为深入研究牛场中普遍存在的持续性感染，探讨不同生物型牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）转化的分子机制，本试验将致细胞病变型BVDV （CP型BVDV）和非致细胞病变型BVDV （NCP型BVDV）感染MDBK细胞，观察细胞变化，感染后12~72 h期间每间隔12 h收集1次细胞，同时对24、48 h收集的细胞进行转录组学分析。结果显示，不同生物型BVDV感染宿主细胞24 h后，与感染NCP型BVDV的细胞相比，感染CP型BVDV的MDBK细胞中上调差异表达的基因2 849个，下调差异表达的基因3 347个，48 h后，上调差异表达的基因2 933个，下调差异表达的基因2 831个。对差异基因的GO功能分析结果表明，差异基因参与的分子功能主要有催化活性、结合活性、酶调节活性、分子转导活性和蛋白结合转录因子活性等；Pathway显著性富集分析结果显示，差异表达基因主要参与细胞自噬、细胞凋亡、免疫调节因子等相关的信号通路。本试验结果可为进一步揭示病毒致病的分子机制、控制BVDV和研制其候选疫苗奠定基础。

为了研究中国特有地方猪种丫杈猪、青裕猪和乌金猪盲肠微生物菌落的组成，揭示地方猪种耐粗饲特性的机理，本试验采用16S rDNA扩增子测序技术比较分析了体重90 kg左右的丫杈猪、青裕猪和乌金猪盲肠微生物菌群的多样性。结果显示，在门水平上3个品种猪的核心菌群均为拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes），在属的水平上均为普雷沃菌属（Prevotella）和拟杆菌属（Bacteroides）；在3个猪种的盲肠中均发现了与降解纤维素相关的细菌，其中纤维杆菌属（Fibrobacter）和梭菌属（Clostridium）在丫杈猪盲肠中的数量显著高于青裕猪和乌金猪（P<0.05），普雷沃氏菌属（Prevotella）在丫杈猪盲肠内的数量显著高于乌金猪（P<0.05），拟杆菌属（Bacteroides）在青裕猪盲肠内的数量显著高于丫杈猪（P<0.05），螺旋体门（Spirochaetes）在青裕猪盲肠内的数量显著高于乌金猪（P<0.05）。结果表明，3个品种猪盲肠内微生物菌群分布的种类相似度高，但分布规律和数量存在显著差异；对与纤维素消化相关菌群的分析表明，丫杈猪对纤维消化的能力是3个品种中最强的，其次是青裕猪，乌金猪最弱。

试验旨在构建猪β₂肾上腺素能受体（β₂ adrenergic receptor，β₂AR）基因及其突变体真核表达载体，并鉴定其在HEK293T细胞中的表达。通过猪基因组DNA克隆猪β₂AR基因，利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1（+），构建真核表达载体pcDNA3.1（+）-β₂AR，加入c-myc标签后命名为myc-pcDNA3.1（+）-β₂AR。以真核表达载体为模板构建突变体myc-pcDNA3.1（+）-β₂AR-D130N、myc-pcDNA3.1（+）-β₂AR-C285S和myc-pcDNA3.1（+）-β₂AR-D130N/C285S，并将构建的真核表达载体和突变体转染HEK293T细胞，利用Western blotting技术验证其表达。结果显示，猪β₂AR基因已正确重组入pcDNA3.1（+）载体中；经测序鉴定，猪β₂AR的第130位天冬氨酸成功突变为天冬酰胺，第285位半胱氨酸成功突变为丝氨酸。Western blotting检测结果证明所构建的表达载体均可在HEK293T细胞中表达。本研究成功构建了猪β₂AR野生型的真核表达载体及2个单点突变和1个双点突变的突变体，并验证其在HEK293T细胞中正常表达，为进一步研究猪β₂AR蛋白表达及其药理学活性奠定基础。

牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）是导致牛腹泻的重要致病病毒之一，BVDV感染不仅能造成严重的临床症状，且可导致患畜的免疫力降低从而感染其他病原，致使患病动物的发病率和死亡率大大增加，给养牛业造成重大的损失。随着近年来分子生物学相关理论及技术不断发展，对于BVDV的研究逐渐深入，人们对该病毒的分子生物学方面有了一些新的了解，作者主要从BVDV的病毒粒子结构组成及功能、国内外的流行情况和BVDV基因的遗传与变异情况3个方面阐述近几年BVDV的分子生物学研究进展。

为探讨猪体内、外成熟卵母细胞对核移植重组胚胎发育能力的影响，试验通过激素促排获得体内成熟卵母细胞和收集废弃卵巢获取体外成熟的卵母细胞，分别构建核移植重组胚，比较其卵裂率、囊胚率及胚胎移植受孕情况。结果显示，PGC+PMSG+HCG组的平均排卵数（27.8枚/头）显著高于PGC+HCG （12.5枚/头）、PMSG+HCG （13.7枚/头）及自然发情组（11.5枚/头）（P<0.05），体内收集到的卵母细胞，可用于构建核移植重组胚的可用卵率均达到90%以上，与其他处理组差异不显著（P>0.05），说明通过激素处理可获得更多的可用卵母细胞，而且卵母细胞的质量没有显著差异；以体内和体外成熟卵母细胞作为核移植受体构建的克隆胚胎，二者的胚胎融合率（80.31%和79.29%）和卵裂率（90.40%和86.51%）差异均不显著（P>0.05），但来自体内成熟卵母细胞克隆的胚胎发育至囊胚期的比例显著升高（P<0.05）；将体内、外成熟卵母细胞构建的核移植重组胚分别移植代孕母猪，头平均移植30或60枚时，体内成熟卵母构建的克隆胚胎移植出生仔猪10头，而体外培养卵母细胞构建的克隆胚胎均未着床受孕，表明通过激素促排获得的卵母细胞质量更好，能显著提高克隆胚胎的囊胚率，减少胚胎移植数量，提高代孕母猪的怀孕率。

