鸡MHCⅠ类分子克隆及其二聚体融合基因的构建与表达

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (3): 61-64.

鸡MHCⅠ类分子克隆及其二聚体融合基因的构建与表达

戴银¹，程宝艳¹，胡晓苗¹，王骏俊²，陈芳芳²，余为一²

（1.安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，安徽合肥 230031； 2.安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥 230036）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-03-20 发布日期:2011-03-20
通讯作者: 余为一

Cloning and Fusion Expression of Chicken MHCⅠ Molecule

DAI Yin¹，CHENG Bao-yan¹，HU Xiao-miao¹，WANG Jun-jun²，CHEN Fang-fang²，YU Wei-yi²

（1.Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，Anhui Academy of Agricultural Sciences，Hefei 230031，China;2.College of Animal Science and Technology，Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-03-20 Published:2011-03-20
Contact: YU Wei-yi

摘要/Abstract

摘要： 为进一步研究MHCⅠ类分子作用机制，以及为制备MHCⅠ基因工程疫苗奠定基础,克隆鸡MHCⅠ基因，并构建MHCⅠβ_2m-α融合基因进行原核表达。运用RT-PCR方法，克隆鸡MHCⅠα和β_2m链基因，并通过编码连接肽（Gly₄Ser）₄的基因序列将两者头尾相连，构建了pET-32a-MHCⅠβ_2m-α重组质粒，经PCR扩增、双酶切和测序鉴定后，重组质粒在E.coli BL21细胞进行IPTG诱导表达融合蛋白，采用SDS-PAGE和Western blotting方法分别检测表达产物。结果表明，成功克隆了MHCⅠα和β_2m链基因，长度分别为1014和300 bp；构建的融合基因MHCⅠβ_2m-α长度为1194 bp，经原核表达，融合蛋白分子质量约为62.0 ku，能与相应的抗体结合，具有一定的免疫学活性。

关键词: 鸡MHCⅠα链; 鸡MHCⅠβ_2m链; 融合蛋白

Abstract: To explore MHC mechanism presenting antigen and function as vaccine carrier，we cloned MHCⅠgene from chicken by RT-PCR，and constructed a recombined plasmid containing MHCⅠβ_2m-α fusion gene and expressed in a prokaryotic system. Chicken MHCⅠα and β_2mchains were cloned from chicken by RT-PCR，the recombinant gene MHCⅠβ_2mα was linked with a DNA sequence coding for short peptide（Gly₄Ser）₄，and confirmed by PCR amplification，double restriction digestion and DNA sequencing. The recombinant plasmid was expressed in E.coliBL21 after induction by IPTG. SDS-PAGE and Western blotting were used to detect expression products. The results revealed that the lengths of MHCⅠα and β_2m chains were 1014 and 300 bp，respectively, and the recombinant fusion gene was 1194 bp. The fusion protein was about 62.0 ku and had the reactinogenicity with specific antibody.

Key words: chicken MHCⅠα chain; chicken MHCⅠ β_2m chain; fusion protein

中图分类号:

戴银;程宝艳;胡晓苗;王骏俊;陈芳芳;余为一. 鸡MHCⅠ类分子克隆及其二聚体融合基因的构建与表达[J]. , 2011, 38(3): 61-64.

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