为了探讨E3泛素连接酶Nrdp1、SOCS-1基因在布鲁氏菌侵染巨噬细胞过程中对细胞凋亡的影响,构建Nrdp1、SOCS-1基因的干扰和过表达细胞模型(简称为pLL3.7-N1、pLL3.7-S1和pLEX-Nrdp1、pLEX-SOCS-1);羊种布鲁氏菌16M(简称16M) 侵染正常细胞RAW264.7及pLL3.7-N1、pLEX-Nrdp1、pLL3.7-S1、pLEX-SOCS-1组细胞,qRT-PCR检测Bax、Bcl-2、TNF-α的mRNA表达量,并通过流式细胞仪术检测细胞凋亡率。结果显示,试验成功构建并筛选出干扰和过表达Nrdp1、SOCS-1效果最好的pLL3.7-N1、pLEX-Nrdp1、pLL3.7-S1、pLEX-SOCS-1细胞模型;16M侵染各组细胞,与对照组相比,在不同的时间段pLL3.7-N1、pLL3.7-S1、pLEX-Nrdp1、pLEX-SOCS-1组细胞的Bcl-2和Bax的mRNA表达量差异显著(P < 0.05);pLL3.7-S1组细胞的TNF-α mRNA显著降低(P < 0.05),而pLEX-SOCS-1组显著升高(P < 0.05);pLEX-Nrdp1、pLEX-SOCS-1组细胞凋亡率显著升高(P < 0.05),而pLL3.7-S1组显著降低(P < 0.05)。研究结果表明,Nrdp1、SOCS-1基因与16M诱导的细胞凋亡密切相关,为16M胞内寄生机制的研究奠定了基础。

试验旨在筛选有效抑制猪紧密连接蛋白1 (zonula occludens-1,ZO-1)基因表达的shRNA干扰片段,为后期利用RNA干扰技术深入了解ZO-1基因在猪卵母细胞成熟过程中的功能奠定基础。本研究首先克隆了猪ZO-1基因,并构建了其真核表达载体,而后筛选了有效抑制ZO-1基因表达的shRNA干扰片段。结果表明,猪ZO-1基因编码区长度为3 036 bp,多重序列比对结果显示,猪ZO-1基因核苷酸序列与牛、羊、马和人相应序列的同源性分别为88%、88%、87%和85%。构建的pDsRed-N1-ZO-1真核蛋白融合表达载体经脂质体法转染HEK293T细胞后,可观察到清晰的RFP红色荧光蛋白表达。将靶质粒与shRNA干扰质粒共转染HEK293T细胞48 h后,与对照组相比,可观察到红色荧光表达得到抑制。实时荧光定量PCR结果显示,设计合成的2条shRNA对猪ZO-1基因表达均有抑制效果,其中ZO-1 shRNA201的抑制效果显著高于ZO-1 shRNA1276 (77.8%和67.0%,P < 0.05)。

本研究旨在分析绿壳蛋鸡与白来航蛋鸡microRNA变异及其靶基因,将已鉴定的microRNA与预测microRNA组成全基因组的microRNA,并通过与GGRS得到的两种鸡群体SNP位点进行映射,挖掘含SNP的microRNA。利用生物信息学的方法,对含SNP的microRNA进行靶基因预测,并对直接含有SNP的mature-microRNA进行聚焦。将这些靶基因进行富集,一共得到22个GO分类和10条KEGG信号通路与3个主要IPA调控网络,发现其在与生长相关的mTOR信号通路、Wnt信号通路、生长激素受体网络、胰岛素样生长因子Ⅰ受体网络得到了富集,与产蛋性状相关的卵母细胞减数分裂信号通路、黄体酮卵母细胞成熟信号通路得到了富集。此研究方法和结果可以给后期研究提供参考。

研究布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7后类泛素SUMO-1的表达变化,并构建小鼠类泛素SUMO-1基因过表达的慢病毒载体。本试验分别利用布鲁氏菌16M、M5-90侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测细胞中类泛素SUMO-1的表达;利用DNA重组技术将类泛素SUMO-1基因片段插入到慢病毒表达载体pLEX-MCS 中,获得重组慢病毒质粒pLEX-SUMO-1,测序鉴定成功后转染293T 细胞,包装好的慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,并利用实时荧光定量PCR、Western blotting方法分别检测细胞中类泛素SUMO-1 mRNA及蛋白表达水平。结果表明,布鲁氏菌16M、M5-90侵染细胞后,在感染早期类泛素SUMO-1的表达受到抑制,12 h内呈现下降趋势,在12 h后开始上升,极显著高于正常水平(P < 0.01);测序结果证明,类泛素SUMO-1基因正确插入到pLEX-MCS 质粒中;实时荧光定量PCR方法检测表明,类泛素SUMO-1 mRNA转录水平上调。由此可见,布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7能够引起细胞内类泛素SUMO-1表达的改变;成功构建了类泛素SUMO-1慢病毒过表达载体,为进一步研究类泛素SUMO-1的功能奠定基础。

试验采用RT-PCR方法,以麦洼牦牛脾脏cDNA为模板扩增牦牛低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因,并运用生物信息学软件对其序列进行分析。结果发现,扩增得到的麦洼牦牛HIF-1α基因编码区长为2 472 bp,编码823个氨基酸;蛋白质预测结果显示,该蛋白质分子质量为92.13 ku,等电点5.09,为亲水性蛋白,二级结构以随机卷曲和α-螺旋为主,有69个磷酸化位点和4个N-糖基化位点;系统进化树显示,麦洼牦牛与牦牛、野牦牛、普通牛亲缘关系最近。本试验成功克隆麦洼牦牛HIF-1α基因并对其序列进行了分析,为进一步研究HIF-1α基因的功能提供参考。