为探究可溶性环氧化物水解酶抑制剂（soluble epoxide hydrolase inhibitors，sEHI）的降血糖功效，试验以高脂饲料与链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）联合诱导的Ⅱ型糖尿病小鼠为研究对象，将C57BL/6J小鼠随机分为：正常对照组、糖尿病模型组和sEHI组，sEHI组饲喂高脂饲料，每日灌胃sEHI （t-AUCB）1 mg/kg，连续灌胃4周；糖尿病模型组饲喂高脂饲料，每日灌胃同等计量的生理盐水；正常对照组饲喂普通饲料，每日灌胃同等体积的生理盐水。期间各组小鼠均自由采食及饮水，记录小鼠体重、血糖并进行口服葡萄糖耐量试验。试验结束后，测定血清血脂指标、肝脏过氧化指标并对小鼠胰岛组织进行病理学分析。结果显示，与糖尿病模型组相比，采用sEHI干预后糖尿病小鼠的空腹血糖显著降低（P<0.05），而葡萄糖耐量水平升高；小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）水平明显降低，其中TC、TG水平与糖尿病模型组相比差异显著（P<0.05），而高密度脂蛋白与胆固醇比值（HDL/TC）水平则显著升高（P<0.05）；与糖尿病模型组相比，sEHI干预组小鼠肝脏的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性显著提高（P<0.05），丙二醛（MDA）活性显著降低（P<0.05）；小鼠的胰岛组织切片分析结果表明，sEHI对小鼠胰岛组织有明显的修复作用。综上所述，sEHI具有降血糖、减轻自由基损伤、抑制脂质过氧化、修复受损胰岛组织的作用。

为了解阿哈尔捷金马经长途运输后血液生理生化反应的情况，试验选用23匹阿哈尔捷金马（公马14匹、母马9匹，年龄2~6岁），从俄罗斯出发经长途公路运输5 d到达新疆阿拉山口，在到达目的地后第7和35天，分别进行颈静脉采血，测定生理生化指标及应激相关激素水平，同时采用异地对照法与未经运输的15匹本地阿哈尔捷金马（公马10匹、母马5匹，年龄6~10岁）进行比较研究。结果发现：与本地阿哈尔捷金马相比，经长途运输后第7、35天的阿哈尔捷金马血液中性粒细胞（Gran）数量及占比、红细胞压积（HCT）、血小板（PLT）数量、碱性磷酸酶（ALKP）活性均有提高（P<0.05；P<0.01），而中间细胞（Mid）数量和百分比、血糖（GLU）水平显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01）；运输后第35天，平均红细胞体积（MCV）、磷（PHOS）、总蛋白（TP）含量均有所提高（P<0.01；P<0.01），淋巴细胞（LY）百分比则显著降低（P<0.05）；运输后第7天抗利尿激素（ADH）、生长激素（GH）、尿素氮（UREA）及胰岛素（INS）含量均有下降（P<0.05；P<0.01），总胆红素（TBIL）、三碘甲状腺原氨酸（T3）水平均显著提高（P<0.05），但这些激素水平在运输后第35天均与对照组无显著差异（P>0.05）。综合以上结果，阿哈尔捷金马经长途运输后，出现了相应的一过性应激反应特征，经过一定的调整期（35 d）后大部分指标和未经长途运输马趋于一致，在此期间尚不能立即进入正常使用状态，以免导致长期不可逆性病变。

试验以新鲜牦牛血液为原料，采用血粉法、冰醋酸法及醋酸钠法，探索制备氯化血红素的最优工艺参数，并对不同方法制备的氯化血红素纯度及得量进行对比。结果显示，血粉法的最优工艺是超声处理时间40 min，酸性丙酮添加量为120 mL，抽提时间30 min，乙酸钠添加量为9 mL，氯化血红素纯度达到96%，得量为7.38 g/L。采用冰醋酸法制备氯化血红素，当冰醋酸添加量为红细胞量的3倍时，氯化血红素纯度达到80%，得量为6.10 g/L。采用醋酸钠法制备氯化血红素，当氯仿添加量为红细胞量的2倍时，氯化血红素纯度达到90%，得量为3.44 g/L。通过对比3种制备方法，氯化血红素纯度依次为血粉法 > 醋酸钠法 > 冰醋酸法；氯化血红素得量依次为血粉法 > 冰醋酸法 > 醋酸钠法，由此可知，3种方法中，选用血粉法制备氯化血红素的量更高且更加有利于工业化生产。

本研究旨在探讨丙酸睾酮在肉鸡组织中的残留及其对肉鸡血清生化指标及睾丸生长发育的影响，为保障畜产品安全提供检测依据。选取初始体重为（2.2±0.1） kg的60日龄青脚麻公鸡160只，随机分为对照组与试验组，每组4个重复，每个重复20只。对照组饲喂基础日粮，试验组饲喂添加20 mg/kg丙酸睾酮的试验日粮，连续饲喂7 d，分别于休药期第2、6、11、17天每组选择8只鸡屠宰，采集鸡冠、肝脏、睾丸和肌肉等组织，用液相色谱-质谱联用仪（HPLC-MS/MS）检测丙酸睾酮残留量、睾酮含量；翅静脉采集血液样品，分离血清后用全自动生化分析仪测定血清生化指标的含量；采集睾丸样品，利用HE染色病理组织检查、甲苯胺蓝病理形态学镜检观测睾丸组织细胞形态、肥大细胞数等。结果显示，①血液中丙酸睾酮残留量最高，鸡冠中残留量次之，胸肌、腿肌、肝脏和睾丸中无残留；休药期长短对鸡冠中丙酸睾酮残留量无显著影响（P>0.05），休药17 d后血清丙酸睾酮含量极显著低于2、6和11 d （P<0.01），且休药期与鸡冠、血液中的丙酸睾酮残留量呈一元二次回归关系。②试验组睾丸中睾酮含量在休药2、6、11、17 d时较对照组分别降低了71.45%、63.46%、62.86%、73.61%（P<0.01）。③在休药2 d时，试验组睾丸相对重量显著低于对照组（P<0.05）；试验组肝脏相对重量与对照组无显著差异（P>0.05）。④肉鸡血清大部分指标（总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、白球比（A/G）、胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）及乳酸脱氢酶（LDH）、谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）酶）均无显著变化（P>0.05）。⑤丙酸睾酮对公鸡睾丸的影响较大，细胞失去了原有的椭圆形，生精细胞在管腔中排列紊乱。试验组脱颗粒数目、肥大细胞（MC）数分别比对照组多。综上所述，饲喂丙酸睾酮会导致公鸡睾丸萎缩，可通过血液和鸡冠取样检测到其残留量，这一结果可为保障畜产品安全提供检测依据。

