猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究

中国畜牧兽医

猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究

张盼盼，何静，康银峰，向斌，任涛

（华南农业大学兽医学院，广东广州 510642）

修回日期:2014-03-04 出版日期:2014-06-20 发布日期:2014-07-24
通讯作者: 任涛（1968—），男，湖北人，教授, 博士生导师。E-mail：rentao@scau.edu.cn；Tel：020-85283054
作者简介:张盼盼(1988—），女，安徽人，硕士生，研究方向：预防兽医学。
基金资助:
公益性行业（农业）科研专项（201303033）；广东省科技计划项目（2012A020800006）。

Cloning and Prokaryotes Expression of Porcine Interferon-α and Interleukin-18 Fusion Gene and Detection of its Antiviral Activity

ZHANG Pan-pan, HE Jing, KANG Yin-feng, XIANG Bin, REN Tao

（College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China）

Revised:2014-03-04 Online:2014-06-20 Published:2014-07-24

摘要/Abstract

摘要： 为探索猪α干扰素（poIFN-α）与白介素-18（poIL-18）融合基因的抗病毒效果，本研究通过融合PCR，以质粒pMD18-T/poIFN-α和pMD18-T/poIL-18为模板扩增猪IFNα-IL18（poIFNα-IL18）融合基因。将poIFNα-IL18融合基因插入原核表达载体pET-28b（+）构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL18，转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达，SDS-PAGE分析重组表达蛋白；经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化后，用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上进行抗病毒活性测定。结果表明成功构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL18；SDS-PAGE可检测到分子质量为37 ku左右的蛋白条带，与目的蛋白大小相近；经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化，获得高纯度重组蛋白；用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上检测到重组蛋白poIFNα-IL18比单一蛋白poIFN-α和poIL-18的抗病毒活性显著，其抗水疱性口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV)活性分别为1.03×10⁵、1.28×10⁴及0.11×10⁴U/mg。

关键词: 融合基因; 克隆; 表达; 抗病毒活性

Abstract: In order to explore the antiviral effect of porcine interferon-α and interleukin-18 fusion gene （poIFN-α-IL-18）, poIFN-α-IL-18 was amplified from pMD18-T/IFN-α and pMD18-T/IL-18 by using fusion-PCR in this study. The recombinant expression plasmid pET-28b/IFNα-IL18 was constructed by inserting poIFNα-IL18 into vector pET-28b（+） separately. SDS-PAGE was used for analyzing the protein after induced by IPTG. The protein was purified by Ni²⁺-NTA. Antiviral activities of the purified protein were tested by cytopathogenic effect inhibition assay. Results showed that the recombinant expression plasmid pET-28b/IFNα-IL18 was successfully constructed. SDS-PAGE could detect the protein bands about 37 ku. After Ni²⁺-NTA affinity chromatography purification, the activity of purified fusion protein against astrovirus was better than the single protein. Antiviral activities of the purified proteins, poIFN-α-IL-18, poIFN-α and poIL-18, were about 1.03×10⁵,1.28×10⁴ and 0.11×10⁴ U/mg.

Key words: fusion gene; cloning; expression; antiviral activity

张盼盼，何静，康银峰，向斌，任涛. 猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究[J]. 中国畜牧兽医.

ZHANG Pan-pan, HE Jing, KANG Yin-feng, XIANG Bin, REN Tao. Cloning and Prokaryotes Expression of Porcine Interferon-α and Interleukin-18 Fusion Gene and Detection of its Antiviral Activity[J]. .

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