水貂阿留申病基因工程诊断抗原的制备

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.07.010

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (7): 1686-1691.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.07.010

水貂阿留申病基因工程诊断抗原的制备

张蕾¹, 柴秀丽¹, 冯佩平¹, 张海玲¹, 胡博¹, 白雪¹, 赵建军¹, 冯卓¹, 王振军¹, 徐磊², 闫喜军¹, 吴威¹

1. 中国农业科学院特产研究所, 吉林省特种动物分子生物学省部共建国家重点实验室, 长春 130112;
2. 中国兽医药品监察所, 北京 100081

收稿日期:2014-12-16 出版日期:2015-07-20 发布日期:2015-07-23
通讯作者: 闫喜军 E-mail:yanxijunjmp163.com
作者简介:张蕾(1979-),女,吉林榆树人,博士,副研究员,研究方向:毛皮动物诊断制剂,E-mail:908834146@qq.com
基金资助:
吉林省科技发展计划项目(201201001);吉林省科技攻关计划(20140204074NY)

Preparation of Genetic Engineering Diagnostic Antigen of Mink Aleutian Disease

ZHANG Lei¹, CHAI Xiu-li¹, FENG Pei-ping¹, ZHANG Hai-ling¹, HU Bo¹, BAI Xue¹, ZHAO Jian-jun¹, FENG Zhuo¹, WANG Zhen-jun¹, XU Lei², YAN Xi-jun¹, WU Wei¹

1. State Key Laboratory for Molecular Biology of Special Economic Animals, Institute of Special Animal and Plant Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130112, China;
2. China Institute of Verterinary Drug Control, Beijing 100081, China

Received:2014-12-16 Online:2015-07-20 Published:2015-07-23

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在建立一种生产水貂阿留申病(Aleutian disease,AD)诊断抗原的新方法。试验提取水貂阿留申病毒(Aleutian disease virus,ADV)的基因组,PCR扩增ADV核衣壳蛋白VP2基因,构建重组表达质粒Bacmid-VP2,脂质体介导其转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒AcMVPV-VP2。电镜下观察表达的VP2蛋白,Western blotting检测目的蛋白的反应原性。以传统接毒方法生产的AD诊断抗原作对照,通过对流免疫电泳试验检测表达蛋白的生物学活性。结果表明,表达的重组VP2蛋白在电镜下组装成病毒样颗粒且能与ADV阳性血清发生反应。与商业诊断抗原相比,重组抗原诊断AD的阴阳性的符合率为100%。该方法可成为生产AD诊断抗原的替代方法。

关键词: 水貂阿留申病; 基因工程; 诊断抗原

Abstract: To develop a new method of Aleutian disease (AD) diagnostic antigen production,we used Bac-to-Bac expression system in this study.Firstly,Aleutian disease virus (ADV) genome was extracted and ADV VP2 gene was amplified by PCR method.Then Bacmid-VP2 was constructed and transfected into insect cell Sf9 by liposomes to construct AcMVPV-VP2.Secondly,the VP2 protein was observed by electromicroscope and antigency was detected by Western blotting.At last,the activity of recombinant protein was inspected by countercurrent immunoelectrophoresis.The results showed that the expressed recombinant VP2 protein could react with ADV positive serum and form virus like particles.Compared with the commercial diagnostic antigen,the coincidence rate of recombinant antigen was 100%.This method could be a candidate for AD diagnostic antigen production.

Key words: mink Aleutian disease; genetic engineering; diagnostic antigen

中图分类号:

Q786

张蕾, 柴秀丽, 冯佩平, 张海玲, 胡博, 白雪, 赵建军, 冯卓, 王振军, 徐磊, 闫喜军, 吴威. 水貂阿留申病基因工程诊断抗原的制备[J]. , 2015, 42(7): 1686-1691.

ZHANG Lei, CHAI Xiu-li, FENG Pei-ping, ZHANG Hai-ling, HU Bo, BAI Xue, ZHAO Jian-jun, FENG Zhuo, WANG Zhen-jun, XU Lei, YAN Xi-jun, WU Wei. Preparation of Genetic Engineering Diagnostic Antigen of Mink Aleutian Disease[J]. , 2015, 42(7): 1686-1691.

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