试验通过筛选高产蛋白酶米曲霉及其固态发酵条件优化，获得高酶活固态发酵物，并应用于肉仔鸡日粮，以期为提高肉仔鸡日粮蛋白质等养分利用提供技术手段。经过对8种不同米曲霉孢子产品进行初筛、复筛后获得一株产酸性蛋白酶较高的米曲霉菌株0-8，采用单因素和正交试验设计，对其产酸性蛋白酶发酵条件进行优化。结果表明：米曲霉菌株0-8产酸性蛋白酶培养的最适温度30℃、发酵时间66 h、初始水分47.40%、接种量1.5×107个/mL、麸皮含量80%、碳氮比（C/N）为1/3，优化后酸性蛋白酶活力达14 416.64 U/g，比优化前提高了157.02%。在肉仔鸡日粮中添加米曲霉0-8发酵物500 mg/kg，经过适应期10 d、正试期5 d的饲养试验，结果表明：与对照组相比，添加米曲霉0-8发酵物对粗蛋白质及能量消化率均有一定提高，但差异不显著（P>0.05）。日粮添加米曲霉发酵物有益于肉仔鸡的生产，但其添加水平及方式有待进一步研究。

为研究日粮中添加天蚕素、合生素对AA肉鸡小肠黏膜形态及免疫细胞的影响，试验选用480只1日龄健康AA肉鸡，随机分为4组，每组4个重复，每个重复30只鸡。对照组（Ⅰ组）饲喂基础日粮，试验组（Ⅱ~Ⅳ组）分别在基础日粮中添加0.5%天蚕素、0.3%合生素、0.5%天蚕素+0.3%合生素。试验期42 d。结果显示，与Ⅰ组相比，Ⅳ组十二指肠、回肠绒毛高度极显著升高（P<0.01）；Ⅱ组空肠和回肠、Ⅲ组小肠各段隐窝深度显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01）；Ⅱ、Ⅲ组小肠各段和Ⅳ组十二指肠、回肠绒毛高度/隐窝深度显著或极显著升高（P<0.05；P<0.01）；Ⅱ组空肠绒毛宽度显著降低（P<0.05），Ⅲ组十二指肠和空肠、Ⅳ组空肠和回肠绒毛宽度均极显著降低（P<0.01）；Ⅱ、Ⅲ组空肠黏膜厚度显著升高（P<0.05），Ⅳ组小肠各段黏膜厚度均极显著升高（P<0.01）。Ⅱ组回肠上皮内淋巴细胞数量显著升高（P<0.05），Ⅲ组十二指肠、Ⅳ组小肠各段上皮内淋巴细胞数量极显著升高（P<0.01）；Ⅲ组十二指肠、Ⅳ组十二指肠和回肠杯状细胞数量极显著升高（P<0.01）；Ⅳ组空肠肥大细胞数量显著升高（P<0.05）。综上所述，天蚕素、合生素单独或联合添加均能改善AA肉鸡小肠黏膜结构，促进小肠黏膜免疫细胞增殖，联合添加效果最佳。

本试验为研究金荞麦超微粉对肉鸡免疫功能和生长发育的影响，将160只1日龄白羽肉鸡随机分为4组，7日龄时用新城疫活疫苗滴鼻（1头份/只），同时颈部皮下注射新城疫-禽流感二联灭活疫苗（0.3 mL/只），间隔12 h后各组分别饲喂含不同药物的饲料，自由采食。低、高剂量组分别在饲料中添加4.50‰、8.75‰金荞麦超微粉，连续给药7 d。阳性对照组在饲料中添加400 g/L黄芪多糖，连续给药7 d；空白对照组饲料中不添加任何药物。随后在给药结束后的第7、21和35天翅下静脉采血用于分离淋巴细胞和血清，用CCK-8法测定外周血淋巴细胞增殖能力；微量血凝抑制试验评价血清中抗体效价；同时称量各组肉鸡体重，屠宰后解剖，取脾脏、法氏囊和胸腺计算免疫器官指数。结果显示，与对照组相比，在给药结束后7、21和35 d，金荞麦超微粉高、低剂量组与黄芪多糖组料重比均不同程度降低（P>0.05）；此外给药组可提高肉鸡外周血淋巴细胞增殖能力、免疫抗体水平和肉鸡体重，其中给药结束后21 d，金荞麦超微粉高剂量组禽流感病毒和新城疫病毒抗体效价与对照组相比差异极显著（P<0.01）；同时还能提高脾脏和法氏囊的脏器系数，并具有量效关系。综上所述，金荞麦超微粉可以显著提高雏鸡的细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能，并显著增加体重。表明金荞麦超微粉具有增强白羽肉鸡免疫力和促进生长发育的功效，为开发金荞麦超微粉为新型天然植物药、饲料添加剂提供了依据。