试验旨在研究布鲁氏菌侵染宿主细胞过程中AIR对由布鲁氏菌感染引发的炎症反应的影响。本试验分别对膜融合蛋白Tecpr1中AIR结构域进行干扰(I-A)、过表达(O-A)、干扰后回补(OA-IA),建立羊种布鲁氏菌16M侵染细胞的模型。以二氯荧光素(DCFH-DA)为探针,利用激光共聚焦显微镜观察 ROS产生的变化及各组细胞线粒体分布的动态变化;通过qRT-PCR技术检测16M侵染宿主细胞引起NLRP3、 ASC和Caspase-1表达量的变化;通过ELISA方法检测IL-18、IL-1β和Caspase-1炎性因子表达量的变化。结果表明,16M能以时间依赖性方式诱导RAW264.7细胞产生ROS,I-A组和 O-A组线粒体异常集聚程度高;qRT-PCR及ELISA检测结果表明,16M侵染宿主细胞能够引起不同处理组细胞中炎性相关基因NLRP3、ASC和Caspase-1及炎性因子IL-18、IL-1β和Caspase-1表达量的变化。AIR缺失后,ROS 释放量发生变化,线粒体出现异常集聚,且AIR与炎性小体的活化、炎症反应的发生密切相关。

为了建立猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗体检测的间接ELISA方法,本研究以纯化的原核表达的PEDV截短N蛋白作为包被抗原,建立了PEDV抗体检测的间接ELISA方法,将该方法命名为rnPED-ELISA。该抗原不与其他常见的7种猪病的阳性血清发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于13%;rnPED-ELISA相对于血清中和试验(SN)试验的敏感性为93.33%,特异性为90.00%;rnPED-ELISA与TSZ全病毒抗体检测试剂盒的符合率达91.67%。采用rnPED-ELISA方法检测200份临床样品,PEDV抗体阳性检出率为69.5%。本试验建立的rnPED-ELISA方法具有良好的敏感性和特异性,可为免疫猪群抗体监测和猪流行性腹泻流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。

为建立单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,本研究以LM iap基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR快速检测LM的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有LM菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为6.5 CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的139份样品进行检测,共计检出3份LM阳性样品,与国标法(GB 478930-2010)检测结果一致。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。

本试验以6月龄伊犁马驹为试验动物,饲喂不同水平的精料补充料,通过全收粪、收尿法进行消化代谢试验,探究饲喂不同水平的精料补充料对6月龄伊犁马消化代谢、血液生化指标及体增重的影响,为6月龄伊犁马驹的科学饲喂提供依据。试验选用平均体重为(145.28±1.69) kg的6月龄断奶伊犁公马驹20匹,随机分为4组,每组5匹,分别为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ组,各组每匹马每天饲喂4 kg苜蓿干草,在此基础上分别饲喂精料补充料0.4、0.6、0.8、1.0 kg。进行20 d的消化代谢试验,其中预试期16 d,正试期4 d。结果表明,随精料补充料饲喂水平的增加6月龄伊犁马马驹对营养物质的摄入量,干物质、有机物、粗蛋白质、钙的消化量,以及消化能、代谢能、氮沉积率、钙沉积率均增加,对6月龄伊犁马马驹血浆中总蛋白、球蛋白、白蛋白及血液尿素氮含量均无显著影响(P > 0.05),但6月龄伊犁马马驹血液中球蛋白的含量有增加的趋势,血液中尿素氮的含量有降低的趋势;此外试验期内平均日增重随精料补充料饲喂水平的增加呈上升趋势。因此,增加6月龄伊犁马马驹精料补充料的饲喂水平可提高营养物质摄入量、消化率及沉积率,还可增强机体免疫能力、促进氮沉积并提高马驹的平均日增重。

本试验旨在研究日粮中添加不同水平莫能菌素对泌乳期奶牛生产性能和养分消化率的影响。选取泌乳期荷斯坦奶牛12头,采用重复4×4拉丁方试验设计,随机分成4组,每组3个重复,对照组饲喂基础日粮(A组),试验组分别在基础日粮的基础上添加300 (B组)、400 (C组)、500 (D组)mg/(头·d)莫能菌素。试验分为4期,每期28 d (7 d预饲期,21 d正饲期)。结果表明,日粮中添加莫能菌素可以提高泌乳期奶牛产奶量和乳糖率,降低乳脂率,其中C组和D组的平均日产奶量分别较对照组提高4.08%和4.57%(P < 0.05),D组的乳糖率较对照组提高1.99% (P < 0.05),D组的乳脂率较对照组降低7.45% (P < 0.05),但对4%乳脂校正乳(FCM)、乳中非脂固型物(SNF)比例和乳蛋白率的影响不显著(P > 0.05)。莫能菌素会提高奶牛的体增重(BWG)及粗蛋白质(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的表观消化率,其中D组的BWG较对照组提高34.62% (P < 0.05),3个试验组的CP消化率分别较对照组提高3.73%、4.35%和5.35% (P < 0.01),D组的NDF和ADF消化率分别较对照组提高7.24%和9.08% (P < 0.05),另外,莫能菌素对泌乳期奶牛的粗脂肪(EE)、钙(Ca)和磷(P)的消化率及干物质采食量(DMI)影响不显著(P > 0.05)。综上所述,在泌乳期奶牛日粮中添加莫能菌素可以促进奶牛机体代谢,提高奶牛养分消化率和经济效益,其适宜添加量为400~500 mg/(头·d)。

