进出口动物中新霉素ELISA检测方法的建立

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.12.012

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (12): 3163-3169.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.12.012

进出口动物中新霉素ELISA检测方法的建立

孙明君¹, 邱芳¹, 张金玲², 郑小龙¹

1. 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 青岛 266002;
2. 潍坊出入境检验检疫局, 潍坊 261000

收稿日期:2016-05-11 出版日期:2016-12-20 发布日期:2016-12-22
通讯作者: 郑小龙 E-mail:zhengxl612@163.com
作者简介:孙明君(1986-),男,辽宁铁岭人,硕士生,兽医师,研究方向:食品农产品质量安全,E-mail:522302003@qq.com
基金资助:
CNCA检验检疫行业标准制定计划项目（2014B369）

Establishment of ELISA Detection Method for Neomycin in Import and Export Animal

SUN Ming-jun¹, QIU Fang¹, ZHANG Jin-ling², ZHENG Xiao-long¹

1. Inspection and Quarantine Technology Center of Shandong Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Qingdao 266002, China;
2. Weifang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Weifang 261000, China

Received:2016-05-11 Online:2016-12-20 Published:2016-12-22

摘要/Abstract

摘要：

应用碳二亚胺法合成人工抗原得到卵清蛋白偶联新霉素，通过方阵试验确定最佳抗原包被浓度与抗体稀释倍数，以新霉素质量浓度对数为横坐标、抗体抑制率为纵坐标绘制标准曲线，建立了进出口食用动物中新霉素ELISA快速检测技术，并对建立的方法进行了回收率和特异性试验。结果表明，建立的检测方法包被人工合成抗原的最适稀释度为1：200，抗体的最佳稀释度为1：2 000，半数抑制浓度（IC₅₀）为6.99 ng/mL；该方法的最低检测限达40 ng/mL，与庆大霉素、卡那霉素、链霉素、托普霉素、阿米卡星、双氢链霉素的交叉反应率均小于0.1%，平均加标回收率83.77%。标准曲线在1.5~40 ng/mL范围内是线性的，相关系数为0.987，标准曲线方程为y=-37.66x+94.592；与常规液相检测方法相比操作简单、快速。本研究建立了一种快速、高效、特异的新霉素ELISA检测方法。

关键词: 进出口食用动物; 新霉素; 酶联免疫吸附试验; 检测方法

Abstract:

This experiment used carbodiimide get egg albumin synthesis of artificial antigens coupling neomycin,through square test to determine the best antigen packaged concentration and antibody dilution ratio,mass concentration logarithm of neomycin as abscissa,inhibition rate of antibody as the ordinate drawing standard curve,established ELISA fast detection techniques of neomycin in edible animal for import and export.Methods of recovery and specific test had been done in further research.Results showed that the test dilution ratio of optimum synthetic antigen was 1:200,the best dilution multiple of antibodies was 1:2 000, half inhibitory concentration(IC₅₀) was 6.99 ng/mL;The minimum detection limit of the method was 40 ng/mL,and cross reaction rate of gentamicin, kanamycin, streptomycin,tobramycin,amikacin and dihydrostreptomycin were less than 0.1%,the average of recovery rate was 83.77%.The range of standarding curve in 1.5~40 ng/mL was linear,the correlation coefficient was 0.987,the equation of standarding curve was y=-37.66x+94.592;Compared with HPLC method,the operation was simple and fast.The test results showed that the enzyme-linked immunosorbent method of detecting neomycin was rapid,efficient and specific.

Key words: import and export food animals; neomycin; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA); detection method

中图分类号:

S859.2

孙明君, 邱芳, 张金玲, 郑小龙. 进出口动物中新霉素ELISA检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(12): 3163-3169.

SUN Ming-jun, QIU Fang, ZHANG Jin-ling, ZHENG Xiao-long. Establishment of ELISA Detection Method for Neomycin in Import and Export Animal[J]. , 2016, 43(12): 3163-3169.