为了对广西麻鸡进行产品开发和品种改良，本研究选择在相同营养水平和饲养管理条件下的30只120日龄广西麻鸡（公、母各半）进行屠宰试验和肉质分析，测定其屠宰性能，肌肉中氨基酸、肌苷酸以及脂肪酸含量。结果显示，公、母鸡屠宰率分别为90.15%和92.57%，全净膛率为69.12%和68.08%；公、母鸡的胸肌和腿肌中氨基酸总量分别为20.37、18.40及21.30、18.44 g/100 g；公、母鸡的胸肌和腿肌必需氨基酸/总氨基酸（EAA/TAA）分别为39.32%、42.33%及42.72%、43.06%，必需氨基酸指数（EAAI）分别为84.33、88.82及90.44、90.77；胸肌的鲜味、甜味、支链氨基酸和肌苷酸含量分别比腿肌多0.85 g/100 g、0.42 g/100 g、0.56 g/100 g和1.55 mg/g，母鸡甜味氨基酸比公鸡多0.40 g/100 g；广西麻鸡肌肉第一限制性氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸；肌肉的不饱和脂肪酸主要由油酸和亚油酸组成，饱和脂肪酸主要由棕榈酸和硬脂酸组成；腿肌多不饱和脂肪酸和必需脂肪酸相对含量均比胸肌高，母鸡较公鸡高。综合分析表明，广西麻鸡具备优质地方肉鸡的良好产肉性能，风味佳，营养价值高，母鸡的营养优于公鸡。

试验选用10周龄金定蛋鸭144只，研究在高温环境下（29~35℃）日粮中分别添加酵母硒（以硒量计）0（对照组）、0.15（处理Ⅰ组）、0.45（处理Ⅱ组）和0.75 mg/kg （处理Ⅲ组）对笼养育成蛋鸭（10~16周龄）生长性能和部分血液生化指标的影响。结果表明，与对照组相比，日粮中添加酵母硒能显著增加14~16周龄育成鸭的平均日采食量（P<0.05）；处理Ⅰ组13~15周龄体重显著高于对照组（P<0.05），第16周龄体重显著高于其他3组（P<0.05），且与标准体重比较差异不显著（P>0.05），其他3组均极显著低于标准体重（P<0.01）；4个组的料重比差异不显著（P>0.05），但以处理Ⅰ组的最低；处理Ⅰ组的谷草转氨酶（AST）活性显著低于处理Ⅱ组（P<0.05），3个处理组的乳酸脱氢酶（LDH）活性显著低于对照组（P<0.05），且处理Ⅰ组的乳酸脱氢酶活性又显著低于处理Ⅱ、Ⅲ组（P<0.05）；处理Ⅰ、Ⅱ组血清总胆固醇（TCH）浓度显著高于处理Ⅲ组（P<0.05）。综合上述结果，高温环境下，在日粮中添加0.15 mg/kg的硒（以酵母硒的形式）可明显改善笼养育成蛋鸭的生长性能，保护肝脏功能，提高育成鸭血清总胆固醇含量。

为了探讨黑白花兔肌肉营养品质特性，试验按照国家食品安全标准和化学分析法，对黑白花兔肌肉（腿肌）常规营养成分、氨基酸和脂肪酸构成比例进行测定分析，并评价其蛋白质营养价值。结果显示，黑白花兔肌肉中水分、粗蛋白质、粗脂肪和灰分含量分别为73.43%、21.67%、3.83%和1.13%，公、母兔间常规营养成分无显著差异（P>0.05）；黑白花兔肌肉中总氨基酸、必需氨基酸和鲜味氨基酸含量分别为196.53、78.64和70.80 mg/g；以氨基酸评分（AAS）为标准，第一限制性氨基酸是缬氨酸，第二限制性氨基酸是蛋氨酸+胱氨酸；以化学评分（CS）为标准，第一限制性氨基酸是蛋氨酸+胱氨酸，第二限制性氨基酸是缬氨酸，公、母兔间氨基酸含量均无显著差异（P>0.05）；脂肪酸构成比例中不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸比为1.74；除棕榈油酸（C16：1）和亚麻酸（C18：3）外，公、母兔间其余脂肪酸含量均无显著差异（P>0.05）。综上所述，黑白花兔肌肉中蛋白质含量高，鲜味氨基酸和必需氨基酸含量丰富，氨基酸平衡性较好，不饱和脂肪酸含量高于饱和脂肪酸，营养价值较高，具有较好的食用价值。

为了探求水牛泌乳和非泌乳期关键调控差异表达miRNAs及其表达模式，试验结合Solexa高通量测序和生物信息学分析结果筛选出18个水牛乳腺组织在泌乳期和非泌乳期差异表达的miRNAs，设计、筛选可行的miRNAs反转录及实时荧光定量PCR引物，进行实时荧光定量PCR验证差异表达miRNAs的表达模式。结果发现，miRNA的差异表达模式与测序结果基本一致。泌乳期miRNA-103、miRNA-125a、miRNA-30a-5p和miRNA-148a的表达量均显著高于非泌乳期（P<0.05）；miRNA-29a在非泌乳期表达量显著高于泌乳期（P<0.05）；miRNA-141、miRNA-125b和miRNA-497在泌乳期表达量均高于非泌乳期，但差异不显著（P>0.05）；低丰度的miRNA-490和miRNA-592在泌乳期表达量均显著高于非泌乳期（P<0.05）。Novel-123b在泌乳期和非泌乳期差异不显著（P>0.05），Novel-57在泌乳期比非泌乳期高29.79倍（P<0.01）。本试验结果为后续水牛乳腺研究提供了16个miRNA的可用特异性反转录引物和实时荧光定量PCR引物，miRNA-103、miRNA-125a、miRNA-30a-5p、miRNA-148a、miRNA-29a和Novel-57 6个水牛差异表达miRNAs值得进一步研究。

试验旨在研究醋酸甲羟孕酮（medroxyprogesterone acetate，MPA）与前列腺素（prostaglandin，PG）、N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate，NMDA）和来曲唑（letrozole，LE）的不同配伍对母羊血浆繁殖相关激素水平的影响。选取3岁经产萨福克母羊39只，平均体重（75.51±11.55） kg，随机均分为3组，试验Ⅰ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+1 mL/只PG，试验Ⅱ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+600 mg/（d·只） NMDA，试验Ⅲ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+14 mg/（d·只） LE，试验期18 d。结果发现，补饲MPA基础上进行PG处理，母羊血浆中FSH水平呈极显著升高（P<0.01）；补饲MPA基础上进行NMDA处理，母羊血浆中E2、MLT、FSH和LH水平均呈极显著升高（P<0.01）；补饲MPA基础上进行LE处理，母羊血浆中MLT、LH和T水平均呈极显著升高（P<0.01）。综合比较各生殖激素之间的关系及变化规律，在本试验条件下，建议MPA与NMDA和LE分别结合使用，可作为调控母羊繁殖性能的药品；且通过比较激素水平得出，MPA与NMDA组合效果最佳。