试验旨在研究绿汁发酵液(previously fermented juice,PFJ)对柱花草青贮营养成分及品质的影响。以热研2号柱花草为原料进行青贮试验,设对照组(直接青贮)和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ组,各试验组PFJ添加比例为1%、2%、3%、4%和5%,30 d后测定柱花草青贮饲料主要营养成分含量及发酵品质。结果显示,与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组粗蛋白质(CP)含量显著提高(P < 0.05),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量均有不同程度的降低,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组柱花草青贮的饲料相对值(RFV)显著提高(P < 0.05)。添加PFJ试验组与对照组相比显著降低了青贮饲料的pH (P < 0.05),乙酸和丙酸含量均有不同程度的降低,乳酸含量显著提高(P < 0.05)。柱花草直接青贮品质较差,添加PFJ提高了饲料青贮质量评分等级。综上所述,添加PFJ可提高营养价值,明显改善柱花草青贮品质,PFJ添加量为4%时青贮效果最好。

试验旨在研究4种日粮对1岁伊犁马消化代谢、血液生化指标的影响。选用平均体重为(227.38± 16.48)kg的1岁伊犁马16匹,随机分为2组,每组8匹,采用分期分组的试验方法,分别为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组。试验Ⅰ组每匹马饲喂苜蓿干草8 kg/d、颗粒精料0 kg/d;试验Ⅱ组每匹马饲喂苜蓿干草7 kg/d、颗粒精料1 kg/d;试验Ⅲ组每匹马饲喂苜蓿干草6.3 kg/d、颗粒精料1.7 kg/d;试验Ⅳ组每匹马饲喂苜蓿干草5.6 kg/d、颗粒精料2.4 kg/d。进行21 d的消化代谢试验,其中预试期15 d,正试期6 d。结果表明,1岁伊犁马对干物质、有机物、粗蛋白质、磷的消化率随日粮中颗粒精料水平的增加呈增长趋势,而中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、钙的消化率呈下降趋势;消化能、代谢能随日粮中颗粒精料水平的增加呈增长趋势(P > 0.05);氮沉积量、氮沉积率随日粮中颗粒精料水平的增加而增长,其中试验Ⅲ、Ⅳ组氮沉积量、氮沉积率极显著高于试验Ⅰ组(P < 0.01);钙沉积量、钙沉积率随日粮中颗粒精料水平的增加而降低,且试验Ⅰ组极显著高于试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(P < 0.01);磷沉积量随日粮中颗粒精料水平的增加而极显著增加(P < 0.01);各组血浆中总蛋白含量差异不显著(P > 0.05),但试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血浆尿素氮含量均低于试验Ⅰ组(P > 0.05)。综合1岁伊犁马对4种日粮的消化代谢情况及血液生化指标,1岁伊犁马粗蛋白质适宜需要量为14.28 g/kg代谢体重,可消化蛋白适宜需要量为9.16 g/kg代谢体重,代谢能适宜需要量为1.74 MJ/kg代谢体重,消化能适宜需要量为1.41 MJ/kg代谢体重。

为研究中国西门塔尔牛的肌纤维和肉品质特性,本试验以10头中国西门塔尔公牛为研究对象,测定了背最长肌、腰大肌和半腱肌的组织学特性、pH、系水力、剪切力和质构剖面分析。结果显示,肌纤维直径Ⅰ型 < ⅡA型 < ⅡB型,腰大肌中Ⅰ型具有最高的肌纤维数比例和肌纤维面积比,背最长肌和半腱肌中ⅡB型具有最高的肌纤维比例和肌纤维面积比。与腰大肌相比,背最长肌和半腱肌具有较低pH、弹性和压力失水率,较高的剪切力、硬度和回复性。综上所述,肌纤维特性影响牛肉品质,特别是牛肉的质构特性,提高Ⅰ型纤维比例和降低ⅡB型纤维比例能够改善牛肉嫩度。

试验旨在研究不同营养调控剂对冷季放牧绵羊肉品质的影响。采用单因素完全随机区组试验设计,将48只健康、体重相近(28.01±1.70) kg的7月龄放牧母羊随机分为4组,分别为Ⅰ组:不补饲;Ⅱ组:补饲常规精料;Ⅲ组:补饲常规精料+复合配方1组(0.30%苹果酸、0.06%半胱胺、0.08%糖萜素);Ⅳ组:补饲常规精料+复合配方2组(0.60%苹果酸、0.12%半胱胺、0.16%糖萜素)。其中每组3个重复,每个重复4只,试验期45 d,试验期末测定采集各组母羊背最长肌肌肉样品,测定肉质养分、氨基酸的含量。结果显示:①试验Ⅲ组的粗脂肪含量比Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组分别提高27.92% (P < 0.05)、16.67% (P > 0.05)和7.85% (P > 0.05);试验Ⅲ组的粗蛋白质含量比Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组分别提高7.35% (P < 0.05)、3.94% (P > 0.05)和2.49% (P > 0.05);补饲组的剪切力均极显著低于未补饲组(P < 0.01),试验Ⅲ组较Ⅱ组降低3.98% (P < 0.05)。②试验Ⅳ组的脯氨酸含量较Ⅰ和Ⅱ组分别提高38.34% (P < 0.01)和22.75% (P < 0.05),试验Ⅲ组的脯氨酸含量较Ⅰ和Ⅱ组分别提高19.63% (P > 0.05)和6.15% (P > 0.05);其余氨基酸含量在各组之间均差异不显著(P > 0.05)。综上,补饲复合营养调控剂可改善绵羊肉质剪切力,提高绵羊肌内粗脂肪、粗蛋白质和氨基酸含量,改善嫩度风味和营养价值。考虑综合因素,试验Ⅲ组补饲效果最为显著,补饲复合配方1组对改善冷季放牧绵羊肉品质有实际指导意义。

