的长大二元杂后备母猪配种利用率（100.00%、100.00%）极显著（P<0.01）高于夏季（71.89%）和秋季（51.47%），同时夏季也极显著（P<0.01）高于秋季；秋季配种的长大二元杂后备母猪受胎分娩率（86.21%）分别显著（P<0.05）和极显著（P<0.01）低于春季（94.07%）和冬季（97.42%）；③长大二元杂后备母猪首配日龄在211~230 d组的窝均活仔数（9.30）显著（P<0.05）低于231~250 d（10.15）和251~270 d（10.36）组，并且极显著（P<0.01）低于271~290 d（10.48）组；211~230 d组的窝均合格仔数（8.96）显著（P<0.05）低于231~250 d（9.82）组，极显著（P<0.01）低于251~270 d（10.04）和271~290 d（10.21）组。综合试验结果，长白后备母猪的配种利用率较好，长大二元杂后备母猪的产仔性能较好。长大二元杂后备母猪在春、冬季节进群时配种利用率较好，在秋季配种时受胎分娩率较差；且其首配日龄在211~230 d时产仔性能较低，在211~290 d时产仔性能较高。

本研究旨在构建基于减毒鼠伤寒沙门菌的平衡致死系统。将打靶基因片段Cat基因重组入鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因位置，之后将温敏型质粒pCP20转入菌体中用以消除Cat基因片段，通过PCR技术两步法筛选出缺失株Δasd LH430；将asd⁺的原核表达质粒pYA3493转入Δasd LH430，经PCR及测序鉴定表明鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430（pYA3493）构建成功。对构建的基因缺失株研究表明，该缺失株失去了在二氨基庚二酸（DAP）阴性环境中生存的能力；糖发酵试验表明，缺失菌株在利用碳源的能力方面与亲本菌株保持一致；9种生化试验结果显示，缺失菌株遗传了亲本菌株的生化特性；遗传稳定性试验表明，缺失菌株能够稳定遗传缺失的423 bp的基因片段；将绿色荧光基因转入所构建的平衡致死系统，成功构建携带绿色荧光基因的重组菌Δasd LH430（pYA-gfp），对其研究表明该重组菌能够有效表达绿色荧光蛋白。本研究成功构建了鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430（pYA3493），能够有效表达所携带的基因，该系统可作为疫苗活载体来携带外源基因。

为开发猪O型口蹄疫病毒（FMDV）病毒样颗粒（VLPs）基因工程亚单位疫苗，试验参考GenBank中登录的FMDV毒株基因序列（登录号：JN998085），设计针对VP1、VP2、VP3和VP4 4个基因片段的特异性引物，以O型FMDV O/MYA98/XJ/2010毒株的cDNA序列为模板，对目的基因进行PCR扩增；将获得的VP3、VP1和VP4、VP2基因片段分别插入2个杆状病毒供体质粒（pFastBacDual）的p10和pH双元启动子中，构建pFBD-VP3-VP1和pFBD-VP4-VP2 2个重组转座质粒；将验证正确的2个重组转座质粒分别转化含有穿梭载体（Bacmid）的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，获得2个重组杆粒rBacmid-VP3-VP1和rBacmid-VP4-VP2，经验证正确后，对其进行扩增和提取，将其分别转染Sf9贴壁昆虫细胞，构建2个重组杆状病毒rvAc-VP3-VP1和rvAc-VP4-VP2；2个重组杆状病毒共同感染悬浮培养的Sf9昆虫细胞，利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞内对4个基因进行表达，目的蛋白通过间接免疫荧光试验（IFA）、SDS-PAGE、Western blotting及透射电镜（EM）进行检测。结果显示，本研究成功构建2株分别表达FMDV VP1、VP2、VP3和VP4 4个结构蛋白的重组杆状病毒；特异性抗体检测发现，4个蛋白VP1~VP4均成功表达，且具有良好的特异性反应；4个蛋白在Sf9昆虫细胞内能够完成自我组装，形成与天然病毒结构相似的VLPs，直径大小在25~30 nm。本研究利用共感染表达方式在Sf9昆虫细胞内成功制备出FMDV病毒颗粒，为开发高效安全的FMDV基因工程亚单位疫苗开辟了一条新思路。

