基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫效力研究

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.06.037

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (6): 1840-1846.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.06.037

基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫效力研究

孙朋

徐州生物工程职业技术学院, 徐州 221006

收稿日期:2016-12-22 出版日期:2017-06-20 发布日期:2017-06-28
通讯作者: 孙朋 E-mail:2698949103@qq.com
作者简介:孙朋(1976-),男,江苏徐州人,副教授,研究方向:分子病毒学与免疫学
基金资助:
徐州生物工程职业技术学院畜牧兽医品牌专业建设项目；2015年徐州市科技计划项目（KC15N0016）

Study on Expression and Immune Effect of F Protein of Newcastle Disease Virus Type Ⅶ in Insect Cell

SUN Peng

Xuzhou Vocational College of Bioengineering, Xuzhou 221006, China

Received:2016-12-22 Online:2017-06-20 Published:2017-06-28

摘要/Abstract

摘要：

本试验旨在利用杆状病毒表达系统对基因Ⅶ型新城疫病毒（NDV）F基因进行表达研究。RT-PCR扩增F基因，将其克隆到pFastBac HT A载体中，阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞，PCR鉴定获得阳性克隆，碱裂解法提取阳性质粒，转染Sf9昆虫细胞，获得含F基因的重组杆状病毒质粒，重组病毒感染Sf9细胞72 h后，进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western blotting检测。免疫SPF鸡，间接ELISA测定抗体滴度，攻毒保护试验检测重组F蛋白保护性。结果显示，F蛋白在昆虫细胞中能够特异性表达，该蛋白诱导了高滴度的NDV特异性抗体，具有良好的免疫原性；重组F蛋白免疫组攻击保护率达到90%，明显高于阴性对照组。本研究结果为NDV新型亚单位疫苗的研究奠定了基础。

关键词: 新城疫病毒; 融合蛋白F; 重组杆状病毒; 昆虫细胞; 免疫效力

Abstract:

This experiment was conducted to study the protein expression of F gene of Newcastle disease virus (NDV) type Ⅶ by baculovirus expression system.The F gene was amplified by RT-PCR and cloned into pFastBac HT A plasmid, and then the recombinant plasmid was transformed into DH10Bac competent cells to get the positive recombinant bacmid.After 72 h transfection of Sf9 cell with recombinant bacmid, the expression of interest protein was detected by indirect immunofluorescence assay (IFA), SDS-PAGE analysis and Western blotting. Serum antibody titers of immunized SPF chickens were determined by ELISA and the protective properties were determined by protection test. The results showed that F gene was expressed in Sf9 cells infected with the recombinant baculovirus. The expressed protein could induce high titer specific antibody against NDV. The protective rate of recombinant F protein group was 90%, which was significantly higher than that of the negative control group. These results laid a foundation for study on NDV subunit vaccine.

Key words: Newcastle disease virus; fusion protein F; recombinant baculovirus; insect cell; immune effect

中图分类号:

S855.3

孙朋. 基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫效力研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(6): 1840-1846.

SUN Peng. Study on Expression and Immune Effect of F Protein of Newcastle Disease Virus Type Ⅶ in Insect Cell[J]. , 2017, 44(6): 1840-1846.

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