试验旨在探究快肌肌浆球蛋白可调节磷酸化轻链（myosin light chain，phosphorylatable，fast skeletal muscle，HUMMLC2B或MYLPF）基因在布莱凯特黑牛各组织中的表达情况，以及布莱凯特黑牛与鲁西黄牛背最长肌中MYLPF基因表达量的变化规律，为探讨其与肌肉生长发育关系奠定基础。以布莱凯特黑牛和鲁西黄牛为研究对象，利用实时荧光定量PCR检测其背最长肌、心脏、肺脏、肝脏、脾脏等10个组织中MYLPF基因的表达情况，并对布莱凯特黑牛和鲁西黄牛2、6、10和12月龄4个不同时期背最长肌中MYLPF基因的表达量变化进行研究。结果表明，MYLPF基因在背最长肌中高表达，在心脏中少量表达，在其他组织中几乎不表达。MYLPF基因在2、6、10和12月龄牛背最长肌中均高表达，但随着年龄的增加MYLPF基因的表达量逐渐降低，2月龄的表达量最高，极显著高于其他3个时期（P<0.01），12月龄表达量最低。4个时期布莱凯特黑牛背最长肌中MYLPF基因的表达量均高于鲁西黄牛，其中10月龄差异极显著（P<0.01），2和12月龄差异显著（P<0.05），6月龄差异不显著（P>0.05）。综上结果表明，背最长肌中MYLPF基因可能对骨骼肌生长发育起调节作用，可为研究肉牛骨骼肌生长发育机理和阐明肌肉生长的分子机制提供参考。

试验旨在从水牛（Bubalus bubalis）乳汁中分离培养水牛乳腺上皮细胞并对其进行鉴定，建立经济、便捷的水牛乳腺上皮细胞分离方法。通过无菌收集高产奶水牛泌乳后期乳汁，将其与PBS按2：1（V/V）混匀离心；去除上层乳脂，取带少量上清的沉淀，与PBS按上述比例混匀再次离心；将脂肪层去除干净，取沉淀上方1 mL上清及沉淀分别接种于细胞培养皿。通过细胞形态、免疫荧光、生长曲线测定、细胞接种活力、RT-PCR等对分离的细胞进行鉴定。结果表明，试验成功从水牛乳汁的上清和沉淀中分离获得了水牛乳腺上皮细胞，上清部分细胞和杂质较少；而沉淀部分则细胞和杂质较多。细胞呈典型鹅卵石样，无成纤维细胞，细胞活力好，多处于分裂期。当细胞增殖高度融合时，出现乳头状结构和分层生长现象。经免疫荧光鉴定，分离获得的水牛乳腺上皮细胞表达上皮细胞标志蛋白——细胞角蛋白18。水牛乳腺上皮细胞的生长曲线呈S型，符合一般生物学规律。细胞接种存活率的测定结果显示，细胞活力好、贴壁能力强。经RT-PCR检测，水牛乳腺上皮细胞表达乳蛋白及乳脂合成相关基因。从乳汁中分离水牛乳腺上皮细胞并对其进行鉴定，成功建立了水牛乳汁分离乳腺上皮细胞的方法，为研究水牛泌乳机制、改善乳品质、提高产奶量奠定基础。

为使深县猪保种效果监测更为简化又不失准确性，特建立一种方法以缩减深县猪采样的数量。选取179头深县猪作为一个群体，按照一定的数量梯度抽样，每个梯度随机抽取10次，采用微卫星引物标记的技术计算群体与抽样群的遗传多样性指标。综合10组的遗传多样性评价指标的平均值和标准差与选取的群体对应数值进行比较分析，以遗传多样性变化最小的抽样规模确定为适宜采样规模。结果显示，抽样规模为30头的深县猪遗传多样性主要数据为：平均等位基因数4.6609，平均有效等位基因数3.2325，平均期望杂合度0.6284，平均观察杂合度0.1569，平均PIC 0.5794，与整体数据相比，变化较小，具有代表性，可以代替大群测定。

杜泊羊是原产于南非的世界性著名肉用种羊，是优良的肉羊杂交生产终端父本，自引入中国以后，已分布于多个省（自治区、直辖市），对推动中国商品肉羊生产发挥了重要作用。作者通过对杜泊羊生长发育快、产肉性能好等种质特征的介绍，以及对中国不同地区引入杜泊羊后，分别与本地品种绵羊杂交后的F1代生长发育、产肉性能进行比较分析，发现杜泊羊作为父本与本地绵羊杂交后的F1代均表现出较强的杂种优势，可以作为中国培育肉羊新品种及杂交改良的优异父本品种。