试验旨在比较分析猪源约氏乳杆菌L-76和嗜淀粉乳杆菌L-102被膜态和浮游态下其上清液对病原菌的抑菌活性。采用结晶紫染色法测定L-76和L-102的生物被膜形成能力，研究其被膜态和浮游态乳杆菌上清液及上清液与不同影响因素作用后的抑菌活性，并利用扫描电镜观察其两种状态下的上清液对指示菌形态的影响。结果显示，L-76、L-102乳酸菌具有较强的生物被膜形成能力，被膜态和浮游态乳杆菌L-76、L-102具有良好的抑菌活性，其上清液经蛋白酶作用后，被膜态L-76和L-102上清液的抑菌圈直径比浮游态明显变小；经过氧化氢酶和不同温度作用后，两种状态的乳杆菌上清液的抑菌活性无明显变化（P>0.05），但在pH 3.0作用下，两种状态的乳杆菌上清液的抑菌效果最好；扫描电镜结果显示，被膜态乳杆菌上清液对金黄色葡萄球菌的形态影响略大。综上所述，两种状态下乳酸杆菌上清液中均含有抑菌物质，且被膜态乳酸杆菌上清液中的抑菌物质含量略多或活性略高。

为明确引起狐狸流产的主要原因，确定主要病原体并提出有效防控措施，试验收集了河北地区多个流产狐狸的脾脏和卵巢，利用细菌分离培养、形态观察、药敏试验、16S rRNA基因测序和序列分析及同源性比对等方法对引起狐狸流产的病原体进行分离鉴定，分析其耐药性，筛选有效治疗药物；同时对病原菌的致病力进行检测。结果显示，从流产狐狸病变的脾脏和卵巢中分离到了1株单一的革兰氏阴性菌，命名为FOX-abortion-Hebei。药敏试验结果显示，该菌对头孢哌酮等11类药物敏感，而对妥布霉素等5类抗菌药物中度敏感。动物试验结果显示，该菌株具有较强的致病性，攻毒小鼠和狐狸后均可引起动物死亡。16S rRNA测序和同源性分析结果显示，分离到的革兰氏阴性菌为奇异变形杆菌（Proteus mirabilis，PM），与已公布序列的同源性为93.6%~99.9%；系统进化树结果显示，该菌与埃及分离到的菌株（AUMC B-199）亲缘关系最近。本研究明确了狐狸流产主要是由奇异变形杆菌感染所致，也是首次在流产狐狸中分离到该菌，且能引起严重的繁殖障碍，需在狐狸养殖中加以防控。

乳房炎作为全球性奶牛养殖业的重要疾病，因对社会经济、养殖行业和人类健康的巨大影响使人们从发病机理、疾病诊断、预防等方面对其进行了不断的研究与探讨。作者立足于前期尤其是近几年的研究文献，以引起奶牛乳房炎的重要原因——病原菌为中心展开，探讨其感染类型、奶牛与病原菌及病原菌相互之间的关系。奶牛乳房炎是由包括病原菌的侵袭及宿主奶牛自身抵抗力等多种因素共同作用导致，乳腺对病原菌的入侵应答能力，病原与病原之间或促进或抑制都对其发生产生影响。金黄色葡萄球菌是公认的奶牛乳房炎的主要传染性病原菌，其独特的生物学特性使得其在体内难以治疗，并且耐药性普遍存在；无乳链球菌是环境性还是传染性病原尚有争议，在中国感染率较高，对大部分抗生素仍旧敏感，相对于其他病原菌治愈率较高，畜群清除容易；大肠埃希氏菌被作为环境性病原体，乳房炎感染的分离率仍较高，抗生素治疗结果还有待商榷，耐药性普遍存在并增强；牛支原体近十年的感染率有所上升，在国内外都是严重的乳房炎致病因素，治疗效果不佳，且耐药性正在增强，疫苗开发困难。文章对上述几种主要病原菌的流行、危害与防治等研究进行综述，以期为奶牛生产管理和科学研究方面提供参考。

