狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备

中国畜牧兽医

狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备

米立娟¹, 王永志², 刘晔¹, 张守峰¹, 扈荣良¹

1. 军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春 130122;
2. 吉林省农业科学院,吉林长春 130133

收稿日期:2012-01-09 出版日期:2012-08-20 发布日期:2012-08-24
通讯作者: 扈荣良 E-mail:ronglianghu@hotmail.com
作者简介:米立娟(1984－),女,河北人,硕士生,从事动物病毒性传染病诊断研究。王永志(1978－),男,吉林人,博士,研究方向:分子病毒学。米立娟与王永志对本文具有同等贡献,并列为第一作者。
基金资助:
国家"863"计划项目资助(2011AA10A212)。

Preparation of Mouse Anti-Rabies Virus Glycoprotein Monoclonal Antibodies

MI Li-juan¹, WANG Yong-zhi², LIU Ye¹, ZHANG Shou-feng¹, HU Rong-liang¹

1. Institute of Military Veterinary, Academy of Military Medical Sciences, Changchun 130122,China;
2. Jilin Academy of Agricultural Sciences,Changchun 130133,China

Received:2012-01-09 Online:2012-08-20 Published:2012-08-24

摘要/Abstract

摘要： 用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blotting分析和直接免疫荧光检测结果显示,获得一株针对狂犬病病毒糖蛋白构象表位的单抗6F12和一株针对糖蛋白线性表位的单抗1B12。小鼠中和试验结果显示,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均具有狂犬病病毒中和活性。结果表明,获得了两株针对狂犬病病毒G蛋白不同抗原表位的中和活性单克隆抗体,为狂犬病病毒特性研究和检测奠定了基础。

关键词: 狂犬病病毒; 糖蛋白; 中和抗体; 单克隆抗体

Abstract: Two monoclonal antibodies against rabies virus glycoprotein were produced by immunization with rabies virus strain BD06 in BALB/c mice. Splenocytes from the immunized mice were fused with SP2/0 mouse myeloma cells. After fusion, antibodies in the supernatant of the hybrid cells were respectively detected by ELISA and FAVN tests. Two hybrid cells secreting antibody binding to rabies virus, i.e. 6F12 and 1B12 strains, were analyzed by Western blotting and FAT methods. Results showed that conformational and linear epitopes of the glycoprotein were repectively recognized by neutralizing monoclonal antibody 6F12 and 1B12.

Key words: rabies virus; glycoprotein; neutralizing antibody; monoclonal antibody

中图分类号:

S852.4

米立娟, 王永志, 刘晔, 张守峰, 扈荣良. 狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医.

MI Li-juan, WANG Yong-zhi, LIU Ye, ZHANG Shou-feng, HU Rong-liang. Preparation of Mouse Anti-Rabies Virus Glycoprotein Monoclonal Antibodies[J]. .

[1]	张婧旭, 徐玉, 梁海英, 曾智勇, 汤德元, 王彬, 徐松平, 万娟, 祝羊. 伪狂犬病病毒贵州分离株与疫苗株遗传进化和抗原表位分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1093-1106.
[2]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[3]	谢思豪, 勾红潮, 卞志标, 李斌, 蔡汝健, 臧莹安, 李春玲. MLKL基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1934-1941.
[4]	王乐铭, 王瑜瑞, 曾子轩, 饶国顺, 吴正姣, 靳纬坤, 王冬英. 抗大片形吸虫Cat L1单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 677-686.
[5]	赵静, 褚颖, 罗均, 郭霄峰. 嵌合犬瘟热病毒H基因的重组狂犬病病毒的构建及免疫原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(12): 4776-4785.
[6]	赵少若, 黄甜, 郝丽影, 吴洪超, 汪志艳, 崔宁宁, 王亚玲, 邓均华, 田克恭. 犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4429-4437.
[7]	邢嘉友, 樊文杰, 王昱旻, 鲁秀香, 宋月, 褚贝贝, 王江, 王梦迪. 他莫昔芬对猪伪狂犬病病毒体外增殖的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4503-4512.
[8]	莫红芳, 揭凯, 陈鑫, 文威, 刘文强, 陈焕春, 钱平, 李祥敏. 猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 307-317.
[9]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.
[10]	杨明珠, 陈晓春, 宋佳诚, 侯亚欣, 李俊平. 重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 338-351.
[11]	曾建宇, 董振远, 贾文凤, 张国中, 薛佳. 新城疫病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3423-3431.
[12]	费雅麒, 汤驰, 邓亮. 驴血清α1酸性糖蛋白生物信息学分析与纯化鉴定研究[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(8): 2705-2712.
[13]	曲哲会, 张喜文, 赵瑜, 郑全芳, 连慧香, 赵云焕, 郭晓秋. 豫南地区猪伪狂犬病病毒流行株的主要毒力基因遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(8): 3019-3029.
[14]	李思, 蒋蔚, 程婷婷, 卢春慧, 辛思培, 曹敬政, 王权, 孙卫东. 沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(5): 1772-1783.
[15]	黄二素, 咸文, 张爱琼, 王彬, 曾智勇, 汤德元, 梁海英, 何小莉, 徐玉, 徐松平, 祝羊. 猪伪狂犬病病毒GZYY2015变异株的分离鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(5): 1832-1840.