为探究新疆伊犁鹅繁殖周期中血浆主要生殖激素、卵巢形态及卵泡发育的变化规律，试验以健康状况良好、体重相近的2岁伊犁鹅为试验对象，分别在产蛋期、就巢期及休产期各随机选取32只，采集1次血样，测定激素水平；在各时期分别选取5只采集卵巢组织，观测卵巢及卵泡发育情况。结果表明，在产蛋期，伊犁鹅的GnRH分别极显著高于就巢期和休产期16.78%和58.29%（P<0.01）；PRL显著低于就巢期13.00%（P<0.05），极显著高于休产期28.94%（P<0.01）；FSH高于就巢期6.98%（P>0.05），极显著高于休产期21.12%（P<0.01）；LH极显著低于就巢期8.38%（P<0.01），极显著高于休产期16.84%（P<0.01）；E₂水平分别极显著高于就巢期和休产期29.80%和112.40%（P<0.01）；P₄水平分别极显著高于就巢期和休产期28.89%和30.34%（P<0.01）。产蛋期伊犁鹅的卵巢体积和重量均极显著大于就巢期和休产期（P<0.01）。产蛋期伊犁鹅成熟卵泡与就巢期和休产期相比明显较大，次级卵泡数量较多，初级卵泡数量较少；就巢期卵巢上生长及成熟卵泡发生闭锁，颗粒胞层收缩，向内凹陷，胞质出现空腔，各级卵泡出现萎缩；与就巢期相比，休产期卵巢上卵泡胞质空腔变大，向内凹陷程度进一步加深，大量原始卵泡均匀排列。由此可见，在产蛋期，伊犁鹅的GnRH、E₂、LH反应活跃，对卵巢卵泡发育起主导作用；在就巢期，PRL、LH维持较高的分泌水平，协同维持就巢。

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，给养猪业造成了严重的经济损失。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术（RPA），针对ASFV B646L （p72）基因设计了3组引物和探针，并进行筛选、反应条件优化、灵敏性、特异性和重复性试验，建立了实时荧光RPA方法。结果显示，该方法在39℃、20 min内即可检测10个拷贝的DNA分子，且与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒均无交叉反应，检测5.5×10⁶至5.5×10⁰拷贝/μL共7个稀释度样品在各时间点的荧光强度，变异系数范围在0.38%~28.30%。该等温、快速扩增方法可用于ASFV的定性检测，为中国ASFV感染的早期诊断提供技术支持，对疫情暴发后相应控制方案的制定具有重要意义。

为确诊广东某猪场母猪流产发病原因，本研究收集该猪场流产死胎的脑、淋巴结、肺脏混合液，进行PCR鉴定、病毒分离培养、半数组织培养感染剂量（tissue culture infective dose，TCID₅₀）测定、猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）重要功能基因（gB、gC、gD、gE）序列测定和进化分析及动物回归试验。结果显示，病料混合液为PRV阳性，接种Vero细胞传至第3代即出现稳定的细胞病变（CPE），第5代TCID₅₀达到10^-6.8/0.1 mL，PRV gB、gC、gD、gE基因序列测定、同源性及进化树分析显示为，PRV中国变异株，命名为LC株。动物试验显示，LC株对12周龄猪具有一定致病性，可形成PRV典型临床症状及病理变化。本研究分离到一株PRV流行毒株，推测当前使用疫苗Bartha-K61株尚无法完全控制新毒株的流行。

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）引起的烈性传染病，为了保证其检测结果的准确性和可靠性，需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒，并探究其在检测方法中的应用。首先扩增p72基因的全长片段，利用昆虫杆状病毒系统，包装出含有p72基因的ASF DNA病毒样颗粒。为了进一步验证该病毒样颗粒在应用中的可靠性，本研究将病毒样颗粒与ASF的组织毒及细胞毒同时进行DNA核酸提取，进行实时荧光定量PCR。结果表明，本研究制备的病毒样粒子能很好的取代ASFV在实时荧光定量PCR检测方法中作为阳性质控品，且能对核酸提取过程进行质控，实时荧光定量PCR检测试剂盒中，病毒样粒子的最低包装浓度为10² TCID₅₀。进一步研究发现该病毒样颗粒也适用于普通PCR及LAMP检测方法中，最低浓度分别为10³和10¹ TCID₅₀。本试验结果将为规范ASF检测方法，促进ASF检测方法的转化应用及保证检测结果的准确度和可靠性提供科学依据。

纳米技术是20世纪80年代新兴发展起来的核心信息技术，广泛应用于生命医学、光电化工等领域。纳米技术与寄生虫病的试剂仪器诊断、药物治疗及疫苗防控环节有机结合，全面应用于纳米金标检测试纸条、试剂盒和仪器设备、纳米载体靶向驱虫药物、新型纳米疫苗佐剂的研发制备等方面，深入渗透到医学领域并广泛应用到寄生虫学中。作者着眼于当前纳米技术在寄生虫学中的应用，重点阐述了其在寄生虫病的检测诊断、驱虫药物和疫苗佐剂中的应用情况，包括胶体金标记免疫亲和层析、微粒材料合成、生物传感等纳米技术在寄生虫病检测诊断中的应用，总结了新型纳米驱虫药物脂质载体、化学合成药、草本中药研发的进展，并对疫苗佐剂研发中的热点，如纳米脂质体、聚合物颗粒、细胞因子的相关进展进行了概述。本文旨在为纳米技术在寄生虫学中的深入应用和研究提供参考。

小菌落突变株（small colony variants，SCVs）是细菌正常生长周期中的一种细菌亚群，它在各种不利条件下可被选择出现。其生化特征表现为生长缓慢、菌落形态不规则、生化特性异常，这使得SCVs的分离鉴定较困难。临床上，SCVs可引起慢性持续性感染，而不引起宿主强烈的免疫反应，且对抗菌药物产生严重的耐药性。文章对SCVs在临床上的表型分类、与宿主免疫反应的关系及抗菌药物对其影响进行综述，以期为SCVs的深入研究提供理论支持。

本研究旨在建立检测猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）不同毒株抗体的间接ELISA方法。试验以纯化的非结构蛋白7（nonstructural protein 7，Nsp7）作为包被抗原，通过优化ELISA反应条件建立了PEDV不同毒株抗体检测的间接ELISA方法。结果显示，其最佳反应条件为：抗原包被量为0.2 μg/孔，包被条件为37℃孵育1 h后4℃过夜；血清稀释度为1：300，作用时间为2 h；酶标二抗最适稀释度为1：10 000，作用时间为1.5 h；TMB显色液作用时间为15 min。在优化条件下，临界值的判定标准为：样品S/P值>0.1694判为阳性，S/P值<0.1398判为阴性。所建立的ELISA方法特异性、重复性及敏感性均良好。用所建立的ELISA方法对40份来自于疑似猪PEDV血清样品进行检测，该方法与商品化试剂盒检测之间的符合率为95%。本研究建立的ELISA方法在临床上可用于PEDV不同毒株抗体水平的检测，也有用于PEDV早期诊断的潜质，从而为制定有效防控PEDV的措施提供一定的参考依据。