为探究绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae，Mo）pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒对小鼠细胞免疫应答影响，本试验构建了绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒。用已构建的pMD19T-P30和pMD19-Hsp70质粒为模板，采用基因定点突变（SDM）原理设计引物，应用SOE-PCR扩增目的基因片段，并将其定向克隆至表达载体pcDNA3.1（+），构建重组质粒pcDNA 3.1（+）-TBP30和融合重组质pcDNA3.1（+）-TBP30-Hsp70。使用pcDNA3.1-TBP30、pcDNA3.1-TBP30-Hsp70、pcDNA3.1（+）和Elution Buffer对小鼠进行免疫，应用ELISA试剂盒检测小鼠血清中细胞因子白细胞介素-2（IL-2）、IL-4、干扰素-γ（INF-γ）分泌水平。结果显示，pcDNA3.1-TBP30-Hsp70酶切后可见大小分别约为1 413 bp的目的基因片段和5 400 bp的载体条带。与空白对照组和pcDNA3.1（+）组相比，免疫重组质粒组均可引起小鼠血清中细胞因子INF-γ、IL-2和IL-4分泌水平的增强，与空白对照组和pcDNA3.1（+）组相比差异显著或极显著（P<0.05；P<0.01）；而空白对照组和空质粒组之间差异不显著（P>0.05）；免疫pcDNA3.1-TBP30和pcDNA3.1-TBP30-Hsp70组小鼠血清IL-2、INF-γ和IL-4终分泌量增加，表明重组质粒组可刺激小鼠血清中IL-2、INF-γ和IL-4的变化，并且在时间上都呈现出先增多后减少的规律。本试验结果表明，重组质粒pcDNA3.1（+）-TBP30-Hsp70免疫小鼠后，IL-2和INF-γ分泌水平的升高，增强了机体的细胞免疫功能，进而调节机体细胞免疫影响T细胞和巨噬细胞的分泌，从而提高机体细胞免疫能力；IL-4分泌水平升高，促进机体Th2向Th1分化，维持Th1的优势状态，增强了机体的细胞免疫功能。本试验结果为绵羊肺炎支原体基因工程疫苗的研制提供了参考依据。

为获得针对猪萎缩性鼻炎主要病原体——多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素的高免疫原性抗原，本试验构建、表达并验证该毒素的亚单位蛋白抗原，将猪多杀性巴氏杆菌毒素PMT基因与pMD19-T载体进行连接、转化，经序列分析鉴定后，分别使用BamH Ⅰ、Hind Ⅲ与Blp Ⅰ限制性内切酶将其酶切为3个基因片段。将片段1（Tox1）、片段2（Tox2）和片段3（Tox3）分别亚克隆至原核表达载体pET32-b、pET32-a和pET32-b中，构建3个重组表达载体。将重组表达载体转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导后，分别进行SDS-PAGE与Western blotting检测，并使用小鼠与豚鼠初步研究其免疫原性。结果显示，构建的3个基因片段长度分别为776、409与410 bp，与GenBank中相关序列具有高度同源性；3个蛋白片段表达正常，表达量分别达到379.95、447.62与459.82 μg/mL，SDS-PAGE验证条带分别为75、77与53 ku；因3个片段位置不同，仅Tox3有Western blotting检测条带，与理论预测相符；使用3种表达蛋白免疫小鼠与豚鼠后，二免后14 d，血清经试剂盒检测阳性率达到100%，对二免后14 d小鼠攻毒保护率达到93%。本研究成功构建了PMT的3个亚单位活性片段，且具有较好的免疫原性。

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）引起家猪的一种急性、出血性、高度接触性蜱传病毒病，可致家猪网状内皮系统出血及高死亡率，是危害世界养猪业健康发展最严重的传染病之一。ASFV是一种大型的DNA病毒，结构复杂，其基因组编码大量蛋白。该论文介绍了ASFV的特性，免疫应答机制如免疫逃逸、体液免疫和细胞免疫，以及基因工程疫苗如减毒活疫苗、亚单位疫苗、病毒载体活疫苗及DNA疫苗研究的最新进展，并对中国ASF的疫苗研制、防控进行了展望。

