鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性与保护性研究

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.010

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (10): 2580-2586.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.010

鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性与保护性研究

王善辉¹, 谢金文², 吕颜枝¹, 李云龙¹

1. 江苏省徐州生物工程职业技术学院动物工程系, 徐州 221006;
2. 山东省滨州畜牧兽医研究院重点实验室, 滨州 256600

收稿日期:2015-02-05 出版日期:2015-10-20 发布日期:2015-10-23
通讯作者: 王善辉 E-mail:wagnshanhui2015@126.com
作者简介:王善辉(1977-),女,内蒙古阿荣旗人,博士,研究方向:分子病毒学与免疫学
基金资助:
徐州市科技项目(XM13B120);徐州生物工程职业技术学院科研课题(2013B03)

Secretory Expression of DTMUV E Gene in Insect Cells and Study on its Immunogenicity and Protective Efficacy

WANG Shan-hui¹, XIE Jin-wen², LV Yan-zhi¹, LI Yun-long¹

1. Animal Engineering Department, Jiangsu Xuzhou Vocational College of Bioengineering, Xuzhou 221006, China;
2. Key Laboratory of Shandong Binzhou Animal Science & Veterinary Medicine Institute, Binzhou 256600, China

Received:2015-02-05 Online:2015-10-20 Published:2015-10-23

摘要/Abstract

摘要： 鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭产蛋量急剧下降。本研究通过杆状病毒表达系统,利用蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,Mels)构建分泌表达DTMUV JSXZ株E蛋白的重组杆状病毒,将其感染Sf9昆虫细胞,从而分泌表达DTMUV E蛋白,并对该表达E蛋白的免疫原性和保护效果进行了研究。经Western blotting、IFA试验证明E蛋白可以在Sf9昆虫细胞培养上清中分泌表达;通过免疫雏鸭试验、间接ELISA结果证明E蛋白可以诱导产生高水平的IgG血清抗体;MTT试验结果显示E蛋白能刺激T 淋巴细胞增殖;攻毒保护试验结果显示0.3 mL组免疫保护率为80%,0.6 mL组和0.8 mL组保护率均为100%,而PBS对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中3只死亡。上述研究结果为DTMUV亚单位疫苗的研究奠定基础。

关键词: 鸭坦布苏病毒(DTMUV); E蛋白; 杆状病毒; 分泌表达; 免疫原性; 保护效果

Abstract: Duck Tembusu virus (DTMUV) was newly emerged which caused severe egg-drop syndrome in duck.Here,we constructed the recombinant baculovirus by honeybee melittin signal peptide (Mels) which expressed E protein of DTMUV JSXZ strain,and its immunogenicity and protective efficacy were investigated in duck infection model.Western blotting and indirect immunofluorescence assay (IFA) showed E protein was effectively secretory expressed in supernatant of Sf9 insect cells.Indirect ELISA result showed E protein could induce high levels of anti-E IgG in the sera.MTT result showed that E protein could stimulate the proliferation of T lymphocytes.Moreover,the protection rates were 80% in 0.3 mL group and 100% in both 0.6 mL and 0.8 mL groups,respectively,whereas,all ducks in PBS control group showed the typical clinical signs with 3 died post challenge.These results laid a foundation for the study of DTMUV subunit vaccine.

Key words: duck Tembusu virus (DTMUV); E protein; baculovirs; secretory expression; immunogenicity; protective efficacy

中图分类号:

S852.65

王善辉, 谢金文, 吕颜枝, 李云龙. 鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性与保护性研究[J]. , 2015, 42(10): 2580-2586.

WANG Shan-hui, XIE Jin-wen, LV Yan-zhi, LI Yun-long. Secretory Expression of DTMUV E Gene in Insect Cells and Study on its Immunogenicity and Protective Efficacy[J]. , 2015, 42(10): 2580-2586.

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