miR-193a在MDBK细胞中诱导细胞凋亡的研究

›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (10): 123-128.

miR-193a在MDBK细胞中诱导细胞凋亡的研究

史梦婷¹, 付强², 孟露萍², 史慧君², 包海洋², 张辉², 任艳³, 陈创夫²

1. 石河子大学生命科学学院, 新疆石河子 832000;
2. 石河子大学动物科技学院, 新疆石河子 832000;
3. 石河子大学医学院, 新疆石河子 832000

收稿日期:2014-05-22 出版日期:2014-10-20 发布日期:2014-10-29
通讯作者: 陈创夫 E-mail:ccf-xb@163.com
作者简介:史梦婷(1989－),女,新疆人,硕士生,研究方向:动物功能基因组与分子免疫学;付强(1985－),男,新疆人,博士生,研究方向:分子病毒学。
基金资助:
国际科技合作项目(2013DFR30970);国家自然科学基金项目(U1303283)

Study on the Inductive Effects of miR-193a on Apoptosis in MDBK Cells

SHI Meng-ting¹, FU Qiang², MENG Lu-ping², SHI Hui-jun², BAO Hai-yang², ZHANG Hui², REN Yan³, CHEN Chuang-fu²

1. College of Life Science, Shihezi University, Shihezi 832000, China;
2. College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832000, China;
3. College of Medicine, Shihezi University, Shihezi 832000, China

Received:2014-05-22 Online:2014-10-20 Published:2014-10-29

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在研究miR-193a在致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒(cp BVDV)感染MDBK细胞过程中诱导细胞凋亡的分子机制。试验利用TargetScan和Microcosm Targets等生物信息学在线软件预测凋亡相关的miR-193a靶基因Bax,并利用双荧光素酶报告基因系统验证miR-193a的靶基因;用过表达miR-193a的慢病毒pre-miR-193a-lv和抑制miR-193a表达的慢病毒pre-miR-193a-inhibitor-lv分别侵染MDBK细胞,48 h后收集细胞,然后用实时荧光定量PCR、Western blotting和流式细胞仪检测凋亡通路中Bax的表达水平及MDBK细胞凋亡率。结果预测并验证了miR-193a的靶基因为Bax;双荧光素酶报告基因分析结果显示miR-193a能直接结合到Bax 3'UTR区域中的miRNA反应位点,并极显著下调Bax的表达水平(P<0.01);流式细胞仪检测凋亡率结果显示,感染pre-miR-193a-lv慢病毒的MDBK细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。结果表明miR-193a能直接靶向凋亡通路中Bax基因,从而促进凋亡的发生。

关键词: miR-193a; Bax; 凋亡; MDBK细胞

Abstract: The study was aimed to investigate the molecular mechanisms of miR-193a inducing apoptosis in cytopathogenic bovine virus diarrhea virus (cp BVDV) infected MBDK cells. Prediction of apoptosis-related miR-193a target gene Bax with bioinformatics online applications,TargetScan and Microcosm Targets,and verification of the interaction between miR-193a and Bax by dual-luciferase reporter assay were carried out to investigate the interaction between miR-193a and Bax. miR-193a overexpressing lentivirus pre-miR-193a-lv and lentivirus pre-miR-193a-inhibitor-lv inhibiting miR-193a expression were used to infect MDBK cells,respectively;Bax expression levels and apoptosis rates of MDBK cells were detected by Real-time quantitative PCR,Western blotting and flow cytometry,48 h later. According to the prediction and verification,we convinced that apoptosis-related gene Bax was the target of miR-193a;the results of Real-time quantitative PCR,Western blotting and dual-luciferase reporter assay showed that miR-193a directly targeted the miRNA response site of Bax 3'UTR and Bax expression levels were extremely significantly downregulated after miR-193a overexpression (P<0.01);meanwhile,the results of flow cytometry assay showed that apoptosis rates were extremely significantly decreased in MDBK cells infected with pre-miR-193a-lv (P<0.01). In a word,miR-193a could directly target Bax gene in pathway of apoptosis and promot apoptosis.

Key words: miR-193a; Bax; apoptosis; MDBK cells

中图分类号:

Q291

史梦婷, 付强, 孟露萍, 史慧君, 包海洋, 张辉, 任艳, 陈创夫. miR-193a在MDBK细胞中诱导细胞凋亡的研究[J]. , 2014, 41(10): 123-128.

SHI Meng-ting, FU Qiang, MENG Lu-ping, SHI Hui-jun, BAO Hai-yang, ZHANG Hui, REN Yan, CHEN Chuang-fu. Study on the Inductive Effects of miR-193a on Apoptosis in MDBK Cells[J]. , 2014, 41(10): 123-128.

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