试验旨在研究添加不同水平维生素A (VA)与蛋氨酸锌(ZnMet)对断奶仔猪生长性能、部分血清抗氧化指标的影响。采用2因素3水平析因设计,选择81头28日龄断奶、体重为(7.94±0.62) kg的健康杜×长×大三元仔猪,按体重和性别随机分为9个处理组,每个处理3个重复,分别饲喂含不同剂量VA (0、3 000及6 000 IU/kg)和ZnMet (0、300及400 mg/kg)的日粮。试验预饲期7 d,试验期21 d。试验第0、7和14天逐头空腹称重,记录每日采食量并计算仔猪平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。试验开始(35日龄)与结束(56日龄)时,每组随机抽取3头猪,早晨空腹采血,制备血清,测定血清抗氧化指标。结果显示:①与对照组相比,单独添加VA或ZnMet均能提高仔猪ADG (P < 0.05),但对F/G无显著影响 (P > 0.05);VA和ZnMet对仔猪ADG有互作效应,联合添加可以显著提高仔猪ADG (P < 0.05),但二者对F/G无互作效应。②与对照组相比,35日龄时,除单独添加300 mg/kg ZnMet组的GSH-Px活性无显著变化外,其他试验组的CuZn-SOD及GSH-Px活性水平均显著提高(P < 0.05);56日龄时,与对照组相比,单独添加ZnMet或VA均能显著提高仔猪血清CuZn-SOD活性水平(P < 0.05);同时添加VA与ZnMet能显著提高仔猪血清GSH-Px活性(P < 0.05),而单独添加VA或ZnMet虽能提高仔猪血清GSH-Px活性,但效果不显著(P > 0.05)。结果提示,日粮中单独添加VA、ZnMet或联合添加这两种营养素均能促进断奶仔猪生长,改善断奶仔猪抗氧化功能。

试验旨在研究小鼠急性汞中毒后血液、肝脏及肾脏的中毒表现及木犀草素对急性汞中毒小鼠血液指标、肝脏及肾脏的影响。将28只小鼠随机分成4组,分别为对照组(腹腔注射0.9%生理盐水)、木犀草素组(灌胃100 mg/kg木犀草素)、氯化汞组(腹腔注射4 mg/kg氯化汞)和氯化汞+木犀草素组(腹腔注射4 mg/kg氯化汞,灌胃100 mg/kg木犀草素)。检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性,肌酐(CREA)和尿素氮(BUN)水平,血液白细胞(WBC)、红细胞(RBC)和血红蛋白(HGB)水平及肝脏组织谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,并观察肝脏、肾脏组织形态学改变。结果显示,与对照组相比,氯化汞组的血清ALT、AST活性极显著升高(P < 0.01),血清CREA、BUN,血液WBC及肝脏组织MDA含量均显著增加(P < 0.05),血液RBC、HGB及肝脏组织GSH水平均显著降低(P < 0.05),肝脏、肾脏病理变化明显。与氯化汞组相比,氯化汞+木犀草素组的血清ALT、AST活性,CREA和BUN,血液WBC及肝脏组织MDA含量均显著降低(P < 0.05);血液RBC、HGB及肝脏组织GSH含量均显著升高(P < 0.05),肝脏、肾脏病理变化减轻。小鼠急性汞中毒后,其中毒表现为炎症和贫血的发生及肝脏、肾脏不同程度的损伤,木犀草素可减弱急性汞中毒小鼠血液、肝脏和肾脏的毒性作用。

乳酸菌微胶囊技术是将核心菌体包覆于胃不溶、肠溶性的安全、特殊壁材中,可增加菌体对不良环境(胃液、胆盐等)的抵抗力,使其顺利到达肠道以发挥益生作用,且利于储存、加工和运输。利用喷雾干燥技术进行微胶囊制备具有包被速率快、生产成本低、适用于连续化生产等优点,但由于其存在较高进出口风温度及快速脱水过程,对于饲用乳酸菌的微胶囊制备在壁材物质及制备参数等方面具有严格的要求。为此,作者从工艺过程、壁材选择、工艺参数选择及其产品效果分析等方面,对近年来喷雾干燥技术在乳酸菌微胶囊制备方面进行了综述,以期为推动乳酸菌微胶囊制剂的研制及其在动物生产中的应用提供依据。

