单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.06.008

›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (6): 1453-1457.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.06.008

单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

李丹丹¹, 徐义刚², 李梦圆³, 王昱⁴, 邱索平³, 高会江⁵, 高慎阳⁶

1. 海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 海口 570311;
2. 东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150001;
3. 从化出入境检验检疫局, 从化 510900;
4. 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 重庆 404100;
5. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 牛遗传育种研究室, 北京 100193;
6. 辽宁医学院畜牧兽医学院, 锦州 121001

收稿日期:2015-11-30 出版日期:2016-06-20 发布日期:2016-07-11
通讯作者: 徐义刚 E-mail:108074182@qq.com
作者简介:李丹丹(1979-),女,博士,高级兽医师,研究方向:微生物学与免疫学,E-mail:108074182@qq.com
基金资助:
海南省社会发展科技专项(2015SF29);国家质检总局科技项目(2013IK031、2013IK051、2015IK089);重庆市科技计划项目(cstc2014yykfA80017);海南省应用技术研究与开发专项项目(ZDXM20130025);广东检验检疫局科技计划项目(2011GDK44、2013GDK04)

Development of A Dual Real-time PCR for the Rapid Detection of Listeria monocytogenes

LI Dan-dan¹, XU Yi-gang², LI Meng-yuan³, WANG Yu⁴, QIU Suo-ping³, GAO Hui-jiang⁵, GAO Shen-yang⁶

1. Technical Center of Hainan Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Haikou 570311, China;
2. College of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University, Harbin 150001, China;
3. Conghua Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Conghua 510900, China;
4. Technical Center of Chongqing Entry-exit Inspection and Quarantine Bure, Chongqing 404100, China;
5. Laboratory of Bovine Genetics and Breeding, Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;
6. Department of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Liaoning Medical University, Jinzhou 121001, China

Received:2015-11-30 Online:2016-06-20 Published:2016-07-11

摘要/Abstract

摘要： 为建立单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,本研究以LM iap基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR快速检测LM的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有LM菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为6.5 CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的139份样品进行检测,共计检出3份LM阳性样品,与国标法(GB 478930-2010)检测结果一致。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。

关键词: 单核细胞增生李斯特菌; iap基因; 实时荧光定量PCR

Abstract: To establish a rapid assay for Listeria monocytogenes(LM) detection,a Real-time PCR method was developed targeting iap gene of LM.The results showed that the test for 15 bacteria strains,only LM was positive,indicated that the method had high specificity.In addition,the sensitivity of Real-time PCR was 6.5 CFU/mL.Stability and reproducibility of the test showed that the coefficient of variation for the same sample repeat the Ct values were less than 2%.Furthermore,a total of 3 positive samples for LM were detected from 139 clinical samples by the method,which was in accordance with the testing result by GB 478930-2010 standard detection protocol.Therefore,the Real-time PCR method provides a novel rapid,sensitive and good repeatability detection method for LM infection.

Key words: Listeria monocytogenes(LM); iap gene; Real-time PCR

中图分类号:

李丹丹, 徐义刚, 李梦圆, 王昱, 邱索平, 高会江, 高慎阳. 单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立[J]. , 2016, 43(6): 1453-1457.

LI Dan-dan, XU Yi-gang, LI Meng-yuan, WANG Yu, QIU Suo-ping, GAO Hui-jiang, GAO Shen-yang. Development of A Dual Real-time PCR for the Rapid Detection of Listeria monocytogenes[J]. , 2016, 43(6): 1453-1457.

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单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

Development of A Dual Real-time PCR for the Rapid Detection of Listeria monocytogenes

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