迟钝爱德华菌PuAH基因的原核表达及其部分特性分析

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.009

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (10): 2573-2579.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.009

迟钝爱德华菌PuAH基因的原核表达及其部分特性分析

陈斌^1,2, 池洪树², 方勤美², 许斌福², 龚晖²

1. 福建农林大学动物科学学院, 福州 350002;
2. 福建省农业科学院生物技术研究所, 福州 350003

收稿日期:2015-03-10 出版日期:2015-10-20 发布日期:2015-10-23
通讯作者: 龚晖 E-mail:ghxfjm@163.com
作者简介:陈斌(1986-),男,河南驻马店人,硕士生,研究方向:预防兽医学,E-mail:chenbinbin0721@163.com
基金资助:
福建省基金项目(2010J01095);福建省农科院创新团队项目(CXTD-2-1321);863项目(2008AA092501);福建省平台建设项目(2009N2003)

Prokaryotic Expression of Edwardsiella tarda PuAH Gene and Analysis of its Partial Characteristics

CHEN Bin^1,2, CHI Hong-shu², FANG Qin-mei², XU Bin-fu², GONG Hui²

1. College of Animal Sciences, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China;
2. Institute of Biotechnology, Fujian Provincial Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350003, China

Received:2015-03-10 Online:2015-10-20 Published:2015-10-23

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在对迟钝爱德华菌EIB202 PuAH基因进行克隆表达,并对其部分特性进行分析。根据GenBank中发表的迟钝爱德华菌PuAH基因序列(登录号:CP001135,CDS编号:ETAE_0818)设计引物,克隆并通过表达载体pET32a重组表达该基因所编码的蛋白,纯化表达产物并制备兔抗血清,采用ELISA、Western blotting、溶血试验、菌体凝集试验分析所得融合蛋白的特性。结果显示,所得融合蛋白主要以可溶性蛋白的形式表达,蛋白分子质量约为42 ku;具有免疫原性和抗原性,对鳗鲡红细胞不具溶血性,但融合蛋白抗血清对迟钝爱德华菌EIB202膜蛋白提取物的溶血性有一定的抑制作用,且可以凝集迟钝爱德华菌EIB202菌体。

关键词: 迟钝爱德华菌EIB202; PuAH基因; 原核表达; 抗血清

Abstract: This assay was aimed to express the PuAH gene of Edwardsiella tarda (E.tarda) EIB202 and analyze its partial characteristics.A pair of specific primers was designed based on the PuAH gene sequence of E.tarda published in GenBank(accession No.:CP001135,CDS No.:ETAE_0818).The gene was cloned and expressed by recombinant plasmid pET32a-PuAH in E.coli BL21(DE3).The recombinant protein was purified and used to immune New Zealand rabbits to prepare antisera.Then the characteristics of expression product and antisera were analyzed by ELISA,Western blotting,hemolysis test and bacterial agglutination test.In conclusion,the expression product was fusion protein with 42 ku molecular weight,and had immunogenicity and antigenicity,but no hemolytic to erythrocytes of eel.Yet the antisera could inhibited the hemolytic of outer membrane protein of E.tarda EIB202 to some extent,and could agglutinate E.tarda EIB202.

Key words: E.tarda EIB202; PuAH gene; prokaryotic expression; antisera

中图分类号:

Q786

陈斌, 池洪树, 方勤美, 许斌福, 龚晖. 迟钝爱德华菌PuAH基因的原核表达及其部分特性分析[J]. , 2015, 42(10): 2573-2579.

CHEN Bin, CHI Hong-shu, FANG Qin-mei, XU Bin-fu, GONG Hui. Prokaryotic Expression of Edwardsiella tarda PuAH Gene and Analysis of its Partial Characteristics[J]. , 2015, 42(10): 2573-2579.

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