试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei，B.pseudomallea）的BPSS0180基因进行克隆和原核表达，并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSS0180基因序列设计1对引物，对类鼻疽伯克霍尔德菌hn-1株进行PCR扩增获得BPSS0180基因片段。将得到的BPSS0180基因连接到pET-28a （+）载体，构建pET-28a （+）-BPSS0180重组质粒，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后，将构建成功的pET-28a （+）-BPSS0180重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，经IPTG诱导表达，表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。应用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale对BPSS0180基因序列进行生物信息学分析。结果显示，本试验成功克隆了1 146 bp的BPSS0180基因，诱导表达得到的His-BPSS0180融合蛋白大小约为45 ku，且主要以包涵体形式存在。BPSS0180蛋白的分子式为C₁₇₇₉H₂₈₀₉N₅₄₅O₅₃₆S₇，分子质量为40.6 ku，消光系数为40 575，疏水指数为85.43。其不稳定系数为46.52，属于不稳定蛋白；理论等电点（pI）为5.54，为酸性蛋白；总平均疏水性（GRAVY）是-0.261，为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构以α-螺旋（58.79%）和无规卷曲（32.02%）为主，预测其在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30 h。本试验结果为进一步探究类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSS0180基因提供了一定的理论依据。

试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）的重组酶聚合酶（recombinase polymerase amplification，RPA）检测方法，为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPV VP2基因的保守序列，设计合成1对RPA引物探针，通过对反应时间的优化，建立38℃恒温水浴锅检测PPV的RPA方法。结果表明，所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应30 min，能够特异性的检测PPV；以重组质粒pPPV-VP2作为模板，RPA的检测限为10²拷贝，同本研究中应用的实时荧光定量PCR方法检测限一致，比普通PCR方法高100倍；RPA方法对疑似PPV感染临床样品的阳性检出率为82.6%，略低于实时荧光定量PCR的检出率（86.9%），明显高于普通PCR的阳性检出率（66.7%）。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速，结果确实可靠，适用于PPV的快速检测。

试验旨在探索利用杆状病毒表达系统分泌表达小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV） F基因蛋白及将其作为亚单位疫苗的应用价值。将PPRV F基因克隆到已插入蜂毒信号肽（melittin）的转移载体pFastBacⅠ中，将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，经抗性及蓝白斑筛选得到含F基因的重组杆状病毒DNA （F-Bacmid），转染提取的F-Bacmid DNA至Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒（F-rBac），应用无血清培养的High Five细胞进行重组蛋白的表达及条件优化。SDS-PAGE结果表明，重组蛋白在重组杆状病毒感染的High Five昆虫细胞中获得分泌表达，并可产生较高浓度的重组蛋白；Western blotting结果显示，重组蛋白可被PPRV的特异性抗体所识别，表明重组蛋白具有反应原性；应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠试验结果显示，该蛋白可刺激小鼠产生较高水平的特异性抗体。本研究成功分泌表达了PPRV F蛋白，该蛋白能够刺激机体产生免疫应答，为小反刍兽疫亚单位疫苗的研制奠定基础。

为实现鸭坦布苏病毒（duck tembusu virus，DTMUV）的快速检测，本研究根据GenBank中公布的DTMUV E蛋白基因的高度保守序列设计了1套引物，通过优化反应体系各组分的浓度、反应时间和温度，建立了一种灵敏、便捷的RT-LAMP扩增方法。结果显示，在最佳条件下甜菜碱对反应体系影响不明显；该方法灵敏度是常规RT-PCR的100倍；只能特异性扩增坦布苏病毒，对于其他常见的禽源病毒无特异性扩增；检测结果可直接通过肉眼观察来判断；对临床74份疑似病料，可检出65份。本试验建立的方法灵敏性高、特异性强，可用于鸭坦布苏病毒病的临床诊断和流行病学调查。

抗菌药通过直接用药或用作饲料添加剂投入养殖业中，用于治疗或预防动物疾病。养殖业不当使用抗菌药，不可避免地造成抗菌药在动物源性食品中残留过量。微生物学法是最早用于抗菌药残留检测的方法，较其他检测方法而言，微生物学法操作简单、成本低、高通量，广泛应用于牛奶、畜禽组织等动物源性食品中抗菌药残留快速筛选检测，为后期的化学分析确证法节约大量成本。文章主要综述了微生物学法的发展历程及微生物学法在牛奶、可食性畜禽组织、鸡蛋、水产品、蜂蜜等动物源性食品中抗菌药残留检测的应用情况，为后续研制新微生物学法提供理论依据和实践基础，并对未来的微生物学法的发展做出展望。

为了建立快速、敏感、特异的雌二醇（E₂）残留免疫检测方法，本研究应用胶体金免疫层析技术，研究制备一种快速检测牛奶中E₂的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，采用物理吸附法将E₂兔多克隆抗体偶联至胶体金，经过优化抗原包被量和多克隆抗体标记量等反应条件组装成检测试纸条，测定检测试纸的灵敏度、特异性、重复性和加速保存等参数，并对E₂类似物交叉反应和牛奶基质干扰反应进行了测定。结果表明，试纸条最优包被抗原浓度为2 mg/mL，抗体浓度为20 μg/mL。采用消线法判定结果，检测时间10 min，PBS缓冲液中E₂检测限为10 μg/L，该方法与雌三醇的交叉反应率为40%，与戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、雌酮、己烯雌酚、炔雌醚、乙炔雌二醇、壬基酚等类似物均无可见交叉反应，牛奶样品经2倍稀释消除基质干扰直接用于检测，该方法在牛奶样品中的判定值为20 μg/L。本研究建立的E₂胶体金试纸条使用简单方便，适合现场快速检测牛奶中E₂残留。

