柱状黄杆菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (10): 51-55.

柱状黄杆菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

吕娜^1,2, 张虹茜¹, 殷晓平¹, 张懋岚¹, 赵国坤¹, 孙强¹, 张捷²

1. 吉林农业大学食品科学与工程学院, 吉林长春 130118;
2. 浙江万里学院生物与环境学院, 浙江宁波 315100

收稿日期:2014-04-11 出版日期:2014-10-20 发布日期:2014-10-29
作者简介:吕娜(1980―),女,吉林人,博士,副教授,研究方向:鱼类疾病快速检测。
基金资助:
2010年浙江省科技厅公益项目(2010C32066);吉林农业大学博士科研启动基金(201308)

Establishment of Colloidal Gold Immunochromatographic Assay for the Rapid Detection of Flavobacterium columnaris

LV Na^1,2, ZHANG Hong-xi¹, YIN Xiao-ping¹, ZHANG Mao-lan¹, ZHAO Guo-kun¹, SUN Qiang¹, ZHANG Jie²

1. College of Food Science and Engineering, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;
2. College of Biological and Environmental Sciences, Zhejiang Wanli University, Ningbo 315100, China

Received:2014-04-11 Online:2014-10-20 Published:2014-10-29

摘要/Abstract

摘要： 为建立一种通过胶体金免疫层析技术快速检测柱状黄杆菌的方法,试验采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20 nm的胶体金颗粒,将其标记纯化的抗柱状黄杆菌单克隆抗体(McAb)制备出金标抗体结合垫。纯化的兔抗柱状黄杆菌多克隆抗体(PcAb)和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)与质控线(C)上,制备出胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性及稳定性进行测定。结果显示,该试纸条检测灵敏度为1×10³ CFU,检测时间为3.5 min,制备的试纸条与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌均无交叉反应,且稳定性好。本研究首次成功建立了柱状黄杆菌胶体金快速检测方法,所制备的试纸条具有灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于柱状黄杆菌的检测。

关键词: 柱状黄杆菌; 胶体金; 快速检测

Abstract: The aim of this study was to establish a colloidal gold immunochromatographic assay for the rapid detection of Flavobacterium columnaris.Colloidal gold particles with diameter 20 nm were prepared by the sodium citrate reduction method.Purified Flavobacterium columnaris monoclonal antibodies (McAb) labelled with 20 nm colloidal gold particles to form colloidal gold combined pad.Purified polyclonal antibody (PcAb) against Flavobacterium columnaris and goat anti mice IgG were coated on the nitrocellulose membrane to be the test line (T line) and the control line (C line).Gold immunochromatographic strips which prepared to detect Flavobacterium columnaris were obtained.Its sensitivity,specificity and stability were evaluated.The results showed that sensitivity of the strip reached to 1×10³ CFU.The testing time was 3.5 min.Specificity analysis showed no cross-reaction with other aquatic pathogenic bacteria such as Edwardsiella tarda,E.coli,Aeromonas hydrophila,Vibrio anguillarum,Vibrio alginolyticus,Vibrio parahaemolyticus and Vibrio harveyi.The strip showed good stability either.This study successfully established colloidal gold immunochromatographic assay of the rapid detection of Flavobacterium columnaris for the first time.The strip prepared was sensitive,specific,stable and rapid.It could be used for the detection of Flavobacterium columnaris.

Key words: Flavobacterium columnaris; colloidal gold; rapid detection

中图分类号:

S852.61

吕娜, 张虹茜, 殷晓平, 张懋岚, 赵国坤, 孙强, 张捷. 柱状黄杆菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立[J]. , 2014, 41(10): 51-55.

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