试验旨在研究黄连解毒汤有效成分的提取及对其体内白色念珠菌的清除作用。分别采用水煎煮和乙醇回流提取法，随后乙醇提取物用3种不同极性的有机溶剂萃取（正丁醇、乙酸乙酯、石油醚），以最小抑菌浓度为指标优化出最佳抑菌效果的提取工艺；观察给药前后系统性感染白色念珠菌小鼠肾脏、肝脏的真菌负荷量及活性氧（ROS）含量水平的变化，并检测血清中细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β、白细胞介素-1β前体（pro-IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。结果显示，黄连解毒汤抑菌效果最优的提取工艺为：料液比1：30，乙醇浓度60%，温度80℃，提取时间1 h，提取次数2次，测得乙酸乙酯萃取物MIC₉₀为0.3125 mg/mL。与模型组相比，黄连解毒汤乙酸乙酯提取物（EAHD）高剂量组能显著降低小鼠肾脏真菌负荷量（P<0.05），完全治愈率达40%，并明显高于氟康唑组；EAHD低、中和高剂量组（50、100及200 mg/（kg·d））均能显著降低肝脏真菌负荷量（P<0.05），其中中剂量组和氟康唑组降低肝脏真菌负荷量效果接近。同时EAHD高剂量组能显著或极显著降低感染后小鼠肾脏和肝脏ROS含量（P<0.05；P<0.01）；显著或极显著提高血清中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量（P<0.05；P<0.01），同时降低pro-IL-1β含量。综上所述，通过优化后的提取工艺得到的EAHD具有降低模型小鼠肾脏和肝脏ROS含量和调控炎症因子的作用，进而降低炎症反应，起到保护组织和抵抗白色念珠菌的作用。

试验旨在通过高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法测定五氯柳胺阿苯达唑复方混悬液的有关物质。采用高效液相色谱法，以自身对照法计算五氯柳胺阿苯达唑复方混悬液有关物质的量。选用Thermo Hypersil BDS C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相以0.1%磷酸-10 mmol/L磷酸二氢铵水溶液为A相，以甲醇为B相，31：69（V/V）；流速为1 mL/min；进样量为5 μL；柱温30℃；检测波长295 nm。结果显示，在建立的色谱条件下，五氯柳胺阿苯达唑复方混悬液中的主成分峰与杂质峰均能基线分离。3，5，6-三氯水杨酸、2-氨基-4，6-二氯苯酚盐酸盐、五氯柳胺、阿苯达唑在5~100 μg/mL内与峰面积线性关系良好（R² ≥ 0.999），定量限分别为5 μg/mL及750、500、225 ng/mL，检测限分别为1 μg/mL及500、250、100 ng/mL，杂质3，5，6-三氯水杨酸、2-氨基-4，6-二氯苯酚盐酸盐总平均回收率分别为101.15%、100.35%，总平均回收率RSD均为0.71%（n=9）。经方法学验证，建立的HPLC方法简单、快速、准确，可用于五氯柳胺阿苯达唑复方混悬液中有关物质的测定。

为研究宠物犬源bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的携带情况，同时了解宠物犬携带bla_CTX-M基因肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征，本研究从355只宠物犬的鼻拭子和肛拭子中分离头孢噻肟耐药细菌，通过16S rDNA和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定细菌种属。对鉴定为肺炎克雷伯菌的菌株，运用PCR检测bla_CTX-M基因，药物敏感性试验测定bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型，PFGE分型和全基因组测序技术分析bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的分子特征。PCR结果显示，共分离到7株bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌，3株来自宠物肛拭子，4株来自宠物鼻拭子；药敏试验结果显示，7株菌均对头孢噻呋、头孢噻肟和阿莫西林-克拉维酸耐药，但对多黏菌素E、美罗培南和替加环素敏感。PFGE结果显示，其中3株细菌相似度为100%，而另外4株细菌相似度差异较大（<30%）。全基因组结果显示，7株菌共有5个ST分型，bla_CTX-M基因分离的亚型为CTX-M-14型（n=5）和CTX-M-3型（n=2），同时这些菌株中还携带了其他β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药基因。从本研究结果可以看出，目前宠物犬源bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的检出率较低，但其多重耐药性较严重，本研究分离的耐药基因bla_CTX-M、bla_SHV亚型与国内外流行有差异。目前宠物在抗生素的使用和监控上仍有不足，需进一步关注宠物细菌耐药性，为后续防控提供依据。