试验旨在研究内蒙古草原放牧肉牛春季最佳补饲量。选择75头体重为(281.19±17.15)kg的健康西门塔尔杂交肉牛随机分为5组(A、B、C、D、E组),每组15头牛,1头牛为1个重复。各组分别按体重的0、0.3%、0.6%、0.9%及1.2%补饲精料,依次为0、0.8、1.7、2.5及3.4 kg/d,其他放牧条件相同。预试期15 d,正试期60 d。结果表明,随着精料补饲量的增加,肉牛的平均日增重依次显著增加(P < 0.05),D组平均日增重较A、B、C组分别提高331.25%、130.00%及38.00%,日粮中干物质和粗蛋白质的表观消化率显著高于其他各组(P < 0.05);D组日均收入为11.22元,分别较A、B、C及E组显著提高了183.33%、102.53%、36.17%及20.52%(P < 0.05),育肥效益最好。综合以上结果,内蒙古草原春季放牧条件下,肉牛每天的最佳补饲量为2.5 kg,在此条件下可获得较高的日增重及较高的经济收益。

试验旨在研究鼠李糖乳杆菌发酵中草药复合枯草芽孢杆菌对白羽肉鸡生长后期免疫性能及大肠杆菌感染的影响。选取体重相似、健康状况基本相同的360只1日龄肉鸡随机分成3个组,每组4个重复,每个重复30只。试验预试期7 d,正试期35 d。试验Ⅰ组为阳性对照组,试验Ⅱ组为阴性对照组,均饲喂基础日粮,试验Ⅲ组在基础饲料中添加1%发酵中草药制剂,且试验Ⅱ、Ⅲ组在肉鸡35日龄时腹腔注射大肠杆菌菌悬液1 mL,连续攻毒2 d,测定肉鸡死亡率、免疫器官指数、盲肠菌群含量、免疫球蛋白水平和白介素含量。结果表明,腹腔注射大肠杆菌造成鸡大量死亡,试验Ⅱ组高达75.00%,显著高于试验Ⅰ、Ⅲ组(P < 0.05),使用发酵中草药微生态制剂后鸡死亡率显著下降(P < 0.05),仅有23.33%;注射大肠杆菌后试验Ⅲ组脾脏指数和法氏囊指数显著升高(P < 0.05),但使用发酵中草药微生态制剂后脾脏指数接近于试验Ⅰ组,而法氏囊指数稍高于试验Ⅰ组,说明发酵中草药微生态制剂可以抵抗大肠杆菌感染,脾脏和法氏囊发育不受影响;注射大肠杆菌后试验Ⅲ组大肠杆菌数量显著下降(P < 0.05),但试验Ⅲ组由于饲喂发酵中草药复合芽孢杆菌制剂,肠道乳杆菌数量显著增加,抑制大肠杆菌的繁殖,从而大肠杆菌数量与正常饲喂状态下的试验Ⅰ组趋于一致;42日龄时,盲肠内容物sIgA含量试验Ⅲ组分别高出试验Ⅰ、Ⅱ组11.99%和36.56%(P < 0.05),血清IgG含量试验Ⅲ组分别高出试验Ⅰ、Ⅱ组14.68%和28.15%(P < 0.05);42日龄时,试验Ⅱ组IL-2含量最低,显著低于试验Ⅲ组(P < 0.05),试验Ⅲ组IL-6含量显著低于试验Ⅱ组(P < 0.05)。

2015年3月至2015年8月在新疆伊犁新生源公司巴彦岱牛场为研究大提琴、小提琴及低音提琴演奏的轻音乐对泌乳牛神经递质和泌乳性能的影响。选取体重、年龄、胎次及泌乳量接近,健康状况良好,饲养管理水平完全一致的荷斯坦泌乳牛36头,随机分成2组,试验组和对照组各18头。试验分3期,每期40 d,每隔20 d采集一次血样和乳样并测定单头产奶量。结果显示,与对照组相比,3种乐器演奏的音乐均能促进产奶量,其中小提琴音乐组的产奶量显著高于对照组(P < 0.05);小提琴演奏的音乐能显著增加血清中甘氨酸(Gly)含量,显著降低神经肽Y (NPY)含量(P < 0.05);低音提琴演奏的音乐能显著降低NPY含量(P < 0.05)。结果提示,可选用小提琴演奏的音乐作为奶牛生产生活的环境音乐。

为了探讨救必应水提取物的抑菌作用及抑菌机理,采用2倍微量稀释法和琼脂平板稀释培养计数法,测定救必应水提取物对产ESBLs(extended spectrum β-lactamases)细菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC),通过对细菌生长曲线、细菌超微结构、细胞壁和细胞膜通透性变化试验、核酸合成抑制试验研究救必应水提取物的抑菌机理。结果表明,与不添加提取物的对照组相比,救必应水提取物能够影响细菌的生长规律,使细菌破损严重,细胞壁和细胞膜通透性增加,细胞质外渗,菌液中AKP含量、可溶性蛋白含量增多、大肠杆菌DNA荧光强度明显减弱。研究表明,救必应水提取物的抑菌机理是通过细菌细胞壁和细胞膜通透性的变化,抑制细菌核酸的合成实现的。

试验旨在探讨党参多糖(CPPS)和硒化党参多糖(sCPPS₅)对环磷酰胺(CY)所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响。将96只小鼠随机分为8组,分别为正常对照组、CY模型组、CY+CPPS低、中、高剂量组、CY+sCPPS₅低、中、高剂量组。正常对照组和CY模型组给予生理盐水,其余每组均用CPPS和sCPPS₅按0.2、0.4、0.6 mg/g灌胃小鼠,每天1次,连续给药10 d。第11天,除正常对照组外,其余组分别腹腔注射0.04 mg/g CY,每天1次,连续3 d。各试验组末次给药24 h后,检测各组小鼠免疫学指标。结果显示,CPPS和sCPPS₅各组的脾脏、胸腺指数均显著高于CY模型组(P < 0.05);刀豆蛋白A (ConA)和脂多糖(LPS)刺激时,CPPS和sCPPS₅试验组的A_{570 nm}值显著高于CY模型组(P < 0.05);CPPS和sCPPS₅试验组IgG和IgM的含量显著高于CY模型组(P < 0.05),sCPPS₅效果优于CPPS;综述所述,CPPS和sCPPS₅均能够增强免疫抑制小鼠的免疫活性,硒化修饰后的CPPS效果优于未硒化修饰的CPPS,说明硒化修饰可以提高多糖的免疫活性。