参考文献

[1] 刘晓冬,林洪,江洁.动物源性食品中氨基糖苷类抗生素检测技术的研究进展[J].安徽农业科学,2010,38(8):4128-4132.
[2] 滕慧,张亚雄.新霉素研究进展[J].三峡大学学报(自然科学版),2008,30(2):95-98.
[3] 商艳红,陈义强,吴小平,等.鸡组织中新霉素残留的ELISA检测方法的研究[J].中国兽医杂志,2007,43(7):90-91.
[4] Wang S,Xu B,Zhang Y,et al.Development of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of neomycin residues in pig muscle,chicken muscle,egg,fish,milk and kidney[J].Meat Science,2009,82(1):53-58.
[5] Jin Y,Jang J,Leem,et al.Development of ELISA and immunochromatographic assay for the detection of the detection of neomycin[J].Clinica Chimica Acta,2006,364(1-2):260-266.
[6] 黄耀凌,刘智宏,叶妮,等.ELISA法检测牛奶中链霉素残留量[J].中国乳品工业,2007,35(2):54-56.
[7] 刘沙洲,黄非,王丽丽,等.新霉素酶联免疫检测方法的研究-新霉素抗体的制备[J].食品科技,2007,3:208-211.
[8] 刘宣兵,滕蔓,张改平,等.新霉素单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定[J].华北农学报,2009,24(4):80-83.
[9] 刘维红,厉磊.酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗[J].安徽农学通报,2008,14(19):227-229.
[10] 肖小华,周思,李攻科.莱克多巴胺ELISA快检技术样品前处理方法研究[J].食品安全质量检测学报,2012,3(5):485-488.
[11] 孙明君,郑小龙,孙涛,等.进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医,2015,11(上):278-281.
[12] 徐乃丰,胥传来,匡华,等.新霉素的直接竞争酶联免疫分析法[J].食品科学,2011,32(10):212-217.
[13] 邢广旭,王方雨,胡骁飞,等.新霉素快速半定量ELISA试剂盒的研制与应用[J].核农学报,2013,27(6):811-816.
[14] 王爱萍,李发弟,胡骁飞,等.新霉素阻断ELISA试剂盒的研制与应用[J].畜牧兽医学报,2011,42(6):857-864.
[15] 焦奎,张书圣.酶联免疫分析技术及应用[M].北京:化学工业出版社,2004.
[16] 张改平,刘宣兵,彩鸿翔,等.新霉素人工抗原的合成与鉴定[J].中国饲料,2008,17:38-41.
[17] 周群标,桑亚新,王丽,等.动物性食品中盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立及应用[J].中国食品学报,2011,11(6):158-161.
[18] 刘沙洲,桑小雪,欧阳华学,等.新霉素ELISA检测方法的建立[J].食品科学,2011,32(14):227-231.
[19] 方结红,张明洲,李艳,等.动物组织中新霉素残留快速检测方法[J].中国计量学院学报,2009,20(3):211-213.
[20] 肖静,赵健亚,许世勇,等.ELISA检测饲料中莱克多巴胺的不确定度分析[J].中国饲料,2012,7:38-39.

进出口动物中新霉素ELISA检测方法的建立

Establishment of ELISA Detection Method for Neomycin in Import and Export Animal

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[1]	陈吉敏, 李辉煌, 赖连杰, 杨银华, 杨悦, 林瑞意. 鸭坦布苏病毒检测方法及疫苗研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1329-1339.
[2]	王迁迁, 于永乐, 李月华, 董雅琴, 尼博, 刘拂晓. A型塞尼卡病毒检测方法及疫苗研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2336-2346.
[3]	郭銮英, 李家磊, 金芹芹, 马骏, 刘全. 牛丙型肝炎病毒研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1994-2000.
[4]	吴帅斌, 崔泽华, 廖晓萍, 刘雅红, 孙坚. 产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌检测方法研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(3): 1072-1083.
[5]	孙佳丽, 董浩, 彭小薇, 朱良全, 蒋卉, 冯宇, 李筱英, 丁家波, 王春凤. 犬种布鲁氏菌研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3803-3811.
[6]	王勇, 韩雨奇, 卢明华. β-受体激动剂药物残留检测方法研究进展[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(8): 2478-2487.
[7]	刘丁溪, 杨杰程, 周宏超, 郭抗抗. 动物性食品中抗菌药物残留检测方法研究进展[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(7): 2183-2192.
[8]	王勇, 龚勇, 卢明华. 氟喹诺酮类药物残留检测方法的研究进展[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(8): 2509-2516.
[9]	姚怀兵, 赵毅, 刘宏, 张毅, 任方, 黄炯. 口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(2): 311-318.
[10]	冯春燕, 杜方原, 刘丹丹, Pershin Andrey, 王彩霞, 张永宁, 吴绍强, 林祥梅. 含非洲猪瘟病毒核酸序列病毒样颗粒的研制及其在检测方法中的应用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(11): 3287-3293.
[11]	王明明, 许娜, 唐云, 杭晔, 刘振江, 杜道林. 食品中硝基呋喃类药物残留检测方法的研究进展[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(8): 2202-2207.
[12]	朱愈斐, 谢书宇, 陈冬梅, 王玉莲, 潘源虎, 彭大鹏, 陶燕飞, 袁宗辉. 饲料添加剂检测方法研究进展[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2016, 43(7): 1785-1791.
[13]	阿地力江·卡德尔, 刘雪雪, 杨敏, 玛哈巴·肉孜, 蒋琳, 马月辉. 全基因组选择信号检测方法在家畜研究中的应用进展[J]. , 2016, 43(6): 1641-1646.
[14]	练斯南, 梁淋, 白挨泉, 崔尚金. 鉴别猪伪狂犬病病毒的双重PCR方法的建立及初步应用[J]. , 2016, 43(5): 1169-1175.
[15]	龙飞翔, 施开创, 张珍, 尹彦文, 陈汉忠, 莫胜兰. PEDV、TGEV和PRoV多重RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(10): 2518-2526.