试验旨在研究汤阴北艾精油对CYP450酶各亚型活性和表达的影响。采用水蒸馏提取法提取北艾精油，通过GC-MS检测北艾精油成分。为研究北艾精油对CYP450酶活性的影响，将SD大鼠随机分为对照组（CON）和北艾精油组（EO），分别灌胃0.1%吐温-80 100 μL/g和0.1%吐温-80稀释的北艾精油（5%）100 μg/g，灌胃后给予20 μg/g各探针药物，采用鸡尾酒探针法分别对给药后5、10、20、30 min及1、2、3、6、12、24、36、48 h血浆中3种探针底物的浓度进行检测，考察北艾精油对CYP1A2、CYP2E1和CYP2D6酶活性的影响；为探究北艾精油对CYP450酶基因和蛋白表达的影响，将昆明小鼠随机分为对照组和北艾精油组，分别灌胃0.1%吐温-80 100 μL/g和0.1%吐温-80稀释的北艾精油（5%）100 μg/g，连续灌胃3日，每日2次，末次给药24 h后提取总mRNA及肝微粒体，采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法（Western blotting）测定CYP1A2、CYP2E1和CYP2D6 mRNA和蛋白表达含量。结果表明：①北艾精油主要成分为Eucalyptol；3-Cyclohexen-1-ol，4-methyl-1-（1-methylethyl）-3；（+）-2-Carene，4-.alpha.-isopropenyl-2；m-Mentha-4，8-diene，（1S，3S）-（+）-；Benzoic acid，2，4，6-trimethyl-2，4，6-trimethylphenyl ester。②对血液中非那西汀（CYP1A2底物）、右美沙芬（CYP2D6底物）和氯唑沙宗（CYP2E1底物）进行药代动力学分析可知，北艾精油具有抑制CYP2D6和CYP2E1酶活性的作用，而对CYP1A2酶活性无显著作用。③实时荧光定量PCR和Western blotting测定结果表明，北艾精油可显著抑制CYP2E1和CYP2D6酶的表达。综上，北艾精油对CYP2E1和CYP2D6酶活性和表达均具有明显的抑制作用，提示艾草精油不能同时与以CYP2D6和CYP2E1为主要代谢酶的药物同食。该研究结果可为北艾精油的合理用药提供数据基础。

为研究龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用，本试验建立Marc-145细胞模型，在研究其对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上，结合细胞病变形态观察和MTT法，设立药物组、利巴韦林阳性对照组、病毒对照组和细胞对照组，对病毒进行阻断、抑制和直接灭活3种作用方式的测定。结果显示，龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷和利巴韦林的最大安全浓度分别为6.250、0.020、0.630和0.016 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中，龙胆草水提取物对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为43.1%、57.4%和56.4%，均低于阳性对照利巴韦林，且各作用方式下细胞均发生了明显病变。龙胆草总黄酮对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为66.1%、41.1%和42.7%，其抑制作用和直接灭活作用的抑制率均低于阳性对照利巴韦林，阻断作用下细胞轻微病变。龙胆草总苷对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为33.4%、78.2%和81.9%，其抑制和直接灭活作用较强，远高于阳性对照利巴韦林，且在这两种作用方式下细胞基本保持单层完好。综合3种作用方式，3种龙胆草提取物中龙胆草总苷抗PRRSV的效果最好，其次是龙胆草水提取物和龙胆草总黄酮。