本试验旨在探讨疯草解毒用复方中药制剂在大鼠体内的药代动力学特性。在确定制剂中有效成分的基础上,采用紫外分光光度法检测大鼠经口服药物制剂后体内有效成分的吸收情况,并计算相应的药代动力学参数。本试验建立了适用于检测8种成分的紫外光谱分析法;制剂经口服给药后能在胃肠道被快速吸收,1 h左右大鼠体内各组分的血药浓度达到最大,药效发挥迅速;党参皂甙、多糖和阿魏酸代谢速度快,甘草酸、柴胡皂苷、黄芪甲苷、升麻素苷的代谢产物在体内作用时间较长。复方中药制剂在试验大鼠体内的药代动力学过程基本符合二室模型(陈皮苷除外)。所选用的测定方法简便、准确度和稳定性较高,适用于该制剂的药代动力学研究。

甘氨酰tRNA合成酶(glycyl-tRNA synthetase,GlyRS)是重要的氨基酰tRNA合成酶(aminoacyl-tRNA synthetases,aaRSs)家族成员。目前,国内外关于GlyRS 在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。为了揭示GlyRS的表达与奶牛乳腺发育与泌乳之间的关系,本试验应用EdU免疫荧光法、流式细胞术检测GlyRS对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)中DNA数目及细胞周期的影响,实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测GlyRS对BMEC中Cyclin D1的表达影响。结果显示,GlyRS过表达时,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均增加;GlyRS抑制后,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均减少。表明GlyRS通过上调Cyclin D1的表达,加快细胞周期转换,增加DNA合成数目,从而促进BMEC增殖。

试验采用酶消化及机械法相结合的方法培养奶牛子宫内膜上皮原代细胞及传代细胞。酶消化法采用0.1%链蛋白酶于4 ℃消化16~20 h,机械法采用手术刀刮取子宫角内膜。获得原代分离的细胞后,采用胰蛋白酶消化法进行细胞的传代培养。试验应用角蛋白抗体对细胞进行免疫细胞化学鉴定,并对第3代奶牛子宫内膜上皮细胞用MTT法绘制增殖曲线。结果显示,细胞在相差显微镜下呈明显的上皮样细胞形态,细胞传代到第8代时,仍能保持与原代细胞相似的细胞形态特征及生长状态。同时细胞角蛋白染色阳性细胞占80％以上。试验结果表明,应用酶消化和机械法可成功分离并培养数量、活力和纯度均较高的子宫内膜细胞,可操作性强,可在具备基本细胞培养条件的实验室应用推广。

本试验旨在研究紫菀乙醇提物对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能的影响。采用离体气管恒温灌流的方法,将豚鼠气管制成气管螺旋条,通过 BL-420F 生物机能实验系统测定其张力的变化,观察紫菀乙醇提物对离体气管平滑肌静息状态下的舒张作用,以及在氯化乙酰胆碱(Ach)、磷酸组胺(His)、CaCl₂条件下和无钙下Ach诱导细胞内钙释放和外钙内流所致两种收缩条件下对离体气管平滑肌张力变化的影响。试验结果显示,低浓度紫菀乙醇提取物(0.002~0.008 g/mL)对静息状态下豚鼠离体气管平滑肌具有一定的收缩作用,高浓度(0.008~0.196 g/mL)时具有舒张作用;低、中、高3个剂量组均可抑制Ach、His和CaCl₂引起的气管平滑肌收缩强度,使各致痉剂的量效曲线非平行右移并降低最大效应。紫菀乙醇提取物对His的抑制作用强度最大,其次为Ach,最后是CaCl₂,且均呈剂量依赖性。以上结果表明紫菀乙醇提物具有舒张气管平滑肌的作用,其机制可能与抑制豚鼠气管平滑肌M受体、H₁受体和阻断Ca²⁺通道从而抑制细胞Ca²⁺内流有关。

试验旨在建立同时检测鸡蛋中土霉素、四环素、金霉素和多西环素4种四环素类药物残留的高效液相色谱法。将鸡蛋样品用0.1 mol/L Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取,通过Oasis MAX固相萃取柱净化,以乙腈—三氟乙酸(0.01 mol/mL)为流动相,梯度洗脱,反相液相色谱分离测定。结果显示,4种四环素类药物在30~1 000 ng/g范围内呈良好线性关系,检出限为10 ng/g,定量限为50 ng/g,平均回收率为67.3%~81.4%,日内相对标准偏差为2.7%~14.3%,日间相对标准偏差为0.9%~5.0%。本研究建立的高效液相色谱法可同时检测鸡蛋中的土霉素、四环素、金霉素和多西环素的药物残留,该方法灵敏度、准确度和精密度较高,操作快速、简单。

