鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (3): 47-50.

鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达

芦芝川^1,2, 史耀旭², 杨孝朴¹

1. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070;2. 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046

收稿日期:2011-11-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-03-20 发布日期:2012-03-20
通讯作者: 杨孝朴

Cloning and Expression of Chicken IFN-γ Gene

LU Zhi-chuan^1,2, SHI Yao-xu², YANG Xiao-pu¹

1. College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070,China;2. China Agriculture Vet.Bio.Science and Technology Co., Ltd , Lanzhou 730046, China

Received:2011-11-01 Revised:1900-01-01 Online:2012-03-20 Published:2012-03-20

摘要/Abstract

摘要： 参照Digby 发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列,设计1对引物,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从Con A诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性的扩增出大小约为 500 bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序,结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100%。将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-1中构建成重组表达载体pGEX-CHIFN-γ,并将其导入大肠杆菌BL21中,诱导表达的重组蛋白经 SDS-PAGE 分析分子质量约为 43 ku,表明所克隆的CHIFN-γ 基因在原核细胞中得到表达。

关键词: γ-干扰素; 鸡; 克隆; 表达

Abstract: The total RNA was abstracted from the concanavalin A(Con A) -activated spleen lymphocytes, a pair of specific primers was designed by Oligo software based on the sequence of chicken interferon-gamma submitted by digby in GenBank(accession No.U27465). A 500 bp DNA fragment was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and then ligated into T-easy vector for sequencing. The results showed that the fragment contained the complete open reading frame (ORF) of CHIFN-γ gene. In comparison with GenBank data, the homology of the nucleotide sequence was 100%.The sequence was inserted into pGEX-4T-1 and the recombined expressing vector was constructed, then transformed into Escherichia coli BL21, which were further induced by IPTG and cultured,and a fusion protein was obtained with about 43 ku of molecular weight in SDS-PAGE.This results showed that the cloned CHIFN-γ gene was expressed in prokaryotic cells.

Key words: interferon-γ; chicken; cloning; expression

中图分类号:

芦芝川;史耀旭;杨孝朴. 鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达[J]. , 2012, 39(3): 47-50.

LU Zhi-chuan;SHI Yao-xu;YANG Xiao-pu. Cloning and Expression of Chicken IFN-γ Gene[J]. , 2012, 39(3): 47-50.

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