为筛选具有显著治疗犬蠕形螨的中药制剂，试验将中药小茴香、蛇床子、羊蹄根采用水煮醇沉及蒸馏等提取方法制备成中药制剂犬螨灵，并观察其对犬蠕形螨的疗效。将犬螨灵设为高、中、低3个浓度，其生药含量分别为2.0、1.0和0.5 g/mL，采用点滴法进行体外抑杀蠕形螨试验，在此基础上对12只接种蠕形螨的试验犬进行治疗试验，为验证治疗效果，对临床上已确诊的45只患有蠕形螨的病犬分3组进行临床治疗试验。结果显示，中药犬螨灵3种剂量均有较强的体外抑杀螨虫作用，高剂量组作用后4 h即可完全抑杀蠕形螨，1%伊维菌素对照组则为作用后8 h；高剂量组在治疗3周后，患处有大量新毛生长，红疹结节和皮屑消失，患处皮肤已痊愈，1%伊维菌素治疗组患犬皮肤好转，仅有少量新毛生长，不能达到痊愈标准；高、中剂量组皮肤刮取物螨虫数量平均比例及停药1个月后复发率均为0，1%伊维菌素治疗组皮肤刮取物螨虫数量平均比例及停药1月后的复发率分别为10.63%和9.17%。高剂量中药犬螨灵与1%伊维菌素两种药物联合治疗组，对临床上患病犬进行3周治疗，其虫卵平均转阴率、治愈率与平均治愈天数分别为100.00%、93.33%和19.56 d，其效果均优于中药犬螨灵与1%伊维菌素单独治疗组。结果表明，高剂量自制中药制剂犬螨灵对犬蠕形螨体外抑杀作用、接种蠕形螨试验犬与临床自然感染病例均有显著的治疗效果，优于1%伊维菌素对照组，犬螨灵作为中药杀螨虫制剂具有较好的市场开发前景。

本研究旨在验证抗球虫中药常山口服液的微生物限度检查法，为其质量控制、研发新兽药奠定基础。试验通过直接接种法考察常山口服液的抑菌活性，并采用验证过的试验条件和方法（常规法）进行细菌计数、回收率测定及控制菌的检查，建立常山口服液微生物限度检查方法，并进行验证试验。结果证实常山口服液无抑菌作用或抑菌作用极其微弱，可采用常规法建立检查方法。常山口服液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉的加菌回收率均大于70%，且供试品和所用稀释剂对此结果无干扰。按常规方法对大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌进行控制菌验证检查发现，试验组、阳性对照组均检出相应的试验菌，阴性对照组和供试液组均未检出相应的试验菌。综上所述，常规法可用于常山口服液细菌、霉菌和酵母菌的计数检验，控制菌检查及微生物限度检查，试验过程符合微生物限度检查法规定，且方法简便，可操作性强，结果准确可靠。

试验通过考察地黄提取物的急性毒性和亚慢性毒性，评价其安全性，为临床用药提供理论依据。急性毒性试验采用昆明种小鼠进行半数致死量（LD₅₀）和最大给药量（MTD）的测定。亚慢性毒性选取80只SD大鼠，分为低、中、高地黄提取物组和对照组，连续灌胃30 d，试验结束后进行血液常规和血液生化指标检测，处死后测定脏器系数，并做病理组织学观察。急性毒性试验结果显示，在试验期内未发现小鼠死亡，未测得LD₅₀，小鼠最大给药量为61.54 g/kg。亚慢性毒性结果显示，各给药组大鼠的体重、血液生化指标、脏器系数及内脏组织病理学观察与对照组均无显著差异（P>0.05），未见与药物作用有关的病理变化。结果表明，在本试验条件下，根据世界卫生组织（WTO）有关外源性化学物急性毒性分级标准，地黄提取物属实际无毒物质，结合急性毒性和亚慢性毒性试验结果，说明按临床剂量使用地黄提取物是安全无毒的。

试验旨在对吉林省某水貂养殖场送检的3只具有典型腹泻症状的病死水貂的小肠和肠内容物样品进行细菌分离鉴定及耐药情况分析，为临床治疗提供参考。通过细菌分离纯化和PCR方法对分离菌株进行鉴定，对BALB/c小鼠进行菌液注射来检测菌株的致病性。采用K-B药敏法检测菌株对常用药物的敏感性，并通过PCR方法检测其耐药基因和Ⅰ类整合子的携带情况。结果显示，分离得到3株志贺氏菌，致病性检测试验显示分离菌可引起小鼠腹泻。药物敏感性试验结果显示，3株志贺氏菌对氟喹诺酮类药物、头孢类药物、氟苯尼考和多黏菌素较敏感，对氨基糖苷类、四环素、氯霉素、青霉素、氨苄西林耐药。耐药基因检测结果显示，3株志贺氏菌共检测出7种耐药基因bla_TEM-1、aadA1、aac（3'）-Ⅱc、aac（6'）-Ⅰb、aph（3'）-Ⅶ、tet（M）、cat2及携带aadA1基因盒的Ⅰ类整合子。结果表明，分离的3株志贺氏菌均具有致病性，可引起小鼠腹泻，主要表现为多重耐药现象，携带的耐药基因呈多样性，为临床治疗带来巨大影响。

试验旨在检测抗病毒药物对猫传染性鼻气管炎病毒的有效性。利用F81细胞建立抗猫传染性鼻气管炎病毒药物的体外筛选模型，采用MTT法检测，计算病毒的抑制率。结果显示，阿昔洛韦、利巴韦林、L-赖氨酸、板蓝根和黄芪多糖的半数有效浓度（IC₅₀）分别为9.5、3.3、3.4、161.0和4.7 μg/mL，聚肌胞IC₅₀为6.0 mg/mL，治疗指数TI分别为76.8、39.3、2 588.0、4.5、78.7和5.8。结果表明，L-赖氨酸和黄芪多糖为高效抗猫传染性鼻气管炎病毒药物。