沼泽型水牛卵泡抑素基因的真核表达研究

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (9): 57-60.

沼泽型水牛卵泡抑素基因的真核表达研究

邓继贤¹, 杨秀荣², 韦英明², 蒋和生^1,2

1. 广西科学院中国东盟(广西)生物技术合作研发中心,广西南宁 530003;2. 广西大学动物科技学院,广西南宁 530005

收稿日期:2011-03-02 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-09-20 发布日期:2011-09-20
通讯作者: 蒋和生

Eukaryotic Expression of Swamp Buffalo Follistatin

DENG Ji-xian¹, YANG Xiu-rong², WEI Ying-ming², JIANG He-sheng^1,2

1. China-ASEAN (Guangxi) Biotechnology Cooperative Center, Guangxi Academy of Sciences, Nanning 530003, China;2. College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530005, China

Received:2011-03-02 Revised:1900-01-01 Online:2011-09-20 Published:2011-09-20

摘要/Abstract

摘要： 试验通过候选基因法,选定卵泡抑素(follistatin,FS)作为影响水牛繁殖性能的主要候选基因,通过基因工程的方法,用XhoⅠ、SacⅡ双酶切广西大学动物遗传育种与繁殖实验室克隆的添加有ACC的Kozaka 序列的pMD-bFS质粒和pEGFP-N₁,构建pEGFP-bFS真核表达质粒,将其与阳离子脂质体混匀后,分别转染体外培养的水牛胎儿成纤维(BFF)细胞和仓鼠肾(BHK)细胞系,经过48 h培养后,在相差荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达水平,用RT-PCR和Western blotting方法对转入质粒表达进行定性鉴定。结果显示,本研究成功构建了添加有ACC的Kozaka 序列的pEGFP-bFS真核表达质粒,该重组质粒在BFF和HBK两种细胞均表达,但在HBK细胞系的表达量稍高。本研究结果将为下一步制备具有生物活性的bFS工程疫苗,研究bFS对水牛繁殖性能的影响提供参考。

关键词: 沼泽型水牛; 卵泡抑素; 真核表达; 繁殖性能

Abstract: In this study,follistatin gene was chosen as the candidate gene affecting the reproductive ability in buffalo. Recombinant plasmid pEGFP-bFS was conducted and expressed in both buffalo fetal fibroblast (BFF) and BHK cells. pMD-bFS and pEGFP-N₁ were digested with XhoⅠ,Sac Ⅱ,then eukaryotic expression vector-pEGFP-bFS was constructed. Buffalo fetal fibroblast and BHK cells were cultured with pEGFP-bFS intermixing Lipofectamine^TM 2000 in carbon dioxide incubator with 37 ℃,5% CO₂,100% humidity. After 24 h,expression levels of recombinant vector were verified through observing directly under phase contrast fluorescence microscope,RT-PCR and Western blotting. The results indicated that bFST expressed in both buffalo fibroblast and BHK cells. This study was a very significance to produce bioactive bFS engineered plasmid and research effects of bFS on reproductive ability.

Key words: swamp buffalo; follistatin; eukaryotic expression; reproductive ability

中图分类号:

S823.8⁺3

邓继贤;杨秀荣;韦英明;蒋和生;. 沼泽型水牛卵泡抑素基因的真核表达研究[J]. , 2011, 38(9): 57-60.

DENG Ji-xian;YANG Xiu-rong;WEI Ying-ming;JIANG He-sheng;. Eukaryotic Expression of Swamp Buffalo Follistatin[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2011, 38(9): 57-60.

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