禽霍乱巴氏杆菌的分离鉴定及基因分型

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.09.026

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (9): 2724-2730.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.09.026

禽霍乱巴氏杆菌的分离鉴定及基因分型

唐沙¹, 袁海文¹, 杨源¹, 张云丹¹, 王军¹, 程振涛^1,2, 唐英秀³, 陈波³

1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;
2. 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室, 贵阳 550025;
3. 长顺县动物疫病预防控制中心, 长顺 550700

收稿日期:2017-02-21 出版日期:2017-09-20 发布日期:2017-09-22
通讯作者: 程振涛 E-mail:chengzhentao@sohu.com
作者简介:唐沙(1992-),女,贵州贵阳人,硕士生,研究方向:动物疫病病原学,E-mail:670836771@qq.com
基金资助:
贵州省农业攻关项目"畜禽源主要病原菌药物防控技术创新与示范"（黔科合NY[2014]3042号）；贵州省科技创新人才团队项目（黔科合人才团队[2015]4016号）

Isolation, Identification and Genotyping of Pasteurella multocida from Fowl Cholera

TANG Sha¹, YUAN Hai-wen¹, YANG Yuan¹, ZHANG Yun-dan¹, WANG Jun¹, CHENG Zhen-tao^1,2, TANG Ying-xiu³, CHEN Bo³

1. College of Animal Science, Guizhou University, Guiyang 550025, China;
2. Key Laboratory of Animal Diseases and Veterinary Public Health in Guizhou Province, Guiyang 550025, China;
3. Changshun County Animal Disease Prevention and Control Center, Changshun 550700, China

Received:2017-02-21 Online:2017-09-20 Published:2017-09-22

摘要/Abstract

摘要：

为确定疑似禽霍乱病例病原种类及其病原基因型，本研究采用细菌分离技术对病原菌进行实验室分离培养，应用传统方法和分子生物学方法对分离细菌进行鉴定，并应用PCR扩增和基因序列分析对分离细菌进行基因分型。结果显示，分离菌具有多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida，Pm）典型培养特征，菌落形态和菌体染色特征、生理生化特性均与多杀性巴氏杆菌相符；PCR扩增到457 bp的基因片段。采用5对分型引物对分离菌进行基因分型显示，仅有A型引物扩增到大小1 050 bp的目的基因片段，序列分析也显示分离菌荚膜基因与A型多杀性巴氏杆菌参考菌株荚膜特异性基因同源性高达97.6%~100.0%，系统进化与A型多杀性巴氏杆菌处于同一进化分支。结果表明，疑似禽霍乱病例病原为A型多杀性巴氏杆菌，本研究结果将为禽霍乱的防控提供参考资料。

关键词: 禽霍乱; 多杀性巴氏杆菌; 分离鉴定; 基因分型

Abstract:

In order to determine the suspected avian cholera pathogen and geneotypes, bacteria isolation technology was used to isolate and culture pathogenic bacteria, the isolated bacteria were identified by traditional methods and molecular biological methods. Geneotyping of the isolated bacteria were determined using PCR technology and gene sequence analysis. The results demonstrated that the isolated bacteria had typical culture characteristics of Pasteurella multocida (Pm),and the morphology of the colony, the characteristics of cell staining, the physiological and biochemical characteristics were consist with Pm; 457 bp fragment was amplified by PCR. Geneotyping results showed that only A primer amplified the target gene fragment of 1 050 bp, sequence analysis also showed that the isolated bacteria shared 97.6% to 100.0% sequence homology with reference strains, and phylogenetic tree analysis showed that the isolated bacteria and A type Pm were in a branch.The experimental results indicated that the isolated bacteria was identified as capsular serotype A of Pm, the results provided reference for the prevention and control of fowl cholera.

Key words: fowl cholera; Pasteurella multocida; isolation and identification; genotyping

中图分类号:

S852.61

唐沙, 袁海文, 杨源, 张云丹, 王军, 程振涛, 唐英秀, 陈波. 禽霍乱巴氏杆菌的分离鉴定及基因分型[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(9): 2724-2730.

TANG Sha, YUAN Hai-wen, YANG Yuan, ZHANG Yun-dan, WANG Jun, CHENG Zhen-tao, TANG Ying-xiu, CHEN Bo. Isolation, Identification and Genotyping of Pasteurella multocida from Fowl Cholera[J]. , 2017, 44(9): 2724-2730.

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Isolation, Identification and Genotyping of Pasteurella multocida from Fowl Cholera

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