抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定

›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (11): 97-100.

抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定

王爱华¹, 许可军², 王金良³, 魏凤³, 孙全文¹

1. 河北北方学院, 河北张家口 075000;
2. 滨州市农村科技信息化管理中心, 山东滨州 256600;
3. 山东省滨州畜牧兽医研究院, 山东滨州 256600

收稿日期:2014-06-03 出版日期:2014-11-20 发布日期:2014-12-06
通讯作者: 王金良 E-mail:wjl478@163.com
作者简介:王爱华(1966-),女,河北人,博士,教授,研究方向:动物疫病检验与公共卫生。
基金资助:
河北北方学院重大项目(ZD201307);山东省自然科学基金项目(ZR2010CQ012);山东省大型科学仪器设备升级改造技术研究专项(2013SJGZ18)。

Preparation and Characteristic Identification of Monoclonal Antibodies against Classical Swine Fever Virus

WANG Ai-hua¹, XU Ke-jun², WANG Jin-liang³, WEI Feng³, SUN Quan-wen¹

1. Hebei North University, Zhangjiakou 075000, China;
2. Binzhou Rural Science and Technology Information Management Center, Binhzou 256600, China;
3. Shandong Binzhou Animal Science and Veterinary Medicine Academy, Binzhou 256600, China

Received:2014-06-03 Online:2014-11-20 Published:2014-12-06

摘要/Abstract

摘要： 将纯化后的猪瘟病毒免疫4只SPF级BALB/c小鼠,无菌取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经半固体培养基克隆化和间接ELISA筛选,最终获得了4株稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果显示4株单克隆抗体效价均较高,并与其他病毒及PK-15细胞培养物无交叉反应。Western blotting结果证实3株单克隆抗体可特异性识别猪瘟病毒。间接免疫荧光试验可在细胞膜内观察到特异性绿色荧光,表明3株单克隆抗体与猪瘟病毒具有良好的反应性。该研究为猪瘟病毒新型诊断试剂开发奠定了基础。

关键词: 猪瘟病毒; 单克隆抗体; 制备; 鉴定

Abstract: 4 SPF BALB/c mice were immunized with purified classical swine fever virus (CSFV) as the antigen and mouse splenic cells were fused with SP2/0 cells. Hybridoma cells were screened by ELISA and semi-solid agar cloning, 4 hybridoma cells secreting anti-CSFV monoclonal antibodies were obtained. ELISA results showed that all of these monoclonal antibodies with high antibody titer, which could specifically react to CSFV but not cross react to other pig viruses and PK-15 cell cultures. Western blotting indicated that 3 strains of monoclonal antibodies reacted with CSFV specially. Specific green fluorescence was observed in the cell membrane by IFA. This study layed a foundation for the development of new diagnostic reagents for CSFV.

Key words: classical swine fever virus (CSFV); monoclonal antibody; preparation; identification

中图分类号:

S813.2

王爱华, 许可军, 王金良, 魏凤, 孙全文. 抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定[J]. , 2014, 41(11): 97-100.

WANG Ai-hua, XU Ke-jun, WANG Jin-liang, WEI Feng, SUN Quan-wen. Preparation and Characteristic Identification of Monoclonal Antibodies against Classical Swine Fever Virus[J]. , 2014, 41(11): 97-100.

[1]	卢玉葵, 刘佳琪, 钟嘉诚, 陈济铛, 朱婉君, 张溢珊, 张济培. 鹅源副鸡禽杆菌的分离鉴定及致病性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2562-2572.
[2]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[3]	李志杰, 赵莹, 马鑫, 王萌, 余四九, 王立斌, 潘阳阳. 动物卵泡液外泌体分离方法及主要生殖功能研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1480-1488.
[4]	田常青, 张坤中, 齐玉梅, 史文静, 董志杰, 张浩浩, 何曾文, 芝吉, 赵学慧, 崇倩, 薛慧文, 苟惠天. 1株环境源单增李斯特菌的分离鉴定及生物特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1543-1555.
[5]	曹颖颖, 梁亮, 曾怡蓉, 钟清华, 袁小芳, 唐海波, 冷静. 滇西树鼩源沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1718-1728.
[6]	刘可欣, 王超, 张傲, 刘佳利, 谭斌, 张淑琴. 牛病毒性腹泻病毒LN-1株的分离鉴定及基因组序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1150-1159.
[7]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[8]	陈栋, 张言浩, 张阳, 李森, 周祖涛, 李自力. 3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1250-1258.
[9]	李朋霏, 宋晓明, 周保琨, 曹志, 张洪亮, 马清霞, 单虎. 用于非洲猪瘟病毒核酸检测的假病毒阳性对照品的制备和标定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 647-655.
[10]	王冰艺, 马弘财, 邹明昊, 樊世杰, 元振杰, 拉巴次仁, 董海龙, 曾江勇. 牦牛源链球菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 745-753.
[11]	肖洋洋, 李芮芮, 马忠臣, 唐恬, 王娜, 陈创夫, 郑炜, 王勇, 王鹏雁. 新疆石河子地区牛支原体的分离鉴定及药物敏感性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 754-763.
[12]	钟华晨, 王丽芳, 郭晨阳, 刘嘉琳, 宋洁. 内蒙古地区乳房炎奶样与环境中细菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 817-826.
[13]	张凯, 张春平, 戈胜强, 孙春喜, 程杰, 伏春雨, 王刚, 牛星, 彭军. 非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 270-279.
[14]	张梦杨, 何健, 刘阳坤, 姚伦广. 非洲猪瘟病毒p37蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 300-309.
[15]	孙愉, 张昊, 李畅洋, 陶燕子, 王秋菊. 牛源抗氧化芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 359-367.