试验旨在研究不同激素配比及表皮生长因子(EGF)浓度对牛卵母细胞体外成熟及卵母细胞质量的影响。将随机分组的卵丘-卵母细胞复合体于添加FSH+LH、HMG、FSH+LH+E₂、HMG+E₂ 4种不同激素组合配比的成熟基础液中培养,对比其体外成熟率,比较了EGF对牛卵母细胞体外成熟率和孤雌胚胎体外发育的影响,并采用TUNEL法检测添加不同浓度EGF的牛孤雌激活囊胚细胞凋亡情况。结果表明,添加HMG的成熟试验结果稳定,E₂对牛卵母细胞成熟有一定的促进作用,HMG+E₂联合使用可以得到高效稳定的成熟结果;在此基础上,在成熟液中添加30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟质量、胚胎发育及降低胚胎细胞凋亡都有明显的促进作用。因此,在体外成熟培养液中添加0.075 IU/mL HMG、1 μg/mL E₂和30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟和质量较为有益。

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是模式识别受体的主要类别,除表达于经典免疫细胞外,多种哺乳动物的卵巢和生殖道同样存在此类受体分子,其在卵巢活动中发挥着重要作用。TLRs在排卵过程中的生物学功能是生殖免疫学领域研究的主要内容之一。文章主要从TLRs在哺乳动物卵巢中的表达与分布、表达与功能的调节机制及在排卵过程中所发挥的作用及意义等方面进行了综述,并对其在排卵相关疾病中的可能作用进行了简要分析,以期为生殖免疫学相关领域研究提供参考。

本研究采用对流免疫电泳方法(CIEP)检测辽宁水貂养殖场疑似水貂阿留申病毒(aleutian mink disease virus,ADV)水貂血清抗体,采集抗体阳性水貂的肝脏、脾脏、肾脏和肠系膜淋巴结组织,电镜观察存在细小病毒样颗粒。组织液研磨无菌处理后,接种CRFK细胞,盲传6代,取病毒细胞分离液用PCR方法检测,呈ADV阳性。将病毒分离液纯化后接种健康水貂,隔离观察,接种后3 d即出现食欲减退,贫血,被毛无光泽,后期出现拒食、狂饮、死亡,个别水貂出现神经症状,表现抽搐、痉挛、步态蹒跚、共济失调,证明分离获得的病毒为ADV强毒株,命名为ADV-LN株。

为了给天津某规模猪场提供猪传染性胸膜肺炎(PCP)的科学防控和合理的用药方案,本试验对该猪场疑似患PCP的病猪进行临床综合诊断和病理组织学观察,无菌采集病料,通过细菌的分离与培养、镜检、生化试验、卫星试验、PCR检测、动物致病性试验及药敏试验等实验室方法对分离菌进行系统分析。结果发现,病猪呼吸困难,病理剖检和病理组织学观察可见有典型的纤维素性肺炎变化;显微镜下分离菌呈多形性的革兰氏阴性杆菌,且其生化试验、卫星试验结果与传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)特性一致;用APP APX ⅣA毒素基因特异性引物扩增结果为阳性;该APP分离菌对小鼠具有致病性,且对头孢噻肟、氟苯尼考等药物高度敏感。根据实验室检测结果并结合临床综合诊断,最终判定该细菌分离株为猪传染性APP。

为获得来源于藏绵羊的益生菌菌株,对健康母藏绵羊新鲜粪便进行90 ℃水浴处理5 min以筛选具有抗逆性的芽孢杆菌,再综合形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析进行鉴定,通过抑菌试验、耐酸、耐胆盐试验及产水解酶试验等方法对其生物学特性进行研究。结果显示,从新鲜粪便样品中分离到的芽孢杆菌菌株SWUN-G43对大肠杆菌和沙门氏菌有明显的抑菌效果,通过分析鉴定其为短小芽孢杆菌,该菌株在pH 2.0的环境中存活率为50.43%,在0.3%胆盐环境中存活率为44.35%,可产生蛋白酶和纤维素酶,对12种常用的抗生素具有很高的敏感性。从试验结果可分析出该短小芽孢杆菌(SWUN-G43)有一定的抗逆性和潜在的益生能力,且该菌株不含耐药质粒,不会在动物肠道微生态系统中造成抗生素抗性的水平传递,具有作为微生态添加剂开发的潜力。

为掌握广西猪主要病毒性传染病流行情况,为猪传染病预防方案提供依据,本研究于2013年1月1日至2014年12月31日从广西省共收集410份样品,运用PCR及RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(PORV)、猪流感病毒(SIV)的感染情况。检测结果表明,PRRSV、PCV-2、CSFV、PRV、PEDV、TGEV、 PORV和SIV的平均感染率分别为35.12%、18.54%、1.17%、0.98%、10.00%、2.44%、0和1.22%;PRRSV和PCV-2混合感染率为6.83%;PRRSV在秋、冬季节呈现高感染率为36.67%、45.31%和63.64%、48.78%,而PCV-2在春、夏、冬季节呈现高感染率为44.44%、25.00%,11.29%、19.35%和39.39%、14.63%。PRRSV和PCV-2是混合感染的主要病原,它们互相之间或是与CSFV、PEDV、PRV、SIV及副猪嗜血杆菌、链球菌等混合感染,PRRSV和PCV-2将是今后广西地区猪病防控的重点。

试验旨在对2株血凝活性较弱的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)进行病毒特性的研究。采用HA/HI、电镜观察、HA和NA测序等方法对2株分离株进行了病毒的鉴定;采用形态学、化学和生物学方法对这2株分离株进行研究。2株病毒被确定为A型H9N2亚型AIV;病毒粒子在透射电镜下为圆形、椭圆形、杆状并呈多型性,大小为80~120 nm;血凝素(HA)均为中等耐热型;病毒50 ℃均耐热;均能凝集公鸡和人O型红细胞,但凝集作用开始并未出现,而是随着病毒的传代逐渐恢复;均不凝集猪、牛、羊、兔和马红细胞;2株病毒均对乙醚、氯仿不敏感,只有1株病毒对酸敏感;病毒对鸡胚无致死性,EID₅₀均为1×10^-7/0.2 mL;经鼻腔途径感染小白鼠,均未导致小鼠出现症状和死亡,接种后第14天在小鼠血清中可检出相应病毒的抗体。研究结果表明,上海地区活禽交易市场存在对环境条件具有较强耐受性的H9N2亚型AIV。

为了比较VP2和NS1两种蛋白的免疫原性,选择免疫原性较好的蛋白进行亚单位疫苗制备。本试验分别扩增了水貂细小病毒(mink enteritis virus,MEV)NS1与VP2基因,连接pET-32a表达载体并进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析。以His-Bind亲和层析柱纯化目的蛋白,将纯化后的蛋白免疫小鼠,分析目的蛋白的免疫原性。经SDS-PAGE与Western blotting鉴定,表明NS1与VP2蛋白大小分别为83 和67 ku,且均具有生物学活性;免疫小鼠后,目的蛋白NS1和VP2均可诱导小鼠产生抗MEV特异性抗体,且VP2蛋白诱导小鼠产生的抗体滴度要高于NS1蛋白。与NS1蛋白比较,VP2蛋白更适合亚单位疫苗的制备。

试验旨在研究高寒地区奶牛舍和犊牛舍冬季有害气体的含量变化,选取河北省坝上高原具有代表性的3种奶牛舍和4种犊牛舍,检测冬季不同时间段牛舍内外空气中氨气(NH₃)和二氧化碳(CO₂)的含量。结果显示,不设舍外运动场的奶牛舍中CO₂含量极显著高于带舍外运动场的奶牛舍(P < 0.01),且晚上CO₂含量高于早上和中午,最高达4 481.7 mg/m³(奶牛舍1)。所有犊牛舍CO₂含量均表现为早晚高、中午低的规律性,所有奶牛舍和犊牛舍内CO₂含量均极显著或显著高于净道或运动场(P < 0.01;P < 0.05)。3种奶牛舍19:00后NH₃含量出现急剧升高的趋势。奶牛舍3只检测到低浓度的NH₃,波动范围为0~0.36 mg/m³,犊牛舍的NH₃含量介于0.71~5.28 mg/m³。综上所述,奶牛舍和犊牛舍有害气体含量与牛舍建筑类型和结构相关,密闭性好的牛舍CO₂和NH₃含量均较高,甚至出现CO₂含量严重超标的现象。为降低舍内的有害气体含量,寒冷地区应在考虑牛舍保温设计的同时,兼顾通风换气的设计,以改善牛舍的空气质量。

长期的自然和人为选择使家畜品种经济性状得到了显著改善,其相关的基因组区域也发生了特定遗传变异。随着时间的推移部分基因多态性已经下降或消失,而在群体中保留包含单一单倍型的多个基因。这种基因组上特定区域基因多态性频率的变异被称为选择信号。识别选择信号可以提供家畜驯化机制并进一步揭示表型相关的基因变异。目前,高密度SNP芯片及大规模重测序技术已成功应用于家畜选择信号鉴定研究。全基因组选择信号检测方法有等位基因频率检测法、连锁不平衡检测法和群体分化分析法。作者综述了全基因组范围内选择信号检测方法及其在家畜研究中的应用进展,为从事家畜育种及生物进化研究人员提供参考。

为了建立清营口服液的质量检测方法,对制剂处方药味金银花、连翘、黄连、丹参、玄参、麦冬进行了薄层色谱(TLC)鉴别研究,并利用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中绿原酸的含量进行了测定确定了HPLC的测定条件。结果表明,TLC鉴别方法专属性强、斑点清晰、阴性对照无干扰;在8~160 μg/mL范围内绿原酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为97.86%,RSD为1.2%。以上结果表明,本研究所建立的检测方法简便、准确、专属性强、重复性好,可对清营口服液的质量进行有效检测。

为了快速且准确的预测辽育白牛胴体产肉量,进而建立完善的胴体分级体系,本试验对60头辽育白牛进行屠宰胴体分割试验,分别测量了胴体重(X₁),第5肋侧厚度(X₂),第5~6肋眼肌宽高乘积(X₃),第5~6肋眼肌面积(X₄),第12肋侧厚度(X₅),第12~13肋眼肌宽高乘积(X₆),第12~13肋眼肌面积(X₇),肾脏油、心脏油和膈肌油之和(X₈),后腿围(X₉)和大腿肌肉厚(X₁₀)等与产肉量、产肉率相关的10项指标,利用SPSS 19.0软件对数据进行相关分析和线性回归分析。结果显示,X₁、X₈与产肉量和产肉率相关性最强,依此推导出2个可信度高、实践中方便应用的产肉量预测方程:①产肉量(眼肌宽高乘积)=0.809X₁+0.158X₆+0.857X₈-13.967 (R²=0.986);②产肉量(眼肌面积)=0.779X₁+0.318X₇+0.933X₈-17.779 (R²=0.990)。